柱层析法对菌株snef8有效成分的初步分离
柱层析的实验方法和技巧
柱层析的实验方法和技巧柱层析分离技术及其实验技巧一、胶柱层析（正、反相柱层析）——根据物质的极性不同进行分离根据固定相和流动相之间的极性不同，硅胶柱层析可以分为：正相柱层析、反相柱层析。
通常把固定相极性大于流动相极性的柱色谱方法称为正相柱层析，常用的流动相为有机溶剂，如石油醚、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇等。
较适宜分离化合物为低级性、中等极性化合物。
而把固定相极性小于流动相极性的柱色谱方法称为反相柱层析，常用的流动相为甲醇、水等极性溶剂。
较适宜分离极性较高的化合物。
二、凝胶层析——根据物质的分子大小进行分离凝胶层析又称为凝胶过滤、分子筛层析等，是以具有网状结构的凝胶颗粒作为固定相，根据物质的分子大小进行分离的一种层析技术。
常用的凝胶是葡聚糖凝胶（Sephadex)，如Sephadex LH-20。
三、柱层析实验操作3. 1层析柱的选择这与样品的处理量、分离难度、所用的基质和分离目的有关。
以基质是硅胶为例，当样品量较多，分离难度较大（相邻组分的△R较小，相差不到0.1）时，需选用较粗大的柱子以填充较多的硅胶。
柱子长，相应的塔板数就高；柱子粗，上样后样品的原点就小（反映在柱子上就是样品层比较薄），这样相对地减小了分离的难度。
试想如果柱子十厘米，而样品就有两厘米，那么分离的难度可想而知，而如果样品层只有0.5厘米，那么各组分就比较容易得到完全分离了。
当然采用粗大的柱子要牺牲比较多的硅胶和溶剂，不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么。
如果所需组分和杂质分的比较开（是指在所需组分Rf在0.2～0.4，杂质相差0.1以上），就可以少用硅胶，用小柱子。
3. 2流动相的选择在柱层析分离中流动相（淋洗剂）的选择尤为关键，直接影响到柱层析的分离效果，如果选择不当常常导致几十毫克样品，用了几百毫升淋洗剂都还没有完全分离，甚至不能分离。
以硅胶柱为例，具体选择哪种流动相以及流动相的极性，多是通过薄层色谱（TLC）来确定。
柱层析的分离原理和分离步骤
柱层析的分离原理和分离步骤：
柱层析是一种广泛应用于化学和生物学领域中的分离技术，其基本原理是利用混合物中各组分物理化学性质的差异，如吸附力、分子形状及大小、分子亲和力、分配系数等，使各组分在固定相和流动相之间进行不同的分配和移动速度，从而达到分离的目的。
在柱层析中，固定相通常是由不溶性基质形成，如硅胶、大孔吸附树脂、聚酰胺等，而流动相则是由溶剂组成。
样品被加到柱子上后，用流动相洗脱，在洗脱过程中，样品中的各组分根据其在固定相和流动相中的分配系数不同，经历多次反复的吸附、解吸、再吸附、再解吸过程，最终实现分离。
柱层析的操作方式主要包括常压分离、减压分离和加压分离，其中，常压分离是最简单的分离模式，适用于大于50-100g的产品，但洗脱时间较长；减压分离可以节省填料的使用量，但由于大量的空气通过填料会使溶剂挥发，且有时易分解的化合物难以得到；加压分离可以加快淋洗剂的流动速度，缩短样品的洗脱时间。
简述柱层析的一般流程。
简述柱层析的一般流程。
柱层析（Column Chromatography）是一种常用的色谱分离技术，广泛应用于有机合成、药物分析和天然产物提取等领域。
它的一般流程包括样品制备、填充柱层析柱、样品进样、柱层析过程、洗脱和收集目标化合物等步骤。
样品制备是柱层析的第一步。
样品的制备通常包括溶解、过滤和浓缩等操作，以获得纯净的目标化合物。
接下来，需要选择合适的柱层析柱。
柱层析柱是由一种固定相填充在柱子中，常用的固定相有硅胶、脱水醇、分子筛等。
根据目标化合物的性质选择合适的固定相，以实现对目标化合物的有效分离。
然后，将样品进样到柱层析柱中。
样品通常以溶液的形式进样，可以通过注射器或注射针将样品均匀地注入柱层析柱中。
为了保证柱层析的有效进行，进样时应控制好进样量，避免过多的样品进入柱层析柱。
柱层析过程是柱层析的核心步骤。
在柱层析过程中，样品中的不同组分会根据它们与固定相的相互作用力的不同而在柱层析柱中发生分离。
相互作用力较强的组分会在柱层析柱中停留时间较长，而相互作用力较弱的组分则会较快地通过柱层析柱。
通过这种分离机制，可以将混合样品中的目标化合物与其他杂质分离开来。
在柱层析过程中，可以通过改变溶剂的组成或流速来控制柱层析的分离效果。
当溶剂的极性或流速改变时，样品中的不同组分与固定相的相互作用力也会发生变化，从而影响柱层析的分离效果。
当目标化合物被分离出来后，需要进行洗脱操作。
洗脱是将目标化合物从柱层析柱中洗脱出来的过程。
洗脱通常使用洗脱剂，根据目标化合物的特性选择合适的洗脱剂。
洗脱剂的选择应使目标化合物溶解度较大，从而能够有效地将目标化合物洗脱出来。
收集目标化合物。
洗脱出来的目标化合物可以通过收集装置进行收集，常用的收集装置有收集瓶或收集管。
