BD多色流式全面解决方案-20150114中科院
BD多色流式全面解决方案课件
BV650
BV711
BV711
BV786
BV786
PE
PE-CF594
PE-Cy5
PE-Cy7
BUV395
BUV395
BUV737
BUV737
2
2
3
45Leabharlann 文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
BD Horizon Brilliant™ Violet
• 六种被紫激光激发的染料 – 基础多聚体: BV421 and BV510 – 串联体: BV605, BV650, BV711 and BV786
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荧光素分辨率等级
• 等级由细胞经不同克隆，不同规格的抗体在多种流式细胞仪上的实验所得的染色指数（分辨 率）的比较决定
• 激光器的能量，PMT电压，光学部件，抗体克隆和生物样品等多种因素均会影响荧光素/试 剂在某个特定仪器上的效果
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流式多色方案中荧光素选择的重要性
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荧光素的选择是关键
V450
BV510
BV605
BV421
CD 3
CD4
• 合适的荧光素选择帮助我们更好的理解实验 • 对于弱的抗原，亮的染料尤为重要
BD Horizon Brilliant Ultraviolet (BUV)
BUV395 中等亮度
Exmax/Emmax: 348 nm/395 nm 滤光片: 379/28BP
BD FACSAria 高速流式细胞分选仪 - 微生物技术国家重点实验室
仪器的操作和使用
①打开电源，对系统进行预热；
②打开气体阈，调节压力，获得适宜的液流速度；开启光源冷却系统；
③在样品管中加入去离子水，冲洗液流的喷嘴系统；
④利用校准标准样品，调整仪器，使在激光功率、光电倍增管电压、放大器电路增益调定的基础上，0 。
和90 。
散射的荧光强度最强，并要求变异系数为最小；
⑤选定流速、测量细胞数、测量参数等，在同样的工作条件下测量样品和对照样品；同时选择计算机屏上数据的显示方式，从而能直观掌握测量进程；
⑥样品测量完毕后，再用去离子水冲洗液流系统；
⑦因为实验数据已存入计算机硬盘（有的机器还备有光盘系统，存贮量更大），因此可关闭气体、测量装置，而单独使用计算机进行数据处理；
⑧将所需结果打印出来。
在操作和使用中一定要注意如下事项：
1 ）光电倍增管要求稳定的工作条件，暴露的较强的光线下以后，需要较长时间的“暗适应”以消除或降低部分暗电流本底才能工作；另外还要注意磁屏蔽；
2 ）光源不得在短时间内（一般要1h 左右）关上又打开；使用光源必须预热并注意冷却系统工作是否正常；
3 ）液流系统必需随时保持液流畅通，避免气泡栓塞，所使用的鞘流液使用前要经过过滤、消毒；
4 ）注意根据测量对象的变换选用合适的滤片系统、放大器的类型等；
5 ）特别强度每次测量都需要对照组。
BD流式分选的原理和应用课件
21
部分应用实例
科学是复杂的，工具是简单的
22
转染绿色荧光蛋白GFP细胞的分选
用带GFP (绿色荧光蛋白 ) 标记的质粒转染细胞， 在488nm激光激发下， 表达GFP 的细胞发绿色荧光。本实验为U937 细胞转染GFP和目的基因， 用BD FACSAria III 分选高表达GFP目的基因的细胞。本案例用BD FACSAria III 分选GFP阳性细胞， 该 样本GFP阳性的目标细胞含量仅为1 .9%， 分选后回测， 目的细胞纯度高达99%。
细胞凋亡-Annexin Ⅴ/PI双标记法
FITC Annexin V/PI染色和流式细 胞仪分析。Jurkat细胞（人T细胞 白血病）用6µM的喜树碱或0.1% DMSO（阴性对照）4小时，引导凋 亡。细胞根据Annexin V-FITC凋亡 检测试剂盒的染色指南，用FITC Annexin V和碘化丙啶（PI）染色。 与DMSO对照组相比，喜树碱处理会 增加细胞的早期凋亡（PI阴性， Annexin V阳性），即图中绿色部 分。死细胞（PI阳性，红色部分） 和活细胞（Annexin V和PI阴性， 黑色部分）群体很容易辨别。图中 的数据来自BD Accuri C6流式细胞 的BD CFlow® Plus。
BD公司流式细胞仪
FACSJazz
FACSAriaII
Influx
FACSCantoII
LSRFortessa
Accuri C6
流式细胞仪特点及检测标本
BD多色流式全面解决方案PPT学习课件
SEB
CD4
IFN-g PE
IFN-g PE
CD8
紫激光配置
检测光学部件需匹配所用的 荧光素 • 许多仪器已经配置可以使
用纳米晶体染料 • 为最大限度地发挥BD
Horizon Brilliant Violet 的 组合优势，仪器可能需要 更新配置 • 更新配置可提高扩展仪器 的性能
BD Horizon Brilliant Ultraviolet (BUV)
302 43 81
7
4
Hu CD4
174 47 58 166
4
3
Hu CD19
85 16 15 40
5
6
Ms CD8a
86 24 50 151
4
2
Ms CD11b
68 15 26
5
3
Hu CD127
37
9
4
Ms CD11b
Hu CD19
Hu CD127
Better resolution of dim markers
CD25 FITC
CD25 BB515
CD25 FITC or CD25 BB515 and CD3 PerCP-Cy5.5, CD4 APC, CD127 PE
荧光素同抗原的搭 配
• 亮的染料 • 减少交叉激光激发 • 减少样品制备影响
BV421
BV711
BV650
PE
BV786
BV605
BV510
与B其V CD他4 试染剂与料PE的比较比较
Buffer Compatibility – Surface Stain
Transcription Factor Buffer
1-5成绩
