水貂株犬瘟热病毒F基因工程疫苗的免疫特性研究
基于水貂源Nectin4受体的犬瘟热病毒敏感细胞系、制备方法和应用[发明专利]
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专利名称：基于水貂源Nectin4受体的犬瘟热病毒敏感细胞系、制备方法和应用
专利类型：发明专利
发明人：赵建军,陶荣珊,张宇飞,陈杰,刘梦佳
申请号：CN201910421114.6
申请日：20190520
公开号：CN110106151A
公开日：
20190809
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及生物技术领域，具体而言，提供了一种基于水貂源Nectin4受体的犬瘟热病毒敏感细胞系、制备方法和应用。
基于水貂源Nectin4受体的犬瘟热病毒敏感细胞系，保藏编号为CGMCC NO.17413。
该细胞系为可以稳定表达水貂源Nectin4基因的Vero细胞系，细胞的犬瘟热病毒敏感性更好，分离的病毒效价稳定，不会发生适应性突变和毒力致弱的问题。
本发明提供的制备方法，将含有优化水貂源Nectin4基因的转基因载体引入宿主细胞，筛选得到表达水貂源Nectin4受体的犬瘟热病毒敏感细胞系，其中，所用优化水貂源Nectin4基因的序列如SEQ ID NO.1所示。
该方法操作简便，安全性高。
申请人：中国农业科学院特产研究所
地址：130112 吉林省长春市净月经济开发区聚业大街4899号
国籍：CN
代理机构：北京超凡宏宇专利代理事务所(特殊普通合伙)
代理人：李双艳
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一例水貂感染犬瘟热病毒的诊治
践案例doi: 10.3969/j.issn. 1008-4754.2019.06.033 ^^G摘要:水貂犬瘟热病毒(CDV)是当前威胁我国水貂养殖业的头号传染病，对我国水貂养殖业甚至毛皮动物养殖业的危害巨大。
2018年7月，某水貂场饲养的幼貂发生C D V感染疫情，经过快速确诊并采取系列治疗措施，疫情得到了有效控制。
关键词:水貂;犬瘟热病毒;诊断;治疗 □ n+基金项目：山东省现代农业产 业技术体系特种经济动物创新团队项目(SDAIT-21-15)作者简介：王建军（1976—），男，陕西人，本科，助理研究员，研究方 向:预防兽医学及兽医临床。
#通讯作者：王玉茂（1964—），男，研究员，主要从事预防兽医学及兽 医临床研究。
一例水貂感染犬瘟热病毒的诊治5^王建军，王玉茂—(山东省滨州畜牧兽医研究院，山东滨州256600)犬瘟热（c a n in e d is te m p e r,CD)是由犬瘟热病毒（c a n in e d is te m p e r vim s,CDV)引起的一种急性、热性、高度接触性传染病 ra,C D V感染的宿主范围非常广泛，除食肉目的8个科动物均易感 外，其还感染偶蹄目猪科灵长目猕猴属内多种动物H，近年来随着 我国毛皮动物养殖业的快速发展，水貂感染C D V常有发生,C D V 已成为威胁我国水貂养殖业的头号传染病，严重降低了我国水貂 养殖业的经济效益，严重危害我国水貂养殖业甚至毛皮动物养殖 业的健康发展。
2018年7月，某水貂场饲养的幼貂率先发生了一 种以体温升高、食欲减退、死亡前抽搐、口吐白沫为主要特征的疑似C D V感染疫情，现将整个诊断和治疗过程汇报如下。
1发病情况该水貂场共饲养水貂3,000余只,2018年7月初，陆续有幼貂 开始发病，发病水貂主要表现为体温升高、食欲减退、死亡前抽搐、口吐白沫，曾经使用抗生素进行治疗,但临床症状不但未见好转且 逐步严重。
犬瘟热病毒临床流行野毒株F蛋白信号肽区分析
犬瘟热病毒临床流行野毒株F蛋白信号肽区分析王凤雪;闫喜军;柴秀丽;吴威;邵西群;罗国良;张海玲;易立;赵建军【期刊名称】《微生物学通报》【年(卷),期】2008(35)4【摘要】根据GenBank上发表的犬瘟热病毒(CDV)融合蛋白基因(F)序列,设计引物扩增F蛋白部分信号肽区,片段长369 bp.对2005年～2007年收集的犬瘟热阳性的水貂、狐、貉实质脏器、血液、尿液等样品进行扩增,获得了13个CDVF蛋白部分信号肽区基因片段.序列分析发现,CDV 野毒F蛋白该区段核苷酸与氨基酸序列与目前我国使用疫苗株CDV3及其他国内外疫苗株比较存在较大差异,与CDV3对应区段的核苷酸同源性在80.7%～83.2%之间,而推导的对应氨基酸序列同源性只有64.8%～71.3%.部分信号肽区的氨基酸疏水性分析,推测其调控功能也发生变化,本研究为CDV遗传变异和分子流行病学提供理论数据.【总页数】6页(P533-538)【作者】王凤雪;闫喜军;柴秀丽;吴威;邵西群;罗国良;张海玲;易立;赵建军【作者单位】中国农业科学院特产研究所,吉林,132109;中国农业科学院特产研究所,吉林,132109;中国农业科学院特产研究所,吉林,132109;中国农业科学院特产研究所,吉林,132109;中国农业科学院特产研究所,吉林,132109;中国农业科学院特产研究所,吉林,132109;中国农业科学院特产研究所,吉林,132109;中国农业科学院特产研究所,吉林,132109;中国农业科学院特产研究所,吉林,132109【正文语种】中文【中图分类】S8【相关文献】1.四平地区戊型肝炎流行病学及临床特征——附376例临床资料分析 [J], 曹丽2.2011年～2013年南关区流行性出血热的流行趋势病情观察与临床护理分析 [J], 吕丹;王晓霞3.犬瘟热病毒地方分离株F蛋白编码区5′部分基因克隆与序列分析 [J], 孙维平;王金福;张永霞4.水貂、狐狸和貉源犬瘟热病毒F蛋白信号肽区基因克隆及遗传变异分析 [J], 孙彦刚;赵建军;白雪;牛登云;邵西群;胡博;刘昊;张海玲;张蕾5.2014～2017年广州市花都区登革热流行病学及临床特征分析 [J], 谭丽娟;徐沛演;张英俊因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