收集到的目标化合物可以进行后续的分析或进一步处理。
总的来说，柱层析的一般流程包括样品制备、填充柱层析柱、样品进样、柱层析过程、洗脱和收集目标化合物等步骤。
这种色谱分离技术在化学分析和有机合成中具有重要的应用价值，通过对不同组分间相互作用力的利用，可以实现对复杂样品的有效分离和纯化。
简述柱层析的一般流程
简述柱层析的一般流程
柱层析的一般流程如下：
1. 样品制备：将待测样品进行前处理，包括样品的提取、纯化、浓缩等步骤。
2. 色谱条件设定：根据样品的性质和分析目的，选择合适的柱层析色谱条件，包括色谱柱的种类、流动相的成分与流速等。
3. 样品进样：将经过前处理的样品注入色谱系统中，通常通过自动进样器或手动进样器完成。
4. 柱层析分离：样品在色谱柱中进行分离，样品中的成分根据其在固定相（色谱柱填料）与流动相之间的相互作用力的强弱而分离出来。
5. 检测分析：根据分析目标选择合适的检测器进行检测，常见的检测器包括紫外-可见吸收检测器、荧光检测器、电化学检
测器等。
6. 数据处理：使用专门的色谱分析软件对检测到的信号进行处理和分析，包括峰识别、面积计算、定量分析等。
7. 结果解释：根据数据处理的结果，解释样品中所含的目标物质的种类、含量等信息，可以与标准样品进行比对，确定样品的成分和浓度。
8. 质量控制：柱层析分析需要进行质量控制，包括校准曲线的建立、重复性的检验、空白样品的检测等，以确保分析结果的准确性和可靠性。
需要注意的是，柱层析的具体流程可能会有所差异，根据不同的样品性质和分析目的，可以对流程进行适当的调整和优化。
(完整版)柱层析的操作步骤和注意事项
柱层析技术常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。
我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。
由于柱分的经验成分太多，所以下面我就几年来过柱的体会写些心得，希望能有所帮助。
柱子可以分为：加压，常压，减压。
压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。
所以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的，但是时间也最长，比如天然化合物的分离，一个柱子几个月也是有的。
减压柱能够减少硅胶的使用量，感觉能够节省一半甚至更多，但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发（有时在柱子外面有水汽凝聚），以及有些比较易分解的东西可能得不到，而且还必须同时使用水泵抽气（很大的噪音，而且时间长）。
以前曾经大量的过减压柱，对它有比较深厚的感情，但是自从尝试了加压后，就几乎再也没动过减压的念头了。
加压柱是一种比较好的方法，与常压柱类似，只不过外加压力使淋洗剂走的快些。
压力的提供可以是压缩空气，双连球或者小气泵（给鱼缸供气的就行）。
非凡是在轻易分解的样品的分离中适用。
压力不可过大，不然溶剂走的太快就会减低分离效果。
个人觉得加压柱在普通的有机化合物的分离中是比较适用的。
关于柱子的尺寸，应该是粗长的最好。
柱子长了，相应的塔板数就高。
柱子粗了，上样后样品的原点就小（反映在柱子上就是样品层比较薄），这样相对的减小了分离的难度。
试想假如柱子十厘米，而样品就有二厘米，那么分离的难度可想而知，恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了。
而假如样品层只有0.5厘米，那么各组分就比较轻易得到完全分离了。
当然采用粗大的柱子要牺牲比较多的硅胶和溶剂了，不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么了（有些不环保的说，不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费）。
现在见到的柱子径高比一般在1：5～10，书中写硅胶量是样品量的30～40倍，具体的选择要具体分析。
假如所需组分和杂质分的比较开（是指在所需组分rf在0.2～0.4，杂质相差0.1以上），就可以少用硅胶，用小柱子（例如200毫克的样品，用2cm×20cm 的柱子）；假如相差不到0.1，就要加大柱子，我觉得可以增加柱子的直径，比如用3cm 的，也可以减小淋洗剂的极性等等。
植物组织遗传物质的提取与检测实验报告
植物组织遗传物质的提取与检测实验报告实验目的：了解植物组织遗传物质的提取方法和常用的检测方法。
实验原理：1. 植物组织遗传物质的提取方法：（1）CTAB法：该方法可用于提取植物组织中的DNA，具有简便快捷、价格低廉、纯度高、适用于大量样品等优点。
（2）酚/氯仿法：该方法主要用于提取植物种子和干燥植物材料中的DNA。
（3）柱层析法：该方法可用于DNA的纯化和寡核苷酸的制备。
2. 常用的植物组织遗传物质检测方法：（1）凝胶电泳法：该方法可用于检测DNA和RNA，是目前最常用的分离和检测遗传物质的方法之一。
