滋肾化瘀祛痰汤对多囊卵巢综合征大鼠胰岛素抵抗相关性的影响研究

基 金 项 目 ：温 州 市 卫 生 科 技 发 展 计 划 课 题 （ｏ Ｓ ８ ７ ） Ｎ ． ０ １ ７
１ ２ ４ 应用Ｓ Ｓ １． 统计软件进行 方差 分析 。 ．． ＰＳ １５ ２ 结 果 ２ ｉ 卵 巢 病 理 检 查 肉 眼 观 察 ： 正 常 对 照 组 卵 巢 色 泽 红 ． 润 ；模 型对 照组卵 巢表 面较苍 白，体 积增 大 ，见 较 多囊 状 扩 张 的 卵 泡 ；两 中 药 组 卵 巢 色 泽 较 模 型 对 照 组 红 润 ； 二 甲 双胍 组与模 型对 照组无 差异 。镜下 观察 ：正常对 照组 可见 不 同发育 阶段 卵泡及 多个黄 体 ，无 囊性 卵泡 出现 ；颗粒 细 胞形态完整 ，排 列整齐，卵泡膜无显著增生。模 型对照组及 二 甲双胍组标本 中可见囊性扩张卵泡 ，窦腔扩大 ，放射冠消 失 ；颗粒细胞层数减少排列稀疏 ，卵泡膜细胞显著增生及间 质细胞增生 。两 中药组囊状卵泡 明显减少 ；颗粒细胞层数较 模 型对 照组 明显增 多 ，颗粒 细胞形 态完 整 ，排 列整齐 ，卵 泡 膜 细 胞 层 变 薄 ， 黄 体 组 织 数 量 增 多 。滋 肾 化 瘀 祛 痰 汤 组 较 益 肾 导痰 调 冲 汤 组 改 善 更 明显 。
论 著
Ｔｒ ａ ｉ ｅ ｒｓ ｅ
中 国 民 族 民 间 医 药
Ｃ ＬｅｅＪ ｕ ｎ ｌｏ ｈ ｏ ｄｃ ｎ ｈ ｏ ｈ ｒ ｃ ｈｎ ｓ ｏ ｒ ａ ｆＥｔ ｎ ｍｅ ｉｉ ａ ｄ Ｅｔ ｎ ｐ ａ ｍａｙ ｎｅ ・３７ ・
滋 肾化 瘀 祛 痰 汤 对 多囊 卵 巢 综 合 征 大 鼠胰 岛素 抵 抗 相 关 性 的 影 响 研 究
李淑娟’ 程
ｌ 内蒙古准格 尔旗 中蒙医院 ，内蒙古 ＿ 鄂尔多斯
泾
温州 ３ ５ １ ２ ０４
０ ０ ０ ；２ 温 州 中山医院不 孕不育科 ，浙江 １３０ ．
【 摘 要 】目的 ：观察滋 肾化 瘀祛痰 汤对 多囊 卵巢综合征 （ Ｃ Ｓ Ｐ Ｏ ）大 鼠胰 岛素抵抗相 关性的影 响并分析其可 能的作用机 制。方法 ： 规律发情周期ｓ雌性 大鼠５只 ，应用人绒毛膜促 性腺激素 （Ｃ ）联合胰 岛素 （Ｎ） Ｄ Ｏ ＨＧ ＩＳ 造模法制作动物模 型，随机分为正常对照组 、模 型对 照 组 、二甲双胍组 、滋 肾化瘀 祛痰 汤组和益 肾导痰 调冲汤组 。运用放 免法测定血清性激素水 平的变化 ，光镜观察 卵巢 组织形态学改变 ，免疫 组化法检 测卵巢组织ＩＲ Ｉ Ｆ １ 表达水平 。结果 ：滋 肾化瘀祛痰汤 能使Ｐ Ｏ 大 鼠卵巢囊状卵泡减少 ，颗粒细胞形态恢复完整 、排列整齐 ， Ｎ ＳＩ 一Ｒ ￣Ｇ ＣＳ