水貂肺炎二联苗制备及免疫效果评价
2019.05作者简介:赵斌(1990-),男,汉,山东省诸城市人,助教,硕士研究生,研究方向:微生物与免疫。
水貂肺炎二联苗制备及免疫效果评价赵斌1张敏敏2苏子涵1孙凯1藏萃妮1孙璐瑶1(1,潍坊工商职业学院262200;2,山东省诸城市畜牧兽医管理局262200)摘要:目前水貂肺炎主要以铜绿假单胞菌、克雷伯氏菌为主,常于水貂换毛期时暴发性流行,且多呈混合感染。
本文针对水貂肺炎面临的突出问题,根据国内外肺炎疫苗的研究进展与市面疫苗对水貂的保护情况,探索克雷伯荚膜多糖作为佐剂及其与铜绿假单胞菌制备二联苗对水貂保护。
通过免疫小鼠产生抗体水平与特异性分泌细胞评价结果表明,荚膜多糖对铜绿假单胞菌抗原具有良好佐剂效用,但效果低于氢氧化铝佐剂。
荚膜多糖是肺炎克雷伯良好抗原,能产生较高抗体。
铜绿假单胞菌菌体疫苗与铜绿假单胞菌上清液疫苗抗体水平无显著差异。
关键词:Balb/c 小鼠;铜绿假单胞菌;荚膜多糖;免疫效果评价水貂出血性肺炎[1]是由铜绿假单胞菌(Pseu⁃domonasaeruginosa,PA)又称绿脓杆菌引起的急性传染病,多发生于夏季炎热潮湿季节,以出血性肺炎为主要特征,发病急,死亡快,常呈地方性暴发性流行,给养貂业造成较大经济损失。
肺炎克雷伯氏菌[2](KlebsIella Peneumoniae)属肠杆菌科菌属克雷伯氏菌种,典型的条件致病菌,在自然界、人和动物体内广泛存在。
当水貂换毛抵抗力下降或本菌大量增殖时,会引起水貂发病甚至暴发性流行。
肺炎克雷伯氏菌引起的感染已上升到仅次于铜绿假单胞菌,居革兰氏阴性菌感染的第2位,且两者常呈混合感染。
近些年来,由于水貂养殖规模的提高,在山东文登和威海、诸城养殖场发生了大量水貂混合感染肺炎病例。
养殖户对抗生素乱用,菌株耐药性不断增强。
致使该病危害程度逐年加深,目前该病已成为危害水貂养殖的主要传染病之一[3]。
国内外针对水貂肺炎疫苗研发主要从铜绿假单胞菌出发,往往忽略克雷伯引起的肺炎。
水貂、狐狸和貉源犬瘟热病毒F蛋白信号肽区基因克隆及遗传变异分析
水貂、狐狸和貉源犬瘟热病毒F蛋白信号肽区基因克隆及遗传变异分析孙彦刚;赵建军;白雪;牛登云;邵西群;胡博;刘昊;张海玲;张蕾【摘要】为了解近年来犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)在中国毛皮动物主要养殖区的流行情况及遗传变异情况,本试验于2012-2014年从山东、河北、辽宁收集疑似犬瘟热的水貂、狐狸和貉病料,经犬瘟热抗原检测试纸条检测和RT-PCR检测为阳性后,克隆测序了15株CDV F蛋白信号区(Fsp)基因序列.序列分析结果显示,15株CDV野毒株Fsp基因核苷酸序列和氨基酸序列的相似性均为93.6％～100.0％,与疫苗株相似性为80.7％～81.7％.基因系统进化分析结果显示,15株野毒株均属于中国当前流行的Asia-1基因型.氨基酸序列比对分析结果显示,Fsp蛋白在氨基酸3-14、16-37、47-67位等处存在高变异.通过对当前流行CDV野毒株Fsp基因序列分析,结果表明该Fsp基因区具有较高的变异率,可作为CDV基因分型的依据,同时本试验结果为毛皮动物犬瘟热的防控提供了参考依据.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2015(042)004【总页数】9页(P838-846)【关键词】水貂;狐狸;貉;犬瘟热病毒;F蛋白信号肽(Fsp)【作者】孙彦刚;赵建军;白雪;牛登云;邵西群;胡博;刘昊;张海玲;张蕾【作者单位】中国农业科学院特产研究所经济动物疫病研究室,长春130122;中国农业科学院特产研究所经济动物疫病研究室,长春130122;中国农业科学院特产研究所经济动物疫病研究室,长春130122;青岛农业大学动物科技学院,青岛266109;中国农业科学院特产研究所经济动物疫病研究室,长春130122;中国农业科学院特产研究所经济动物疫病研究室,长春130122;中国农业科学院特产研究所经济动物疫病研究室,长春130122;中国农业科学院特产研究所经济动物疫病研究室,长春130122;中国农业科学院特产研究所经济动物疫病研究室,长春130122【正文语种】中文【中图分类】S852.65犬瘟热病毒(canine distemper virus，CDV)为有囊膜的单股、负链、不分节段的RNA病毒，属于副黏病毒科(Paramyxoviridae family)、麻疹病毒属(Morbillivirus genus)。
貂狐貉犬瘟热疫苗研究进展
貂狐貉犬瘟热疫苗研究进展作者：张爽，尹茉莉，冷雪，李福军来源：《畜牧兽医科学》 2018年第2期犬瘟热（Canine distemper，CD）是一种急性、热性的病毒性传染病。
可感染水貂、狐、貉等多种动物，是我国毛皮动物的一种重要的传染病[1]。
在全世界大部分国家和地区均有犬、狐、貉、水貂和多种野生动物暴发犬瘟热的报道。
死亡率很高，平均为23.2%，每年不断暴发流行，发病率约10%，给毛皮动物养殖业造成了巨大的经济损失[2]。