（2）PCR法：该方法可用于扩增某一片段的DNA，具有灵敏度高、特异性强、适用于少量或低浓度的样品等优点。
（3）Southern blotting法：该方法可用于检测某一特定基因的存在与否，并可以估算基因的拷贝数和分析结构等。
实验材料：PCR仪、琼脂糖凝胶、DNA提取试剂盒、电泳仪、紫外线照相仪、PCR试剂盒等。
实验步骤：1. 提取DNA：（1）取一片新鲜的植物叶片放入研钵中，加入适量的CTAB提取液，进行研磨。
（2）将研磨好的样品转移到离心管中，进行蛋白质酶处理、乙醇沉淀等步骤。
（3）使用紫外线照相仪测定DNA浓度和质量。
2. 准备琼脂糖凝胶：（1）按照琼脂糖凝胶的要求调配好琼脂糖缓冲液。
（2）将琼脂糖缓冲液煮沸，将琼脂糖加入其中，搅拌至溶解。
（3）将混合物冷却至约60℃，倒入凝胶板中，在其表层形成凝胶。
3. 进行电泳分析：（1）将DNA样品通过电泳进行分离。
（2）将分离好的DNA样品转移到凝胶板电泳槽中，通电分离。
（3）运用特殊技术进行荧光探针和显色剂的染色，测定目标位点的大小和数量等信息。
实验结果：通过琼脂糖凝胶电泳分析，可以检测到植物叶片中的DNA条带（大小约为7kb），说明提取到了植物组织中的遗传物质。
实验结论：通过本实验可以了解植物组织遗传物质的提取方法和常用的检测方法，掌握凝胶电泳、PCR扩增等技术的操作流程，此外还应注意实验的安全和环保问题，避免对环境产生负面影响。
有机物分离与纯化的方法柱层析的一些技巧
有机物分离与纯化的方法柱层析的一些技巧柱层析是有机物分离与纯化中常用的一种方法，它适用于各种有机物分离和纯化的需求，具有操作简单、分离效果好、分离范围广等优点。
以下是柱层析的一些技巧和注意事项：1.选择合适的固定相：柱层析的关键是选择合适的固定相。
固定相应根据有机物的性质选择，例如，非极性化合物可选择疏水性固定相，而极性化合物可选择亲水性固定相。
此外，选择固定相时还需考虑其耐酸碱性、耐溶剂性以及稳定性等因素。
2.预处理样品：在进行柱层析之前，需要对样品进行预处理。
通常，样品需要经过一系列的前处理步骤，如提取、结晶、干燥等，以去除杂质和水分，确保柱层析的准确性和精确性。
3.选择合适的洗脱剂：洗脱剂的选择应根据样品的性质和分离要求进行。
通常，洗脱剂应具有良好的溶解度、流动性和洗脱效果。
此外，还应注意洗脱剂对固定相的稳定性和可逆性的影响。
4.控制流量和压力：柱层析时，通过控制流量和压力来控制洗脱速度。
一般情况下，流速应控制在适当的范围内，以避免样品在柱上停留时间过短或过长，同时还应注意防止柱内压力过高导致流动性降低。
5.分馏收集：柱层析过程中，不同组分的洗脱剂和样品溶液需要分馏收集。
对于挥发性较强的组分，可采用低温收集或短时间收集的方法，以减少组分的损失。
6.调整pH值：一些有机物分离和纯化需要在特定pH条件下进行。
在柱层析前，需要对洗脱剂或样品溶液进行调整，以改变pH值，提高分离效果。
7.重复柱层析：柱层析是一个可重复进行的操作，可以根据需要多次进行柱层析。
在重复柱层析过程中，需要逐步提高洗脱剂的极性或采用不同的洗脱剂组合，以实现更好的分离效果。
8.优化条件：在柱层析过程中，需进行条件优化。
通过调整柱层析的参数，如固定相类型、样品负载量、洗脱剂类型和流速等，以达到最佳分离效果。
9.保护柱层析柱：柱层析柱是一种易损耗的设备，应注意保护。
在使用过程中，应避免受到机械碰撞和高温等有害因素的影响，避免使用过量的洗脱剂和样品负载，以延长柱层析柱的使用寿命。
实验九 柱层析讲解
柱层析原理
流动相流过时各组分会以 不同的速率向下移动，吸附弱 的组分以较快的速率向下移动。 随着流动相的移动，在新接触 的固定相表面上又依这种吸附 溶解过程进行新的分配，新鲜 流动相流过已趋平衡的固定相 表面时也重复这一过程，结果 是吸附弱的组分随着流动相移 动在前面，吸附强的组分移动 在后面，吸附特别强的组分甚 至会不随流动相移动，各种化 合物在色谱柱中形成带状分布， 实现混合物的分离。
柱色谱操作流程---洗脱与接收
? 用不同比例的石油醚和乙酸乙酯进行梯度洗 脱（先用28mL的(2.5:1)混合液，然后用1:1 的洗脱液20mL）
? 先收集黄色带（邻硝基苯胺），如果有交叉， 换接受瓶收集交叉组分。
? 再收集浅黄色带（对硝基苯胺），减压除去 溶剂。（旋转蒸发）
柱色谱操作流程--浓缩
? 显色 分离的化合物若有颜色，很容易识别出来各个样
点。但多数情况下化合物没有颜色，要识别样点， 必须使样点显色。通用的显色方法有碘蒸气显色和 紫外线显色。
①碘蒸气显色：将展开的薄层板挥发干展开剂后， 放在盛有碘晶体的封闭容器中，升华产生的碘蒸气 能与有机物分子形成有色的缔合物，完成显色。
②紫外线显色：用掺有荧光剂的固定相材料（如 硅胶 F，氧化铝 F等）制板，展开后在用紫外线照射 展开的干燥薄层板，板上的有机物会吸收紫外线， 在板上出现相应的色点，可以被观察到。
