人白细胞介素2,IL-2试剂盒说明书
达科为IL-2 ELISA试剂盒说明书
6. 实验操作中请使用一次性的吸头,避免交叉污染。 7. 使用前检查试剂盒内各种试剂;试剂稀释、加样和中止反应
充分混匀或者摇匀对实验结果尤为重要,最好使用低速频 率振荡器或者反应过程中每 15 分钟手工摇匀一次。 8. 实验板孔加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应孔的孵育 时间一致。 9. 使用洁净的塑料容器盛装洗涤液。
即用型
即用型
*:96/48 Tests
4、 需要实验者自行准备的试剂与仪器:
1. 酶标仪(建议参考仪器使用说明提前预热) 2. 微量加液器及吸头:P10,P50,P100,P200,P1000 3. 蒸馏水或去离子水 4. 全新滤纸 5. 旋涡振荡器和磁力搅拌器 6. 37℃温箱
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5、 注意事项:
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10. 洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干,滤 纸上看不到水印。勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。
11. TMB 对光敏感,避免长时间暴露于光下,避免金属接触影 响结果。有毒,避免用手接触!准备使用的 TMB 若变为蓝 色,表明 TMB 已经污染,请丢弃。请在终止反应后 10 分 钟内读取 OD 值。
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8、结果分析:
1. 有两种设定空白对照的方案: 1) 将 TMB 空白显色孔设为对照。所有的标准品和样品的 吸光值减去空白孔的吸光值后,在坐标纸上画出曲线,以吸 光值作为纵坐标,以浓度作为横坐标。 2) 将零孔设为对照。得到的数据可以直接在坐标纸上画出 曲线。
2. 根据样品的吸光值在坐标上找出对应的浓度。用户也可以使 用各种应用软件来计算。若样品 OD 值高于标准曲线上限,应 适当稀释后重测,计算浓度时应乘以稀释倍数。
小鼠白细胞介素2IL
小鼠白细胞介素2(IL-2)试剂盒使用方法检测范围:96T30 ng/L -1200 ng/L使用目的:本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中白细胞介素2(IL-2)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠白细胞介素2(IL-2)水平。
用纯化的小鼠白细胞介素2(IL-2)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素2(IL-2),再与HRP标记的白细胞介素2(IL-2)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的白细胞介素2(IL-2)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠白细胞介素2(IL-2)浓度。
试剂盒组成1 30倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7 终止液6ml×1瓶2 酶标试剂6ml×1瓶8 标准品(2400ng/L)0.5ml×1瓶3 酶标包被板12孔×8条9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶4 样品稀释液6ml×1瓶10 说明书1份5 显色剂A液6ml×1瓶11 封板膜2张6 显色剂B液6ml×1/瓶12 密封袋1个标本要求1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
1200 ng/L 5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液600 ng/L 4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液300 ng/L 3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液150 ng/L 2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液75 ng/L 1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。
人Human白细胞介素-2IL-2ELISA检测试剂盒使用方法
人(Human) 白细胞介素-2(IL-2)ELISA 检测试剂盒使用方法用途:人IL-2 ELISA试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、缓冲液中细胞上清液及各种体液中的IL-2 。
本试剂盒可以检测天然和重组的IL-2 。
本试剂盒专用于科研、而非用于临床诊断。
试验原理:人IL-2 试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知IL-2 浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。
先将IL-2 和生物素标记的抗体同时温育。
洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。
再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。
产生颜色。
颜色的深浅和样品中IL-2 的浓度呈比例关系。
试剂盒内容及其配制自备材料1.蒸馏水。
2.加样器:5ul、10 ul、50 ul、100 ul、200、500 u、1000lul。
3.振荡器及磁力搅拌器等。