目前，预防犬瘟热最有效的方法是免疫接种犬瘟热疫苗。
在毛皮动物养殖业，传统疫苗的使用一直是该病的主要防控手段，但是随着科学技术的发展，各类新型疫苗已被深入研究，并取得较大进展。
1灭活疫苗Puntoni首次使用福尔马林灭活感染CDV的犬脑组织，制备了组织灭活苗，该疫苗无法有效地控制犬瘟热。
夏咸柱等用静水压高压方法灭活CDV后，以蜂胶为佐剂制备的犬瘟热灭活疫苗，该疫苗对犬的保护率达89％。
国外对于水貂、狐、貉犬瘟热的防治曾使用脏器灭活疫苗，由于犬瘟热灭活苗免疫原性差、产生抗体水平较低、保护期短等缺点，现已很少使用。
2 弱毒活疫苗国外研制多种疫苗用于犬瘟热的防治，在弱毒活疫苗研究方面曾使用鸡胚成纤维细胞制备弱毒疫苗，目前主要使用Vero细胞传代制备犬瘟热弱毒疫苗。
在我国从60～80年代学者主要从国外引进的弱毒疫苗中分离毒种，接种鸡胚成纤维细胞制备水貂犬瘟热弱毒疫苗,如钱国成等从国外水貂犬瘟热弱毒疫苗中分离出左FDV3毒种，接种鸡胚致病变，成功研制了水貂犬瘟热弱毒鸡胚细胞疫苗，经过实验证明，能控制犬瘟热流行。
目前，国内也使用Vero细胞增殖犬瘟热病毒制成犬瘟热弱毒活疫苗，目前国内使用最广泛的犬瘟热弱毒疫苗主要有吉林特研生物技术有限责任公司生产的水貂犬瘟热活疫苗（湿苗、冻干苗）、齐鲁动物保健品公司生产的犬瘟热冻干活疫苗，能有效的防治、控制毛皮动物犬瘟热的发生。
由于水貂犬瘟热活疫苗存在毒种变异、散毒、不利于保存等问题，研制一种安全有效的疫苗防控毛皮动物犬瘟热发生具有重要意义。
犬瘟热病毒F基因克隆及序列分析
犬瘟热病毒F基因克隆及序列分析高华峰;朱建波;赵文华;姚俊;张念祖【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2007(28)7【摘要】从犬瘟热病毒检测阳性的3份(KM1、KM2、KM3)病料中进行F基因的克隆测序,并与其他5株代表性参考毒株的同一基因序列进行比较(国内外流行毒株以及疫苗毒株).结果表明,KM1与KM2有95.7%的核苷酸同源性,其氨基酸序列完全相同;KM3株与KM1有1个氨基酸的差异,与参考的5株犬瘟热病毒的F基因核苷酸和氨基酸分析同源性分别为91.1%～96.5%和96.8%～100%.【总页数】4页(P40-43)【作者】高华峰;朱建波;赵文华;姚俊;张念祖【作者单位】农业部热带亚热带动物病毒病重点实验室,云南昆明,650224;农业部热带亚热带动物病毒病重点实验室,云南昆明,650224;农业部热带亚热带动物病毒病重点实验室,云南昆明,650224;农业部热带亚热带动物病毒病重点实验室,云南昆明,650224;农业部热带亚热带动物病毒病重点实验室,云南昆明,650224【正文语种】中文【中图分类】S852.659.5;S858.292【相关文献】1.狐、貉源犬瘟热病毒H和F基因的克隆与序列分析 [J], 闫如勋;陈立志;吴威;赵建军;柴秀丽;闫喜军;倪佳;张海玲;高晗;白雪;张蕾2.狐源犬瘟热病毒H基因和F基因的克隆与序列分析 [J], 吕品;胡传伟;杨笃宝;谢之景3.恒河猴源犬瘟热病毒N、F基因的克隆与序列分析 [J], 邱薇;王文博;胡挺松;余静;郭平;郑颖;张富强;范泉水4.犬瘟热病毒贵州株(CDV-GZ1)F基因的克隆及序列分析 [J], 曾智勇;周莉;刘志杰5.小熊猫源犬瘟热病毒株H、F基因的克隆及序列分析 [J], 蒋梅;陈武;翟俊琼;卜婉迪;谢逸伦;刘灿彬;单芬;罗满林因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
水貂犬瘟热活疫苗与水貂细小病毒性肠炎灭活疫苗制备及其联合免疫效果研究
水貂犬瘟热活疫苗与水貂细小病毒性肠炎灭活疫苗制备及其联合免疫效果研究罗国良;张洪亮;王振军;冯二凯;易立;郭利;程悦宁;程世鹏;王守富;王宏正【摘要】制备了水貂犬瘟热活疫苗 (以下简称犬瘟活疫苗) 与水貂细小病毒性肠炎灭活疫苗 (以下简称肠炎灭活苗) 各3批, 通过半成品及成品检验结果显示, 生产的2种疫苗合格且生产工艺稳定.通过采用肠炎灭活苗稀释犬瘟活疫苗, 实现2种疫苗联合 (简称联合疫苗) 后, 体外接种Vero细胞, 采用专用稀释液稀释的犬瘟活疫苗作对照, 在25℃存放条件下, 5 h内两者的犬瘟热病毒含量无明显差异, 表明该方法对犬瘟热病毒的存活无明显影响.将联合疫苗免疫水貂10只, 犬瘟活疫苗、肠炎灭活苗分别免疫10只水貂作为单苗对照组, 免疫后21 d采血, 测定3组的抗体水平, 联合疫苗组的犬瘟热病毒中和抗体和细小病毒HI抗体分别与对应单苗的抗体水平无明显差异, 表明联合疫苗具有与单苗相当的免疫效力.该研究为进一步研发水貂犬瘟活疫苗与肠炎灭活苗联苗奠定了基础.