单位姓名考号考场语文数学英语科学品社中小鲍守芮0150100177988243324中小杨铠源01501002733.55811124中小司光阳01501003753.53014611中小杨凯01501004773.581313531中小高少珍0150100575950232819中小刘智文0150100674666311416中小谢佳欣0150100777158302824中小郑悦0150100877686713747中小毛柯权01501009767.566483544中小徐晴0150101076941423341中小刘馨慧01501011733.588192116中小杨加旺0150101275382202715中小李起丞0150101377793483745中小孙一01501014758.58073530中小杨宗宇01501015777.575264631中小马冰玉01501016770.565323316中小曹庭硕01501017757.54814916中小孙昭旭01501018753.55822379中小唐亚晴01501019785.557173343中小尹其航01501020755.57852932中小董文跃01501021748165126中小陈怡彤0150102277817402331中小曹玲0150102376883643142中小李健超0150102476530171817中小杜培石0150102576986162523中小陈青青0150102677349232530中小王娜01501027764.563142619中小孙萍0150102875869312115中小孙仕洋015010297646823188中小刘红振01501030729.581372423中小刘嘉璐0150103186169122118中小李娅0150103287375311939中小鲍守磊01501033855.581222811中小谢以诺015010348323828414中小高甜甜01501035864.592572124中小徐开明01501036867.568544523中小葛成意0150103787469363831中小周毅01501038827.54225171中小吴亚群01501039874.571454128中小刘超01501040840.52832924中小刘凯0150104186869332320中小高振01501042810.5212382中小吴庆枝015010438517191527中小赫凤娇0150104487941283141中小赵仁慧01501045855.531212118中小许可艳0150104686565542538中小夏俊豪0150104788391633947中小郑尚海0150104886989343231中小葛文迪01502049860.58171715中小尹启凡0150205086215142514中小吴衍昭01502051863.583403525中小司光照0150205685725153218中小尹成豪0150205786750313627中小谢家慧0150205887781563838中小谢芬0150205988892684946中小高中强0150206086354243733中小谢荣月0150206157438443738中小谢颖01502062567.531284134中小董旭01502063570.572735042中小谢友彤01502064564.539452931中小王皎0150206556933304038中小齐昕阳01502066573.572504146中小齐永乐01502067570.541473618中小谢智欣01502068561.528204137中小陈明凯01502069582.573413340中小李坤01502070578.573574342中小刘东浩01502071564.515252512中小潘慧0150207257267763446中小高云01502073579.563644747中小刘富超015020745642222201中小周祥宇01502075563.558224443中小高子阳01502076556.510211820中小于文慧01502077576.551644838中小齐媛01502078574.538373532中小张朕01502079571.525313829中小魏文琪0150208057276423942中小孙秀云0150208157976634138中小谢昕芮0150208257362693239中小王继晖01502083570.554253513中小管晨0150208457966313342中小乔飞0150208553321445中小张岳婷0150208657853284638中小张安琪01502087563.544504433中小谢宁0150208856849314315中小郭芙菡0150208957543604434中小杨宇祥0150209055124131924中小陈海涛01502091654982017中小司涵01502092676.566603821中小藏尚斌015020936764223419中小齐瑞雪0150209468167774530中小席广昊0150209567770663226中小邵聪01502096663.575213118中小刘兆宸01503097679.580484650中小蒋存0150309867985673220中小赵祥宇0150309968395674142中小刘晗0150310068074454037中小吴晓庆01503101670.575353327中小谢荣杰01503102661.541251913中小刘毅01503103660.535171722中小臧云霞01503104673.573523935中小杨宗睿0150310566548202215中小唐悦茹01503106666.568262730中小李昊源0150310769189714535中小赵震01503112671.586254538中小鲍福临0150311368080354538中小银端0150311468684504737中小曹守正01503115664.577154320中小杜现锋0150311668682293631中小李汶骏0150311767358353538中小齐旭0150311868790565142中小周浩0150311967048283928中小谢荣欢0150312067674264332中小张力丹0150312196380283715中小赵振兴0150312298189255137中小孙瀚文01503123978.592434140中小马健衷0150312497984554337中小崔秀琪01503125980.578234326中小唐瑞欣0150312697883613533中小鲍晓雨01503127956.588123216中小孙智刚01503128964.574292928中小鲍克峥0150312996781184227中小朱干01503130962.587444927中小朱晓雨01503131968.585454932中小曹富有01503132964.557212722中小臧有政01503133916.553823中小马彦群01503134973.578294524中小唐冬01503135964.57717234中小管彦红0150313697078161723