安全性1.此试剂盒的人血制品中的HbsAg、和抗HIV为阴性,但没有实验室可完全保证此血制品不会传染肝炎、AIDS或其它传染病,依据当地的安全条例处理本试剂盒里的成份及血清和血浆等样品。
2.避免直接接触终止液和底物A、B。
一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
3.实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
4.不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
操作注意事项1.试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。
稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
2.实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
3.不用的其它试剂应包装好或盖好。
不同批号的试剂不要混用。
保质前使用。
4.使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
5.使用干净的塑料容器配置洗涤液。
使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6.洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7.底物A应挥发,避免长时间打开盖子。
底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。
重组人白细胞介素—2制备工艺的研究
重组人白细胞介素—2制备工艺的研究白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)是一种由T细胞分泌的免疫调节因子,对细胞免疫和体液免疫调控起着重要作用。
由于其广泛的生物活性和临床应用价值,人白细胞介素-2的制备工艺研究一直备受关注。
人白细胞介素-2可以通过多种方法进行制备,其中最常用的方法是采用重组DNA技术。
该方法首先需要在合适的表达载体中克隆人白细胞介素-2的基因,将其转染至适当的宿主细胞中,通过大规模培养和纯化过程得到目标产物。
重组人白细胞介素-2的制备工艺主要包括以下几个步骤:1.基因克隆:将人白细胞介素-2基因放入适合的表达载体中。
载体通常是质粒,具有能够稳定细胞内基因组的特性。
该载体还包含了启动子、终止子等序列,以调控基因的表达。
2.转染:将已构建好的表达载体转染至宿主细胞中。
常用的宿主细胞包括大肠杆菌、酵母或哺乳动物细胞等。
3.培养:经过转染的宿主细胞在适当的培养条件下进行大规模培养。
培养基中会加入适当的抗生素,以筛选出含有重组基因的细胞群。
4.表达:通过培养过程中的细胞生长和代谢活性,使重组基因在细胞内被转录和翻译成蛋白质。
这样,大量的重组人白细胞介素-2就会被产生出来。
5.纯化:将培养基中的细胞分离出来,通过离心、滤过等操作得到细胞上清液。
然后利用离子交换、凝胶过滤、亲和层析等方法进行层析纯化,去除杂质,得到纯净的重组人白细胞介素-2。
重组人白细胞介素-2的制备工艺需要考虑多个因素。
首先,合适的宿主细胞选择对产量和纯度影响很大。
常用的宿主细胞是大肠杆菌、酵母或哺乳动物细胞,每种细胞系统有其优势和限制。
其次,可以通过优化培养条件来提高人白细胞介素-2的表达水平,如调节培养基成分、温度和pH等。
此外,纯化过程的选择和优化也是影响产品质量的重要因素。
目前,人白细胞介素-2的制备工艺已经相对成熟,并且在临床上得到了广泛的应用。
重组人白细胞介素-2的制备工艺研究不断进步,将为更好地利用白细胞介素-2的免疫调节作用,提供更好的疾病治疗手段和提高临床疗效。
白细胞介素(IL-2)检测及临床意义
白细胞介素(IL-2)检测及临床意义
一、概述
白细胞介素-2 (IL-2)又称T细胞生长因子。
主要由T细胞产生。
是在淋巴细胞增殖分化过程中重要的细胞生长因子,生理作用有刺激T细胞生长、诱导细胞毒作用和对B细胞的生长及分化均有一定的促进作用等
二、检测方法
IL-2主要检测方法为生物素亲合素系统的双抗体夹心ELISA 法。
三、临床意义
1、IL-2可提高人体对病毒、细菌、真菌和原虫等感染的免疫应答,促进细胞毒性T淋巴细胞(CTL)、自然杀伤细胞(NK 细胞)、淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK 细胞)和肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)增殖,并使其杀伤活性增强,进而清除体内肿瘤细胞和病毒感染细胞等。
2、IL-2 还可以增加抗体和干扰素 (IFN)等细胞因子的分泌,在机体免疫应答中具有非常重要的作用,是一种免疫增强剂,具有抗病毒、抗肿瘤和提高机体免疫功能等作用。
3、IL-2的表达异常与临床多种疾病有密切关系,尽管外周血、尿液中IL-2 水平,或激活淋巴细胞上清液中IL-2水平的异常没有疾病特异性,但是可作为相关疾病的辅助诊断、预后及疗效观察提供可靠数据。
4、IL-2升高:肿瘤、心血管病、肝病等疾病时均可使 IL-2 水平升高,在器官移植后早期排斥反应时也出现IL-2表达升高。
5、IL-2降低:在多种原发性免疫缺陷病和继发性免疫缺陷病时均可伴有 IL-2 水平降低,如 SLE、麻风和艾滋病等。
biosharp 人IL-2 ELISA 试剂盒使用说明书