色谱法须在两相系统间进行。一相是固定相， 需支持物，是固体或液体。另一相为 流动相， 是液体或气体。当流动相流经固定相时，被 分离物质在两相间的分配，由平衡状态到失 去平衡到又恢复平衡，即不断经历吸附和解 吸的过程。随着流动相不断向前流动，被分 离物质间出现向前移动的速率差异，由开始 的单一区带逐渐分离出许多区带，这个过程 叫展层。
柱层析技术在中药材有效成分分离纯化中的应用
多糖是 由单糖聚合形成 的天然高分子化合物， 是生物体 内
重 要 的生 物 大 分 子 ， 具 有抗 肿 瘤 、免 疫 调 节 、抗 衰 老 、抗 病 毒 、
物， 需进一步分离与纯化 。 柱层析技术是利用物质的分子形状、 大 小、带 电状态、溶解度 、吸附能力、分配系数 、分子极性及
亲 和 力 等 理 化 性 质 的差 别 ， 使 混 合 物 中 各 组 份 以不 同程 度 分 布
果 。
总之 ， 不同柱层析均 可应用在 多糖 的分 离纯化 中， 有 的研
究将 多种 类 型 柱 层 析 联 合 使 用 ， 以达 到提 高 多糖 纯 度 获 得 单 体
离 子 交 换 柱 层 析 是 利 用 离 子 交 换 剂 对 各 种 离 子 的 离 子 交
换亲和 力不 同， 将 目标 离子 固定在 固定相 中， 通过洗 脱液洗脱
分配 柱层析及等 电聚焦柱层析等 多种类型 。其 中， 吸 附、离子
交 换 、 凝 胶 柱 层 析 是 应 用 最 为 广 泛 的 柱 层 析 技 术 。
吸附柱层 析是利 用吸 附剂对 不 同物 质的吸 附力 不 同而使
各 组 份 分 离 的方 法 。吸 附力 越 大 的物 质 ， 移 动 速 率 越 慢 。 常用
析在 中药材多糖 、生物碱和黄酮 的分 离纯 化中的应用， 为中药
研 究开发提供参考 。 １ 柱 层 析 的分 类 根据 物 质 分 离 机 理 的不 同， 目前 的 柱 层 析 可 分 为 吸 附柱 层
７ １ ． ２ ％ 。王氏等 利用 阴离子交换树脂 Ｄ ３ １ ５ 对茶 多糖进行 了分 离， 在 ｐ Ｈ值为 ６ ． ０ ～７ ． ０ 、温度 ３ ０℃、上样量浓度 ２ ． ５ ｍ ｇ ／ Ｌ 条件下， 通过水和 ０ ． ５ ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ的 Ｎ ａ Ｃ Ｉ溶液洗脱， 能提高茶多糖 的纯度， 并实现初步分离纯化 。 扈氏等 利用凝胶柱层析 技术对沙葱多糖进行纯化 ， 其通
柱层析分离净化的实验方法和经验总结
柱层析分离净化的实验方法和经验总结柱层析技术也称柱色谱技术。
一根柱子里先填充不溶性基质形成固定相，将混合样品加到柱子上后用特别的溶剂洗脱，溶剂组成流动相。
在样品从柱子上洗脱下来的过程中，根据混合物中各组分在固定向和流动相中的分配系数不同经过多次反复分配，将不同组分逐一分离。
硅胶层析法的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而得到分离，一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附，极性较弱的物质不易被硅胶吸附，整个层析过程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸过程。
根据填充基质和样品分配交换原理不同，离子交换层析，凝胶过滤层析和亲和层析是三种分离混合物的经典层析技术。
1、柱层析操作方法的选择目前，柱色谱分离的操作方式，主要包括常压分离、减压分离和加压分离3种模式。
常压分离是最简单的分离模式方便、简单，但是洗脱时间长。
减压分离尽管能节省填料的使用量，但是由于大量的空气通过填料会使溶剂挥发，并且有时在柱子外面会有水汽凝结，以及有些易分解的化合物也难以得到，而且还必须同时使用水泵或真空泵抽气。
加压分离可以加快淋洗剂的流动速度，缩短样品的洗脱时间，是一种比较好的方法，与常压柱类似，只不过外加压力使淋洗液更快洗脱。
压力的提供可以是压缩空气，双连球或者小气泵等。
2、柱子规格的选择市场上有各种规格的柱层析分离柱。
柱子长了，相应的塔板数就高，分离就好。
目前市场上的柱子，其径高比一般在1: 5～10范围，在实际使用时，填料量一般是样品量的30～40倍，具体的选择要根据样品的性质和含量进行具体分析。
如果所需组分和杂质的分离度较大，就可以减少填料量，使用内径相对较小的柱子(如 2 cm × 20 cm的柱子) ；如果Rf相差不到0.1，就要加大柱子，增加填料量，比如用3 cm内径的柱子。
3、装柱柱层析色谱柱的填装主要有湿法和干法两种，湿法省事，一般用淋洗剂溶解样品，也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯等，但溶剂越少越好，不然溶剂就成了淋洗剂了。
天然药物中活性成分的分离与鉴定
天然药物中活性成分的分离与鉴定天然药物一直以来都是人们关注的焦点，因其来源广泛、有效性高而备受推崇。
