塞克硝唑对口腔厌氧病原菌体外抗菌活性的测定_于佳辉

文章编号:1001-8689(2007)07-0447-02塞克硝唑对口腔厌氧病原菌体外抗菌活性的测定In vitro activities of secnidazole against oral anaerobic bacteria于佳辉　李淼　肖丽英*　丁一　肖晓蓉　朱珠　龚其美Yu Jia-hui,　Li Miao,　Xiao Li-y ing ,　Ding Yi,Xiao Xiao -rong,　Zhu Zhu and Gong Qi-m ei(口腔生物医学工程教育部重点实验室,四川大学,　成都610041)(L abor ato ry of O ral Biom edical M inist ry of Education,Sichuan U niv ersity ,　Chengdu 610041) 摘要:　目的　测定实验药物塞克硝唑对口腔厌氧病原菌的体外抗菌作用。

方法　本试验采用美国国立临床实验室标准化研究所(CL SI/NCCL S)推荐的厌氧菌药物敏感试验-琼脂稀释法,检测塞克硝唑对6株模式株和参考株及35株口腔临床分离株的体外抗菌活性,并与同类药物甲硝唑进行比较。

结果　塞克硝唑和甲硝唑对6株模式株和参考株的M IC 值分别是0.062～0.5L g /ml 、0.125～0.5L g /ml;对35株临床分离株的M I C 值分别是0.031～0.5L g/ml 、0.031～1.0L g /ml 。

结论　塞克硝唑与甲硝唑相比体外抗厌氧菌活性相似或略强。

关键词:　塞克硝唑;　抑菌实验;　厌氧菌;　M I C 中图分类号:R 978.5 文献标识码:A收稿日期:2006-12-13作者简介:于佳辉,女,生于1975年,在读硕士研究生。

*通讯作者,E-mail:klobme@ 口腔临床常见的感染性疾病如牙周炎、冠周炎均为厌氧菌感染为主的疾病,厌氧菌检出率在95%左右。

5-硝基咪唑类药物[如甲硝唑(M TZ)等]被认为是抗无芽孢厌氧菌感染效果较好的药物。

塞克硝唑(sec-nidazole ,SNZ )是近年来国外临床广泛使用的安全、有效的抗脆弱拟杆菌、幽门螺杆菌、阴道滴虫及肠道阿米巴的5-硝基咪唑类药物[1,2]。

与其它5-硝基咪唑类药物相比,具有有效血药浓度维持时间长(17～29h )[3]、不良反应少等优点[4,5]。

目前国内塞克硝唑仅应用于妇科感染性疾病的治疗,还未见用于口腔感染性疾病的治疗,为进一步了解塞克硝唑对口腔厌氧菌株的敏感性,本文对塞克硝唑进行体外抑菌实验,为本品在口腔临床抗厌氧菌感染中的应用提供有意义的实验数据。

1　材料与方法1.1　材料(1)实验药和对照药实验药　塞克硝唑原药粉,白色粉剂,批号20041216,由浙江南洋药业股份有限公司提供。

对照药　甲硝唑原药粉,白色粉剂、批号HEC -M E-040634,由浙江南洋药业股份有限公司提供。

(2)实验菌株　选择口腔临床常见的厌氧病原菌菌株作为本实验的实验菌株,其中模式株和参考菌株6株,临床分离株35株,均从口腔临床牙周炎患者的病灶位点分离。

质控株脆弱拟杆菌AT CC25285;实验菌株(模式株和参考菌株)6株:牙龈卟啉单胞菌(P or -p hy nomonas gingiv alis )AT CC33277,牙龈卟啉单胞菌381,牙髓卟啉单胞菌(P orp hy romonas endodentalis )AT CC 34506,中间普雷沃菌(P revotella intermed ia )AT CC 25611,产黑素普雷沃菌(P revotella melanino -genica )AT CC13040,具核梭杆菌(Fusobacterium nucleatum )ATCC10953。

(3)培养基　Brain -heart infusion -S (BH I -S ),Bio -M erieux 产品,批号51009。

(4)厌氧孵育箱　DYII 型,浙江义乌。

1.2　方法采用美国临床实验室标准化研究所(CLSI /NCCLS )推荐的厌氧菌药物敏感试验(Antimicro bial Susceptibility Testing of Anaer obes )琼脂稀释法(Ag ar Dilution M ethod )测定实验药物和对照药物的抗菌活性,用最小抑菌浓度(m inimum inhibitor y con-centration,M IC)表示。

(1)药物实验液和含药琼脂平皿的配制药物实验贮存液的配制　实验药和对照药均用无菌蒸馏水配制成药物浓度为5120L g /ml 的贮存液(-4℃保存一周)。

含药琼脂平皿的配制　采用对倍稀释法,用BHI 液体培养基分别将实验药和对照药的贮存液(5120L g/m l)配制成系列浓度的实验药液:2560、1280、640、・447・中国抗生素杂志2007年7月第32卷第7期320、160、80、40、20、10、5、2.5、1.25、0.62和0.31 L g/m l。

分别取上述不同浓度的药物实验液2m l加18m l浓度为48～50℃的BHI-S琼脂混合均匀后倾注平皿,配制系列对倍递减浓度的含药琼脂平皿(256、128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.062和0.031L g/m l)。

(2)实验细菌液的准备　在BHI-S琼脂表面接种实验菌株,置厌氧培养箱内(80%N2+10%CO2+ 10%H2)培养48h,取48h纯培养物接种BHI-S肉汤后放置厌氧培养箱内(80%N2+10%CO2+10%H2)培养48h,校正实验菌液的浓度为0.5M cFarland (108CFU/ml)备用。