%The study prepared 3 batches of mink canine distemper live vaccine and mink parvovirus inactivated vaccine respectively. The results of semi-finished products and finished products of vaccine showed that the two vaccines were qualified and the production process was stable. Vero cells were inoculated after the combination of two vaccines by the mink parvovirus enteritis inactivated vaccine to dilute the live vaccine of the canine distemper. The results indicated that the virus contents of live vaccine of the canine distemper which was diluted by the mink parvovirus enteritis inactivated vaccine (trial group) at 25℃, 5 h was not significantly different compared to the canine distemper live vaccine which was diluted by the special diluent (controlgroup). The combined vaccine immunized 10 minks, canine distemper vaccine and enteritis inactivated vaccine were immunized 10 minks as the control group, and the antibody levels of the three groups were determined until 21 days after immunization. The SN against CDV and the HI against MEV of the combined vaccine were not significantly different from that of the corresponding single vaccine, respectively. This study indicated that the combined vaccine has the same immune effect as the single vaccine. This trial establish basis for further studying the combined vaccine of mink canine distemper vaccine and mink parvovirus inactivated vaccine.【期刊名称】《特产研究》【年(卷),期】2019(041)001【总页数】4页(P22-25)【关键词】水貂犬瘟热活疫苗;水貂细小病毒性肠炎灭活疫苗;联合免疫【作者】罗国良;张洪亮;王振军;冯二凯;易立;郭利;程悦宁;程世鹏;王守富;王宏正【作者单位】中国农业科学院特产研究所,长春 130112;长春西诺生物科技有限公司,长春 130012;中国农业科学院特产研究所,长春 130112;中国农业科学院特产研究所,长春 130112;中国农业科学院特产研究所,长春 130112;中国农业科学院特产研究所,长春 130112;中国农业科学院特产研究所,长春 130112;中国农业科学院特产研究所,长春 130112;吉林农业大学,长春 130118;长春西诺生物科技有限公司,长春 130012【正文语种】中文【中图分类】S852.4水貂犬瘟热是引起水貂以双相热、白细胞减少、鼻炎和粘膜炎为特征的传染病[1]。
水貂抗犬瘟热病毒中和抗体滴度的测定
水貂抗犬瘟热病毒中和抗体滴度的测定刁非非;赵永峰;姜常青;韩铠怿;谢之景【摘要】为了解当前犬瘟热疫苗及免疫程序的在水貂的免疫效果,该研究在6个水貂养殖场,随机对CD疫苗免疫接种后55～60d的水貂进行心脏采血,共采集、制备84份血清.采用血清微量中和试验,测定84份水貂血清中抗CDV的中和抗体滴度.结果表明,只有1份水貂血清中抗CDV的中和抗体滴度为94,占1.2％,其余83份血清样品中的抗CDV中和抗体滴度小于10,达98.8％.【期刊名称】《山东畜牧兽医》【年(卷),期】2016(037)008【总页数】2页(P12-13)【关键词】水貂;犬瘟热病毒;中和抗体【作者】刁非非;赵永峰;姜常青;韩铠怿;谢之景【作者单位】山东农业大学动物科技学院山东泰安271018;山东省动物生物工程与疾病防治重点实验室山东泰安;山东农业大学动物科技学院山东泰安271018;山东省动物生物工程与疾病防治重点实验室山东泰安;山东农业大学动物科技学院山东泰安271018;山东省动物生物工程与疾病防治重点实验室山东泰安;山东农业大学动物科技学院山东泰安271018;山东省动物生物工程与疾病防治重点实验室山东泰安;山东农业大学动物科技学院山东泰安271018;山东省动物生物工程与疾病防治重点实验室山东泰安【正文语种】中文【中图分类】S852.65+5当前水貂CD疫苗免疫程序的免疫效果很差，这是造成在水貂养殖过程中CD流行的重要因素，因此研究制定科学水貂CD疫苗免疫接种程序成为当务之急。
犬瘟热（Canine Distemper，CD）是由犬瘟热病毒（Canine Distemper virus，CDV）引起犬科、鼬科、和浣熊科等动物的一种急性、高度接触性传染性疾病［1］。
CDV是副粘病毒科麻疹病毒属的成员，病毒粒子呈多形性，多数呈球形，直径大多数在150～300nm之间，为负链单股不分节的RNA病毒，只有一个血清型。
目前CDV自然感染的动物范围在不断扩大，除犬科外，人们又发现了许多CDV的新宿主，例如鼬科的雪貂、水貂，浣熊科的小熊猫、浣熊，猫科的猫、狮、孟加拉虎、豹，大熊猫科的大熊猫，偶蹄目猪科的猪，日本猕猴和人等。
