13第十三章 其他革兰阴性杆菌检验

临床微生物学检验技术
临床意义
表9-1 几种主要嗜血杆菌常栖部位及所致疾病
菌种 流感嗜血杆菌
副流感嗜血杆菌 溶血嗜血杆菌 副溶血嗜血杆菌
杜克雷嗜血杆菌 埃及嗜血杆菌 嗜沫嗜血杆菌 副嗜沫嗜血杆菌
常栖部位及所致疾病
原发化脓性感染及继发性感染，包括脑膜炎、鼻咽炎、关节炎、 心包炎、鼻窦炎及中耳炎等。 口腔及阴道正常菌群，偶尔可引起心内膜炎、尿道炎。 鼻咽部正常菌群，常引起儿童上呼吸道感染。
核酸检测
分离培 养
血清学诊断，ELISA等
鲍金琼脂 等
可疑菌落
菌落观察
镜检
生化反应 DFA 核酸检测
鲍特菌检验程 序
凝集反应
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分离培养与鉴定
在CCBA琼脂平 版上形成光滑、 有光泽、水银 样的菌落
•百日咳鲍特菌在CCBA培养基的菌落
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6种鲍特菌生化特征
动力 氧化酶 脲酶
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临床意义
传染源：病兽，以羊、牛、猪多见 传播途径：病兽的组织、尿、乳液、等通过人体的
皮肤、呼吸道、消化道进入人体 易感人群：发病以青壮年为主，从事兽医、皮毛加
工、屠宰的工人发病率较高 潜伏期：5~21日，亦可高达数月
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临床表现：
• 症状：长期发热，多汗，关节疼痛及全身乏力，疼痛 • 病理：菌在淋巴结、脾、骨髓等处繁殖，并多次入
百日咳鲍特菌
-
+
-
副百日咳鲍特菌 -
-
+
支气管炎鲍特菌 +
+
+
鸟鲍特菌
+
+
-
欣氏鲍特菌
+
+
-
霍氏鲍特菌
-
-
-
枸橼酸盐利用 + + + -
硝酸盐还原 + -
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标本直接检测
• 抗原、抗体检测采用ELISA检测 • ①直接荧光抗体检测 • ②单克隆抗体检测 • ③核酸检测 • 抗体检测：IgM及IgA，其中IgA在感染早期出现，
一、分类
• 不断有新种发现，现已命名的有40多个种 • 从人体中分离出19种 • 其中对人致病的主要是嗜肺军团菌，根据该菌O抗原的不同分
为15个血清型，在我国分离较多的为1型和6型
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二、临床意义
军团菌引起以肺为主的全身感染，统称军团病，85%以上 由嗜肺军团菌引起，多发于免疫力低下人群。
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分类
• 百日咳鲍特菌(B.pertussis) • 副百日咳鲍特菌（B.parapertussis） • 支气管鲍特菌(B.branchiseptica) • 鸟鲍特菌(B.avium) • 欣氏鲍特菌(B.hinzii) • 霍氏鲍特菌(B.holmesii)
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临床意义
• 是百日咳的致病菌 • 一年四季均可发病，冬春季多发，小儿多于成人 • 传播途径：飞沫 • 传染源：病人 • 潜伏期：1~2周 • 致病因素：百日咳毒素(PT)、丝状血细胞凝集素 (FHA)
腺嘌呤环酶毒素(ACT)、气管细胞毒素、 皮肤坏死毒素
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临床表现：
1.卡他期：1~2周，明显卡他症状，传染性强，感 染标本培养阳性率高
菌科，嗜血杆菌属 • 流感嗜血杆菌（H.influenzae） • 副流感嗜血杆菌（H.parainfluenzae） • 溶血嗜血杆菌(H.haemolyticus) • 副溶血嗜血杆菌（H.parahaemolyticus） • 克雷嗜血杆菌（H.ducreyi） • 埃及嗜血杆菌（H.aegyptius） • 嗜沫嗜血杆菌（H.aphrophilus） • 副嗜沫嗜血杆菌(H.paraphrophilus) • 迟缓嗜血杆菌（H.segnis）
血引起菌血症及网状内皮系统上皮样增生，形 成肉芽肿。 • 致病性：不产生外毒素，有较强的内毒素
可产生透明质酸酶和过氧化氢酶 侵袭力较强 迟发性超敏反应
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微生物特性
• 革兰阴性短小球杆菌，两 端钝园，偶见两极浓染，
• 无动力、无芽胞、无荚膜 • 抗原：A抗原、M抗原
羊—1:20
A:M
BCYE +抗生素
BCYE +抗生素 抗原检测 核酸检测
35℃,2.5% CO2 革兰阴性菌，仅BCYE 培养基上生长
报告军团菌
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第四节 布鲁菌属（Brucella）
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分类
• 羊布鲁菌（B.melitensis又称马尔他布鲁菌） • 牛布鲁菌（B.abortus又称流产布鲁菌） • 猪布鲁菌（B.svis） • 绵羊布鲁菌(B.ouis) • 狗布鲁菌(B.canis) • 森林鼠布鲁菌（B.neotomaes）
牛—20:1
猪— 2:1
马尔他布鲁菌革兰染色
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培养特性:
• 需氧菌营养要求较高 • 需5%~10%的CO2 • 培养基：硫胺、烟酸、
生物素等物质 • 生长温度为35℃ • 最适pH6.7 • 生长缓慢（5-7天）
马尔他布鲁菌血平板菌落
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微生物检验
• 检验程序 • 标本采集 • 标本直接检查 • 分离培养与鉴定
+
-
-
-
+
V
-
+
+
牛布鲁菌 + +
+
