日本医蛭不同萃取部位体外抗凝活性的实验研究

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水蛭及其炮制品的体内抗凝血活性研究_李艳玲

水蛭及其炮制品的体内抗凝血活性研究李艳玲,赵丽　(郑州牧业工程高等专科学校药物工程系,河南郑州450011)摘要　[目的]研究水蛭及其炮制品的抗凝活性,为水蛭的新药开发提供依据。

[方法]通过测定小鼠的凝血时间、出血和抗血栓作用来观察不同水蛭及不同剂量的抗凝血效果。

[结果]抗凝血效果从强到弱依次为:生水蛭的甲醇提取液>烫水蛭的甲醇提取液>生水蛭的水煎液>烫水蛭的水煎液。

[结论]水蛭素为水溶性多肽,在甲醇提取物中存在的可能性不大,水蛭中应该还有其他的抗凝血成分。

关键词　水蛭;炮制品;抗凝血;体内中图分类号　S 917 文献标识码　A 文章编号　0517-6611(2009)34-16894-01作者简介　李艳玲(1978-),女,河南鹤壁人,硕士,讲师,从事中药药理作用研究及化学成分分析研究工作。

收稿日期　2009-08-20 水蛭为传统动物药,临床用于瘀血、跌打损伤等病症。

据有关资料报道,新鲜水蛭的唾腺分泌物中含有抗凝血物质水蛭素,而经干燥后的药材,水蛭素则被破坏[1]即失去了生物活性。

然而,在实际临床应用中,有的水蛭是以干燥全体入药抗凝血[2-3],有的是用炮制品入药。

水蛭生品和炮制品中哪种抗凝血活性较强,水蛭中除了水蛭素外还有没有其他的抗凝血活性成分,其相关的报道较少。

为此,笔者研究了水蛭生品和炮制品不同提取液对大鼠凝血系统的影响,以期为寻找其他有效的水蛭抗凝血成分提供科学依据。

1　材料与方法1.1　材料(1)主要试剂。

A P T T 试剂(上海太阳生物试剂公司生产);P T 试剂(上海太阳生物试剂公司生产);T T 试剂(上海太阳生物试剂公司生产);枸橼酸钠;羧甲基纤维素钠;乙醚;生理盐水;无水甲醇。

(2)主要仪器。

L G -P A B E R -1型血小板聚集凝血因子分析仪;天平;离心机;旋转蒸发仪。

(3)动物。

W i s t a r 大鼠,雄性,体重180～220g ,由军事医学科学院实验动物部提供,符合国家一级实验动物标准;昆明种小鼠,雄性,体重(30±2)g ,由军事医学科学院实验动物部提供,符合国家一级实验动物标准。

水蛭抗凝血酶活性测定实验报告

水蛭抗凝血酶活性测定实验报告【题名】水蛭抗凝血作用实验研究
【关键词】水蛭血液流变学抗凝血高凝模型小鼠大鼠
【文摘】目的：观察水蛭对正常和高凝动物血液流变学及凝血系统的影响。

方法：小鼠连续给不同剂量药物后,以剪尾法测定出血时间（BT）,以毛细管法测定凝血时间（CT）,摘眼球取血测定凝血酶原时间（PT）,活化部分凝血酶时间（APTT）,凝血酶时间（TT）以及纤维蛋白原（Fibg）的含量;尾静脉注射鞣花酸溶液,测定BT和CT。

大鼠连续给不同剂量药物后,舌下静脉注射鞣花酸溶液,测定全血黏度和血浆黏度以及血浆凝血时间APTT、PT、TT以及Fibg 的含量。

结果：水蛭能显著延长正常和高凝小鼠BT和CT,显著延长正常小鼠PT和APTT,显著降低高凝大鼠全血黏度和血浆黏度,显著延长PT、APTT和TT。

结论：水蛭能显著改善血液流变学,有抗凝血作用。

水蛭活性物质体外抗凝及纤溶活性的研究

果表１
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２００２日６月第４卷第２期
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水蛭活性物质体外抗凝及纤溶活性的研究
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性 ” ．种活性同时也是活血化瘀中药取得疗效的这可能途径之一。。水蛭活性物质由活血通络动物类Ｊ中药水蛭（ｉｄｎｐｏｉ１ｆａ）怍提取。为Ｈｒ（ｉｎｃｗｈｍｎ活ｅ＿ｐａ，探讨其作用机理，者进行ｒ体外抗凝及纤溶活性笔
张汉忠董明华：张汉贞
ｌ湖北省Ｊ列门市卫生局（４．０２湖北省中医药研究院４８０）８
摘要：中药水蛭的活体中获得性物质，从｝著进暂经体补抗凝、纤溶活性实驻。结果表重，哇物质对凝且酶活活性具声明豆的抑作用，对复钙时、凝血酶原曩有髓显的延长作用，作用蔼弱与活性密质浓度有密切关系，当达到一定浓鹱时．血液凝匿则中止水蛭活吐物质纤溶活巨强弱与浓度关系不如抗凝活性明豆。说明水蛭通过