中小谢晓涵01503137942101158中小管国欣0150313897249141322中小陈文正0150313997882224942中小齐坤01503140958.572143714中小孙杰015031419504116157中小谢明芮01503142958.521231425中小徐珊珊0150314397381533730中小孙臣禹01503144945.569272619驿头陈祥雨06501145238.541191722驿头乔颜06501146269.576873528驿头王正0650114723336732917驿头乔娟0650114826852723032驿头陈凡祥06501149271.574293729驿头张文琦0650115027268764736驿头王棋06501151258.564244110驿头张然06501152252.561523227驿头刘心蕊06501153261.540292826驿头刘玉豪06501154261.56030268驿头乔立豪0650115523223221910驿头齐秀鑫06501156257.566562920驿头时大壮0650115725250272724驿头朱金正06501158251.574722712驿头陈静06501159269.566752729驿头马宇航06501160265.551882725驿头刘佰仕0650116127279693622驿头刘统正0650116223457152316驿头乔英杰0650116323671351414驿头齐玉娇06501168358.571732921驿头刘云06501169356.544641626驿头袁小嵛06501170338.58252510驿头王玉镔0650117137178773527驿头乔安冉06501172362.571833932驿头朱衍来0650117336576813725驿头马瑞阳06501174377.575673328驿头乔立雪0650117537549811933驿头席语0650117635952721623驿头齐晓然06501177373.579923928驿头马瑞林06501178360.537642728驿头张欣06501179378.567873135驿头苗芮0650118037772813529驿头乔立舜06501181369.561583510驿头刘义甜065011823542329107驿头赵俊0650118335974763325驿头宋佳乐0650118434735171717驿头陈瑞星0650118536185393724驿头陈慧娟06501186382.584883640兴台孟文慧25501187272.575294243兴台姜茂敏2550118826865334132兴台杨雨欣25501189277.571513737兴台吴谦2550119025951131426兴台祝诺2550119127668663546兴台高如如2550119227255264733兴台咸会晓冉2550119326749483747兴台张富君25501194268.538233234兴台李然25501195250.524211119兴台亓玉城25501196260.551262328兴台高冠甲2550119726038211323兴台靳文胜2550119824340131632兴台李因水2550119924553242420兴台沈悦2550120027158312945兴台张雨2550120127766374043兴台李洪运25501202271.563224342兴台刘泽阳25501203271.554454446兴台咸柯羽25501204262.549403347兴台王鹏皓25501205263.554263839兴台刘泽臣2550120626758203135兴台刘德盛25501207257.53924916兴台刘浩然2550120827946222938兴台刘婷婷2550120938171463646兴台郑敏2550121036833381338兴台刘浩25501211367.572234038兴台刘梦喆25501212350.566264331兴台班聪2550121336136352041兴台房玉婷2550121436643292942兴台房斌25501215359.556142230兴台蒋臻25501216363.576213539兴台郑帅2550121737691443543兴台郑硕25501218358.547301835兴台王媛255012193542125730兴台刘晓霖25501224353.539311436兴台王浩阳2550122534941223633兴台孙天美25501226338.520211522兴台王家龙255012273383817140兴台咸圆圆25501228300600兴台王文菲25501229361.562223924兴台孙橦25501230376.569273948岐山张强025********.557332341岐山张涵0250123226167331634岐山苏玉乐025********.582474445岐山杨正顺0250123428468703941岐山王朝瑞0250123527480473946岐山王玉瑶0250123628678843051岐山徐圣佳025********.547312845岐山张进025********.54129143岐山王霖颖025********.545322737岐山路杨025********.532372234岐山徐佳佳0250124126232542734岐山葛琳025********.562662841岐山姜威龙025********.558372928岐山王传杰0250124428082754151岐山杨涵025********.537383239岐山杨兆旺0250124626042242836岐山张雪025********.522281331岐山陈红025********.549332539岐山韩羽彤025********.586674748岐山葛乐0250125037551762348岐山葛喜025********.539551541岐山赵云0250125236643391737岐山杨宗贺025********.573422343岐山徐圣龙025********.545371531岐山葛文豪025********.51423106岐山张宝025********.555261624岐山杨国瑞0250125739280724248岐山姜鑫025********.587773949岐山葛叙025********.571613946岐山康金金0250126038183864747岐山齐宜冉025********.569512347岐山菅杰025********.583583340