狗瘟热疫苗的研发与应用
狗瘟热疫苗的研发与应用近年来，犬瘟热（Canine Distemper）作为一种具有高度传染性和致命性的病毒性疾病，给大量的犬只带来了威胁。
为了控制和预防犬瘟热的传播，狗瘟热疫苗的研发与应用显得尤为重要。
本文将探讨狗瘟热疫苗的研发历程以及其在实际应用中的效果和前景。
一、疫苗研发历程狗瘟热疫苗的研发始于上世纪五六十年代，经过多年的努力和研究，科学家们逐渐摸索到了制备狗瘟热疫苗的方法。
首先，他们需要从感染犬瘟热的犬只体内提取病毒，并对其进行分离和培养。
然后，通过对病毒进行灭活或减毒处理，制备出能够刺激犬只免疫系统的病毒片段或疫苗。
在疫苗研发的过程中，科学家们还面临着一些挑战。
狗瘟热病毒的变异性较高，不同地区、不同株系的病毒存在差异，因此制备出适用于不同地区的疫苗具有一定难度。
此外，狗瘟热疫苗的安全性和有效性也是研发过程中需要考虑的重要因素。
二、疫苗的应用效果经过多年的研究和改进，现代狗瘟热疫苗已经获得了显著的应用效果。
首先，狗瘟热疫苗能够有效预防犬只感染狗瘟热病毒，从而降低疾病的发病率和死亡率。
其次，疫苗还能够提高犬只的免疫力，增强其对其他病原体的抵抗能力，对维护犬只的整体健康至关重要。
除了预防感染病毒的效果外，狗瘟热疫苗还可以起到控制病毒传播的作用。
疫苗接种能够减少病毒在犬只之间的传播，从而有效遏制疾病的传播链条。
这对于疫情的控制和公共卫生的维护至关重要。
三、疫苗的前景展望随着科学技术的不断进步，狗瘟热疫苗的研发和应用仍在不断发展。
目前，疫苗的制备技术已经相对成熟，但仍有改进的空间。
例如，科学家们正在研究用基因工程技术制备狗瘟热疫苗，以提高疫苗的安全性和效果。
此外，疫苗的应用范围也在不断扩大。
除了对未感染的犬只进行预防接种外，科学家们还在探索病后犬只的疫苗应用。
这将为已经感染狗瘟热病毒的犬只提供额外的控制手段，促进其康复和免疫系统的恢复。
总之，狗瘟热疫苗的研发和应用在预防和控制狗瘟热病毒传播方面发挥了重要作用。
犬瘟热病毒水貂株的分离与鉴定_苏凤艳[1]
![犬瘟热病毒水貂株的分离与鉴定_苏凤艳[1]](https://img.taocdn.com/s3/m/b495e92a482fb4daa58d4bdd.png)
第38卷第2期东 北 林 业 大 学 学 报Vol.38No.2 2010年2月JOURNAL OF NORT HE AST F ORESTRY UN I V ERSI TY Feb.2010犬瘟热病毒水貂株的分离与鉴定1)苏凤艳 魏吉祥 王卓聪 王春雨 王全凯(吉林农业大学,长春,130118) 摘 要 从疑似犬瘟热病死水貂的肝脏中分离出1株病毒,并进行了系统的鉴定。
结果表明:该毒株接种于Ver o传代细胞后,出现了典型而有规律的病变;其病毒理化特性与犬瘟热病毒相同;致细胞病变作用可被兔抗C DV阳性血清阻断;间接免疫荧光试验表明接种病毒的BHK-21细胞出现特异性的亮绿色荧光,而正常细胞则未见绿色荧光;对提取接种病料后的Ver o细胞培养物中的总RNA进行RT-PCR扩增,得到了324bp和1053bp的目的片段,证明该毒株为C DV。
关键词 水貂,犬瘟热,分离鉴定分类号 S852.65Isol a ti on and I den ti f i ca ti on of Can i n e D istem per V i rus fro m M i n k/Su Fengyan,W ei J ixiang,W ang Zhuocong,W angChunyu,W ang Quankai(College of Chinese MedicinalM aterials,J ilin AgriculturalUniversity,Changchun130118,P.R.China)//Journal of Northeast Forestry University.-2010,38(2).-79～82A strain of canine diste mper virus(C DV)was is olated and identified syste m ically fr om the liver of a dead m ink sus2pected of having canine diste mper.Results indicated that typ ical and disci p linary pathol ogical changes appeared on Ver ocells after being inoculated with the treated pathol ogical material,and the physical and che m ical characteristics of the is o2lated virus were si m ilar t o those of CDV.The cyt opathogenic effect was interdicted by rabbit anti2CDV positive seru m.I n2direct i m munofluorescent assay showed that idi osyncratic bright green fluorescence appeared on BHK221cells inoculatedwith CDV,but not in the nor mal BHK221cells.The t otal