一、产品简介 ������������������� ���������二、检测原理 ������������������� ���������三、试剂盒组分 ������������������� ���������四、储存条件 ������������������ ����������五、注意事项 ������������������ ����������六、其它实验材料 ������������������� ��������七、使用说明 �������������������� �������7.1、样品收集、处理及保存方法 �������������������� � 7.2、试剂准备 �������������������� ������� 7.3、操作步骤 �������������������� ������� 7.4、操作流程图 �������������������� ������� 7.5、操作要点提示 �������������������� ���7.6、结果判断 �������������������� �������八、常见问题分析及解决 ���������� ������������� 2 2 3 3 3 4 4 4 4 5 6 6 6 8目 录全国统一热线:400-600-4213 Elisa试剂盒使用说明书本试剂盒用于定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液等样本中天然和重组IL-2浓度。
使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分,如有任何疑问请与北京兰杰柯科技有限公司或经销商联系,公司将为您提供强有力的技术支持。
仅供研究,不用于临床诊断。
二、检测原理本实验采用双抗体夹心ELISA,用抗人IL-2单克隆抗体预包被酶标板,加入适度稀释的样本和标准品,其中IL-2会与其单抗结合,洗去游离成分;加入生物素化的抗人IL-2抗体,抗人IL-2抗体与结合在单抗上的人IL-2结合而形成免疫复合物,洗去游离的成分;加入辣根过氧化物酶标记的亲合素,生物素与亲合素特异性结合,洗去未结合的酶结合物;加入显色剂,若反应孔中有IL-2,辣根过氧化物酶会使无色的显色剂现蓝色;加终止液变黄。
碧云天生物技术 Human IL-1β ELISA Kit 说明书
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线:400-168-3301或800-8283301 订货e-mail :******************技术咨询:*****************网址:碧云天网站 微信公众号Human IL-1β ELISA Kit产品编号 产品名称包装 PI305Human IL-1β ELISA Kit96次产品简介:碧云天的Human IL-1β ELISA Kit (Human Interleukin-1β Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit),即人白细胞介素1β酶联免疫吸附检测试剂盒,是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆、细胞或组织裂解液、或细胞培养上清液中的IL-1β的ELISA 试剂盒。
本产品检测灵敏度高,特异性强,重复性好。
多次重复检测结果表明,最小检出量为2.2pg/ml ,与人IL-1r α、IL-1sRII 、IL-1sRI 、小鼠IL-1α、小鼠IL-1β等均没有交叉反应,板内、板间变异系数均小于10%。
IL-1即白细胞介素-1(简称白介1),其家族由IL-1α(也称IL-1F1)、IL-1β(也称IL-1F2)、IL-1受体拮抗剂(IL-1 receptor antagonist, 简称IL-1RA, 或IL-1F3)及IL-18、IL-33和IL-1F5~F10组成。
IL-1主要由巨噬细胞产生,此外几乎所有的有核细胞,如B 细胞、NK 细胞、体外培养的T 细胞、角质细胞、树突状细胞、星形细胞、成纤维细胞、中性粒细胞、内皮细胞以及平滑肌细胞均可产生IL-1。
正常情况下只有皮肤、汗液及尿液中含有一定量的IL-1,绝大多数细胞在受到外来抗原或细菌内毒素刺激后才能合成和分泌IL-1。
IL-1β在免疫和炎症反应、骨重建(bone remodeling)、发烧、碳水化合物代谢等生理、病理过程中都有重要作用。
注射用重组人白介素-2
剂开始,逐渐增大剂量或遵从医嘱。使用本品低剂量、长疗程可降低毒性,并且可维持抗肿瘤活性。 【孕妇及哺乳期妇女用药】
孕妇慎用。 【儿童用药】
尚不明确。 【老年用药】
尚不明确。
【药物相互作用】 尚不明确。
(二)抗结核治疗: 辅助用于治疗由耐药结核菌株引起的难治性肺结核:在结核病治疗的强化期,与抗结核药联合使
用,其用法用量为:每次 20 万国际单位(IU),皮下注射,每日 1 次,第 1、3 月分别连续使用 30 日。 【不良反应】
各种不良反应中最常见的是发热、畏寒、疲劳,且与用药剂量有关。一般是一过性发热(38℃左 右),亦可有寒战高热,停药后 3~4 小时可自行恢复正常。个别患者可出现恶心、呕吐、类感冒症状。 皮下注射者局部可出现轻度红肿、硬结、疼痛,所有副反应停药后均可自行恢复。使用较大剂量时, 本品可能会引起毛细血管渗漏综合症,表现为低血压、末梢水肿、暂时性肾功能不全等。使用本品应 严格掌握安全剂量,出现上述反应可对症治疗。 【禁忌】
1. 对白介素-2 或本制剂其它成分有过敏史者。 2. 高热、严重心脏病、低血压者,严重心肾功能不全者,肺功能异常或进行过器官移植者。 3. 重组人白介素-2 既往用药史中出现过与之相关的毒性反应:
(1) 持续性室性心动过速; (2) 未控制的心率失常; (3) 胸痛并伴有心电图改变、心绞痛或心肌梗塞; (4) 心压塞; (5) 肾功能衰竭需透析>72 小时; (6) 昏迷或中毒性精神病>48 小时; (7) 顽固性或难治性癫痫; (8) 肠局部缺血或穿孔; (9) 消化道出血需外科手术。
核准日期:××××年××月××日 修改日期:××××年××月××日
欣吉尔 新形重组人白介素-2简介
2。 诱导细胞毒性T淋巴细胞产生和 增殖
IL-2是抗原激活的细胞毒性T细胞前提细 胞转化为细胞毒性T淋巴细胞的主要因子。 在IL-2存在条件下,细胞毒性T淋巴细胞 繁殖明显增强,特异性地识别肿瘤相应抗 原,特异性地杀伤肿瘤细胞,是肿瘤侵润 淋巴细胞的主要细胞群。
3 对自然杀伤细胞(NK)的作用
注意事项
对于孕妇、老年人及儿童,未进行相关临 床试验且无可靠参考文献建议慎用。
欣吉尔的优势
1.空间构象更稳定