不同提取法炮制对水蛭体外溶栓活性的影响

ＰｌａｎｔＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＰｅｋｉｎｇＵｎｉｏｎＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００１９３，Ｃｈｉｎａ）ＡｂｓｔｒａｃｔＯｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇｍｅｔｈｏｄｓｏｎｔｈｅａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｏｔｉｃａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＷｈｉｔｍａｎｉａＰｉｇｒａｂｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＴｈｅｗａｔｅｒｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄａｎｄｔｈｅｂｉｏｎｉｃｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｗｅｒｅｕｓｅｄｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｔｏｅｘｔｒａｃｔｔｈｅａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓａｃｔｉｖｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｉｎＷ．ｐｉｇｒａｈａｎｇｉｎｇｄｒｉｅｄｐｒｏｄｕｃｔｓ，ｔａｌｃｕｍｐｏｗｄｅｒｆｒｉｅｄｐｒｏｄｕｃｔｓａｎｄｗｉｎｅｐｒｏｄｕｃｔｓ．ＩｎｔｈｅｃａｓｅｏｆｔｈｅｔｒａｎｓｐａｒｅｎｔｃｉｒｃｌｅａｒｅａｏｆｔｈｅｆｉｂｒｉｎｐｌａｔｅｍｅｔｈｏｄａｎｄｔｈｅｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎｐｌａｔｅｍｅｔｈｏｄｗｅｒｅｕｓｅｄａｓｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｄｅｘｅｓｔｏｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｆｉｂｒｉｎｏｌｙｔｉｃａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐｒｏｃｅｓｓｅｄＷ．ｐｉｇｒａ．Ｔｈｅｎ，ｆｏｒｔｈｅｐｕｒｐｏｓｅｏｆｆｕｒｔｈｅｒｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇｔｈｅａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓａｃｔｉｖｉｔｙ，ｔｈｅｔｈｒｏｍｂｕｓｍｏｄｅｌｉｎｖｉｔｒｏｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｉｎｏｒｄｅｒｔｏｃａｌｃｕｌａｔｅｆｕｒｔｈｅｒｔｈｅｄｉｓｓｏｌｕｔｉｏｎｒａｔｅｏｆｂｌｏｏｄｃｌｏｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｗ．ｐｉｇｒａｃｏｕｌｄｐｒｏｄｕｃｅｔｒａｎｓｐａｒｅｎｔｒｉｎｇｓｏｎｔｈｅｆｉｂｒｉｎｐｌａｔｅｂｅｆｏｒｅａｎｄａｆｔｅｒｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ．Ｉｎｔｈｅｓａｍｐｌｅｏｆｔｈｅｗａｔｅｒｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ，ｉｔｗａｓｆｏｕｎｄｔｈｅｒｅｅｘｉｓｔｅｄｎｏｔｏｎｌｙｄｅｃｒｅａｓｅｄｔｈｅａｒｅａｏｆｔｒａｎｓｐａｒｅｎｔｒｉｎｇｓｂｕｔａｌｓｏｗｅａｋｅｎｅｄａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｆｉｂｒｏｎｏｌｙｓｉｓａｆｔｅｒｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇｂｏｔｈｉｎｔｈｅｔａｌｃｕｍｐｏｗｄｅｒｆｒｉｅｄｐｒｏｄｕｃｔｓａｎｄｔｈｅｗｉｎｅｐｒｏｄｕｃｔｓ，ａｎｄｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｒｄｅｒｗａｓａｓｆｏｌｌｏｗｓ：ｈａｎｇｉｎｇｄｒｉｅｄｐｒｏｄｕｃｔｓ＞ｗｉｎｅｐｒｏｄｕｃｔｓ＞ｔａｌｃｕｍｐｏｗｄｅｒｆｒｉｅｄｐｒｏｄｕｃｔｓ，ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｗｈｏｍｗｅｒｅｉｎａｇｒｅｅｍｅｎｔｗｉｔｈｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｔｈｅｗｅｉｇｈｔｌｏｓｓｒａｔｉｏｏｆｔｈｅｄｉｓｓｏｌｖｅｄｂｌｏｏｄｃｌｏｔｉｎｖｉｔｒｏ．Ｉｎｔｈｅｓａｍｐｌｅｏｆｔｈｅｂｉｏｎｉｃｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ，ａｌｌｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈｅｆｉｂｒｉｎｏｌｙｔｉｃａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄｔｈｅｔｈｒｏｍｂｏｌｙｓｉｓｒａｔｅｏｆＷ．ｐｉｇｒａａｆｔｅｒｗｉｎｅｐｒｏｄｕｃｔａｎｄｔａｌｃｕｍｐｏｗｄｅｒｆｒｉｅｄｐｒｏｄｕｃｔｗｅｒｅｉｎｃｒｅａｓｅｄ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｗｈｅｎｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｗａｔｅｒｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ，ｔｈｅｂｉｏｎｉｃｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｗａｓｍｏｒｅｓｉｍｉｌａｒｔｏｔｈｅａｂｓｏｒｐｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓｏｆＷ．ｐｉｇｒａｉｎｈｕｍａｎｄｉｇｅｓｔｉｖｅｓｙｓｔｅｍａｆｔｅｒｏｒａｌａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ，ａｎｄｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｅｄｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓｏｆｔｈｅｂｉｏｎｉｃｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｗｅｒｅｍｏｒｅｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔｗｉｔｈｈｕｍａｎｄｉｇｅｓｔｉｏｎａｎｄａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ．Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ，ｔｈｅｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇｍｅｔｈｏｄｃａｎｅｎｈａｎｃｅｔｈｅａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＷ．ｐｉｇｒａ．ＫｅｙＷｏｒｄｓＷｈｉｔｍａｎｉａｐｉｇｒａ；Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ；Ｂｉｏｎｉｃｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；Ｆｉｂｒｉｎｏｌｙｓｉｓ；Ａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓａｃｔｉｖｉｔｙ中图分类号：Ｒ２８４；Ｒ２８３文献标识码：Ａｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３－７２０２．２０１９．１２．０１２

水蛭免加热提取物抗凝血及抗血栓作用_史小莲

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! 材料
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水蛭免加热提取物
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注：与阳性药对照组比较， ! % ) (* (+ ， !! % ) (* (’ ；与同剂量水蛭煎煮浓缩物组比较， R % ) (* (+ 。
中药新药与临床药理 !""# 年 $ 月第 %& 卷第 ! 期
纵向剪开下腔静脉管腔用滤纸条仔细吸去血管内血液并观察有无血栓形成若已形成血栓则小心取出立即称重为血栓湿重然后再放入干燥箱内于6bc干燥水蛭煎煮浓缩物和免加热提取物对大鼠颈总动脉闭塞性血栓形成时间的影响动物分组及按改良fghijk8a法制备动脉血栓模型33右颈总动脉以塑料布遮盖伤口周围组织将温度探测仪的探头轻轻接触血管表面测量颈总动脉远心端的血管表面温度