岐山李奎恩0250126336463291938岐山孙艺荫025012643332221127岐山刘洋洋0250126538058463145岐山刁寒0250126638569423344南屯张继洋115012677列6241261133南屯李齐115012687列6681843541南屯李庆芝115012697列84.593944248南屯张俊仪115012707列60.550681827南屯东丽媛115012717列8376793029南屯李潘115012727列72.581842433南屯刘洋115012737列7140701522南屯刘庆乐115012747列7887813741南屯李萍115012757列65.557742532南昌唐修惠1250128026825201711南昌李鸿睿12501281226152105南昌邵星博125012822471291316南昌田富格1250128327430262630南昌孙敬涛1250128424619111211南昌魏益良12501285214.5822160南昌冯继柱12501286262.551112311南昌冯振刚12501287258.526101912南昌闫辉轩12501288241.58887南昌邵明阳12501289253.561783南昌唐金辉1250129025378221312南昌唐成壮125012912302817105南昌孙婕1250129227121112327南昌唐玉清12501293265.549392124南昌闫康12501294212.54740南昌孙超12501295221.5151740南昌唐振慧12501296267.51922412南昌田盈盈12501297237.5371838南昌唐瑞悦12501298246.52715822南昌闫浩12501299252161060南昌高原12501300239.551280南昌田成洋12501301223.511140南昌唐真1250130227160271529马峪张宁1950130337758572545马峪马丹丹1950130437670633347马峪鲁珂佳19501305355.52543744马峪文静1950130637670692648马峪孙万杰19501307364.562283638马峪马梦瑶1950130837581572946马峪韩宁1950130937674433742马峪文明宇19501310351.512211838马峪马京翠19501311376.582763547马峪马京强19501312371.560221345马峪文士坤1950131337873322348马峪马旭1950131437679442237马峪姜彦新19501315350.518162242马峪马翔1950131636060321643马峪丁成明19501317372.532291947马峪马燕洁195013183680.545334348马峪杜宝雨1950131938154572544马峪杜磊19501320381.581723744马峪姜云19501321375.553583349马峪马正瑞19501322349.559292439马峪马天凤1950132336945411748马峪潘永康19501324356.562432943马峪李雨1950132537162472346李庄李明泽2250132627261692324李庄李秀月2250132728388844747李庄郭寒雪22501328259.550662721李庄张迪2250132926266541631李庄李琳2250133027174803236李庄张恒2250133127262643926李庄王明阳22501336277.579704936李庄王民圆22501337273.571543535李庄季文雯2250133828062662831李庄李浩正22501339269.546551917李庄李昕娣2250134027044472324李庄张庆娇22501341268.567592527李庄郭绘亮2250134226977183420李庄李阔22501343274.584774034康小齐洋045013445列71.574753138康小秦鸿运045013455列6661161936康小康雯慧045013465列68.574662135康小康程程045013475列59.548301716康小康荣新045013485列55.52128712康小康永辉045013495列5735251123康小康荣寒045013507列70.56025925康小康晓045013517列541641819康小颜冰045013527列67.546441222康小王雨婷045013537列73.574632335康小王雨桐045013547列4373291221回龙张玉迪0750135526766842635回龙赵恩宝0750135627879913436回龙乔恒0750135728267913640回龙赵涵07501358272.574883246回龙能冉0750135927475874049回龙梁宇07501360270.582892140回龙李付磊07501361265.587952238回龙王馨0750136227797954445回龙王荣豪07501363231.582691533回龙张振凯0750136427385903544回龙能玉博07501365269.568812138回龙赵康07501366272.566844241回龙能健飞0750136726772873646回龙能浩森07501368258.570833241回龙赵敏0750136927567834545回龙杨婷075013702395563831回龙李想07501371267.578843242回龙梁芹芹07501372269.590944349回龙李进保0750137325270813042回龙谢会07501374271.594862845回龙乔雪0750137526973902738回龙赵子涵0750137626475891735回龙贾继军0750137726869852935回龙张艳波07501378265.577752336回龙李政0750137927872863050回龙乔浩然0750138025761693836回龙张凯075013812323477822回龙刘百鑫0750138227696913834回龙能超0750138327684843246回龙 