第七章 植物愈伤组织培养
植物愈伤组织培养的关键技术
植物愈伤组织培养的关键技术在现代农业中，植物愈伤组织培养技术广泛应用于种植业和植物育种中。
该技术通过培养和再生植物愈伤组织，可以实现快速繁殖、基因转化和育种改良等目的。
以下是植物愈伤组织培养中的关键技术：1. 材料准备：选择适宜的植物组织（如茎尖、叶片等）作为外植体，确保其健康和无病虫害。
外植体的选择对成功培养愈伤组织至关重要。
2. 外植体的消毒：使用适当的消毒方法，如漂白剂或酒精处理，以杀灭外植体表面的微生物。
3. 媒体配制：选择适宜的基础培养基，并添加必要的植物生长调节剂（如激素）和营养物质，以提供愈伤组织生长和分化所需的条件。
4. 培养条件控制：为愈伤组织提供适宜的光照、温度和湿度条件，以促进其生长和分化。
光照和温度的合理控制对于植物愈伤组织的培养成功至关重要。
5. 组织诱导和增殖：通过添加适当的激素和营养物质，诱导外植体形成愈伤组织，并通过继代培养，实现愈伤组织的快速增殖。
6. 分化和再生：通过调整培养基的成分和激素的添加量，促进愈伤组织分化为根、茎和叶等不同的组织器官，并进一步培养和培育出整株植物。
7. 病害防治：在愈伤组织培养过程中，要注意病害的防治，如消毒外植体、灭菌培养器具等，以避免病原微生物的侵染。
8. 营养调控：根据不同植物的营养需求和生长阶段的需要，合理调节培养基中的营养物质的含量和比例，以促进愈伤组织的生长和发育。
植物愈伤组织培养技术的成功与否，往往取决于以上关键技术的合理应用和控制。
这些技术的正确操作和调控，能够为植物育种和种植业的发展提供有力支持。
以上是关于植物愈伤组织培养的关键技术的简要介绍。
希望对您有所帮助！。
植物组织培养
植物组织培养由于离体植物组织培养对研究植物的形态发生、器官发生、植株再生、植株脱病毒等十分有利，而且植物组织培养理论基础的建立多是以离体组织为研究对象的，因此，组织培养在整个离体培养研究中占有十分重要的地位。
一、植物分生组织培养植物分生组织培养是指对植物的分生组织进行离体培养的技术，包括植物根尖、茎尖等顶端分生组织和形成层组织的培养。
分生组织细胞具有持久的分裂能力和很强的生命力，离体培养时易发生细胞分化，再生完整植株，并利于获得无病毒植株。
在分生组织培养中，以茎尖培养的研究最为深入，广泛用于植株再生和脱病毒等研究。
因此，以茎尖培养为例，说明分生组织培养。
茎尖培养是指对植物顶端的原分生组织和它衍生的分生组织的培养。
茎尖培养的材料可以是10～100μm的茎尖分生组织，也可以是几十毫米的茎尖或更大的芽。
植物带芽茎段经严格灭菌后，在超净工作台上将茎段置体视显微镜（放大倍数为8～40倍）下，用尖头镊子固定芽基，用解剖针剥去所有外层鳞片或幼叶，露出生长点后，用解剖针切取所需茎尖。
茎尖大小视要求而定，由于茎尖培养的成活率及分化生长能力与茎尖大小呈正相关，故不可取材过小。
一般脱毒苗的茎尖要求小于1mm，快速繁殖的茎尖可取数毫米。
如从感染大丽花花叶病的植株上切取0.2～0.3mm的茎尖进行培养，获得了无病毒大丽花苗。
茎尖组织经适当培养后，可能发育的方向为：①芽萌发；②产生胚状体；③产生不定器官；④形成愈伤组织。
茎尖组织培养后向哪个方向发育，与茎尖组织的大小、培养条件、特别是培养基中植物生长调节剂的种类和浓度密切相关。
一般外植体微小或为分生组织时，趋向于形成胚性愈伤组织或非胚性愈伤组织，如甘薯外植体取自枝尖生长点时，胚性愈伤组织的诱导频率为55%～60%，取自2、3节位时为35%，4、5节位时为0～25%，6节位以下为0。
茎尖培养常用的培养基为MS基本培养基，其他添加物和植物生长调节剂种类及浓度随培养植物的种类而异，但应避免使用2，4-D，因它常促使外植体愈伤组织化。
愈伤组织培养
•
第三节 愈伤组织形态的发生