几种水蛭抗凝血物质提取及活性分析

３ｉｇｈｕＭｉＫａｇＢｏｅｈｏｏｙＣｍｐｎｉｔｄ，ｉｇｈｕ４４０．ＪｎｚｏｎｎｉｔｃｎｌｇｏａｙＬｍｉｅＪｎｚｏ３３０，Ｃｉａ；ｈｎ
４．ＦｅｈｔｒＦｉｈｒｅｓａｃｎｔｕｅｏｉｏｉｇＰｏｉｃｒｓｗａｅｓｅｉｓＲｅｅｒｈＩｓｉｔｆＬａｎｎｒｖｎｅ，Ｌａｙｎ１０ｔｉｏａｇ１００，Ｃｈｉａ；１ｎ
ＧｕｎｘｎｔｕｅｏｉｈｒｅａｇｉＩｓｉｔｆＦｓｅｉｓ，Ｎａｎｎ３０２１，Ｃｈｉｔｎｉｇ５０ｎａ；
２ｅｉｇＮｒｌｎｖｒｉ，ｈｈｉａｐｓＺｕａ５８，Ｃｉａ．ＢｉｎｏｍａＵｉｓｙＺｕａＣｍｕ，ｈｈｉ０５ｈｎ；ｊｅｔ１９
摘要：研究３种提取方法对菲牛蛭不同处理品的抗凝作用，采用筛选的最佳提取方法分析了５种水蛭各处理
品的抗凝血酶活性，并比较了３个不同地理分布野生菲牛蛭和２个不同饵料饲喂菲牛蛭各处理品的抗凝血酶活性。结果表明：丙酮浸提法在菲牛蛭各处理品中均具有最高的提取得率，所测抗凝血酶活性显著高于其他方法（００）Ｐ＜．５；５种水蛭抗凝血酶活性测定结果显示非吸血蛭类的湿体匀浆液和干体无或微弱的抗凝活性，而吸血蛭类（ｔ医蛭和菲牛蛭）具有较高抗凝活性，且菲牛蛭的抗凝活性显著高于日本医蛭（Ｅ本Ｐ＜００）．１；不同地理分布野生菲牛蛭和不同饵料饲养菲牛蛭的湿体匀浆液、干体粉末和唾液腺分泌物抗凝活性均无显著差异（Ｐ＞００）．５。研究表明菲牛蛭具有较强的体外抗凝血酶活性，且人工养殖对菲牛蛭的抗凝活性未产生不利影响。

水提取法和仿生提取法研究水蛭不同炮制品的体外抗凝活性

水提取法和仿生提取法研究水蛭不同炮制品的体外抗凝活性为确定水蛭传统炮制的科学性，分别采用水提取法和仿生提取法提取水蛭清水吊干品、滑石粉烫制品、酒浸闷烘品中的抗凝活性成分，以活化部分凝血酶时间（APTT）、凝血酶原时间（PT）、凝血酶时间（TT）、抗凝血酶活性作为活性指标进行抗凝测定，并采用考马斯亮蓝法，测定各炮制品提取物中的蛋白含量以初步解释抗凝活性变化原因。

对比发现，采用水提取法时，APTT，PT，TT，抗凝血酶活性4种指标结果均显示，滑石粉烫制或酒浸闷烘后水蛭的抗凝活性降低，活性顺序为清水吊干品>酒浸闷烘品>滑石粉烫制品，此结果与水蛭不同炮制品水提物蛋白含量顺序一致；而采用仿生提取法时，除滑石粉烫制后APTT缩短外，其他结果均显示炮制使水蛭抗凝活性升高，且活性顺序为酒浸闷烘品>滑石粉烫制品>清水吊干品。

仿生提取法与水提取法相比更符合水蛭口服后在人体内的吸收过程，结果更具科学性。

所以，传统的炮制方法不仅可以矫味矫臭，还可增强水蛭的抗凝活性作用。

标签：水蛭；炮制；仿生提取；抗凝活性[Abstract]In order to determine the scientificalness of traditionally processed Whitmania pigra，water extraction method and bionic extraction method were used respectively to extract the anticoagulating active components in W pigra hanging dry products，talcum powder fried products and wine immersingbaked products Activated partial thromboplastin time （APTT），prothrombin time （PT），thrombin time （TT），and antithrombin activity were selected as the activity indexes to evaluate the anticoagulant activities of different processed W pigra Then the contents of protein in different processed W pigra were measured by Coomassie brilliant blue method to preliminarily explain the reason of anticoagulant activity changes When water extraction method was used，the results of APTT，PT，TT and antithrombin activity showed that the anticoagulant activities of W pigra were decreased both in talcum powder fried products and wine immersingbaked products，and the activity order was as follows：hanging dried products> wine immersingbaked products>talcum powder fried products This order was same as the protein content order While when bionic extraction was used，APTT was shortened in talcum powder fried products，but all the other results indicated the anticoagulant activities of W pigra processed products were increased，and the activity order was as follows：wine immersingbaked products>talcum powder fried products>hanging dry products As compared with water extraction，the bionic extraction was more similar to the absorption process of W pigra in human digestive system after oral administration and was more scientific Therefore，the traditional processing method can not only modify the taste and smell，but also enhance the anticoagulant activity of W pigra [Key words]Whitmania pigra；processing；bionic extraction；anticoagulant activitydoi：10.4268/cjcmm20161013水蛭是一味传统的动物类中药，具有明显的抗凝血作用，近年来广泛用于心脑血管疾病的治疗。