李增龙07501384249.564762030回龙能继增07501385242.570582531东流张鑫雨085013866列58.576551123东流王倩085013876列83.594714338东流魏飞085013926列7879513539东流甄乔085013936列74.587843136东流王景豪085013948列6475583427东流魏景梅085013958列5757542525东流魏景悦085013968列69.575562823东流牛耀085013978列6268603123东流王丁卉085013988列56.555451012东流甄宜原085013998列56.58465241东流魏景旺085014008列64.590742711东流赵文085014018列60.574451322东流杨翔凯085014028列63.585671120北仲武圣翔165014031列68.545431325北仲刘云静165014041列651546533北仲李欣蔓165014051列63.534342237北仲刘亚芝165014061列7351681740北仲刘珂165014071列84.554772142北仲刘文博165014083列77.521542637北仲刘孟祥165014093列68.563533137北仲刘莉165014103列80.567802545北仲刘鑫宝165014113列72.556582737北仲刘素素165014123列79.560841726北仲刘婷婷165014135列74.536522129北仲刘敏165014145列83.531673329北仲刘国燕165014155列461733017北仲刘艳丽165014165列63.545472140北仲刘晓岚165014175列81.534751946北仲刘仕举165014187列58.52334727北仲刘旺165014197列64.528482743北仲亓胜165014207列74.564402740北仲刘彬165014217列5022201312北仲刘璐165014227列81.561911739北仲咸皓165014237列55.547232014北仲刘金雨165014247列77.53373940北仲刘晴晴165014257列47.51028519255 125.5 121.5 258.5 186 180 218 324 267.5 233 184.5 204 307 217.5 262.5 223.5 151.5 186.5 242.5 206.5 94 196 295 154 226 207 193.5 201 188 201.5 189 245 205.5 124 266.5 265.5 256 120.5 267.5 141.5 221 72.5 127 228 154.5 255 331 263 125.5 138 254.5155 219 298 351 219 236 206.5 312.5 213.5 215 287.5 217.5 192.5 274.5 298.5 146.5 300 305.5 134 235.5 130.5 282.5 221.5 199.5 276 302 280 202.5 256 63 248 239.5 211 261 136 114 267.5 197 306 277 214.5 309.5 289 334 282 246.5 165.5 157.5 278.5 176 223.5 337270 245 332 219 257 232 292 303.5 307 259.5 299 213.5 233.5 244 278.5 288.5 200.5 91.5 258.5 194.5 213 85 179 282 204.5 138 150.5 283 195.5 139.5 297.5 190 256 242.5 301 199.5 226.5 186.5 187.5 108 230.5 182 238.5 268.5 258.5 280 147 172290.5 287 283.5 260 225 314.5 219.5 301.5 297 236.5 126 270 136 249 333.5 263.5 241 275.5 165 293 235 250 197.5 127.5 190.5 157 146 168 236 265 243.5 262.5 233.5 222.5 213 147.5 216 283 193 243.5 219.5 196 212 184.5 237.5 292 191.5 1409 211.5 262.5 229.5 213 293.5 304 288 331 223.5 131.5 209.5 184.5 211 277.5 214.5 331 212.5 192 146.5 208.5 338.5 276 219.5 205 257.5 189.5 106.5 179.5 337 337.5 295.5 347 263.5 296.5 216 98 263 276 173 307 361.5 223.5 297 294.5 218 324 253.5101 62.5 160.5 127.5 74.5 89.5 180 92 155 200.5 29.5 59.5 126.5 105.5 120.5 86 66.5 41.5 204 265 292 177.5 292 231.5 291 275 143.5 319.5 214.5 257 261 151.5 214 202.5 852.5 264 318.5 271.5 203.5 223 236.5 252 251 351 225.5 231 295 265210 248.5 220 311.5 289.5 198 264.5 170.5 123.5 151 189.5 138 191.5 268.5 178 280 320 318 314.5 327 304.5 309.5 360 232.5 329 279.5 307.5 310 286.5 317 198 305.5 347.5 277 326.5 299 282 288 278.5 318 263 175 337 324 241.5 228.5 223.5 329.5251.5 244 178.5 230.5 266.5 214.5 246.5 194.5 164 190.5 249 278.5 215.5 252.5 297.5 250.5 266.5 212.5 243.5 113 216.5 255.5 149.5 210.5 245.5 117 289.5 159.5 232.5 109.5。
BD多色流式全面解决方案
FITC PE PerCP-Cy5.5
FITC PE PerCP-Cy5.5 PE-Cy7
FITC PE PerCP-Cy5.5 PE-Cy7
FITC （ BB515） PE PE-CF594 PerCP-Cy5.5 PE-Cy7
FITC （BB515） PerCP-Cy5.5
APC
APC APC-Cy7
分辨率的重要性 优化仪器设置：CS&T 荧光溢漏