原型IL2 125位的Cys存在易与58、105位的Cys形 成错配。欣吉尔将105位的Cys突变成Ala消除 二硫键错配可能不存在异构体,结构均一。
比活性提高一倍作用更强
半衰期更长,效应更久
随着国内外一些用基因重组方法获得的IL2被批准上市,应用欣吉尔与其他生物反 应调节剂或抗癌药物协同作用。已经是继 手术治疗、化疗、放疗之后又一更新且更 加有效的治疗途径。
作用机理
本品是一种淋巴因子,可使细胞毒性T细 胞(CTL)、自然杀伤细胞(NK)和淋巴因 子活化的杀伤细胞(LAK)增殖,并使其杀 伤活性增强,还可以促进淋巴细胞分泌抗 体和干扰素,具有抗病毒、抗肿瘤和增强 机体免疫功能等作用。
临床使用
1 IL-2与化疗联合应用 目前对恶性肿瘤的治疗提倡联合治疗,单 一的化疗或免疫治疗均未能取得满意的疗 效,因此常用IL-2与化疗药物联合应用。 化疗药物在直接杀伤肿瘤细胞的同时也抑 制了免疫系统,所以使用IL-2与化疗药物 联合应用可以起到协同作用。除全身用药 外,通过介入方式联合化疗药物治疗直肠 癌晚期肝转移已成为现今研究的热点
NK细胞是一种极为主要的杀伤细胞,具 有很强的清除肿瘤细胞和被感染细胞的功 能。NK细胞的活化、分化和增殖都离不 开IL-2。IL-2不仅能促进NK细胞的增殖, 还能促使NK细胞产生TNFα,IFNγ和GMCSF等多种细胞因子,IL-2与IL-12协同作 用增加NK细胞的杀伤能力。所以IL-2在 NK细胞发挥免疫调节、抗肿瘤等功能上 具有重要作用。
泉奇(注射用重组人白介素-2(125Ser))
泉奇(注射用重组人白介素-2(125Ser))【药品名称】商品名称:泉奇通用名称:注射用重组人白介素-2(125Ser)英文名称:Pyritinol Hydrochloride Capsules【成份】重组人白细胞介素-2(125Ser)【适应症】本品可用于癌性胸腹腔积液及黑色素瘤、肾癌等恶性肿瘤的治疗。
【用法用量】用无菌生理盐水溶解,具体用法、剂量和疗程因病而异,一般采用下述几种方法(或遵医嘱)。
1全身给药:皮下注射:重组人白细胞介素-2(125Ser)60~100万IU/m2加2毫升无菌生理盐水溶解,皮下注射3次/周,6周为一疗程。
2区域与局部给药:(1)胸腔注入:用于癌性胸腔积液,重组人白细胞介素-2(125Ser)100~200万IU/m2次,尽量抽去腔内积液后注入,1~2次/周,2~4周(或积液消失)为一疗程。
(2)&nb【不良反应】常见的不良反应为发热、畏寒、肌肉酸疼,与用药剂量有关,也可有寒战高热,个别患者可出现恶心、呕吐,少数病人有皮疹、注射局部红肿等,所有不良反应停药后可自行恢复。
本品大剂量使用时,国外报道有可能引起毛细血管渗漏综合症,表现为血压降低、末梢水肿、暂时性肾功能不全等,应立即停用,积极对症处理。
【禁忌】对本品成份过敏者、严重心肾功能不全者、严重低血压者、高热者禁用。
【注意事项】1 本品溶解后如有摇不散的沉淀、异物或瓶有裂纹者不可使用。
2 启瓶后制品应一次性使用完毕不得分次使用。
3 使用剂量应遵医嘱。
【药物相互作用】本品会影响中枢神经系统功能。
因此,本品与精神药物一同用药治疗后,可能会发生相互作用(例如麻醉药、止痛剂、止吐药、镇静剂、安定药)。
本品若与对肾脏有危害性的药物(例如氨基葡糖苷、镇痛消炎药),对骨髓有毒性的药物(例如细胞毒素的化学疗法),对心脏有毒害的药物(例如阿霉素)或肝毒性药物(例如氨甲蝶呤、天冬酰胺酶)并行给药时,会增强对这些器官系统的毒性作用。
鸡白细胞介素2IL
鸡白细胞介素2(IL-2)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定鸡血清,血浆及相关液体样本中白细胞介素2(IL-2)的含量。
实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鸡白细胞介素-2(IL-2))水平。
用纯化的鸡白细胞介素-2(IL-2)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入鸡白细胞介素-2(IL-2),再与HRP标记的IL-2抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的鸡白细胞介素-2(IL-2)呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中鸡白细胞介素-2(IL-2)浓度。
试剂盒组成:样本处理及要求:1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。
离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5. 组织标本:切割标本后,称取重量。
加入一定量的PBS,PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备用。
人白细胞介素2(IL-2)说明书
人白细胞介素2(IL-2)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围:96T40pg/ml-1200pg/ml使用目的:本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中白细胞介素2(IL-2)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白细胞介素2(IL-2)水平。
用纯化的人白细胞介素2(IL-2)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素2(IL-2),再与HRP标记的白细胞介素2(IL-2)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的白细胞介素2(IL-2)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人白细胞介素2(IL-2)浓度。
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。