中药宽体金钱蛭抗凝血有效部位的提取工艺研究

ＢｅｒｋｅｓＭＢ，ＬｉｔｔｌｅＭＴ，ＬａｚａｒｏＬＥ，ｅｔａ１．Ａｒｔｉｃｕｌａｒｃｏｎｇｒｕｉｔｙｉｓ
３小
结
综上所述，踝关节骨折有其明确的受伤机制，根据踝关节解剖特
点和骨折分型确定治疗方案，可使患者获得更好的治疗，目前临床上
１７６９．１７７５．
ＨａｌｕｚａｎＤ，ＥｈｒｅｎｆｒｅｕｎｄＴ，ＳｉｍｅｋＺ，ｅｔａ１．Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃａｌ
ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｉｏｎｏｆｆｉｂｕｌａｒｍａｌｌｅｏｌｕｓｃｕｒｖａｔｕｒｅ［Ｊ］．Ｉｎｊｕｒｙ，２０１３，４４
方法的推广应用，手术治疗踝关节骨折将使更多患者从中受益。
ＳＥＲＩＶａｎｋｌｅｆｒａｃｔｕｒｅｓ［Ｊ］．ＪＢｏｎｅＪｏｉｎｔＳｕｒｇＡｍ，２０１３，９５（１９）：
艺。结果几种提取液中，生理盐水的抗凝时间最长；正交试验结果表明，提取次数为显著性影响因素。结论根据实际情况，将宽体金钱
蛭的提取工艺确定为加生理盐水提取２次，第１次加５倍量，提取２ｈ，第２次加３倍量，提取２ｈ。
【摘要】目的研究中药宽体金钱蛭抗凝血有效部位的提取工艺。方法分别采用不同浓度的乙醇、正己烷正丁醇、生理盐水、磷酸盐缓冲溶液、

日本医蛭冻干粉的质量标准研究

日本医蛭冻干粉的质量标准研究目的：建立日本医蛭（水蛭）冻干粉（简称“冻干粉”）的质量标准，为控制其质量提供参考。

方法：取3批冻干粉，按照2015年版《中国药典》（一部）（简称“药典”）水蛭项下要求对冻干粉进行鉴别、检查和抗凝血霉素活性分析；通过最大耐受量（MTD）实验来考察其毒性；通过设计温度、湿度和强光照射试验来考察其稳定性。

结果：供试品薄层色谱中，在与对照药材色谱的相应位置显相同的紫红色斑点，紫外光灯（365 nm波长）下显相同的橙红色荧光斑点。

3批样品的平均水分含量为2.61%、总灰分含量为2.83%、酸不溶性灰分含量为0.38%、pH为6.92、黄曲霉毒素总量为0.28 ?g/kg、抗凝血酶活性为257.0 U/g，除汞元素含量略高于药典水蛭项下限量外，铅、镉、砷、铜元素含量均符合药典规定。

MTD实验结果显示，给予以生药量计26.4 g/kg的冻干粉后小鼠未出现死亡及不良反应，此剂量为药典规定最大用量的58倍。

在20、40 ℃和强光[（4 500±500）Lx]照射条件下，冻干粉的抗凝血酶活性随着贮藏时间的延长均明显下降，在4 ℃条件下保存6个月其抗凝血酶活性仍符合药典要求；在高湿（相对湿度为90%、75%）条件下，冻干粉的吸湿性极强。

结论：本研究按照药典标准对日本水蛭冻干粉建立了一套系统的质量评价标准，可用于其质量控制。

ABSTRACT OBJECTIVE：To establish the quality standard of Hirudo nipponica freeze-dried powder （called “freeze-dried powder” for short），and to provide reference for controlling its quality. METHODS：A total of 3 batches of freeze-dried powder were collected，identified and tested according to the requirements of H. nipponica stated in 2015 edition of Chinese Pharmacopoeia （part Ⅰ）（shorted for pharmacopoeia）；the antithrombin activity was also analyzed. The maximum tolerated dose （MTD）was used to investigate the toxicity. The stability was determined by designing temperature，humidity and strong light exposure tests. RESULTS：In the TLC of test sample，the same red spots were found in the corresponding location of the control drug chromatogram，and the same orange-red fluorescence spots were shown under the UV light （365 nm）. Average content of moisture in 3 batches of samples was 2.61%，and the levels of total ash，acid-insoluble ash，pH aflatoxin and antithrombin activity were 2.83%，0.38%，6.92，0.28 ?g/kg and 257.0 U/g，respectively. The content of Pb，Cd，As and Cu were in line with the requirements of pharmacopoeia except that the content of Hg was slightly higher than lower limit of H. nipponica in pharmacopoeia. Results of MTD showed that no death and ADR was found in mice after giving 26.4 g/kg freeze-dried powder by the amount of crude drug，which was 58 times as large as the maximum dosage that the pharmacopoeia described. Under the condition of 20，40 ℃and strong light exposure [（4 500±500）Lx]，the anticoagulase activity of freeze-dried powder decreased significantly over time，while the anticoagulase activity of freeze-dried powder stored at 40 ℃for 6 months was in line with the requirements of pharmacopoeia. Under the condition of high humidity （relative humidity were 90%，75%），freeze-dried powder showed a strong hygroscopicity. CONCLUSIONS：Established quality evaluation standard for freeze-dried powderaccording to pharmacopoeia standard could be used to control its quality.KEYWORDS Hirudo nipponica；Freeze-dried powder；Quality standard；Maximum tolerated dose；Stability test水蛭是我国传统的常用中药材，2015年版《中国药典》（一部）（简称“药典”）收载的水蛭药材为水蛭科动物水蛭（Hirudo nipponica Whitman）、蚂蟥（Whitmania nipponica Whitman）或柳叶蚂蟥（Whitmania acranulata Whitman）的干燥全体，捕捉后用沸水烫死，晒干或低温干燥，具有破血通经、逐瘀消癥的作用，用于血瘀经闭、癥瘕痞块、中风偏瘫、跌扑损伤等症的治疗[1]。

日本医蛭不同萃取部位体外抗凝活性的实验研究

日本医蛭不同萃取部位体外抗凝活性的实验研究【摘要】目的研究日本医蛭不同萃取部位的抗凝活性，为日本医蛭的新药开发提供依据。

方法SD大鼠腹主脉取血，应用血凝仪体外测定凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)和活化的部分凝血活酶时间(APTT)。

结果日本医蛭的总提物能使大鼠PT，TT，APTT时间显著延长；石油醚部位能使大鼠PT，APTT延长。

结论中药日本医蛭的低极性小分子具有抗凝活性。

【关键词】日本医蛭抗凝血水蛭作为药用，历史悠久。

在中国，水蛭始载于《神农本草经》，谓其能“逐恶血、瘀血”“破血瘕积聚”。

临床广泛用于血栓形成、冠心病、脑水肿的治疗［1］。

世界上蛭类有数百种，中国也有近百种。

《中国药典》2005年版收载水蛭科动物蚂蝗Whitmania pigra Whitman、日本医蛭Hirudo nipponica Whitman 和柳叶蚂蝗Whitmania acranulata Whitman 3种［2］。