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The BD Horizon™ Tour
分辨率 分辨率 –
流式细胞仪区分弱染色信号和未染色信号的程度 在多色情景下更为复杂
清晰分群的能力取决于背景和阴性群体的分散度。
BD Horizon™ 之旅: 多色方案设计的新视野/26
BD Horizon™ 之旅: 多色方案设计的新视野/19
荧光素同抗原的搭配
• 理解抗原表达的特性 • 选择最合适荧光素偶联的抗体
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The BD Horizon™ Tour
抗原的分类
三大类: • Primary: 很好鉴定，容易区分阴阳性细胞群，
阴阳性峰分得很开 – Examples: CD3, CD4, CD45
Exmax/Emmax: 348 nm/395 nm 滤光片: 379/28BP
BUV737 明亮
Exmax/Emmax: 348 nm/737 nm 滤光片: 740/35BP; 690LP
两种被355nm紫外激光激发的新荧光素 • BUV395: 对其他检测其几乎无溢漏
• BUV737: 对Alexa Fluor 700中等溢漏
检测光学部件需匹配所用的 荧光素
• 许多仪器已经配置可以使 用纳米晶体染料
• 为最大限度地发挥BD Horizon Brilliant Violet 的 组合优势，仪器可能需要 更新配置
BD流式细胞仪操作规范室指定专人操作仪器并做好仪器的清洗
BD流式细胞仪操作规范
1.实验室指定专人操作仪器，并做好仪器的清洗、维护、保养
登记工作。
2.流式上样管在前处理过程中应杜绝凝块，以防上样通路堵塞。
3.开机前检查机器大体状态，鞘液筒、废液筒情况。
先开主机，
再开电脑，预热20分钟后仪器可以使用。
4.科研流式使用前严格执行预约制度。
实验室非指定操作人员
不得擅自操作仪器，因使用不当造成仪器损伤需承担赔偿。
5.实验完成后严格按照日清洗流程进行清洗，完毕后将仪器设
于待机位置，15分钟后可将仪器关闭。
先关闭电脑，再关闭主机。
6.严格按照月清洗流程进行每月一次的大清洗。
并记录仪器清
洗后使用情况。
7.与仪器售后客服保持联系，及时沟通仪器使用过程中碰到的
问题。
并做好仪器的维护保养工作登记。
仪器负责人：邹寒冰
仁济医院中心实验室。
多相流实验-消除严重段塞流的方法总结
防止或消除严重段塞流的方法一、引言在海洋油气开发中，当海底的混输管线到达海洋平台时，需要与上升管连接。
在较低的气液流速下，集输和上升管路组成的系统中会出现称为严重段塞流的特殊有害流型，这种流型给设计和生产带来许多问题，系统压力的剧烈波动和出现长液塞会造成分离器控制困难，甚至出现生产中断，同时在深海油田中严重段塞流现象会产生很高的背压，对油藏造成不利影响，甚至出现死井。
因此，深入系统地研究严重段塞流的发生机理和流动特征，探索消除严重段塞流的可行方法，是我国海洋油气工业走向深水油田开发过程中急需解决的科学问题。
段塞流是混输管道中经常出现的一种流型，其流动特征表现为间歇出现液塞、压力和流量大幅度变化，是典型的不稳定工况。
海上油气田的集输管道多为两相混输管道，其海底水平部分的末端通过立管连接到海洋石油平台上，水平管道与垂直立管构成了类似半U 形管的“下倾管2立管”结构。
对于海洋石油平台，尤其是深海平台的集输管道，这种结构极易引发严重的段塞流，一般称之为“立管严重段塞”或“严重段塞”。
当严重段塞发生时，管内瞬时液体流量能增大到平均流量的5～20 倍，而气体流量则几乎降为0 ；当液塞通过后，管内瞬时气体流量同样会激增。
管内流量和压力的剧烈波动，往往会迫使下游关闭设备，造成停产，甚至会损坏管道或处理设备。
二、消除严重段塞流的方法近年来，随着深海油田的开采，很多研究者对强烈段塞流的消除方法进行了研究，其中Schmidt等人提出了在上升管顶部安装节流装置来消除强烈段塞流；Almeida 提出了在上升管底部的上游适当位置安装文丘利管来消除强烈段塞流；Jansen等人提出了采用气举法来消除强烈段塞流；Johal 等人提出安装多相泵来消除强烈段塞流。
很明显，前两种方法属于节流法；后两种方法属于扰动发。
除此之外，还有气举法、泡沫法以及海洋分离法等。
其中目前最常用的方法是节流法，即在立管顶端（出口端）安部安装节流装置。
（一）节流法节流法已经被证实是一种能成功消弱或消除强烈段塞流的方法，并被成功应用于油田的生产之中。
BD流式细胞仪脱机数据处理系统的建立(全文)
BD流式细胞仪脱机数据处理系统的建立(全文)1BD流式细胞仪系统介绍和应用问题分析流式细胞术(FlowCytometry,FCM)是七十年展起来的高级科学技术,它集计算机技术、激光技术、流体力学、细胞化学、细胞免疫学于一体。
它可测量细胞大小、内部颗粒的性状,还可检测细胞表面和细胞浆抗原、细胞内DNA、RNA含量等；可对群体细胞在单细胞水平上进行分析,在短时间内检测分析大量细胞,并收集、储存和处理数据,进行多参数定量分析。
流式细胞仪主要由五部分构成：①流动室及液流驱动系统②激光光源及光束形成系统③光学系统④信号检测与存储、显示与分析系统⑤细胞分选系统其中第四部分是数据处理系统的核心，信号检测与存储是指在流式细胞仪采集获得的信息，以Listmode(列表排队)方式存入计算机硬盘或其他存储介质中；信号显示与分析是指数据采用一维直方图、二维点阵图、等高线图和密度图显示和分析。
我中心自2003年购入美国BD公司的FACSCalibur流式细胞仪，目前日检测样品数近100管，但因该系统不能同时进行信号检测和分析，致使FACSCalibur流式细胞仪的使用率无法提高，检测者不能及时分析数据、获得结果，无法适应日益增长的应用需求。
因此，我们根据实际需要，建立了FACSCalibur流式细胞仪脱机数据处理系统。
2脱机数据处理系统的构想和实施2.1脱机数据处理系统的构想脱机处理是指在不受FACSCalibur流式细胞仪主机控制的外部设备上独立进行数据处理，或与实时控制系统、主机并行的数据处理。
脱机数据处理系统大大提高了现有系统的使用率和数据处理能力,实现了数据检测和数据分析的同时进行。
2.2脱机数据处理系统的构成增加一台苹果计算机来承担系统的信号显示与分析过程的任务；通过HUB和线建立与原有苹果计算机的互联；在苹果计算机上设置数据共享，以实时获得信号检测与存储过程取得的数据。
2.3脱机数据处理系统的实施2.3.1FACSCalibur流式细胞仪数据处理系统的原有配置及技术规格FACSCalibur流式细胞仪数据处理系统（FACStation）基本配置是苹果(Apple)公司的PowerPCG4（MacOSROM9.6.1,Built-inMemory513MB,VirtualMemory513MBusedon FACStation,LargestunusedBlock451.1MB）；17英寸LCD，键盘，鼠标，加密锁；操作系统为MacOS9.2.2；通过一块PCI数据接口卡与FACSCalibur主机连接。