加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
il-2 用法
il-2 用法IL-2(白细胞介素-2)是一种由T细胞产生的细胞因子,它在调节免疫反应中起着重要作用。
IL-2的主要功能是促进和调节免疫细胞的生长、增殖和功能。
在临床医学中,IL-2主要用于治疗某些癌症和免疫系统疾病。
一、IL-2的用法1.癌症治疗:IL-2主要用于治疗某些类型的癌症,如黑色素瘤、肾细胞癌、前列腺癌等。
通常与其它药物联合使用,如干扰素、白介素-12等。
2.免疫疾病:IL-2还可用于治疗某些免疫系统疾病,如类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等。
3.疫苗佐剂:IL-2可作为疫苗佐剂,增强疫苗的免疫效果。
二、IL-2的用量和用法1.用量:IL-2的用量因患者的病情和体重而异,一般按照体重每公斤给予0.5-1.5亿国际单位(IU),每周3-5次,连续4-6周。
2.用法:可以通过皮下注射、静脉注射或肌肉注射给药。
在治疗癌症时,通常采用静脉注射,以使药物迅速达到全身循环。
在治疗免疫疾病时,可采用皮下注射或肌肉注射。
三、IL-2的副作用1.过敏反应:IL-2可能引起过敏反应,如皮疹、荨麻疹、呼吸困难等。
2.免疫系统反应:IL-2可能引起免疫系统反应,如淋巴细胞增多、红细胞减少等。
3.神经系统反应:IL-2可能引起神经系统反应,如头痛、恶心、呕吐等。
4.心血管系统反应:IL-2可能引起心血管系统反应,如心率加快、血压升高等。
5.肝肾功能损害:IL-2可能对肝脏和肾脏产生损害,表现为转氨酶升高、肾功能不全等。
四、注意事项1.在使用IL-2前,应进行过敏试验,以确保患者对IL-2无过敏反应。
2.IL-2的使用应在医生指导下进行,遵循医嘱,切勿自行调整用量和用法。
3.在治疗期间,应定期检查患者的肝功能、肾功能、血常规等指标,以监测患者的身体状况。
4.如出现过敏反应或其他严重副作用,应立即停药,并就医处理。
5.孕妇和哺乳期妇女在使用IL-2时应谨慎,并在医生指导下使用。
总之,IL-2是一种重要的免疫调节剂,在治疗某些癌症和免疫系统疾病中具有重要作用。
11 人白细胞介素-2
人白细胞介素-2 (IL2)
Human interleukin-2(IL2)
白介素-2即白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2),又名T细胞生长因子(T cell growth factor,TCRF)。
主要由活化的CD4+T细胞和CD8+T细胞产生的具有广泛生物活性的细胞因子。
是所有T细胞亚群的生长因子,能使T细胞在试管内长期存活,并可促进活化B细胞增殖,故为调控免疫应答的重要因子,也参与抗体反应、造血和肿瘤监视。
本产品系由含有高效表达人IL-2基因的原核表达系统(E.coli)经发酵、分离和高度纯化后经冻干制成。
由134个氨基酸残基组成多肽链,分子量为15.5 kDa 。
本产品为溶液形式,溶在 10 mM 磷酸盐( pH为 7.2)、0.1% BSA 以及10% 甘油中。
★产品号
Cat No : BP0009
★产品组成
名称产品号规格贮藏条件运输AdvCell®人白细胞介素-2(IL2)
BP0009 1 mg/管-20℃避光干冰AdvCell® Human Interleukin-2 (IL2)
★质量控制
完全按照 GMP 标准生产
生物学活性:比活性大于1.0×107IU/mg
纯度:经高效液相色谱(SEC-HPLC)和SDS-PAGE检测,纯度大于98.0%
内毒素:小于0.1EU/μg
★使用说明
建议将冻干 rhIL-2溶解在注射用水中,浓度不低于100 μg/ml,以待进一步稀释至工作浓度。
尽可能避免反复冻融。
复溶后的细胞因子:4℃可稳定储存4-10天;长期保存请分装后存放于-20℃,可稳定保存至少6个月。
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人白细胞介素2(IL-2)酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
第一部分 ELISA简介
ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。
自上
世纪70年代初问世以来,发展十分迅速,目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。
ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。
结合在固相载体表面的抗原
或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。
在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。
用洗
涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。
再加入酶标记的抗
原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。
此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一
定的比例。
加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质
的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。
由于酶的催化效率很高,间接地
放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。
第二部分 ELISA 的样本实验准备
在收集样本前都必须有一个完整的计划,必须清楚要检测的成份是否足够稳定。
对收集后
当天就进行检测的样本,及时储存在4℃备用。
对于隔天再检测的样本,及时分装后冻存在-20℃备用,有条件的,最好-70℃冻存备用。
标本应避免反复冻融。