愈伤组织培养物在某些条件下，可以再分
化产生不定芽或根的分生组织甚至是胚状
体，继之，由这些有结构的组织而发育成
苗或完整小植株。
一、愈伤组织通过再分化形成再生植株的 方式：主要有三种(1)先产生芽，后在茎的
外植体的细胞数目多，获得愈伤组织的机会也多。
如果目的仅在于得到愈伤组织，那末将茎的切
段、叶、根、花、果实或种子，或其中的某种 组织切成一片片或一块块放到培养基上就可以 了。
如果要定量地研究愈伤组织的发生，那末外植体
的大小必须一致，形状和组成也要基本相同。进 行这类研究常选用组织块较大的材料，例如胡萝 卜的贮藏根、马铃薯的块茎、菊芋、荷兰防风草
成的能力，因此表面积越大，产生分泌物数量也
越多，愈伤组织的得率也越高。
外植体的体积应尽可能小，从而得到较大数量的
外植体。外植体最小的限度由其亲本组织细胞的
平均大小来决定。细胞数目。
例如菊芋的细胞比胡萝卜根次生韧皮部的细胞 大三倍，一个3.8毫克的胡萝卜外植体大约包含
25，000个细胞，这样一个外植体是能够成活的。
• 理论上愈伤组织是可以无限制继代，但 愈伤组织继代次数增加，形态发生能力 逐渐丧失。 • 原因：遗传因素即继代培养中通常出现 染色体紊乱。
REASONS
遗传上表现不稳定：染色体出现多倍 体和非整倍体
• 四、培养条件
• 1、光照：愈伤组织的诱导需弱光或不需 光，分化需光。继代培养一般需光。此 时光对器官的作用是一种诱导反应。 • 2、温度：一般采用24～28℃的恒温条件 进行。 • 3、湿度：较大，以免引起培养基干缩。
有好几种化学试剂都能起到表面消毒的作
用，试剂的选择及处理时间的长短要根据 材料对试剂的敏感性来决定。
【教案设计】植物愈伤组织培养技术在植物个体发育中的应用
教案设计：植物愈伤组织培养技术在植物个体发育中的应用一、教学目标1.了解植物愈伤组织培养技术的基本概念和原理。
2.掌握植物愈伤组织培养技术的基本操作方法。
3.了解植物愈伤组织培养技术在植物个体发育中的应用。
二、教学重点和难点1.重点：植物愈伤组织培养技术的基本概念和基本操作方法。
2.难点：植物愈伤组织培养技术在植物个体发育中的应用。
三、课程设计1.前导知识讲解在本课内容开始前，老师应该先讲解有关植物个体发育以及植物生长发育的基本知识。
2.植物愈伤组织培养技术概述2.1.什么是植物愈伤组织培养技术2.2.植物愈伤组织的形成和特点2.3.植物愈伤组织培养试剂、设备及操作2.4.植物愈伤组织细胞再生能力2.5.植物愈伤组织培养技术的应用3.植物愈伤组织培养技术在植物个体发育中的应用3.1.依靠愈伤组织培养技术实现植物无性繁殖3.2.利用愈伤组织培养技术进行遗传改良3.3.利用愈伤组织培养技术进行植物细胞学研究4.实验操作简单的植物愈伤组织培养实验操作，使学生学会如何进行植物愈伤组织培养试验，了解其具体操作方法和注意事项。
5.教学总结对于课程中所涉及的主要内容，进行系统的归纳总结，帮助学生更好地掌握学习内容。
四、教学方法本次课程采用讲授、演示、实验操作等多种教学方法，鼓励学生进行互动。
同时，老师还将结合部分案例和视频资料等进行讲解，使学生更加深入地理解植物愈伤组织培养技术在植物个体发育中的应用。
五、教学评估1.考核目标：测试学生对于所学植物愈伤组织培养技术基本概念、基本操作方法以及植物愈伤组织培养技术在植物个体发育中的应用方面的掌握情况。
2.考核工具：该课程的考核工具主要采用笔试的形式进行，题目涉及本课程所有教学内容。
植物愈伤组织培养
03
植物愈伤组织培养的成功应用案例包括生产次生代谢产物、新品种的快速繁殖 、基因工程研究和重造植物等。
展望植物愈伤组织培养的发展趋势和应用前景
植物愈伤组织培养的发展趋势包括深 入研究其生理生化机制、优化培养条 件和寻找更高效的诱导和增殖方法。