BD流式细胞分选仪原理和应用
从分选后染色体在激光共聚焦显微镜下图片 可见分选得到的单条染色体，充分说明了 BD FACSAria Sorp分选纯度高，分选活性 好。
能够分选百万分之 一的细胞
3.肿瘤学
FACSAria分选出1000个 细胞后具有很强的致瘤 性，说明FACSAria分选 出的细胞活性很强。
4. 干细胞研究----分选出的细胞高纯度和高活性
染色体分析和分选图谱（人的23对染色体）
本实验在北京大学医学院 分析测试中心用BD FACSAria Sorp的445nm 及355nm两根激光器对协 和医院基础所的小鼠细胞 样本进行染色体分析分选。 用BD SORP FACSAria 成 功分析并分选到小鼠染色 体，CA3/Hoechst333258 流式图谱可见，很明显的 各号染色体，不同染色体 间的区分度很好，直接说 明了Sorp Aria的355nm及 445nm激光器可以充分激 发Hoechst 333258和 CA3，并且仪器的检测分 辨率高、灵敏度好。
• 胚胎干细胞 • 分化为任何细胞 • Very Small Embryonic-Like Stem Cell ( VSEL) • 分化为任何细胞 • 来源于骨髓或外周血 • 间充质干细胞 • 分化为造血系统外的其它任何细胞 • 来源于骨髓/脐带血/外周血 • 造血干细胞 • 分化为造血系统细胞 • 来源于骨髓/脐带血/外周血 • 成体干细胞 • 器官特异性分化潜能 •iPS •任何来源的细胞 •风险性尚在评估 人胚胎干细胞治疗： 从一个细胞开始的治疗
从一个细胞开始的治疗esc?胚胎干细胞?分化为任何细胞?verysmallembryoniclikestemcellvsel?分化为任何细胞?来源于骨髓或外周血?间充质干细胞?分化为造血系统外的其它任何细胞?来源于骨髓脐带血外周血?造血干细胞?分化为造血系统细胞?来源于骨髓脐带血外周血?成体干细胞?器官特异性分化潜能?ips?任何来源的细胞?风险性尚在评估2012年诺贝尔生理及医学奖
流式细胞仪（BD FACSCalibur）的管理和维护
流式细胞仪（BD FACSCalibur）的管理和维护
鲁敏;李家璜;华子春
【期刊名称】《北方药学》
【年(卷),期】2013(000)010
【摘要】本文主要通过对流式细胞仪的结构和工作原理的介绍，了解流式细胞仪在科研和临床各个领域的应用，通过新、老流式细胞仪对同样样品检测，简明扼要地论述了对仪器的精心管理和维护，延长仪器的使用寿命，确保科研的准确性。
【总页数】1页(P147-147)
【作者】鲁敏;李家璜;华子春
【作者单位】江苏省南京大学医药生物技术国家重点实验室南京 210093;江苏省南京大学医药生物技术国家重点实验室南京 210093;江苏省南京大学医药生物技术国家重点实验室南京 210093
【正文语种】中文
【中图分类】R197.39
【相关文献】
1.BD FACSJazz 分选型流式细胞仪操作技巧及维护方法 [J], 周翔
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多色比色法在生物传感平台的研究进展
多色比色法在生物传感平台的研究进展
徐一;林梦瑶;宫晓群
【期刊名称】《应用化学》
【年(卷),期】2024(41)1
【摘要】比色法是生物传感中较为常用的一种检测手段,因其具有较高的灵敏度和特异性而受到广泛关注。
其中,基于多色探针的多色比色法已成为近年来的研究热点,灵敏度较单色比色法显著提高、且具有更高的分辨率和肉眼辨识度,通过观察颜色变化可进行可视化半定量检测,又可通过计算颜色比率或基于智能手机图像处理软件进行快速定量检测。
基于有机小分子荧光显色、纳米材料显色及酶促反应显色3种不同的显色机理,综述了多色荧光小分子探针、多色纳米材料比色探针及多色酶促反应比色探针的检测机理以及它们在实际样本检测中的应用,并进一步探讨了其面临的挑战及未来发展机遇。
【总页数】18页(P3-20)
【作者】徐一;林梦瑶;宫晓群
【作者单位】天津大学生命科学学院
【正文语种】中文
【中图分类】O652.7
【相关文献】
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Stain – Fix/Perm
Perm III Solution
Stain - Fix/Perm
Fix/Perm - Stain
Fix/Perm - Stain
Hu CD4 BV510
Hu CD4 BV786
BD Horizon™ 之旅: 多色方案设计的新视野/12
BD Horizon™ 之旅: 多色方案设计的新视野/30
仪器设置
优化 PMT电压使弱荧光细胞的分辨率最大化
• CS&T 设置
•
对每个参数，设置PMT电压值使弱荧光微球的平均荧光强度等同于10倍 的电子噪音 o 这是CS&T设置目标MFI值的PMT电压 o 对大多数参数适用，但对紫激光(V450, BV421)和远红外激光 (APC-Cy7, PECy7) 通道电压倾向于将电压设置得过高
阴性群体背景高，不能清晰分 群。
阴性群体背景低但分散度（相 对标准偏差）大，不能清晰分 群。
BD Horizon™ 之旅: 多色方案设计的新视野/27
染色指数: 分辨率的度量标准
染色指数 亮度/MFI 阴性信号的宽度/SD
•
亮度取决于
•
试剂
•
抗原密度，所用荧光素 通道电压增益，激光器能量
•
仪器
BD Horizon™ 之旅: 多色方案设计的新视野/19
荧光素同抗原的搭配
• • 理解抗原表达的特性 选择最合适荧光素偶联的抗体
/20
The BD Horizon™ Tour
抗原的分类
三大类: • Primary: 很好鉴定，容易区分阴阳性细胞群， 阴阳性峰分得很开
– Examples: CD3, CD4, CD45
CD4
• Secondary: 很好鉴定，较高水平表达，经 常连续性表达
– Examples: CD27, CD28, CD45RA, CD45RO
CD45RA
• Tertiary: 低水平表达，激活性marker，或者 表达区分不明显
– Example: CD25
多色方案中荧光素选择的重要性 荧光素同抗原的搭配 优化仪器配置，提高分辨率 多色Panel设计实例分析
BD Horizon™ 之旅: 多色方案设计的新视野/4
流式多色方案中荧光素选择的重要性
/5
The BD Horizon™ Tour
荧光素的选择是关键
488 nm
640 nm
405 nm