RNA extracted fr om Ver o cell culture inoculated with the viruswere a mp lified by reverse transcri p ti on2poly merase chain reacti on(RT2PCR),and t w o objective seg ments(324bp and1053bp)were obtained.Thus,the is olated virus strain was p r oved t o be CDV.Keywords M ink;Canine diste mper virus;Is olati on and identificati on 犬瘟热(canine diste mper,C D)系由副黏病毒科、麻疹病毒属的犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)引起的一种急性、高传染性、高死亡率的疾病,主要侵害易感动物的呼吸系统、消化系统和神经系统。
犬瘟热病毒水貂分离株F1基因的克隆表达
犬瘟热病毒水貂分离株F1基因的克隆表达张蕾;柴秀丽;张大鹏;张海玲;赵建军;高晗;白雪;徐磊;闫喜军【摘要】To prepare CDV antigen for diagnosis, gene engeneering method was explored. CDV genome was extracted, Fl gene was amplified by RT-PCR cloned and then sequenced. The Fl gene was cloned into expression plasmid pET28a and expressed by the induction of IPTG inducer. The recombined protein was examined by SDS-PAGE and Western blotting,purified by Ni column. The results indicated the recombined protein could react with CDV positive serum and might be used as CDV diagnostic antigen.%本研究旨在利用基因工程的方法,制备犬瘟热(canine distemper,CD)疾病诊断用抗原.提取犬瘟热病毒基因组,RT-PCR扩增犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)F1基因序列,克隆并测序.将F1基因定向克隆到原核表达载体pET28a多克隆位点,阳性重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG 诱导表达.SDS-PAGE和Western blotting鉴定表达产物,并用Ni柱亲和层析纯化目的蛋白.结果显示表达的F1重组蛋白能与犬瘟热标准阳性血清发生反应,具有良好的反应原性,可以作为犬瘟热疾病的诊断用抗原.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2011(038)009【总页数】4页(P65-68)【关键词】犬瘟热病毒;F1基因;表达【作者】张蕾;柴秀丽;张大鹏;张海玲;赵建军;高晗;白雪;徐磊;闫喜军【作者单位】中国农业科学院特产研究所,吉林吉林132109;中国农业科学院特产研究所,吉林吉林132109;长春市动物卫生监督所,吉林长春130061;中国农业科学院特产研究所,吉林吉林132109;中国农业科学院特产研究所,吉林吉林132109;中国农业科学院特产研究所,吉林吉林132109;中国农业科学院特产研究所,吉林吉林132109;中国兽医药品监察所,北京 100081;中国农业科学院特产研究所,吉林吉林132109【正文语种】中文【中图分类】Q78水貂犬瘟热（canine distemper，CD）是由犬瘟热病毒（canine distemper virus，CDV）引起的一种高度接触性、致死性传染病，每年给水貂养殖企业造成巨大的损失。
水貂犬瘟热预防与防治
高尧 （ 辽 宁省 海城 市 畜产品 安全监 察 所 １ １ ４ ２ ０ ０ ）
摘要 ：水貂 犬瘟热致病原具 有病 毒的一般性特 点 。适存 于偏
低 温 度 ， 自然 宿 主 较 多 ， 以 犬科 和 猫 科 动 物 为 主 ，水 貂 是 较
眼部 出现 浆液性 、黏液性乃至化脓性 眼睑分泌物 ，并附着眼 内角或 眼裂周 围 ，严重 者整个眼睛糊上 。 口裂和鼻等部位 的 皮肤增厚 ．病有 附着一 层类似糟糠和豆腐 渣类 的干燥物 。病
龄左 右进 行首免 。笔者结合实践 总结认 为 ，此 阶段处于母源 抗体保 护力基 本消失 、潜在的发病 风险期 （ 潜伏 期） ，感染 多呈 隐性表现 。勉强接 种相关疫苗 ，经常造成 免疫失败 。因
此 ，有条件 的规模 化水 貂养殖 场应于 ２ ０日龄 以后综合 检测
温）至常温以上维持一定的休养期 （ ２ 月 以上 ） ，接受 自 然日
前至 ３ ０ — ４ ５日龄之间 ．不宜过晚ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ，并于 ２ － ３ 周 后加强免疫一 次 ，如此可 以发挥最佳疫 苗免疫实效 ．令幼兽 获得持续有效