+
&43;
+
-
+
猪布鲁菌 + +
+
+
+
+
+
+ (-) +
-
森林鼠布 鲁菌
+
-
+
+
+
-
+
+
+
-
-
绵羊布鲁 菌
+
-
-
-
-
-
-
-
-
+ (-)
犬布鲁菌 + +
+
-
-
+
+
+
-
+
-
注：V 不定; (-) 大部分菌株阴性
不受接种疫苗干扰，有利于早期诊断
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药物敏感试验及结果解释
1、本菌的感染以预防接种为主，进行控制 2、临床治疗首选红霉素类，次选氨曲南及磺胺
增效剂（SMZ-TMP） 3、对青霉素不敏感，大多数菌株对四环素耐药
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第三节军团菌属（Legionella）
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3种鲍特菌抗原因子
百日咳鲍特菌 副百日咳鲍特菌 支气管炎鲍特菌
种特异因子
1 14 12
其它因子
2、3、4、5、6、7 8、9、11、7
8、9、10、11、7
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微生物检验
• 检验程序 • 分离鉴定与培养 • 标本直接检查
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标本
直接检查（革兰染色）
DFA 抗原检出
生物学特性
• 革兰阴性短小球杆菌 • 呈双球形或短丝状或
多形性 • 无芽孢、无鞭毛 • 有荚膜
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微生物检验
• 检验程序 • 标本采集 • 抗原检测及核酸检测 • 分离培养与鉴定 • 药物敏感试验
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标本采集原则
• 在疾病早期采取标本，立即送检。 • 在取标本时以肉汤湿润，防止干燥。 • 对心内膜炎、患者取血液标本。 • 痰液标本，应洗涤、消化，再接种。
2.痉挛期：1~4周，阵发性剧烈咳嗽，直至咳出粘 稠的痰液或呕吐为止
3.恢复期：1~2周，阵咳减轻，渐趋停止
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生物学特性
• 革兰阴性短小杆菌 • 无芽孢，有荚膜 • 支气管鲍特菌、鸟鲍特
菌有鞭毛 • 专性需氧，最适温度35
℃， 最适pH6.8~7.0
百日咳鲍特菌革兰染色
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该病分三种类型：肺炎型，肺炎感染型，流感样型。 至今尚无有效的军团菌疫苗，加强水源的管理，尤其是 医院人工输水管道系统和设施的消毒处理，是预防军团菌传 播的重要措施。
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三、微生物学检验
血液、
胸水、痰、组织（无菌操作制成悬液）
抗体检测 增菌培养 革兰染色 血琼脂平板 或镀银染色 巧克力琼脂
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第十三章 其他革兰阴性杆菌检验
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第十章 其他革兰阴性杆菌
• 嗜血杆菌属 • 鲍特菌属 • 布鲁菌属 • 巴斯特菌属 • 费朗西斯菌属
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第一节 嗜血杆菌属
（Haemophilus）
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分类 • 嗜血杆菌属（Haemophilus）隶属于巴斯德
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标本直接检验 • 凝集反应：玻片凝集或试管凝集法 • PCR检测： • 抗体检测：
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布鲁氏菌的生化特性
菌种
糖分解
染料的耐受
精氨 硝酸
触 酶
氧化 酶
葡萄 糖
半乳 糖
阿拉伯 糖
酸脱 羧
盐还 原
尿素 H2S产 硫廑 复红
酶
生 (40μ (20μ
g) g)
羊布鲁菌 + +
口腔、咽部正常菌群，偶可引起咽炎、化脓性口腔炎和心内膜 炎 软下疳，为性传播病菌。常引起外阴脓疱、溃疡、淋巴结肿大。 急性亚急性结膜炎、儿童巴西紫癜热 咽部正常菌群、牙菌斑中常见菌、偶致心内膜炎和脑脓肿
咽部及阴道正常菌群，偶可引起亚急性细菌性心内膜炎、败血 症、甲沟炎、、脑脓肿、脑膜炎。
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药物敏感试验
• 药敏试验：K-B法 • 培养基：HTM • 质控菌株：（ATCC49247） • 需常规检测β-内酰胺酶 • 耐药机制是：
1.由质粒介导的TEM-1型 2.由染色体介导的PBP的改变 3.对氯霉素、四环素耐药与R质粒相关
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第二节 鲍特菌属（Bordetella）
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分离培养
培养条件： 需要X、V因子 营养要求高 生长温度为35℃ 血琼脂平板培养基 巧克力琼脂培养基
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菌落特征：巧克力琼脂培养基小、无色透明菌落
•流感嗜血杆菌巧克力琼脂养基菌落
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鉴定
培养需要X、V因子 菌落形态 卫星现象
卫星现象(Satellite phenomenon)