现在公认水蛭的活性成分为水蛭素，它是从医蛭的唾液腺中提取出来的一种多肽，是作用很强的凝血酶抑制剂，具有抗凝、抗血栓等药理作用。

而中药传统应用炮制的水蛭入药，即水蛭要经过开水烫死晒干或砂炒，水蛭素完全被破坏［3，4］，然而水蛭的破血、通经的功效仍然得以保留，这说明水蛭中含有除水蛭素外的其它抗凝血成分。

目前人们对水蛭中蛋白多肽类活性成分研究较多，如抗凝血物质水蛭素以及肝素、抗血栓素抗炎酶和溶血酶及组胺样物质［5］，而对小分子研究报道较少。

有人研究了蚂蝗的不同极性小分子部位的抗凝活性，证明中等极性的小分子具有较强的抗凝活性［6］。

本文报道日本医蛭不同萃取部位体外的抗凝活性，以期寻找其他有效的抗凝血小分子成分。

1 材料与仪器1.1 动物 Sprague Dawley大鼠，雄性，体重200～250 g，购于中国科学院上海实验动物中心，合格证号SCXK（沪）2002-0010。

饲养环境为清洁级，合格证号SYXK（苏）2002-0007。

PSB净化日本医蛭养殖水体的研究

PSB净化日本医蛭养殖水体的研究rf—f11,陈仕江金仕勇李黎(丽药研~N400065)定2i摘要采甩PSB微生态制剂处理日本医蛭养殖水体的研究结果表明:施用PSB能明显降低日本医蛭养殖水体中的COD,NIt4+一N,底质硫化物,底质有机物,增加水体中的溶氧,净化养殖水体=水蛭是一味常用中药.《本经》云:”其主逐恶血,瘀血,月闭,破血瘕积聚,无子,利水道.”近代本草考证结果表明,日本医蛭(H/ru.do面)是水蛭基源中药用活性最强的一种.近年来由于化肥,农药的大量施用,农耕制度的改变及其用途的拓展,使得医蛭资源供不应求的矛盾13益突出.为解决资源不足的难韪,我们于1995年开始进行13本医蛭人工养殖的研究,今将部分结果作一报告.13本医蛭在人工养殖过程中由于投放的食物残渣极易引起水质败坏,进而影响养殖效果.据我们观测发现,如不采取改善水质的有效措施,在投放饲料后几天水中的H2S和铵态氮等有害物质浓度即增高十几倍乃至几十倍,养殖水体水色变黑,水体发臭,造成医蛭的大量死亡.PsB是具有原始光能合成体系的原核生物它们能在厌氧光照或有氧黑暗的条件下利用有机物作供氧体兼碳源进行不放氧的光合作用,是目前国内外水产养殖业中最具前景的水质净化微生态制剂.本研究将其运用于医蛭的人工养殖中,以期能改善,净化养殖医蛭的水体.1材料与方法1.1试验地点:本院标本囤水生饲养池1.2试验条件:随机将饲喂日本医蛭的1,2,3,4池选为试验池,5#池为对照池.池平均水深1.0m,各池PSB用量见表1.表1饲养池施用PSB的浓度1.3PSB采源:PSB(Photosynthesisbacteria)从本院所在地——黄桷垭镇水产养鱼池微生物垫中分离获得.1.4PSB培养工艺:从鱼池中分离的PsB细菌,经分离,筛选,最后选育出易培养,浓度高的优良菌种并进行了培养基配方实验.一级种在滴流瓶中培养,二级种在白色塑料桶中培养,菌液浓度为23亿/克以上.1.5试验方法:试验池和对照池在饵料种类,投喂量及13常管理上方法相同.施菌前后定期测定各池的溶氧(DO),化学耗氧量(COD), NH一N,底质硫化物,底质总有机物.溶氧(DO)用碘量法结合溶氧仪测定;化学耗氧量(COD)采用重铬酸钾法测定,NH4+ 一N用纳氏试剂比色法;底质硫化物,底质有机物测定参见文献…2结果与讨论21水质情况试验期间养殖池水温22～32℃,盐度l8—26%,oH7.2—8.0,各池的DO,COD,N}—N,底质硫化物,底质总有机物测定结果见表2…345,6.)>l2第4l期重庆中草药研究二o00年六月由以上各表可见,对照池,整个试验期间各项指标变化不大,无规律性,而试验池在施菌的前后各项指标有不同程度的规律性变化. COD在施菌后降低明显,平均下降1.3r~:/L, 一定时间后呈稳定状态,NH4十一N施菌后降低0.1—0.7mg/L.由于COD降低,减少了耗氧因素,DO相应增高.在施菌后,第2天测定平均增加0.57r~c,/L,以后几天仍有增加趋势.2.2底质情况从表5,6中可以明显看出,底质硫化物在施菌后明显降低,底质总有机物也明显降低. 对照池中的底质硫化物不但没有降低,反而增高,底质总有机物变化不大.2.3医蛭生长存活情况施用PSB的4饲养池内医蛭取食明显强于对照池,且医蛭活性强,没有发现死亡个体, 而对照池内的医蛭个体活性明显比处理差,有15头死亡蛭体发现.2.4讨论与分析2.4.1PSB的净水作用:PSB为光能异氧微生物,可利用水中的有机污染物质,降低COl3含量,但这一作用不是无限的,当COD降到一定量时,就只能稳定在一定水平上.2.4.2PSB的增氧作用PSB虽然同浮游植物一样可利用光能,但浮游植物可产生o2,而PSB则不能,所谓增氧只是相对而言,其本质是PSB利用了有机物使COD降低,减少了耗氧因素,从而使o2相对稳定和增加.所以施用PSB的增氧效果是同COD含量相联系的,从表中可见,当COD下降,DO随之增加,当COD保持稳定,DO也相应稳定在一定水平上.2.4.3施菌时间及施菌量试验结果表明,PSB最佳使用时间应在7月初__9月末,此时温度比较适宜PSB的繁殖,施菌量应达l一2PPm,水质变坏施菌量可适当增加.2.5小结综上可见,施用PSB可抑制水中各种致病菌的繁殖,对防治医蛭疾病有积极作用,对净化水体,降低水中的有害物质效果明显.表2COD(化学耗氧量】测定表单位mg/L池号施用PSB前施用第1天2天3天4天5天6天7天参考文献[1]石俊艳等,水产科学.1993.12(12)t6—8[2]slalqJ.T,HoltJGBergey’8Mamal0fsymcBaetefiol~.Wf1]ia~&WiLR,Baldmo~e一.London: 1989『3]i【bkc,}∞血讪,a1a]越豇j朋ofCarote~oidsinph0tc吐aIn”M_mEI1zv|0”V ol:213,Ca~a zead&.Papa,374—391, 1992,AcaderPIessh,Les【erPaek~.[4]刘如林.光合细菌及其应用,北京:中国农业科技出I;匣社,1991.。

