高级药理学 体外抗菌活性试验

液 体 稀 释 法
1.5 结果判定 明显无细菌生长的试管中药物 的最小浓度为该药对该细菌的 MIC
体 外 抗 菌 活 性 试 验
一、稀释法
(二)固体稀释法 二 固体稀释法
1. 试管固体两倍稀释法
将加热融化的无菌普通琼脂培养 基分装于试管中，每管1mL, 用肉 基分装于试管中，每管 汤将药液对半稀释成一系列稀释 然后取1mL药液放入普通琼 度。然后取 药液放入普通琼 脂培养基中，均匀振摇， 脂培养基中，均匀振摇，放置成 斜面，待琼脂凝固后， 斜面，待琼脂凝固后，将细菌接 种于斜面， 培养18~20h，以 种于斜面，置37 ℃培养 ，
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三、比浊法
2. 步骤 将标准药液稀释成不同稀释度 1:10,1:15,1:20,1:30,1:40。然后于 。 大小相同的试管内加入8.8mL肉 大小相同的试管内加入 肉 汤培养基， 汤培养基，同时接种试验菌液 0.2mL。取上述已稀释好的标准 。 稀释液1mL加入肉汤菌液试管中。 加入肉汤菌液试管中。 稀释液 加入肉汤菌液试管中 此时的稀释倍数为 1:100,1:150,1:200,1:300,1:400
液 体 稀 释 法
1.4 试验方法
取灭菌带塞小试管15支 标号， 取灭菌带塞小试管 支，标号，向 支试管中加入0.9ml营养肉汤，其余 营养肉汤， 第1支试管中加入 支试管中加入 营养肉汤 各管加入0.5ml；然后，向第 支试管内 各管加入 ；然后，向第1支试管内 加入0.1ml药液，混匀后，取出 药液， 加入 药液 混匀后，取出0.5ml加 加 入第2管内 依次类推至13管 管内， 入第 管内，依次类推至 管，混匀后 吸出0.4ml弃之，另取 弃之， 吸出 弃之 另取0.1ml涂于营养琼 涂于营养琼 脂平板上；然后向1~14管内加入 脂平板上；然后向 管内加入0.5ml 管内加入 菌液，混匀盖塞后， ℃培养16~18h， 菌液，混匀盖塞后，37℃培养 ， 观察。相同过程重复三次。 观察。相同过程重复三次。 琼脂平板为无菌检查； 管为培养 附：琼脂平板为无菌检查；14管为培养 物对照（接种同数量的细菌， 物对照（接种同数量的细菌，不加药 ）；15管为培养基对照 不加菌， 管为培养基对照（ 液）； 管为培养基对照（不加菌，不 加药）。 加药）。
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三、比浊法
2. 步骤 将检品液也稀释成1~3种不同浓度， 种不同浓度， 将检品液也稀释成 种不同浓度 加入肉汤菌液培养基中。 加入肉汤菌液培养基中。 将全部试管移至37℃ 将全部试管移至 ℃恒温水浴箱 中约3~4h，待细菌充分生长后取 中约 ， 用光电比色计测定其透光度， 出，用光电比色计测定其透光度， 根据同浓度的读数求出平均值， 根据同浓度的读数求出平均值， 然后绘出标准曲线。 然后绘出标准曲线。 将检品管同样求出平均值， 将检品管同样求出平均值，根据 标准曲线即可求出被检品的效价。 标准曲线即可求出被检品的效价。
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二、扩散法
结果判定 抑菌圈直径均值： 抑菌圈直径均值： ＞20mm为高敏药物 为高敏药物 19mm～15mm为中敏药物 ～ 为中敏药物 15mm～10mm为轻敏药物 ～ 为轻敏药物 为抗药（ ＜10mm为抗药（不敏感） 为抗药 不敏感）
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二、扩散法
(二)杯碟法 二 杯碟法
在已配好的含菌平板上用钢管放 置器均匀分布灭菌不锈钢牛津杯， 置器均匀分布灭菌不锈钢牛津杯， 用无菌胶头滴管往每个牛律杯中 分别加入稀释为50倍和 倍的 倍和100倍的 分别加入稀释为 倍和 1280µg/mL待检药品溶液，注意 待检药品溶液， 待检药品溶液 要做到“满而不溢” 要做到“满而不溢”。盖上陶瓦 盖放入托盘中，小心地移至培养 盖放入托盘中，小心地移至培养 箱，37℃培养 ℃培养24h。用游标卡尺精 。 确测量各个抑菌圈直径（ 确测量各个抑菌圈直径（精确到 0.01mm）。 ）。
无细菌生长的一管为最低抑菌浓度 （MIC）。 ）。
一、稀释法
稀 释 法
(二)固体稀释法 二 固体稀释法 2. 平皿稀释法 取平皿13只 加入不同浓度的药液 取平皿 只,加入不同浓度的药液 各1mL,第1~12平皿各加融化的普 第 平皿各加融化的普 通琼脂培养基9.0mL，第13平皿作 通琼脂培养基 ， 平皿作 为对照不加药，加入10mL培养基， 培养基， 为对照不加药，加入 培养基 均匀摇动使其与药液合一。 均匀摇动使其与药液合一。待琼 脂凝固、表面干燥后接种试验菌。 脂凝固、表面干燥后接种试验菌。 培养24~48h，观察结果，求出 置37 ℃培养 ，观察结果，
MIC。 。
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二、扩散法 (一)纸片法 一 纸片法
用灭菌棉签（弯玻棒） 用灭菌棉签（弯玻棒）将菌液均 匀涂抹于普通琼脂平板。 匀涂抹于普通琼脂平板。待琼脂 表面干燥后， 表面干燥后，用灭菌镊子取各种 药敏纸片按一定间隔均匀贴到琼 脂表面，每个平板放5张药敏纸片 张药敏纸片， 脂表面，每个平板放 张药敏纸片， 37℃培养 ℃培养24h。观察结果，用游标 。观察结果， 卡尺测定抑菌圈直径。 卡尺测定抑菌圈直径。
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稀释法、比浊法、 稀释法、比浊法、扩散法
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一、稀释法 （一）液体稀释法 试管液体二倍稀释法
1.1菌液的制备 菌液的制备 将原菌液稀释， 将原菌液稀释，使之含菌数为 105个/mL。 。
液 体 稀 释 法
1.2 药液的制备 准确称取各药用双蒸水溶 解于10mL容量瓶内定容，使终 容量瓶内定容， 解于 容量瓶内定容 浓度为1280µg/mL，分装，贴 浓度为 ，分装， 密封， ℃保存备用。 签，密封，4℃保存备用。 1.3 培养基的制备 营养肉汤、 营养肉汤、营养琼脂
三、比浊法
1. 原理
细菌生长的浑浊度可以用透光度 表示， 表示，则log透光度与一定范围内 透光度与一定范围内 的抗菌药的剂量呈直线关系， 的抗菌药的剂量呈直线关系，可 以制得标准曲线。 以制得标准曲线。 同样， 同样，被测药物所引起的抑制细 菌生长程度也可以用log透光度表 菌生长程度也可以用 透光度表 示。带入曲线方程可得对应的 MIC。 。