但天然药物中的活性成分众多，如何准确地进行分离与鉴定成为了一个重要的研究领域。
本文将探讨天然药物中活性成分的分离与鉴定方法，并提出一种综合利用色谱、质谱等技术的有效策略。
一、分离方法分析天然药物中活性成分的第一步是分离各种复杂化合物。
在这一过程中，常用的方法包括薄层色谱（TLC）、柱层析和液相色谱（HPLC）等。
1. 薄层色谱（TLC）薄层色谱是一种简单易行且成本较低的分离方法，可迅速筛选出天然药物中的活性成分。
通过在硅胶薄层上涂抹样品，再按一定条件进行溶剂上升进行分离。
分离后，通过对比样品与标准品的迁移距离，可以初步判断活性成分的存在。
2. 柱层析柱层析是一种常见的分离方法，通过将样品加入填充在柱子中的吸附剂，利用不同成分的吸附和解吸特性来进行分离。
常用的柱层析方法有硅胶柱层析、逆相柱层析等。
柱层析具有分离效果好、样品消耗少等优点，因此被广泛应用于天然药物中活性成分的分离。
3. 液相色谱（HPLC）液相色谱是一种高效的分离技术，通过利用样品在液体流动相和吸附固定相之间的作用，实现对复杂混合物的分离。
相比于传统的色谱方法，液相色谱具有分离效果好、操作简便快捷等优点，因此成为天然药物中活性成分分离的重要手段。
二、鉴定方法分离出的化合物需要进行鉴定，以确定其结构和活性成分。
常用的鉴定方法包括质谱、红外光谱等。
1. 质谱质谱是一种高灵敏度的分析技术，通过将样品中的化合物进行电离，并测量产生的离子的质量/电荷比来进行鉴定。
常用的质谱技术包括质子化电喷雾质谱（ESI-MS）、飞行时间质谱（ToF-MS）等。
质谱能提供化合物的相对分子质量、分子离子峰、碎片峰等信息，并结合数据库比对，可以确定分离化合物的结构。
2. 红外光谱红外光谱是一种通过测量物质对红外辐射的吸收来研究分子结构的方法。
通过将天然药物中的化合物与一定量的光入射样品，通过观察吸收光强的变化来推断化合物中官能团的存在。
柱层析分离的实验方法和技巧
柱层析分离的实验方法和技巧实验方法：1.选择适当的柱：根据待分离样品的特性以及所需分离的目标物质，选择合适的柱，如正相柱、反相柱、离子交换柱等。
2.预处理：将样品中含有的杂质去除或稀释至适当浓度。
可以通过溶剂提取、沉淀、离心等方式进行预处理。
3.柱层析条件的选择：确定柱层析所需的最佳条件，包括流速、柱温、洗脱剂的类型和浓度、前柱洗脱剂的pH、柱洗脱剂的梯度等。
4.样品的制备：将样品溶解或悬浮于适当的溶剂中，调整至适当的浓度，过滤以去除悬浮物或杂质。
5.微量预柱：对于高浓度的样品，可以使用微量预柱进行初步的预分离和富集，减轻柱层析的工作量。
6.样品进样：使用自动进样器或手动进样方式将样品注入柱，控制每次进样的量不宜过多，以确保柱层析分离的效果。
7.流速控制：控制柱层析的流速，避免过快或过慢，以保证分离效果和分离时间。
实验技巧：1.柱层析装置的操作：熟悉柱层析装置的各种操作按钮和调节装置，掌握柱层析装置的使用方法和操作流程。
2.洗脱剂的选取：选择合适的洗脱剂，根据样品的特性和需求选择不同的洗脱剂类型，如乙酸铵溶液、酸性或碱性溶液等。
3.洗脱剂的混合：根据所需分离的目标物质的亲水性或亲油性，合理混合洗脱剂的比例，以提高分离效果。
4.梯度洗脱：根据目标物质的亲水性或亲油性，在洗脱剂中逐渐增加或减少有机溶剂的浓度，以实现目标物质的分离。
5.洗涤：经过洗脱的目标物质可能还会受到柱中残留物质的影响，需要加入适当的洗涤剂，如水、有机溶剂等，进行稀释或清洗。
6.注射顺序：按照样品的亲水性或亲油性从小到大的顺序进行注射，以充分利用柱层析的分区效应。
7.柱层析柱的使用寿命：及时进行柱检查或更换柱，以确保实验结果的准确性和可重现性。
总之，柱层析分离实验的方法和技巧是多方面的，包括实验操作、条件选择、样品制备等方面，只有掌握了这些方法和技巧，才能顺利进行柱层析分离实验，获得准确和可重复的结果。
离子交换柱交换层析法分离氨基酸
离子交换柱层析法分离氨基酸一、实验原理离子交换层析是利用离子交换剂对需要分离的各种离子具有不同的亲和力（静电引力）而达到分离目的的分离技术。
离子交换层析的固定相是离子交换剂，流动相是具有一定pH 和离子强度的电解质溶液。
树脂（惰性支持物）上结合了阳离子或阴离子后，可与阴离子或阳离子结合，改变溶液的离子强度则这种离子结合又解离。
由于不同的氨基酸在不同的pH值和离子强度溶液中的所带电荷各不相同，故对离子交换树脂的亲和力也各不相同。
从而可以在洗脱过程中按先后次序洗出，达到分离的目的。
带电荷量少，与交换剂亲和力小的先被洗脱下来，带电荷量大，与交换剂亲和力大的后被洗脱下来。
本次实验采用的是Amberlite IR-120 阳离子交换树脂作为离子交换剂，分离的样品为Asp和Lys两种氨基酸的混合液。
在一定的pH下，Asp和Lys的带电情况不同，与磺酸集团的亲和力不同，因此被洗脱下来的次序不一样。
将各收集管分别用茚三酮显色后，测定吸光度，从而得到洗脱曲线。