蚂蟥中抗凝血活性组分的提取精制工艺研究

蚂蟥中抗凝血活性组分的提取精制工艺研究
钟山;杨得坡;崔征;董卫星
【期刊名称】《中成药》
【年(卷),期】2009(031)007
【摘要】目的:对蚂蟥中抗凝血活性组分的提取、精制工艺进行优化.方法:以抗凝活性为指标,采用单因素及正交实验考察提取精制工艺.结果:最佳工艺为蚂蟥药材用4倍量40%的丙酮常温浸渍提取4次,每次24 h,提取液浓缩后先用60%的乙醇除杂,再用85%的乙醇沉淀出活性组分,并真空干燥,whitnumin的提取率为0.072%.结论:该提取工艺方法简单、科学,有推广应用价值.
【总页数】3页(P1041-1043)
【作者】钟山;杨得坡;崔征;董卫星
【作者单位】中山大学药学院,广东广州,510080
【正文语种】中文
【中图分类】B284.3
【相关文献】
1.猪小肠粘膜中肝素钠提取与精制工艺研究 [J], 任红媛;何泼;李红心
2.海带中褐藻多糖硫酸酯的提取及抗凝血活性的测试 [J], 程忠玲
3.备用根大鼠脊髓后角提取液中神经营养活性组分的分离及生物活性测定 [J], 曾园山;章尧;郭畹华;罗超权
4.红车轴草中总异黄酮提取精制工艺研究 [J], 李崇明;向阳;翟莉;曾庆恢
5.圆背角无齿蚌中抗肿瘤活性组分的提取工艺研究 [J], 柯乾坤;胡水根;刘娟;陈正伟;卞俊;王朝武;蔡定国
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水蛭及其炮制品的体内抗凝血活性研究

水蛭及其炮制品的体内抗凝血活性研究
李艳玲;赵丽
【期刊名称】《安徽农业科学》
【年(卷),期】2009(037)034
【摘要】[目的] 研究水蛭及其炮制品的抗凝活性,为水蛭的新药开发提供依据.[方法] 通过测定小鼠的凝血时间、出血和抗血栓作用来观察不同水蛭及不同剂量的抗凝血效果.[结果] 抗凝血效果从强到弱依次为:生水蛭的甲醇提取液>烫水蛭的甲醇提取液>生水蛭的水煎液>烫水蛭的水煎液.[结论] 水蛭素为水溶性多肽,在甲醇提取物中存在的可能性不大,水蛭中应该还有其他的抗凝血成分.
【总页数】2页(P16894-16894,16942)
【作者】李艳玲;赵丽
【作者单位】郑州牧业工程高等专科学校药物工程系,河南郑州,450011;郑州牧业工程高等专科学校药物工程系,河南郑州,450011
【正文语种】中文
【中图分类】S917
【相关文献】
1.水蛭不同炮制品抗凝血活性的比较 [J], 龚敏阳;伍小燕;文隽
2.川牛膝不同组分体内抗凝血活性研究 [J], 孟宪群;梁珊珊;赵奕;王秋红;匡海学
3.海南水蛭中水蛭素的抗凝活性研究 [J], 刘腾;符乃光;李泽友
4.1.1类新药QR02001体内抗凝血活性研究 [J], 张轶涵;柳力;陶慧;陈勇;葛建
5.水蛭及其炮制品中水蛭素的测定 [J], 戴作波
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4种水蛭粗提物抗凝活性及冻存时间对菲牛蛭抗凝活性影响

4种水蛭粗提物抗凝活性及冻存时间对菲牛蛭抗凝活性影响李军;于翔;张健;张涛;龚元;金广海【摘要】The anti-thrombin activity was studied in four species of leeches Poecilobdella manillensis , Hirudo nipponia ,Erpobdellaoctoculata and Whitmania pigra ,and cryopreservation (-20 ℃) on anti-coagulant activity was investigated in leech P .manillensis by anti-thrombin bioactivity method at (24 ± 2)℃ .The results showed that anti-thrombin bioactivity of four species of leeches were in the following de-creasingorder :P .manillensis ,H .nipponia ,W .pigra and E .octoculata ,and the anti-thrombin bioac-tivity were (106 .39 ± 48 .57) U/g ,(29 .44 ± 11 .31)U/g ,(8 .06 ± 0 .48) U/g and (0 .00 ± 0 .00) U/g ,re-spectively .Extracts ofP .manillensis had higher anti-thrombin activity than that of other speciesof lee-ches (P<0 .01) .Anticoagulant activities of P .manillensis preserved in -20 ℃ were (134 .72 ± 51 .11) U/g for 0 month ,(117 .33 ± 16 .04) U/g ,for2 months ,(76 .16 ± 20 .60) U/g for 16 months ,(41 .94 ± 4 .11) U/g for 24 months and (21 .39 ± 0 .96) U/g for 34 months .The anticoagulant activity of P .ma-nillensis was negatively correlated to months of cryopreservation .%比较菲牛蛭、日本医蛭、宽体金线蛭和八目石蛭盐浸提物的抗凝活性，分别为（106．39±48．57）U/g、（29．44±11．31）U/g、（8．06±0．48）U/g和（0．00±0．00）U/g，其中菲牛蛭与日本医蛭、八目石蛭和宽体金线蛭差异极显著（ P＜0．01）。