液体类标本: 包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。
1.血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集
上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2.血浆:应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离
心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3.尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清,保存过程
中如有沉淀形成,应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照此实行。
4.细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。
离心20分钟左右(2000-3000转/
分)。
仔细收集上清。
5.培养细胞:检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100
万/ml左右。
通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂,以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
6.组织标本:切割标本后,称取重量。
加入一定量的PBS,PH
7.4。
用液氮迅速冷冻保存备用。
标本融化后仍然保持2-8℃的温度。
加入一定量的PBS(PH7.4),或组织蛋白萃取试剂,用手工或匀浆器将标本匀浆化。
离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清。
分装后一份待检测,其余冷冻备用。
7.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。
若不能马上进
行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
8.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
第三部分 ELISA试剂盒的检测目的和实验原理
1.检测目的
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中白细胞介素2(IL-2)含量。
2.实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白细胞介素2(IL-2)水平。
用纯化的人白细胞介
素2(IL-2)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素2(IL-2),再与 HRP 标记的白细胞介素2(IL-2)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。
TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的白细胞介素2(IL-2)呈正相关。
用酶标仪在
450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中人白细胞介素2(IL-2)浓度。
第四部分试剂盒组成
第五部分操作步骤
1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待
测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50µl,待测样品孔中先加样品稀释液40µl,然后再加待测样品10µl(样品最终稀释度为5倍)。
加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此
重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50µl,空白孔除外。
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50µl,再加入显色剂B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
15分钟.
10.终止:每孔加终止液50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。
测定应在加终止液
后15分钟以内进行。
12.操作程序总结:
第六部分计算
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,
在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值
由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;
或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的
直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,
计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品
的实际浓度。
(此图仅供参考)
第七部分注意事项
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。
一次加样时间最好控制在5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4.请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。
第八部分检测范围
40pg/ml-1200pg/ml
第九部分保存条件及有效期
1.试剂盒保存:2-8℃
2.有效期:6个月。