多 囊 卵 巢 综 合 征 （ｏ ｙ ｙ ｔｃ ｏ ａ ｙ ｓ ｎ ｒ ｍ ，Ｐ Ｏ ） ｐ ｌ ｃ ｓ ｉ ｖ ｒ ｙ ｄ ｏ ｅ Ｃ Ｓ 是育龄 妇女 常见 的一种发 病 多因性 ，临床表 现呈 多态性 的 异质性 内分 泌紊乱疾 病 。据 报道 ，Ｐ Ｏ 在 育龄 妇女 中的发 ＣＳ 病 率 为 ６ ～ １ ％，是 造 成 不 孕 的 重 要 原 因 之 一 ， 占 无 排 卵 ％ Ｏ 性不育病 因的５ ￣７ ％ Ｊ 中医 学中无 “ ０ ０ ¨。 多囊卵巢综合 征 ” 病 名 ， 根 据 其 主 要 临 床 表 现 当 属 祖 国 医 学 “月经 后 期 ” 、 “ 闭经 ”或 “ 崩漏 ”、 “ 孕 ”等 范畴 。现代 中医 治疗 多 不 囊卵巢 综合 征多采用辨病 与辨证相结合 ，本实验所用方药是 以滋肾阴为主，兼祛瘀化痰，调理冲任为治则创立的治疗 肾 阴虚痰瘀互阻型ＰＯ 的有效方剂 ，临床 中多用于Ｐ Ｏ 中偏 于 ＣＳ ＣＳ 高胰 岛素血 症和胰 岛素抵 抗型 的患者 。本 实验运 用放射 免 疫、免疫组化等技术 ，观察中药滋 肾化瘀祛痰汤对Ｐ Ｏ 大 鼠 ＣＳ 内分泌、卵巢形态学及其Ｉ 改善情况的影响 ；重点研究 ＩＦ Ｒ Ｇ— ｌ 、胰 岛 素 受 体 （Ｎ ） 卵 巢 的 表 达 ， 以从 细 胞 分 子 学 水 平 Ｒ ＩＲ在 探 讨 其 对 Ｐ Ｏ 胰 岛 素 抵 抗 的 作 用 ， 为 滋 。 瘀 祛 痰 汤 的 临 ＣＳ 肾化 床 应用提供实验依据 。 １ 材 料 与 方 法 １ １ 材料 ． １ １ １ 动 物 选 用 ６ ７ 龄 的Ｓ ｒ ｇ ｅ Ｄ ｗ ｅ （ Ｄ ．． －周 ｐ ａ ｕ — ａ ｌ ｙ Ｓ ）雌 性 大 鼠。Ｓ Ｆ ，由温州 医学 院实验动物 中心提供和饲 养 。每 Ｐ级 目光 照 １ｄ 时 ， 喂 以 大 鼠颗 粒 饲 料 。 ２＂ １ １ ２ 药 品 与 试 剂 ① 滋 肾 化 瘀 祛 痰 汤 、 益 肾 导 痰 调 冲 ． ． 汤 ： 由 温 州 中 山 医 院 中 国 中 西 医 结 合 学 会 生 殖 医 学 不 孕 不 育研究所提 供 、制备 ，４ ＯＣ保存 待用 。②二 甲双胍片 ： ～Ｉ ￣ ０ ２ ｇ 片，贵 州天安 药业 。⑨ 中性胰 岛素注 射液 ： ｌｍ ： ．５／ Ｏｌ ４０ ０ 单位 ，江 苏万邦生化 医药股份有 限公司 。④注 射用人 绒 毛 膜 促 性 腺 激 素 ：注 射 用 绒 促 性 素 ｌ Ｏ ｌ ／ ， 丽 珠 集 团 丽 Ｏ ＯＵ瓶 珠制药厂 。