二、实验器材实验仪器：层析柱、恒流泵、试管*30 、吸管、移液枪、烧杯、紫外分光光度计实验试剂：Amberlite IR-120 阳离子交换树脂、柠檬酸缓冲液（pH5.3）、0.5% 茚三酮、0.1%CuSO4 氨基酸样品（0.005mol/L 的Asp 和Lys，用0.02mol/L 的HCl 配制）三、实验操作记录1、树脂的处理干树脂经蒸馏水膨胀，倾去细小颗粒，然后用4 倍体积的2mol/L HCl 及2mol/L NaOH 依次浸洗，每次浸2h,并分别用蒸馏水洗至中性。
再用1mol/L NaOH 浸半小时（转型），用蒸馏水洗至中性。
2、装柱前的准备选择直径1cm长度15~20cm的层析柱，观察柱底端滤膜是否完好，分别用流水和蒸馏水冲洗干净。
将层析柱垂直装在铁架台上，柱进水口和出水口装上橡皮管，关闭柱底端出口，在柱内注入少许（约1cm高）的洗脱液，打开出水口，排净管内空气后关闭出水口。
关于柱层析的实验方法和技巧
关于柱层析的实验方法和技巧柱层析是一种广泛应用于分离、纯化和分析复杂混合物的技术。
其基本原理是根据混合物组分的相互作用力的不同，在柱状填料上发生不同程度的分配与吸附，从而使混合物分离成单个或少量组分。
柱层析实验方法主要包括以下步骤：1.选择柱层析填料：根据所需分离的混合物的特性和目的，选择合适的填料。
常用填料有硅胶、反相填料等。
2.准备样品：将待分离的混合物以适当的溶剂溶解，并过滤除去悬浮物。
3.将填料装入层析柱中：将选择好的填料按照提供的方法装入层析柱，并确保填充完全均匀。
4.平衡填料：用适当的洗脱剂通过填料进行平衡，以除去填料表面的杂质和待分离混合物外的其他杂质。
5.加样分析：在柱层析填料上均匀加样，并注意避免柱尾部的重叠现象，以免影响分离效果。
6.洗脱剂流出：用相应的洗脱剂缓慢流过填料层，将待分离的组分逐渐从填料中洗脱出来。
7.采集分离组分：根据所需分离组分的不同，采用不同的方法收集和提取洗脱液中的分离组分。
8.结果分析：通过检测和分析分离得到的组分，确定柱层析的分离效果，并进一步进行定量分析或纯化操作。
柱层析实验中的技巧有：1.选择合适的填料和洗脱剂：填料的选择应考虑到混合物的性质和目的，洗脱剂的选择应使待分离的组分具有较大的差异性。
2.注意填料装填的均匀性：填料装填均匀可以提高柱层析的分离效果和分辨率，避免填料不均匀造成的漏洗现象。
3.适当控制洗脱剂的流速：流速过快会导致分离不彻底，流速过慢则会延长分析时间。
应根据填料和样品特性调整流速。
4.注意样品加样的均匀性：样品加样均匀可以避免出现分离过早或过晚的现象，影响柱层析的分离效果。
5.经常检查柱的状态和泄漏情况：柱层析过程中，需要时常检查柱的状态，如填料是否松动、泄漏等，及时发现和处理问题。
6.根据分离效果调整实验参数：根据分离效果的实际情况，进行必要的参数调整，如填料种类、洗脱剂浓度、流速等。
柱层析分离操作规程
柱层析分离操作规程柱层析分离（Column Chromatographic Separation）是一种基于差异吸附和分配的分离技术，广泛应用于化学、生物、制药等领域。
柱层析分离操作规程的编制旨在确保操作过程的安全性、有效性和可重复性。
下面是柱层析分离操作规程的一般步骤：1. 实验准备：a. 确保实验室环境整洁、无杂物干扰。
检查仪器设备的运行状态，并进行必要的校准。
b. 准备所需试剂和溶剂，确保其纯度和质量符合要求。
准备充分的样品，并根据需要进行前处理。
c. 清洗柱子和配件，确保无残留样品。
2. 柱层析容器的装填：a. 选择合适的柱子和填料（如硅胶、活性炭、树脂等）。
b. 按照操作流程和填料的特性进行填料，确保填料均匀、紧密。
c. 配置层析缓冲液或溶剂，用于样品的吸附和洗脱。
3. 样品预处理：a. 根据需要，对样品进行预处理，如调整pH值、去除杂质等。
b. 将样品溶解于合适的溶剂中，确保样品溶解度适宜，并滤除悬浮物。
4. 柱层析操作：a. 将样品溶液小心地加入柱子顶部，避免溅出和溶剂浪费。
b. 控制流速和压力，使样品缓慢通过填料。
c. 观察样品的洗脱情况，根据需要适时收集洗脱液。
d. 若需要收集多个洗脱液组分，请采取适当的洗脱步骤和收集方法。
e. 监测洗脱液的浓度变化，根据需要调整洗脱缓冲液的浓度和pH值。
5. 柱层析后处理：a. 对收集的洗脱液进行检测分析，确定目标物质的纯度和得率。
b. 对柱层析装置进行清洗和维护，确保下次操作的质量和效果。
6. 结果分析和记录：a. 将实验结果记录在实验记录本中，包括所用试剂、溶剂、操作步骤、观察等数据。
b. 对实验结果进行分析，包括目标物质的纯度、得率、柱效等。
7. 安全注意事项：a. 柱层析操作涉及到有机溶剂和化学试剂，应穿戴个人防护用品，如手套、安全镜等。
b. 严格遵守实验室安全操作规范，确保实验过程安全无事故发生。
以上是柱层析分离操作规程的一般步骤，实际操作中，根据实验需求和柱层析装置的具体要求，可能会有所不同。
柱层析实验方法范文
柱层析实验方法范文
柱层析实验分为两个基本步骤：样品的吸附和洗脱。
在吸附步骤中，