体 ；Ｃ Ｄ Ｖ的 自然宿主较多 ，以犬 科和猫科动物为主 ，另外还 有鼬科 、浣熊科 、大熊猫 科 等动 物 ，其 中雪貂 和 水貂 均是 Ｃ Ｄ Ｖ较 为常见的宿主 ，且其感染症状 相对较为严重 、危害性
点 ，适存 于偏 低温度 ，负温度 值 以下 、避 光环境可无 限延 长 存活期 ；Ｃ Ｄ Ｖ对 高温 、光 照 （ 日光 、紫外线 ） 、干燥抵抗 力
不强 ，所 以 ，养 殖环境长期保 持清洁 、干燥 ，并在常温 （ 室
（ １ ）现代 水貂 人工规模 化养殖 ，一般 常规习惯 于 ６ ０日
水貂IgG Fc段基因及抗原性分析
水貂IgG Fc段基因及抗原性分析蒋磊;赵翠;沈强;郭浩;王秋菊;常维山【摘要】根据GenBank上发布的水貂IgG中Fc段的序列（L07789.1），设计合成1对引物用于扩增水貂Fc段基因。
从水貂脾脏中提取总RNA，RT-PCR扩增水貂Fc段基因，获得大小约606 bp的片段，将其连接T载体并测序。
然后进行遗传进化分析，在此基础上利用Western blot进行抗体杂交试验。
结果显示水貂IgG Fc与Fc犬核苷酸序列同源性为85.0%，氨基酸序列同源性为80.5%。
Western blot显示水貂IgG重链可以和抗犬IgG有效结合，遗传进化分析得出哺乳动物中水貂与犬IgG Fc的亲缘关系最近。
通过以上分析和相关文献得出用犬的诊断试剂可以检测水貂疾病，或用犬的抗血清进行水貂疾病治疗。
%Detection methods for distemper and canine parvovirus can be universal for dogs and minks according to cloning and phylogenetic analysis of Fc gene as well as reactivity of mink IgG in Western blot. In order to obtain a certain length of Fc segment gene, a pair of primers were designed based on Fc gene sequences of mink IgG (L07789) published in GenBank. Total RNA materials were extracted from spleens of minks and amplified in RT-PCR. The results showed that the Fc segment gene consisted of 606 bp. Amplified Fc fragment was then cloned into the vector PEasy-T1 and sequenced for phylogenetic analysis. Antibody hybridization test was performed in Western blot. The nucleotide sequence homology between mink and canine was 85.0%and amino acid sequence homology was 80.5%. The heavy chain of mink IgG reacted with anti-dog IgG in Western blot. It was concluded that the Fc gene of mink and dog IgGs had the closestrelationship within mammalians based on genetic evolution. The results obtained from the preceding study and related literature confirmed that dog and mink diseases could be mutually diagnosed and treated using the reagents of either dog or mink origin.【期刊名称】《中国动物传染病学报》【年(卷),期】2014(000)002【总页数】5页(P78-82)【关键词】水貂;IgG;Fc基因;遗传进化分析;Western blot【作者】蒋磊;赵翠;沈强;郭浩;王秋菊;常维山【作者单位】山东农业大学动物科技学院，泰安271000;山东农业大学动物科技学院，泰安271000;山东农业大学动物科技学院，泰安271000;山东农业大学动物科技学院，泰安271000;莱芜菁华药业，莱芜271100;山东农业大学动物科技学院，泰安271000【正文语种】中文【中图分类】S852.42近年来我国特种动物的养殖规模在不断地扩大，水貂的养殖量也达到了一定的规模，但是目前流行于水貂群体之间的疾病多为病毒性疾病，如犬瘟热、犬细小病[1]。
犬瘟热病毒F蛋白分子生物学研究进展
犬瘟热病毒F蛋白分子生物学研究进展
许红丽;易立;王建科;杨莘;程世鹏
【期刊名称】《特产研究》
【年(卷),期】2011(033)002
【摘要】犬瘟热病毒融合蛋白是囊膜糖蛋白,是产生中和抗体的主要保护性抗原,结构相对保守.融合蛋白介导病毒囊膜和细胞膜融合,决定病毒在宿主体内扩散的能力,在病毒的致病性及免疫原性上具有重要作用.因此,对犬瘟热融合蛋白基因及其蛋白的结构和功能进行研究具有重要的意义.本文从蛋白结构、蛋白功能、核酸序列比对等多方面对融合蛋白进行了阐述.