⑤血清 睾酮 （） Ｔ 、雌 二醇 （ 、促卵泡素 （Ｓ ） Ｅ） ＦＨ 、 促 黄 体 生成 素 （Ｈ 、 胰 岛素 （ Ｎ ） 放 免 试 剂 盒 ， 博 士 德 生 Ｌ） ＩＳ 物工程有 限公司产 品。⑥ Ｉ Ｒ Ｇ 一 Ｒ Ｎ 、Ｉ Ｆ １ 免疫组化 试剂盒 ：博 士 德 生 物 工 程 有 限公 模 型 对 照 组 血 清 Ｔ Ｓ 、Ｌ 、 Ｉ Ｓ ． 、Ｆ Ｈ Ｈ Ｎ 较 正 常对 照 组 明显 升 高 （ ＜０ ０ ） ；滋 肾 化瘀 祛痰 汤 组 血 Ｐ ．５ 清Ｔ Ｓ 、Ｌ 、ＩＳ 、Ｆ Ｈ Ｈ Ｎ 和二 甲双胍组 、益 。 肾导痰 调冲汤组血 清 Ｔ Ｈ Ｎ 较模 型对 照组 明显 降低 （ ＜０ ０ ） ；各 组 间 血 、Ｌ 、Ｉ Ｓ Ｐ ．５ 清Ｅ均无显著性差异 。 （ １ 表 ） ２ ３ 卵巢 组 织 Ｉ Ｆ １ ｉ Ｉ Ｒ ． Ｇ 一 Ｒ ， Ｎ 的表 达 模 型 对 照 组 颗 粒 细 胞 Ｉ Ｆ １ 表 达 明 显 强 于 正 常 对 照 组 （ ＜ ０ ０ ） ，两 中 药 组 Ｇ一 Ｒ Ｐ ．５
作者简介 ：李淑 娟 （ ９ ２ １ ８ ～），女 ，硕 士研 究生，研究生期 间主要从事中西结合不孕不育 的科研 与临床 工作。 程泾 ，男，主任医师 ，从事 中西 医结合不孕不育工作 。
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论 著
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Ｃｈｎ ｓ ｏ ｒ ａ ｆＥｔ ｎ ｍｅ ｉｉ ｎ Ｅ ｈ ｏ ｈｒ ｃ ｉｅｅ Ｊ ｕ ｎ ｌｏ ｈ ｏ ｄｅ ｎｅ ａ ｄ ｔ ｎ ｐ ａｍａｙ
卵泡膜细胞层变厚 ，黄体组织增多 ；血清Ｔ Ｓ 、Ｌ 、ＩＳ 、Ｆ Ｈ Ｈ Ｎ 水平 明显下降 （ ＜０ ０ ），并下调卵巢组织 ＩＦ ｌ ，增高 ＩＲ Ｐ ．５ Ｇ—Ｒ Ｎ 表达 。结论 ：滋 肾 化瘀 祛痰汤通过调整 内分泌及影 响Ｉ Ｆ １及Ｉ Ｒ Ｇ 一 Ｒ Ｎ 的表达，改善Ｐ Ｏ 大 鼠的高胰岛素血症和胰岛素抵抗，促进 卵泡的发育 成熟及排 卵。 ＣＳ 【 关键词 】滋肾化瘀祛痰汤 ：多囊卵巢综合征大 鼠；胰 岛素抵抗：高胰 岛素血症 【 中图分类号 】Ｒ ８ ． ２５６ 【 文献标识码 】Ａ 【 文章编号 】１０ — ５ ７（０ ０ ０ ０ ７ ３ ０ ７ ８ １ ２ １ ）１ — ３ —
Ｉ Ｆ ｌ 表达 较模型对 照组 明显 降低 （ ＜０ ０ ），二 甲双 Ｇ— Ｒ Ｐ ．５ 胍组与模 型对照组 间、两 中药 组间无显著 性差异 。模 型对