随着生物技术的不断发展，植物愈伤 组织培养将与基因工程、细胞工程和 代谢工程等技术结合，实现更高效的 植物繁殖和次生代谢产物的生产。
基本培养基
指具有共性特点的基础培养基，如MS、1/2MS等。
特殊培养基
指在基本培养基上添加特殊成分或调整某些成分而形成的新型培养基，如B5、N6等。
优化培养基
指根据不同植物或不同生理阶段的特点，对外植体、激素、盐分等成分进行调整而形成的 培养基，如分化培养基、生根培养基等。
03
愈伤组织培养的产业化应用
植物激素与信号转导途径的研究
研究植物激素在愈伤组织形成和分化过程中的作用及其信号转导途径，解析激素调控网络 。
比较基因组学和功能基因组学研究
通过比较不同植物愈伤组织形成的基因表达模式，挖掘关键基因和调控网络，为改良植物 品种提供理论依据。
创新愈伤组织培养技术及其在植物生产中的运用
01
创新愈伤组织培养技术
05
结论与展望
总结植物愈伤组织培养的研究成果
01
植物愈伤组织培养是一种有效的植物繁殖方式，能够快速繁殖和保存植物种质 资源，同时还可以生产次生代谢产物和进行基因工程研究。
02
植物愈伤组织培养的研究已经取得了许多成果，包括建立高效的愈伤组织诱导 和增殖培养基、探索不同因素对愈伤组织诱导和增殖的影响、研究愈伤组织分 化成根和芽的规律和机制等。
植物愈伤组织培养在农业、林业、园 艺和中药等领域具有广泛的应用前景 ，未来将会有更多的应用案例和研究 成果出现。
愈伤组织培养步骤
愈伤组织培养步骤
愈伤组织培养是生物科学研究中的重要技术，它能够让细胞在体外环境下生长和分化。
以下是愈伤组织培养的详细步骤：
1、准备培养基：愈伤组织培养需要特殊的培养基，其中包含细胞生长所需的各种营养成分。
按照培养基的说明书进行配制，确保准确无误。
2、灭菌：在培养之前，所有的培养器具和培养基都需要经过高温高压灭菌，以确保无菌环境。
这是细胞生长的关键，因为任何污染都可能导致实验失败。
3、细胞分离：从植物中分离出细胞是培养愈伤组织的第一步。
通常采用酶解法，即用纤维素酶和果胶酶分解细胞壁，使细胞分离成单个。
这一步要特别小心，因为酶的作用会影响后续的细胞生长。
4、接种：将分离出的单个细胞接种到培养基上。
这一步骤需要使用显微操作技术，确保每个细胞都准确地放置在培养基上。
5、培养：将接种了细胞的的培养基放入恒温箱中，设定适宜的温度和湿度。
在培养期间，要定期检查细胞的生长情况，确保没有污染。
6、观察与记录：每天使用显微镜观察细胞的生长情况，记录生长速度、形态变化等数据。
这些数据对于后续的研究非常重要。
7、换液与传代：随着细胞的生长，营养物质会被消耗。
因此，需要定期更换新鲜的培养基，以保证细胞的正常生长。
当细胞数量足够多时，可以进行传代，即将一部分细胞重新接种到新的培养基上。
8、实验结束后的处理：实验结束后，对使用过的器具和培养基进行消毒处理，避免对环境造成污染。
以上是愈伤组织培养的基本步骤，但实际操作中可能还需要根据具体的实验需求进行调整。
在进行实验时，一定要注意遵守实验室规则，保证实验安全。
愈伤组织培养
菊花叶片培养
器官形成
愈伤组织形成
胚形成
五、愈伤组织的应用
(1)加快了植物新品种和良种繁育速度 植物组织培养将传统的育种方式改在试管和室
内进行，利用一块植物组织在一年内可繁殖成千 上万株的小植株，取得迅速高效、低成本推广新 品种的效果。
(2)利于种质资源保存和远距离运输 应用组织培养保存种质资源具有节约土
1、植物愈伤组织的形成结构
根据愈伤组织的性质和细胞组成的特点，可以将 它们的结构分为致密和松散两种类型。
松散型
致密型
2、愈伤组织形成的过程
外植体中已分化的活细胞，在外源激素的诱导下 通过脱分化后形成愈伤组织，这一过程被大致划 分为四个时期，即诱导期、分裂期、形成期和分 化期。