样品和柱状吸附剂通过物理吸附或化学吸附相互作用，使得样品中的不同
成分以不同的速率被吸附到固相表面上。
在洗脱步骤中，通过改变流动相
的性质，使得被吸附的成分从固相表面上释放出来，以实现分离和纯化的
目的。
1.亲水性柱层析：使用亲水性固相材料（如硅胶、聚乙二醇等）进行
分离。
这种方法常用于分离极性化合物，如氨基酸、多肽和核苷酸等。
流
动相通常为水或含有一定比例有机溶剂的水溶液。
2.疏水性柱层析：使用疏水性固相材料（如疏水性树脂、C18硅胶等）进行分离。
这种方法常用于分离非极性化合物，如脂肪酸、植物提取物和
药物等。
流动相通常是有机溶剂（如甲醇或乙腈）和水的混合物。
3.离子交换柱层析：使用带有离子交换官能团的固相材料（如阴离子
交换剂、阳离子交换剂等）进行分离。
这种方法常用于分离具有不同电荷
的分子，如离子、氨基酸和蛋白质等。
流动相通常是盐溶液或混合盐溶液。
在柱层析实验中，还需要考虑以下几个关键因素：
1.选择合适的固相材料：根据需要分离的样品性质选择合适的固相材料，以保证分离效果和分离速度。
2.流动相的选择：根据样品的溶解性和分离目标，合理选择流动相的
成分和比例，并控制流动相的pH值、离子强度和溶剂极性等参数。
3.样品预处理：对于复杂的样品，可能需要一系列预处理步骤，如溶解、过滤、浓缩和纯化等，以提高分离效果。
4.洗脱策略的优化：选择合适的洗脱条件，如改变流动相的组成、温度和流速等参数，以实现目标分离并提高纯化度。
柱层析步骤——精选推荐
柱层析步骤柱层析分离步骤1.取样拿到样品后⽤⽑细管蘸取少量的样品放⼊离⼼管中，加⼊相应的溶剂将样品溶解，标号后作为对照。
2.跑板将取出的样品与要分离的样品点在同⼀块硅胶板上进⾏跑板，确定第⼏个点是将要分离出来的样品。
3.装柱将少量的棉花（棉花太少会露出硅胶，太多过滤的较慢）塞⼊柱⼦低端防治硅胶露出，配制硅胶溶剂时浓度应适当（浓度过⼤易造成⼲柱，溶度过⼩会⼤量浪费溶剂），将硅胶装⼊柱⼦直径的15—20倍⾼即可（柱⼦过⾼浪费时间且没有必要，柱⼦过低会造成物质没有分离开就应经被洗下）。
倒⼊⼀定量的硅胶之后将硅胶压实，然后将溶液压⾄和硅胶⾯向近处，重复加⼊硅胶到达预定的⾼度，然后加⼊⼀定量的⽆⽔硫酸钠（作⽤是防治在加样时将硅胶⾯冲的变形），然后⽤⼿稍微弹动柱⼦将⽆⽔硫酸钠弹平，在溶剂将柱内壁的硅胶及⽆⽔硫酸钠洗净。
4.加样将样品⽤溶剂溶解后加⼊柱内（加⼊溶液时从中间像外圈旋转滴加，不要将柱⾯冲出坑），并⽤溶剂反复洗瓶⼦3遍左右（洗瓶⼦时将溶剂沿磨砂⼝加但不能碰到瓶内壁，否则会污染试剂），将洗后的液体转移⾄柱⼦内。
5.过柱先⽤滴管沿柱内壁加⼊溶液，溶液到达⼀定⾼度后再将配制的溶液倒⼊到柱⼦上⾯的球型漏⽃内，加压，先⽤锥形瓶接取前⾯柱内的溶剂，然后当溶液到达⼀定的⾼度时开始⽤试管接，然后不断的检验试管中是否有样品洗出，当从有样品洗出到没有时，第⼀个样品就被完全洗出，跳跃的点⼀定数量的点，然后进⾏跑板，确定没有⾃⼰要分离的样品后就可以倒掉，继续洗柱⼦。
换取极性稍⼤的溶剂，分离到第⼆个样品后同第⼀个做同样的处理，直⾄得到⾃⼰要的样品。
6.旋⼲将的的样品转移⾄圆底瓶中旋⼲，在将样品瓶安装好后，先打开冷凝系统和加热系统，然后打开旋转和抽⽓，缓慢关闭活塞，此时不停的观察是否有⽓泡，若有⽓泡应放⼊⼀定⽓体，然后缓慢关闭直⾄没有⽓泡，旋⼲后⽤油泵抽⽓（油泵的真空度⽐选转蒸发仪的真空度更⼤，能抽的更⼲）然后放⼊称量过质量的⼩瓶中，封⼝后放⼊冰箱内保存。
柱层析实验操作规程及流程
一．实验目的1．了解柱层析的基本原理。
2．掌握柱层析的操作技术。
二．实验原理层析法是一种物理分离方法。
柱层析法是层析方法中的一个类型，分为吸附柱层析法和分配柱层析法。
本实验仅介绍吸附柱层析法。
吸附柱层析法是分离、纯化和鉴定有机物的重要方法。
它是根据混合物中各组分的分子结构和性质（极性）来选择合适的吸附剂和洗脱剂，从而利用吸附剂对各组分吸附能力的不同及各组分在洗脱剂中的溶解性能不同达到分离目的。
吸附柱层析法通常是在玻璃层析柱中装入表面积很大、经过活化的多孔性或粉状固体吸附剂（常用的吸附剂有氧化铝、硅胶等）。
当混合物溶液流过吸附柱时，各组分同时被吸附在柱的上端，然后从柱顶不断加入溶剂（洗脱剂）洗脱。
由于不同化合物吸附能力不同，从而随着溶剂下移的速度不同，于是混合物中各组分按吸附剂对它们所吸附的强弱顺序在柱中自上而下形成了若干色带，如图1所示。
在洗脱过程中，柱中连续不断地发生吸附和溶解的交替现象。
被吸附的组分被溶解吸出来，随着溶剂向下移动，又遇到新的吸附剂颗粒，把组分从溶液中吸附出来，而继续流下的新溶剂又使组分溶解而向下移动，这样经过适当时间移动后，各种组分就可以完全分开，继续用溶剂洗脱，吸附能力最弱的组分随溶剂首先流出，再继续加溶剂直至各组分依次全部由柱中洗出为止，分别收集各组分。
三．材料1．仪器 层析柱，烧杯，铁架台，长玻棒，小量筒，脱脂棉。
2．药品 硅胶 ，丙酮 ，石油醚。
3. 材料：菠菜叶。