水蛭不同炮制品抗凝血活性的比较

水蛭不同炮制品抗凝血活性的比较龚敏阳;伍小燕;文隽【摘要】目的:应用抗凝血活性指标筛选水蛭炮制工艺.方法:按生物检定法测定各种炮制品水提取物的抗凝血时间,比较不同炮制方法对水蛭抗凝血活性的影响.结果:净制法和低温冷冻粉碎炮制法均能较好地保持水蛭抗凝血活性,而其它炮制方法炮制的水蛭抗凝血活性不强.结论:净制法炮制水蛭,能较好地保持抗凝血活性,且制作简便,是一种较好的炮制方法.【期刊名称】《广西中医药》【年(卷),期】2010(033)006【总页数】2页(P49-50)【关键词】水蛭;抗凝血;炮制工艺【作者】龚敏阳;伍小燕;文隽【作者单位】广西中医学院第一附属医院,530023,南宁市东葛路89-9号;广西中医学院第一附属医院,530023,南宁市东葛路89-9号;广西中医学院第一附属医院,530023,南宁市东葛路89-9号【正文语种】中文【中图分类】R283.3水蛭始载于《神农本草经》，历代本草均有记载，具有破血、逐瘀、通经之功能，临床用于治疗癥瘕、痞块、血瘀闭经、跌打损伤。

水蛭的传统炮制方法为净制、滑石粉制、油制、焙制、米制、烫制、醋制、酒制、石灰制、蜜制、泔制［1］。

水蛭的有效成分水蛭素为肽类化合物，用化学方法检测比较困难，且水蛭素不耐高温，在炮制过程中有不同程度的损失。

本试验通过比较水蛭不同炮制品的抗凝血活性，旨为筛选出水蛭最适宜的炮制方法。

1 实验材料1.1 仪器 ES-120J电子分析天平（沈阳龙腾电子称量仪器有限公司）；台式离心机（北京医疗仪器厂）；HH系列电热恒温水浴锅（金坛市环保仪器厂）；DB210电热恒温鼓风干燥箱（成都电烘箱厂）。

1.2 试药水蛭采集于广西临桂县，经广西中医学院第一附属医院伍小燕副主任药师鉴定为水蛭科动物蚂蟥 Whitmaniapigra Whitman；所用试剂均为分析纯。

1.3 动物试验用家兔，普通级，雄性，体重3.6 kg，由广西中医学院动物室提供。

2 方法和结果2.1 炮制品的制备［1］每组取20条水蛭，分别按照下列炮制方法制备。

水蛭的酶解及其产物抗凝血活性评价

水蛭的酶解及其产物抗凝血活性评价刘禹尧;胡爱军;张雪;陈喆;果嘉成;唐德;于思雨;郑捷;高建忠【期刊名称】《井冈山大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2017(038)005【摘要】以水蛭为原料,研究不同酶解因素(酶种类、酶用量、酶解时间、pH值、酶解温度、底物浓度)对水蛭酶解产物抗凝血活性的影响规律,优化水蛭的酶解技术参数,并对酶解产物进行活性评价;研究结果表明,优化后的酶解技术条件为,适宜的水解酶为胰蛋白酶,酶用量7000 U/g,酶解时间7 h,酶解pH 8.3,酶解温度50℃,底物浓度14％(w/w).在该条件下得到的酶解产物抗凝血酶活性最高,达到640 U/g.【总页数】5页(P35-38,45)【作者】刘禹尧;胡爱军;张雪;陈喆;果嘉成;唐德;于思雨;郑捷;高建忠【作者单位】天津科技大学食品工程与生物技术学院,天津,300457;天津科技大学食品工程与生物技术学院,天津,300457;天津科技大学食品工程与生物技术学院,天津,300457;天津科技大学食品工程与生物技术学院,天津,300457;天津科技大学食品工程与生物技术学院,天津,300457;天津科技大学食品工程与生物技术学院,天津,300457;天津科技大学食品工程与生物技术学院,天津,300457;天津科技大学食品工程与生物技术学院,天津,300457;天津市泥鳅育种与高效利用技术企业重点实验室,天津,301800;天津金宝地庄园食品有限公司,天津,301800;天津市泥鳅育种与高效利用技术企业重点实验室,天津,301800;天津金宝地庄园食品有限公司,天津,301800【正文语种】中文【中图分类】TQ464.7【相关文献】1.水蛭的酶解及其产物抗凝血活性评价 [J], 刘禹尧;胡爱军;张雪;陈喆;果嘉成;唐德;于思雨;郑捷;高建忠;;;;;;;;;;;;2.多指标评价酶解蚕蛹蛋白产物的抗氧化活性 [J], 牛明福;陈金帅;李桃月;李俊毅;李阳3.文蛤酶解产物的抗氧化活性评价及其组成分析 [J], HU Dawei;LI Heng;JIANG Min;DING Hailong;WANG Songtao;SHEN Caihong;XU Zhenghong;SHI Jinsong4.基于抗凝血活性的不同基原水蛭酶解工艺对比研究 [J], 张学涛; 庄滢潭; 李震; 吴家劲; 邹婧; 高鹏; 代龙5.芪参还五胶囊中虫类药材的仿生酶解工艺优化及抗凝血、溶栓活性评价 [J], 王世信;杨美娜;崔友祥;闫国强;丁洪青因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