【总页数】5页(P52-56)
【作者】许红丽;易立;王建科;杨莘;程世鹏
【作者单位】中国农业科学院特产研究所,吉林省特种经济动物分子生物学重点实验室,吉林吉林132109;中国农业科学院特产研究所,吉林省特种经济动物分子生物学重点实验室,吉林吉林132109;中国农业科学院特产研究所,吉林省特种经济动物分子生物学重点实验室,吉林吉林132109;中国农业科学院特产研究所,吉林省特种经济动物分子生物学重点实验室,吉林吉林132109;中国农业科学院特产研究所,吉林省特种经济动物分子生物学重点实验室,吉林吉林132109
【正文语种】中文
【中图分类】Q939.4
【相关文献】
1.犬瘟热病毒核衣壳蛋白分子生物学研究进展 [J], 罗彬;易立;王建科;程世鹏
2.犬瘟热病毒分子生物学特征研究进展 [J], 乔军
3.犬瘟热病毒分子生物学研究进展 [J], 高娃;杨敬;陈振文
4.犬瘟热病毒分子生物学研究进展 [J], 王琛;袁宝;任文陟
5.犬瘟热病毒分子生物学研究进展 [J], 杨敬;李永清
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水貂犬瘟热的防治
水貂犬瘟热的防治方珍【期刊名称】《新农业》【年(卷),期】2016(000)013【总页数】2页(P43-43,44)【作者】方珍【作者单位】大连市畜牧总站，辽宁大连 116000【正文语种】中文随着人们生活水平的不断提高，毛皮动物养殖业近年来取得了很大的发展。
毛皮产品中水貂皮以其毛绒齐短、光亮华贵深受欢迎，随之而来，水貂的饲养数量和规模也日益扩大。
但是，犬瘟热作为水貂最易感的疫病之一，不但给养殖场带来了严重经济损失，也给从事毛皮动物饲养、繁殖和疫病防治的工作者带来很大的难题。
对水貂犬瘟热的治疗目前没有特效的药物。
应早期发现，彻底隔离、消毒，建立科学的免疫制度及免疫程序。
在患貂未出现神经症状前，用抗血清治疗具有一定疗效，同时还可用抗菌药物、皮质激素类药物及维生素等进行以控制继发感染为中心的对症治疗，同时进行良好的护理，对早期患貂的治愈可起到一定帮助。
当患貂出现明显症状时，大多会出现预后不良。
科学的饲养管理对防治犬瘟热的发生至关重要。
目前在犬瘟热没有得到很好控制的情况下，应尽量采取封闭的饲养方式，可通过限制外来人员进入养殖场内，隔离观察、预防注射新引进的动物等方式进行控制。
对群养动物，应按照性格、年龄分群甚至分地饲养，群体之间尽量少来往。
而且分散饲养，易于隔离，一旦有疫病发生，可缩小传染范围，易于治疗和扑灭。
除了采用科学的饲养管理方式，养殖场还应使用科学的饲料配方。
一方面可防止水貂出现营养不良的症状，另一方面可促进水貂发育完成，具备良好的体质和抵抗力。
给动物舍消毒是要清除日常饲养环境中的病原体，为动物创造既舒适又卫生的环境。
养殖过程中，消毒情况的好坏直接影响到貂群的健康，必须做好笼舍的消毒工作。
消毒方法应将过去使用一种消毒剂、平面消毒的方式，转变为多种消毒剂交替使用、立体化、全方位的消毒。
各养殖场应尽量做到自繁自养。
在春季等犬瘟热流行的季节，应禁止外带犬进入养殖场。
彻底消毒动物舍、场地，以3%烧碱溶液或10%福尔马林消毒。