诱导期：
是细胞准备进行分裂的时期。 特点：代谢活化了，细胞内的合成代谢迅速进行，
通过继代培养，可使愈伤组织无限期地保持在不 分化的增殖状态。
由于代谢产物的积累会产生毒害作用，如 果长时间不继代培养，就会使愈伤组织变 成黑褐色，继而死亡。
用继代培养维持愈伤组织生长，是长期保 存愈伤组织的一种方法。
一般来说，愈伤组织的增殖生长只发生在不与琼 脂接触的表面，而与琼脂接触的一面极少细胞增 殖，只是细胞分化形成紧密的组织块。因此，由 于愈伤组织的迅速增殖，整个愈伤组织小方块变 成了一个不规则的馒头状的组织块。
影响因子： （一）外植体本身 （二）培养基 （三）培养环境
（一）外植体本身
1．遗传型 材料的基因型对愈伤组织的器官 分化有决定性的影响。
2．器官和部位 对有些植物而言，不同的器 官或组织所形成的愈伤组织，在生理上或形态 上存在明显差异。
3．年龄 年龄较幼的外植体，不仅易于诱导 形成愈伤组织，而且也容易诱导分化成植株。
愈伤组织培养
分裂期
是指细胞通过一分为二的分裂，不断增生子细胞 的过程。
外植体的细胞一旦经过诱导，其外层细胞开始迅 速分裂，使细胞脱分化。
在细胞分裂期，其形成结构和生理生化都发生深 刻的变化：
•
1.数目迅速增加。 2.平均鲜重下降。 3.体积小，内无液泡。 4．核和核仁增大到最大。
•
形成期
是指外植体经过诱导期和分裂期后形成了无序结 构的愈伤组织的时期。
•
由于代谢产物的积累会产生毒害作用，如 果长时间不继代培养，就会使愈伤组织变 成黑褐色，继而死亡。
用继代培养维持愈伤组织生长，是长期保 存愈伤组织的一种方法。
•
一般来说，愈伤组织的增殖生长只发生在不与琼 脂接触的表面，而与琼脂接触的一面极少细胞增 殖，只是细胞分化形成紧密的组织块。因此，由 于愈伤组织的迅速增殖，整个愈伤组织小方块变 成了一个不规则的馒头状的组织块。
它是愈伤组织表面或近表面瘤状物生长的结果。
•
•青苹果愈伤组织增殖培养
•
•乌桕愈伤组织增殖培养
•
三 愈伤组织的形态发生
形态建成：外植体在适宜的培养条件下经 过脱分化和再分化形成完整植株的过程。
在组织培养中，从外植体形成器官或无性 系的形态发生，有下面两种方式：
•
形态发生方式（一）
不定芽方式 指愈伤组织通过再分化形成不定芽再生植 株。这是组织培养中常见的器官发生方式。
这一时期愈伤组织内细胞的特点是： ①大而不规则，高度液泡化，整个组织是比较松 散的。 ②细胞增殖速度快,适合用液体培养或悬浮培养。
•
③生长旺盛的愈伤组织呈乳黄色或白色，有光泽 ，也有浅绿色或绿色的；老化的愈伤组织多转变 为黄色甚至褐色。
•
•愈伤组织形成
植物组织培养技术第七章植物脱毒快繁技术
鉴定方法：
抗原的制备 →→抗血清的采收，分离→→ 把稀释的抗血清与未知的病毒植物的汁液在小 试管内混合→→根据沉淀反应来鉴定病毒种类。
植物无病毒苗的培育
3. 特点：
特异性高（这种抗血清是高度专一 性的试剂），测定速度快，一般几小时甚 至几分钟就可以完成。所以抗血清法成为 植物病毒鉴定中最有用的方法之一。
葡萄扇叶病毒
苹果花叶病毒
（二）茎尖培养脱毒
1、茎尖培养脱毒原理 2、培养基 3、茎尖培养方法 4、影响微茎尖培养的因素
①外植体大小 ②培养条件 ③外植体的生理状态
植物的去病毒技术，实质上就是采取不含 病毒颗粒或病毒颗粒含量甚少的0.1～0.5mm 带1～2个叶原基的茎尖作为外植体，进行微繁 殖，使其培养成完整的无病毒小植株的技术。
1、茎尖培养脱毒原理
病毒在植物体内分布不均匀，其数量随植株 部位及年龄而异，越靠近茎顶端区域，病毒感染 的程度越低，生长点即分生组织（约0.1-1mm） 几乎不含或含病毒很少。
分生组织不带病毒，可能有4方面的原因：