四．方法1．装柱 取一支洁净干燥的层析柱玻管，自柱口塞入少许脱脂棉并用长玻棒推至柱底压平（塞时不宜太紧）。
然后用漏斗从柱口小心装入约5g 硅胶（100~160目）（四分之三高度，干法装柱），边装边用手指敲打层析柱，使填装紧密均匀。
再在柱顶加入一薄层脱脂棉花（约0.5cm 厚）。
将此层析柱固定在铁架台上。
2．加样 称取研磨研细的菠菜叶2.0~3.0g 于25mL 烧杯中，量取10mL 石油醚：丙酮=1:1（体积比）的混合液溶解浸泡，用封口薄膜封住杯口，浸泡10min,倒出浸出液静置分层，用刻度胶头滴管吸取1.0mL 上样分析，注意上样应沿管壁。
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已有研究 表 明 ， 松 青 霉 菌株 ｓ ｅ８菌液 对 嗜 ｎｆ
南 方根 结线 虫具有 显著 的毒 杀作 用 。现利 用硅胶 柱 对杀 线虫 真菌 菌株 ｓ ｅ８活性 物 质进 行 了初 步 ｎｆ 的分 离 ， 为进 一 步 的分 离纯 化打 下基 础 ， 新农 药 为
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１ 材 料与方法
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的开 发及毒 理学 研究 提供 依据 。
体 ， 用旋 转 蒸 发 仪 减 压 浓 缩 至 １ 再 ０倍 ， 于 ４ 置 ℃ 冰箱 中预 冷 １ ２ｈ后 ， 将其 与 乙醇 以体 积 比 １ ５混 ： 合 ， 于 一２ ℃ 冰 箱 中 ２ ， 将 上 清 液 加 压 蒸 置 Ｏ ４ｈ 再
胶 柱 ， 量 制备 富 集 粗提 液 ， 其 作 为 生物 农 药应 用 于农 业生 产 ， 防 治根 结 线 虫 病效 果较 好 。 大 将 其 关 键 词 ：ｎ ｆ 菌 ； ｓ ｅ８真 南方 根 结 线 虫 ； 线 虫活 性 ； 杀 生物 测 定 ； 胶 柱 层析 法 硅 中 图分 类 号 ： ４ ２ ￥ ３ 文献标识码 ： Ａ 文 章 编 号 ： ０ ２２ ６ （ ０ １ ０ — ０ ４０ １ ０ ～ ７ ７ ２ １ ） ４０ ６ － ３
根 结线虫 是 一 类 重要 的植 物 寄 生 线虫 ， 以 可 给农 业 生 产 造 成 严 重 的损 失
１ ２ １ 菌液 的制备 以优 化 的查 氏培养 基 （ 萄 ． ． 葡 糖 ４ 、 氯化 铵 ０ ２ 、 酸氢 二钾 ０ ０ ５ 、 ．５ 磷 ． ７ 氯
纯 （ 津市科 密 欧化学 试 剂有 限公 司生产 ）２０ 天 ；０
根 取 出并洗去 泥 土 ， 镊子 挑取 卵 囊 置 于 培养 皿 用 中 ， ０ ５ 的次氯 酸 钠 处 理 ３ｍｉ ， 用 无 菌 水 用 ． ｎ再
冲洗 ３次 ， 于 ２ ℃培养箱 中进 行孵 化 ， 置 ５ ３ｄ左右 就会 孵 出 大量 的 Ｊ ， ２ 吸到 灭 菌 的三 角 瓶 中 ， 于 置 ４ ℃冰箱 中保 存 。 １ ２ ３ 硅 胶 预 处 理 取 硅 胶 用 无 离 子 水 浸 泡 ．． ６ｈ 倾 去细小 颗 粒 ， 氏漏 斗 抽 干 ； ６ ｍｏ ・ 。 ， 布 用 ｌＬ ＨＣ 浸 泡 １ ， ｌ ２ ｈ 去掉 硅 胶 中酸 性 物 质 ， 无 离 子 用 水 洗 至 中 性 ， 氏 漏 斗 抽 干 ； 无 水 乙 醇 浸 泡 布 用
３ ０目的硅胶 （ ０ 上海 五 四化 学试 剂 厂 生产 ） 。主要 仪器 有 ： ｌ— 超纯 水机 、 Ｍｉｉ ｌＱ 层析 柱 （ 阳化 玻仪 器 沈
黑 龙 江 农 业 科 学 ２ １ （ ）６ ￣ ６ ０ １ ４ ：４ ６
Ｈｅｌｎ ｊ ｎ ｒｃ ｌｕ ａ ｃｅ ｃｓ ｉ ｇｉ ｇ Ａｇ ｉｕｔ ｒ ｌ ｉｎ ｅ ｏ ａ Ｓ
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谭可 菲 ， － 段玉 玺 朱 晓 峰 陈 井生。 罗 宝君 赵 秀梅 王 连霞 － ， ， ， ， ， （． １ 黑龙 江省农 业科 学院 齐 齐哈 尔分 院 ， 黑龙 江 齐齐哈 尔 １ １ ０ ；． 阳农业 大 学 植 物 保 护 ６ ０６ ２ 沈 学院 ， 宁 沈 阳 １ ０ ６ ；． 辽 １ １ １ ３ 黑龙 江省农 业科 学院 大庆 分 院 ， 黑龙 江 大庆 １ ３ １ ） ６ ３ ６
摘 要 ： 用硅 胶 柱层 析 的 方 法 ， ｓ ｅ 采 对 ｎｆ ８菌株 中 的 杀线 虫活 性 物 质 进 行 了初 步 的 分 离 ， 物 法 测 定 各 组 份 的 杀 生 线 虫 活性 ， 减压 浓 缩 有 活性 的 组份 制备 粗 提 液 。 结 果表 明 ： 液 中的 杀 线 虫 活 性 物 质 主 要 集 中于 第 ８ 第 １ 菌 ～ ２ 号 管 中 ， 杀 线 虫 活性 接 近 于 ｉ０ 。此 法不 但 可 以除 去 部 分 杂 质 ， 高粗 提 液 的 纯 度 ， 可 以应 用 制备 型 硅 其 ０ 提 还