(3)M IC测定　在系列含药平皿表面用微量加样器分别点种细菌浊度为108CFU/m l(0.5M cFarland 标准)的实验菌液,点种量为7L l。

将点种细菌的实验平皿放置在厌氧箱内(80%N2+10%CO2+10%H2)培养48h。

实验菌对照:将实验菌液点种在不含药液的BHI-S琼脂表面。

厌氧培养(80%N2+10%CO2+ 10%H2)48h后观察MIC结果。

2　结果由表1可见塞克硝唑和甲硝唑对质控菌株脆弱拟杆菌AT CC25285的MIC的测定值与CLSI/NCCLS公布的参考值接近。

对6株模式株和参考株的M IC值分别为0.062～0.5L g/m l、0.125～0.5L g/m l,对35株临床分离株的MIC分别为0.031～0.5L g/m l、0.031～1.0L g/ml。

结果提示,与甲硝唑相比较,塞克硝唑对这几种厌氧菌的体外抗菌活性相似或略强。

表1 塞克硝唑(SN Z)和甲硝唑(M T Z)对实验细菌的M IC(L g/ml)细菌(株数) SNZ M T Z模式株和参考株(6株)　牙龈卟啉单胞菌ATCC332770.0620.125　牙龈卟啉单胞菌3810.1250.125　牙髓卟啉单胞菌ATCC345060.5　0.125　中间普雷沃菌ATCC256110.5　0.5　　产黑素普雷沃菌ATCC130400.25　0.5　　具核梭杆菌ATCC109530.5　0.5　临床分离株(35)　牙龈卟啉单胞菌(18)0.031～0.50.031～0.25　中间普雷沃菌(5)0.062～0.50.062～1.0　产黑素普雷沃菌(4)0.031～0.250.031～0.5　栖牙普雷沃菌(3)0.062～0.50.062～0.5　具核梭杆菌(5)0.062～0.50.062～0.5质控菌株3　讨论塞克硝唑与甲硝唑同属5-硝基咪唑类药物,其抗菌谱与硝基咪唑类其它抗菌药物没有明显差异。

与甲硝唑相比,塞克硝唑的药动学特性如生物利用度、存在活性代谢物和终末消除半衰期(塞克硝唑t1/2B为17～29h,甲硝唑为7～8h)主要表现量的差异,出现差异的原因是由于氮环上结合于硝基邻近的取代基决定的。

国外塞克硝唑主要用于治疗阿米巴、贾第鞭毛虫、滴虫和细菌性阴道炎,绝大多数都是使用单剂方案[5,6],单剂治疗是塞克硝唑的最大特点,有报道塞克硝唑在牙龈组织内药物浓度与血药浓度大体平行[7],说明该药对牙龈组织有较好的穿透作用,同时该药在牙龈组织的半衰期长达28.8h。

该药口服吸收好,口服和静脉给药差异无显著性[8]口腔临床常见的牙周炎和冠周炎均以厌氧菌感染为主,本实验通过塞克硝唑和甲硝唑对6株模式株和参考株及35株临床分离株的测定表明,塞克硝唑的体外抗厌养菌活性相似或略强于甲硝唑。

鉴于塞克硝唑的血液维持浓度较长,胃肠道不良反应小,耐受性良好,单剂口服方便等特点,塞克硝唑在治疗口腔厌氧菌感染方面有较大的应用前景。

参考文献[1]N unez J T,G omez G.L ow-dose secnidazole in the treat-ment of bacter ial vag inosis[J].I nt J Gy necol Obstet, 2005,(3):281[2]Bhatio S,K ar nad D R,Oak J l.Rando mized double-blindtr ial o f metr onidazole v ersus secnidazo le in am ebic liver abscess[J].I nd ia J Gastroenterol,1998,17(2):53[3]Gillis J C,Wisem an L R.Secnidazo le:a r eview of itsantimicr obial a ct ivity,pha rmaco kinet ic pro per ties and ther apeutic use in the manag ement o f pro tozoa l infect ions and bacter ial vig ino sis[J].Dr ugs,1996,51(4):621[4]A car J,P etitjean O,Dubreuil L.Secnidazole,a new5-nitr o-imidazole[J].A ntibiotiq ues,2005,7(3):177[5]So dein K,Syukran O,Fadilla h A,et par isonbetw een t he efficacy of a single do se of secnidazo le with a fiv e day co urse o f tet racy cline and clio quinol in the treat-ment o f a cute intestinal a mebiasis[J].Phar maceutica, 1985,4(4):251[6]D i P risco M C,Jmenez J C,R odrg uez N,et al.Clinicaltr ial w ith secnidazole in a sing le dose in V enezuelan chil-dr en infected by Giar dia intestinalis[J].I nv es t Clin, 2000,41(3):179[7]T enenbaum H,Cuisinier F J G,L e L ibo ux,et al.Secin-dazole concentra tio ns in plasma and cr evicular fluid after a single or al do se[J].J Clin Periodontol,1993,20(7):505 [8]Lam p K C,Fr eeman C D,K lutman N E,et al.Pharm a-kinetics and pha rmaco dy namics of t he nitr oinidazole antimicr obials[J].Clin Phar maco K inet,1999,36(5):353・448・塞克硝唑对口腔厌氧病原菌体外抗菌活性的测定　于佳辉等。