1、植物体病毒的移动主要靠2条途径：一是通过维管 系统，而分生组织中尚未形成维管系统；二是通过胞间连 丝，但这条途径病毒移动速度非常慢，赶不上茎尖和根尖 细胞不断分裂和活跃的生长速度。
活，并加快分裂和生长。
A
B
C
低 温 生长区
热处理区 高 温
寄主无损伤
病原微生物被消除 寄主被杀死
2、热处理脱毒方法
(1)温汤浸渍处理 (2)热空气处理
（1）. 温汤浸渍处理 适用：休眠器官、剪下的接穗或种植的
材料
方法：50℃左右的温水中浸渍10min
至数小时
特点：方法简便易行，但易使材料受伤。
愈伤组织培养PPT课件
植物组织 培养
愈伤组织的诱导与分化 愈伤组织的继代培养
愈伤组织的形态发生 愈伤组织培养的应用
复习思考题
1
第五章
愈伤组织培养
植物组织 培养
2
第五章
愈伤组织
愈伤组织培养
愈伤组织源出于自然生长的 植物受损伤时，在愈合伤口处长 出的一团瘤状突起，瘤状突起内 的细胞相对于植物体成熟细胞已 发生脱分化的变化。
26
愈伤组织培养
第二节 愈伤组织的继代培养
一、培养基和培养条件
（一） 培养基 1． 无机营养 大量元素、微量元素。 2． 植物生长物质 生长素IAA、NAA、IBA、2,4-D，浓度0.1-10mg/l
细胞分裂素 BA、2-ip KT ZT浓度0.1-10mg/l
植物生长物质之间的配比控制器官发生的类型 控制器官发生的类型也受绝对用量的影响，不同的生长素和 细胞分裂素，对生根和长芽的效果不同。 NAA生根比IBA和IAA效果好，但用IAA和IBA生根比较健壮, 而NAA生根较细。
松脆的愈伤组织是进行悬浮培养最适合的材料，稍经机械振 荡，即可使组织分散成单细胞或由少数几个细胞组成的小细胞 团，在培养中细胞迅速增殖；坚实愈伤组织中的细胞间被果胶 质紧紧地粘着，因而往往不能形成良好的悬浮系统。
23
愈伤组织培养
第一节 愈伤组织的诱导与分化 二、愈伤组织细胞的分化
诱导形成的愈伤组织如果在原培养基上继续培养，细胞 将不可避免的发生分化，产生新的结构，但是把它及时转移到 新鲜的培养基上，则愈伤组织内的细胞可无限地进行分裂，维 持其不分化的状态。
18
愈伤组织培养
第一节 愈伤组织的诱导与分化
二、愈伤组织细胞的分化
（1）细胞分裂部位和方向发 生改变
《愈伤组织培养》课件
激素与生长调节剂
激素：植物激 素如生长素、 细胞分裂素等 对愈伤组织培 养有重要影响
生长调节剂：人 工合成的生长调 节剂如2,4-D、 NAA等可以促 进愈伤组织的形
成和生长
激素与生长调节 剂的相互作用： 激素和生长调节 剂共同作用，影 响愈伤组织的形
成和生长
激素与生长调节剂 的浓度：激素和生 长调节剂的浓度对 愈伤组织的形成和 生长有重要影响， 过高或过低都会影
主要应用于植物育 种、基因工程、植 物病理学等领域
愈伤组织培养可以 快速繁殖植物，提 高植物产量和质量
愈伤组织培养的原理
外植体：从植物体上切取下 来的组织或器官
植物细胞全能性：植物细胞 具有发育成完整植株的能力
培养基：提供植物细胞生长 所需的营养物质和环境条件
愈伤组织：植物细胞在培养 基上生长形成的无定形组织
愈伤组织培养的应用
植物育种：通过愈伤组织培养，可以快速繁殖优良品种，提高育种效率
植物基因工程：利用愈伤组织培养，可以方便地进行基因转化和基因编辑，实现 植物基因工程的目标
植物细胞工程：通过愈伤组织培养，可以实现植物细胞的融合和重组，为植物细 胞工程提供技术支持
植物生物反应器：利用愈伤组织培养，可以构建植物生物反应器，生产生物活性 物质，如药物、酶等
营养成分：包 括糖类、氨基 酸、维生素、
无机盐等
生长调节剂： 如生长素、细 胞分裂素、赤
霉素等
植物激素：如 生长素、细胞 分裂素、赤霉
素等
琼脂：作为培 养基的凝固剂