照 组 Ｉ Ｒ 达 明 显 低 于 正 常 对 照 组 （ ＜ ０ ０ ） ，滋 肾 化 瘀 Ｎ表 Ｐ ．５
１２ 方 法 ．
天 皮下注射Ｈ Ｇ Ｉ 溶于生 理盐水共０ ２ １ Ｃ ３ Ｕ（ ． ｍ ），每 日两 次， 实验 周期为２ 天 。所有 实验动物给 予 自然光 照及 自由饮食饮 ２ 水 （ 处理前 为普 通饮 用水 ，处理期间为５ 葡萄糖 水），并继 ％ 续 每 日进 行 阴道 涂 片 以监 测发 情 周 期 。 １２ ２ 给 药方 法 ．． 造 模 完 成 后将 上 述 病 理模 型 组 （ ＝ ０ ｎ ４ ）又 随机 分 为 模 型对 照组 （ ＝ Ｏ ｎ ｌ ）、二 甲双 胍组 （ ＝ Ｏ ｎ ｌ ）、滋 肾化瘀 祛 痰 汤组 （ ＝ Ｏ ｎ ｌ ）、益 。 肾导痰 调冲 汤组 （ ＝ Ｏ ｎ ｌ ），第 ２ 天 开 ３ 始 分别 灌 胃予对应 剂量 的药物 。在给 药剂量 上按 人 鼠体 重 比换算 后乘 以人与 大 鼠体重换算 系数６ ２ ，换算 后大 鼠给 ．５ 药量 为 ：二 甲双胍 组０ １ ｇ ｋ ｄ ． ６ ／ ｇ・ ：滋 肾化瘀 祛痰 汤 中剂 量组 （ 两倍量 ）４ ． ０ ／ ｇ・ ；益 。 ６９ ｇｋ ｄ 肾导痰 调冲汤 中剂量 组 ４ ． ２ ／ ｇ・ ：而 正 常 对 照 组 与模 型 对 照 组 给 予 生 理 盐 水 ７９ ｇｋ ｄ ｌ ｍ ／ ｇ・ ，连续灌 胃 ｌ 天后处死 。正 常对照组 和模型对 Ｏ ｌｋ ｄ ４ 照组与 两 中药组 比较 ，观察 中药疗 效： 正常对照 组与模 型 对照 组 比较 ，观察 造模 情况 。并继 续每 日进 行 阴道涂片 以 监测发情周期 。 １ ２ ３ 检 测 项 目及 方 法 ．． （ ）卵巢 组织病理检 查：大 鼠经戊 巴比妥钠麻 醉后 取 １ 出双侧 卵巢 ，修剪后将 卵巢 以其长径剖开 ，１％ ０ 甲醛溶液常温 固定２ 小时 以上 ，送病理科石蜡包埋 。以卵巢最大平面作为 ４ 待检平面切片，分别 以４ 厚度切片两次 （ ｍ 问隔４ ｜ｍ ０ ｌ ）。 （ ）激 素检测 ：心脏 取血 ，３ ０ ｒ ｍ ｎ Ｏｌ ｍ ｎ ２ ０ ０ ／ ｉ离 Ｏ ｉ ，收 集 血 清 样 品 ， 一 Ｏ 保 存 ， 应 用 放 射 免 疫 法 （ Ｉ ）测 定 血 ２℃ ＲＡ 清 中卵泡刺 激素 （Ｓ ） Ｆ Ｈ 、黄 体生成素 （Ｈ 、雌二醇 （２ 、睾 Ｌ） Ｅ） 酮 （） 和 Ｉ Ｓ Ｔ、 Ｎ 的含 量 。 （ ）免 疫组化 分析 ：应用Ｓ Ｂ 法 分析 卵巢组织 中Ｉ Ｒ ３ ＡＣ Ｎ