561 nm 355 nm # Lasers
2
2
3
4
5
BD Horizon™ 之旅: 多色方案设计的新视野/9
BD Horizon Brilliant™ Violet
• 六种被紫激光激发的染料 – 基础多聚体: BV421 and BV510 – 串联体: BV605, BV650, BV711 and BV786 • 亮的染料 • 减少交叉激光激发 • 减少样品制备影响
T 细胞panel中-可能用到的marker: CD3, CD4, CD8, CD45RA, CD27, CCR7, CD25, CD127
BD Horizon™ 之旅: 多色方案设计的新视野/24
优化仪器配置，提高分辨率
分辨率的重要性 优化仪器设置：CS&T 荧光溢漏
/25
FITC
BD Horizon™ 之旅: 多色方案设计的新视野/16
BD Horizon Brilliant Blue (BB515)
• Brightness: Very Bright • Ex Max 490 nm • Em Max 515nm
• Filter: Same as FITC (e.g. 530/30 nm)
The BD Horizon™ Tour
分辨率
分辨率 –
流式细胞仪区分弱染色信号和未染色信号的程度 在多色情景下更为复杂
清晰分群的能力取决于背景和阴性群体的分散度。
BD Horizon™ 之旅: 多色方案设计的新视野/26
分辨率 vs. 背景
“Negative” Dim Bright
阴性群体背景低，分群清晰。
BD Horizon™ 之旅: 多色方案设计的新视野/22
抗原和荧光素的组合
low medium high
BD Horizon™ 之旅: 多色方案设计的新视野/23
抗原共表达
Marker的共表达：
− Population resolution is impacted by spillover. 细胞群的分辨率 会受到通道溢漏的影响 − Markers co-expressed on specific cell types should be conjugated to spectrally separated fluorochromes. − 在特定细胞亚群共表达的marker应该偶联光谱分离的荧光素
ห้องสมุดไป่ตู้
Ms CD11b
Hu CD19
Hu CD127
BD Horizon™ 之旅: 多色方案设计的新视野/18
Better resolution of dim markers
CD25 FITC
CD25 BB515
CD25 FITC or CD25 BB515 and CD3 PerCP-Cy5.5, CD4 APC, CD127 PE
Buffer compatibility : intracellular staining
Unstimulated CMV pp65 SEB
IFN-g PE
CD4
IFN-g PE
CD8
BD Horizon™ 之旅: 多色方案设计的新视野/13
紫激光配置
检测光学部件需匹配所用的 荧光素 • 许多仪器已经配置可以使 用纳米晶体染料 • 为最大限度地发挥BD Horizon Brilliant Violet 的 组合优势，仪器可能需要 更新配置 • 更新配置可提高扩展仪器 的性能
CD25
Mahnke YD, Roederer M. Optimizing a multicolor immunophenotyping assay. Clin Lab Med. 2007; 27:469-485.
BD Horizon™ 之旅: 多色方案设计的新视野/21
抗原密度列表
在表达最低密度的抗原上匹配最亮的荧光素 • • • 抗原密度一定是在细胞亚群水平上确定的 这个规则会由于通道间相互溢漏，共表达等原因有所改变 抗原密度也会由于激活状态而有所改变
BD Horizon™ 之旅: 多色方案设计的新视野/14
BD Horizon Brilliant Ultraviolet (BUV)
BUV395 中等亮度 Exmax/Emmax: 348 nm/395 nm 滤光片: 379/28BP
BUV737 明亮 Exmax/Emmax: 348 nm/737 nm 滤光片: 740/35BP; 690LP
BD Horizon™ 之旅: 多色方案设计的新视野/17
BB515 is up to seven times brighter than FITC
Hu CD4 Hu CD3
Stain Index x Brighter BB515 FITC A488 PE FITC A488 Hu CD3 302 43 81 7 Hu CD4 174 47 58 166 4 Hu CD19 85 16 15 40 5 Ms CD8a 86 24 50 151 4 Ms CD11b 68 15 26 5 Hu CD127 37 9 4 4 3 6 2 3
Nat Rev Immunol,2012
Eight-color antibody panels proposed by the Human Immunophenotyping Consortium
Nat Rev Immunol, 2012
BD Horizon™ 之旅: 多色方案设计的新视野/3
主要内容
PE-CF594
Alexa Fluor 647
Alexa Fluor 700
选择正确的荧光素组合是回答生物学问题的关键
BD Horizon™ 之旅: 多色方案设计的新视野/7
荧光素分辨率等级
• •
等级由细胞经不同克隆，不同规格的抗体在多种流式细胞仪上的实验所得的染色指数（分辨 率）的比较决定 激光器的能量，PMT电压，光学部件，抗体克隆和生物样品等多种因素均会影响荧光素/试 剂在某个特定仪器上的效果
BD多色流式全面解决方案
BD生物科学 Judy
/1
The BD Horizon™ Tour
Identification of immune cell subsets by eight-color antibody staining
BD Horizon™ 之旅: 多色方案设计的新视野/2
两种被355nm紫外激光激发的新荧光素
• • BUV395: 对其他检测其几乎无溢漏 BUV737: 对Alexa Fluor 700中等溢漏
BD Horizon™ 之旅: 多色方案设计的新视野/15
与其他染料的比较
BUV395 BUV737
BV421
PE
BUV CD4 试剂 与 PE, BV421 和 FITC 比较
BD Horizon™ 之旅: 多色方案设计的新视野/10
与其他染料的比较
BV421
BV711
BV650
PE BV786
BV605
BV510
BV CD4 试剂与PE比较
BD Horizon™ 之旅: 多色方案设计的新视野/11