和支撑物
水：作为培养 基的溶剂和营 养物质的载体
培养基的pH 值：影响植物 细胞的生长和
分化
环境因素与培养条件
光照：光照强度和光照时间对愈伤组织的生长有重要影响 温度：温度过高或过低都会影响愈伤组织的生长 湿度：湿度过高或过低都会影响愈伤组织的生长 培养基：培养基的成分和浓度对愈伤组织的生长有重要影响
植物愈伤组织培养
植物愈伤组织培养汇报人：2023-12-13•植物愈伤组织培养概述•植物愈伤组织培养的基本原理•植物愈伤组织培养的方法与技术目录•植物愈伤组织培养的应用与前景•植物愈伤组织培养的挑战与解决方案•案例分析：某种植物的愈伤组织培养过程及结果分析目录01植物愈伤组织培养概述植物愈伤组织培养是指将植物的细胞、组织或器官进行离体培养，使其在人工控制的条件下再生、生长、分化，进而形成完整的植株或特定的细胞、组织、器官的过程。
定义植物愈伤组织培养具有高度可控性、操作简便、可重复性强等特点，是植物繁殖、遗传改良和生物技术研究的重要手段。
特点定义与特点愈伤组织培养是一种快速、高效的繁殖种苗的方法，可以在短时间内大量繁殖优良品种，提高农业生产效益。
繁殖种苗愈伤组织培养可用于植物的遗传改良，通过细胞工程和基因工程技术将优良性状导入到其他植物中，培育出抗逆性更强、产量更高、品质更优的新品种。
遗传改良愈伤组织培养是植物生物技术研究的重要基础，可以用于研究植物生长发育规律、细胞分化与形态发生、基因表达与调控等生物学问题。
生物技术研究愈伤组织培养的意义愈伤组织培养的历史与发展历史植物愈伤组织培养技术最早起源于20世纪初，随着植物细胞工程和基因工程技术的不断发展，愈伤组织培养已成为生物技术领域的重要分支之一。
发展近年来，随着分子生物学和生物技术的快速发展，植物愈伤组织培养在细胞分化与形态发生、基因表达与调控等方面的研究不断深入，并取得了一系列重要成果。
同时，愈伤组织培养技术在农业生产、植物保护、生态恢复等方面也得到了广泛应用。
02植物愈伤组织培养的基本原理通过将植物组织或细胞与培养基结合，提供适宜的生长条件，诱导植物组织脱分化形成愈伤组织。
愈伤组织的诱导愈伤组织在特定培养条件下，可以分化形成具有特定功能的细胞或组织。
愈伤组织的分化愈伤组织在适宜的培养条件下，能够不断生长和增殖，形成较大的愈伤组织团块。
通过继代培养，愈伤组织可以不断增殖，产生更多的细胞或组织。
第七章 植物愈伤组织培养
第一节
外植体的制备
1.一般植物组织都能诱发愈伤组织。 材料必须完全无菌
外植体的大小
第二节
一、培养基
愈伤组织的 培养
基本培养基只有部分植物组织能够培养和 维持下去，大多数组织需要添加各种各样的附 加物，如维生素、氨基酸、糖醇，生长素、细 胞分裂素等。
二、愈伤的培养方式： 培养分为固体和液体培养两大类。
2.愈伤组织形态发生的途径 3.从外植体形成愈伤组织的三个时期及特点。
液体培养又分
三、培养条件
1、光照：愈伤组织的诱导需弱光或不需 光，分化需光。继代培养一般需光。 2、温度：一般采用24～28℃的恒温条件 进行。 3、湿度：较大，以免引起培养基干缩。
第三节 愈伤组织形态的发生
愈伤组织培养物在某些条件下，可
以再分化产生不定芽或根的分生组织甚至
是胚状体，这些有结构的组织发育成苗。
平均大小往往没有变化。
它们并不是严格的，特别是分裂期和分化期。
一块培养组织的细胞既有分裂的又有分化的。
二、愈伤组织的质地
根据愈伤质 地划分为：
愈伤组织的质地是有明显差异的
有的坚实，有的脆。脆的愈伤组织是悬浮培养生 长的最合适的材料，容易使组织处于分散状态。
思考题
1. 愈伤组织根据其质地可划分为哪几种？
器官分化的植物激素控制理论
大多数植物组织或器官的再生作用符合 器官分化的植物激素控制理论。
生长素与细胞分裂素的比例小时则产生