日本医蛭中一种新抗凝血蛋白质的仿生亲和纯化及鉴定

日本医蛭中一种新抗凝血蛋白质的仿生亲和纯化及鉴定
贵艳丽;董德贤;李荣秀
【期刊名称】《中国生化药物杂志》
【年(卷),期】2008(29)3
【摘要】目的从日本医蛭中快速提取和纯化生物活性蛋白质.方法利用仿生亲和介质库进行配体筛选和1步纯化.结果从日本医蛭中纯化出了1种具有抗凝血活性的新型低丰度蛋白质,命名为NLP-1 (New Leech Protein-1).通过进一步分析,其相对分子质量为13800,蛋白回收率可达到69.2%,其在血浆中含量为0.02mg/mL时即可产生明显的抗凝血现象.利用MALDI-TOF-TOF分析,在蛋白质数据库中未找到相似蛋白质或多肤.结论从日本医蛭中纯化出的NLP-1蛋白质是1种新型的抗凝血物质,具有很高的开发研究价值.
【总页数】4页(P145-148)
【作者】贵艳丽;董德贤;李荣秀
【作者单位】上海交通大学,生命科学技术学院,上海,200240;上海交通大学,生命科学技术学院,上海,200240;上海交通大学,生命科学技术学院,上海,200240
【正文语种】中文
【中图分类】TQ93
【相关文献】
1.串联亲和纯化技术:一种极具潜力的分离、鉴定蛋白复合体的工具 [J], 狄文娜;花芳;彭小忠
2.蜈蚣藻中一种硫酸半乳聚糖的分离纯化、结构鉴定及其抗新生血管生成活性 [J], 严君;施松善;王顺春;王峥涛;胡之璧
3.猪乳中一高分子量蛋白质的分离纯化和鉴定 [J], 秦宜德;丁益;邹思湘;张海方
4.骆驼蓬种子中一种具抗肿瘤活性蛋白的分离纯化及鉴定 [J], 马晓瑾;吴婷;罗晶晶;王燕;李阳;刘东亮;孙素荣
5.尖吻蝮蛇毒中一种新抗凝血因子的纯化及特性研究 [J], 翟宁;冯军;赵文杰
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宽体金线蛭鲜品和干品提取物体外抗凝血活性研究

宽体金线蛭鲜品和干品提取物体外抗凝血活性研究万明;唐仕欢;游云;刘义梅;陈科力【期刊名称】《中南民族大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2012(031)001【摘要】目的：研究宽体金线蛭鲜品和干品提取物的体外抗凝血活性.方法：不同浓度的两种提取物分别作用于大鼠血浆后,检测其对血浆PT、APTT、FIB及粘度的影响.结果：宽体金线蛭的2种提取物对血浆PT、APTT、FIB均有不同程度的影响,并呈现明显量效关系,对血浆粘度的影响不明显.结论：2种宽体金线蛭的提取物具有明显的抗凝活性,体外初步实验表明：鲜品宽体金线蛭的抗凝血活性略强于干品.%Objective： In vitro study on the anticoagulant activities of extracts from dried and fresh materials of Whitmania pigra.Methods： Two extracts with different concentrations was observed to evaluate their influence on PT、APTT、FIB and the viscosity of plasma.Result： The two extracts of Whitmania pigra showed different levels of influence on PT、APTT and FIB in a dose-dependent effect,but had no obvious action on the viscosity of plasma.Conclusion： The two extracts of Whitmania pigra possess obvious anticoagulant activities,and the extract from presented higher effect then that from dried one in the anticoagulant activity.【总页数】4页(P47-50)【作者】万明;唐仕欢;游云;刘义梅;陈科力【作者单位】湖北中医药大学教育部中药资源和中药复方重点实验室,武汉430065;中国中医科学院中药研究所,北京100700;中国中医科学院中药研究所,北京100700;湖北中医药大学教育部中药资源和中药复方重点实验室,武汉430065;湖北中医药大学教育部中药资源和中药复方重点实验室,武汉430065【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.宽体金线蛭抗氧化活性肽的分离纯化及体外活性研究 [J], 尹娜;林小清;杨月伟;徐海圣2.宽体金线蛭不同工艺提取物抗凝血活性的比较 [J], 李宝红;邓妙丽;程怡;吴劲东;康群招;张素方;麦艳珍3.不同地理种群宽体金线蛭繁殖力及其初孵稚蛭、幼蛭成活率和生长指标比较 [J], 王信海;姜爱兰;唐金玉;丁辰龙;吴学军;蔺玉华4.不同地理种群宽体金线蛭繁殖力及其初孵稚蛭、幼蛭成活率和生长指标比较 [J], 王信海; 姜爱兰; 唐金玉; 丁辰龙; 吴学军; 蔺玉华5.桑叶提取物对宽体金线蛭体组成、抗氧化和免疫能力及消化道结构的影响 [J],卢桦; 罗莉; 袁渊; 刘长江; 杨理想; 王伟; 安小平; 李虹因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

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蚂蝗抗凝血酶活性物质提取工艺改进【摘要】目的通过正交实验研究中药水蛭中抗凝血酶活性物质提取的最佳工艺。

方法采用正交实验设计法，以提取温度，生理盐水用量，提取次数和提取时间为考察因素，每个因素设计3个水平进行实验。

以测得的水蛭素含量和蛋白质含量计算出水蛭素的比活力做为评价指标进行正交实验。

结果最佳提取工艺为：15倍溶剂量，温度为70℃，提取时间为30 min，提取次数为两次。

结论该方法可为中药水蛭中抗凝血酶活性物质的提取提供依据。

【关键词】水蛭素; 蛋白质; 正交实验; 提取工艺水蛭是传统的破血逐瘀药，始载于《神农本草经》，《中国药典》2005年版收载了水蛭Hirudo nipponica Whitman，蚂蝗Whitmania pigra Whitman和柳叶蚂蝗W.acranulata Whitman 3种[1]。

水蛭在抗凝血、抗血栓形成等方面有着很强的生物活性，其中水蛭素是迄今为止发现的最强的凝血酶抑制剂之一。

在中国水蛭临床用药多为炮制品，其炮制方法多样，质量各异，标准不一。

经过调查，市售的炮制品水蛭多为开水烫制水蛭(清水水蛭)和滑石粉炒制水蛭，然而随着研究的不断深入，越来越多的学者认为生用效果更佳[2]，所以本实验采用风干的生水蛭也就是吊干水蛭进行研究。

正交实验设计可以用较少的、有代表性的处理组合数提供充分有用的信息，与普通的多因素试验设计相比，它在分析主效应与交互作用的同时大大减少了样本量及实验次数，是一种高效、灵活的多因素试验设计方法，因此被广泛应用于科学研究中。

目前对水蛭抗凝血活性物质提取的报道特别是对提取工艺研究的报道较少，为了有效地开发和利用药材资源，充分提取水蛭中抗凝血活性成分，本实验采用正交实验的方法对传统提取方法进行了改进，确定了生理盐水提取水蛭中抗凝血酶活性成分的最佳提取工艺，为水蛭资源的开发和抗凝血物质的提取提供科学依据。