苗，比例大时则生根，而两种激素的比例适 中时，则产生无结构的愈伤组织。
第四节
愈伤组织的诱 导与分化
一、外植体形成愈伤组织的时期及特点。
从外植体脱分化形成愈伤组织大致可分为三 个时期：起动期 （诱导期）、分裂期和分 化期。
植物愈伤组织的继代培养
月季
与芦荟类似
五、实验步骤
芦荟 1、将愈伤组织在无菌条件下，从试管中取出 2、用镊子和解剖刀剔除附着在愈伤块上的培养 基，并用无茵水反复清洗数次，直至愈伤块上无 残留培养基为止。 3、用解剖刀将愈伤块切成数个小块，再接种到 装有愈伤组织诱导培养基的三角瓶中 4、培养基与愈伤组织诱导培养基相同 5、培养条件：与诱导愈伤组织相同。
植物愈伤组织的继代培养
一、实验名称
植物愈伤组织的继代培养
二、实验目的
1、初步掌握植物愈伤组织继代培养的基 本操作步骤
三、实验材料
1、芦荟愈器材
1、剪刀 2、解剖刀 3、长角镊子 4、超净工作台 5、9cm培养皿 6、封口膜 7、烧杯 8、吸管 9、废液缸 10、橡皮筋
植物愈伤组织培养实验设计方案
植物愈伤组织培养实验设计方案组员：陈林超、陈思超、杨芳、徐国政、萧宇超、郑剑一、实验目的：1、掌握培养基配制方法及灭菌技术2、掌握外植体灭菌的基本方法以及无菌操作技术3、掌握实验结果的统计方法并学会分析二、实验原理：植物组织培养是指在无菌条件下，对离体植物组织（器官或细胞）分离并在培养基中培养，使其能够继续生长，甚至分化发育成一完整的植株的一门实验技术。
组织培养的理论依据是植物细胞的全能性，即植物体的每个细胞携带着一套完整的基因组，因此具有发育成完整植株的潜在能力。
植物组织当中原本已经分化的细胞，一旦脱离原有的机体环境，成为离体状态，在适宜的营养和外界条件下，就会表现出全能性，从已经分化定型的细胞，脱分化，成为恢复分裂能力的细胞，并能重新生长发育成完整的植株。
愈伤组织是指一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化不断分裂、增生子细胞，这些细胞胞分裂快，结构疏松，颜色浅而透明，逐渐形成了无序结构的一团细胞。
三、材料的准备：1、前期器材准备：烧杯（100ml 3个，用于放初步处理后的外植体；1L 1个，用作废液缸；250ml 3个，包好牛皮纸后灭菌，分别装酒精、升汞和无菌水）、电子天平、称量纸（若干）、钥匙（若干）、玻璃棒（一根）、量筒（100ml和10ml各1个），胶头滴管（1个）、陶瓷烧杯（1L 1个）、电炉（配有石棉网）、酸性ph试纸、锥形瓶（250ml 4个，用于配置专属培养基；500ml 2个，装无菌水；100ml 40个，用于接种）、皮筋（或棉绳，若干）、牛皮纸（40+2+2，按锥形瓶口和烧杯口大小裁好）、记号笔（或标签纸）、培养皿（10套）、铁质饭盒内装操作工具（手术刀柄2个、手术剪1个、长形镊子2个，小型镊子2个）、吸水纸（若干）、脱脂棉、滤纸（若干）、高压灭菌锅、超净工作台、保鲜膜、酒精灯、打火机、手术刀片（2片）、人工气候箱2、前期药品配置：75% 酒精、1mol/L HCl、1mol/L NaOH、大量元素母液、微量元素母液、有机物母液、铁盐母液、无菌水、0.1%HgCl2、乙醇、蔗糖、琼脂、6-BA、NAA3、实验材料：月季、仙人掌、芦荟四、实验步骤：1、各种实验器材的准备及清洗2、各种母液的配置：类型成分培养基中配置母液母液体积配1L培养基扩大倍数工作液称取量g ml 吸取量/ml浓度mg/L大量元素NH4NO3 1650 16500KNO3 1900 19000CaCl2·2H2O 440 4400 1000 100 100MgSO4·7H2O 370 3700KH2PO4 170 1700微量元素KI 0.83 83H3BO3 6.2 620MnSO4·4H2O 22.3 2230ZnSO4·7H2O 8.6 860 1000 10 100Na2MoO4·2H2O 0.25 25CuSO4·5H2O 0.025 2.5CoCl2·6H2O 0.025 2.5铁盐FeSO4·7H2O 27.8 2780 1000 10 100 Na2-EDTA 37.3 3730有机物质肌醇100 5000烟酸0.5 25盐酸吡哆素0.5 25 500 10 50盐酸硫胺素0.4 20甘氨酸 2.0 1003、MS培养基的配置：取容量为1L的搪瓷杯，先加入600ml的蒸馏水，放在电炉上进行加热，后依次加入100ml 大量元素母液、10ml微量元素母液、5ml铁盐母液、10ml有机物母液、30g蔗糖和9g琼脂粉。
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一 、愈伤组织形态发生的途径
1.器官的形成
在分化时，愈伤组织的表层和内部都可形成分生中 心。芽多发生在愈伤组织的表层，属外起源。 根发生在组织的深处，与整体植株发生类似，是内 起源。
2.体细胞胚的发生
愈伤组织
体细胞胚
植株
二、激素对愈伤组织分化的影响
植物生长调节物质在分化过程中的作用是 极为明显的，合适的植物生长物质配比在器官 分化中起着重要的作用。
2.愈伤组织形态发生的途径 3.从外植体形成愈伤组织的三个时期及特点。
液体培养又分
三、培养条件
1、光照：愈伤组织的诱导需弱光或不需 光，分化需光。继代培养一般需光。 2、温度：一般采用24～28℃的恒温条件 进行。 3、湿度：较大，以免引起培养基干缩。
第三节 愈伤组织形态的发生
愈伤组织培养物在某些条件下，可
以再分化产生不定芽或根的分生组织甚至
是胚状体，这些有结构的组织发育成苗。
1. 诱导期: 诱导期是细胞准备分裂的时期，是愈伤组织形成起点。
特点：在诱导期，代谢活化了，细胞内 合成代谢迅速进行，但是细胞 的大小仍然和外植体时一样， 没有多大改变。
2.分裂期： 外植体中已分化的活细胞在外源激素的作用下，
外层细胞出现了分裂，细胞的体积缩小，逐渐
回复到分生组织状态，称为回复变化。在回复
变化时，细胞通过脱分化的起动期而进入分裂，
并开始形成愈伤组织。 特征：外层细胞进行分裂，而中间的细胞不分 裂。另外还有细胞数目增加，体积变小；细胞
核和核仁增到最大等
3.分化期 特点：分化结构的形成过程加速，超过了回复
变化。外层细胞的分裂逐渐减慢，甚至停止，
为次生生长所代替，大量次生结构出现。在这
时期中细胞的伸展和分裂处于平衡，故细胞的
平均大小往往没有变化。
它们并不是严格的，特别是分裂期和分化期。
一块培养组织的细胞既有分裂的又有分化的。
二、愈伤组织的质地
根据愈伤质 地划分为：
愈伤组织的质地是有明显差异的
有的坚实，有的脆。脆的愈伤组织是悬浮培养生 长的最合适的材料，容易使组织处于分散状态。
思考题
1. 愈伤组织根据其质地可划分为哪几种？
器官分化的植物激素控制理论
大多数植物组织或器官的再生作用符合 器官分化的植物激素控制理论。
生长素与细胞分裂素的比例小时则产生
苗，比例大时则生根，而两种激素的比例适 中时，则产生无结构的愈伤组织。
第四节
愈伤组织的诱 导与分化
一、外植体形成愈伤组织的时期及特点。
从外植体脱分化形成愈伤组织大致可分为三 个时期：起动期 （诱导期）、分裂期和分 化期。
第七章 植物愈伤组织培养
第一节
外植体的制备
1.一般植物组织都能诱发愈伤组织。 材料必须完全无菌
外植体的大小
第二节
一、培养基
愈伤组织的 培养
基本培养基只有部分植物组织能够培养和 维持下去，大多数组织需要添加各种各样的附 加物，如维生素、氨基酸、糖醇，生长素、细 胞分裂素等。
二、愈伤的培养方式： 培养分为固体和液体培养两大类。