心房纤颤模型犬心房组织基质金属蛋白酶9及组织抑制因子1与纤维化的关系
心房颤动与心房纤维化机制的研究
心力 衰竭 （ ＨＦ 的情 况 下 ， 纯 的 心房 间 质纤 维 化 Ｃ ） 单
即可诱 导 ＡＦ的发 生 。同时 ， 该研 究也 证 明 了 ， 房 心
达存 在 时间和 心脏 部位 差 异 。ＴＧＦ Ｊ ｍＲ — ＮＡ 及 其 ３ 蛋 白表达 在心 肌梗 死 后 １周 时 升 高最 明显 ， 主要 表
达在 梗死 灶 的边缘 区域 及 瘢 痕形 成 处 ； 反 ， ＴＧ 相 Ｃ Ｆ
等ｌ １ 的临床 研 究 发 现 ， Ｅ抑 制 能 够 降 低 孤 立 性 ＡＣ ＡＦ患者 的心 房纤 维 化 水 平 ， 哚普 利 能使 心 肌 梗 群 死伴 左 室 功 能 障 碍 患 者 ＡＦ 发 病 率 减 少 达 ５ 。 ５ 这些 临 床数据 表 明 ， Ｅ抑 制 剂对 延缓 心 房 纤维 化 ＡＣ 和 ＡＦ进 展都 有一 定 的作用 。
活化 Ｅ Ｋ１ Ｅ ２的 ｍＲ Ｒ ／ ＲＫ ＮＡ和 蛋 白质 表 达 显著 增
加 。Ｅ ｒ ｃ ｈ ｌ ｈ等｜ 在 长 期 心 室 快 速 起 搏 诱 发 ＣＨＦ ｉ 犬 心房 肌 Ａｎ Ⅱ含量 较对 照组 犬显 著升 高 ， 导致 ｇ 是
ＣＨＦ犬 心房 间质 纤维 化 和 Ａ Ｆ发 生 的主 要 原 因 ， 而
【 摘要１ 心房颤动 （ Ｆ 是 临床 上 常见 的 心律 失 常 ，５岁 以上 的老 年人 将 近 ５ 患有 Ａ ） ６ ＡＦ 心房 纤维化为 Ａ ， Ｆ的发 生和维持 提供 病理 基础 。研 究显 示 ， 心房 间质 纤 维化 随 着年龄
增 长而增加 ， Ａ 在 Ｆ患者 、 衰老 的动物 模 型 以及 充血 性 心力 衰竭 （ ＨＦ 患者 中， Ｃ ） 同样观 察到
tgfβ1诱导细胞纤维化原理
tgfβ1诱导细胞纤维化原理TGFβ1是一种可溶性的胞外基质蛋白质，它是一种调节细胞增殖、分化和存活的重要因子。
在一系列疾病的发生和发展过程中，TGFβ1因其促进细胞增殖、纤维素合成、氨基酸蛋白酶抑制和细胞外基质（ECM）的重构而扮演着重要的角色，其中包括肝纤维化、肾小球肾炎、心血管疾病和结缔组织疾病等。
TGFβ1通过与其上游的细胞膜受体结合，激活其下游信号转导途径，进而调节基因表达及细胞功能。
信号途径通过TGFβ受体I和受体II的配对作用及某些三磷酸腺苷（ATP）结合酶的介导而被激活。
TGFβ特异性结合到受体II，然后激活受体I，从而促进Smad蛋白激酶的磷酸化，并激活其他的信号通路，如蛋白激酶A、钙离子通路、线粒体和核因子κB（NF-κB）等途径。
这些途径介导了TGFβ1对细胞的增殖、转化、迁移、凋亡、细胞外基质合成和纤维化等过程的调节。
在纤维化过程中，TGFβ1诱导了细胞外基质的合成和分泌。
这些细胞外基质主要是胶原和非胶原物质，其中包括纤维连接蛋白、透明质酸、弹性蛋白、大分子基质蛋白和糖蛋白等。
TGFβ1通过诱导基因转录和促进蛋白质合成来刺激细胞外基质合成。
TGFβ1还能够抑制氨基酸蛋白酶的表达和活性，从而导致基质蛋白的蓄积和沉积。
TGFβ1还能影响细胞黏附-去黏附分子，从而影响细胞-ECM相互作用的稳定性和机械特性。
在TGFβ1诱导的纤维化过程中，细胞的表型也发生了变化。
普遍认为，这些变化包括增殖、转化、巨噬细胞-纤维细胞转化以及细胞形态的改变。
增殖和转化既可以由不同细胞系的增殖，也可以由巨噬细胞-纤维母细胞的转化来引起，这些细胞具有合成和分泌胶原、纤维素和弹性蛋白的能力。
负责信号转导的Smad蛋白，特别是Smad2/3蛋白，也参与了TGFβ诱导的细胞纤维化过程。
TGFβ1是一个在细胞增殖、分化和存活中起重要作用的因子。
在纤维化过程中，TGFβ1通过诱导基因转录、P53信号熵途径的激活以及转换生长因子β1调节亚基家族中Smad蛋白的激活等途径，调控了细胞外基质合成和细胞表型，促进纤维素、胶原和弹性蛋白等物质的沉积和积累，从而引起组织或器官的纤维化。
糖尿病心肌病心肌纤维化病理变化的研究
糖尿病心肌病心肌纤维化病理变化的研究【摘要】目的研究糖尿病大鼠不同病程心肌纤维化及其相关病理的变化。
方法①制造糖尿病大鼠心肌模型随机分组；②氯胺T法测定羟脯氨酸含量，代表心肌胶原总含量。
心肌免疫组织化学染色测定心肌胶原蛋白(Collagen I、Collagen III)和心肌型α肌动蛋白(α-actin)及转化生长因子β1平均积分光密度；③心肌病理改变的光镜和透射电镜观察。
结果糖尿病病程6个月组心肌胶原总含量明显高于病程3个月以内组(P＜0．01)。
病程3个月之后Collagen I表达伴随TGF-β1的表达开始较健康鼠明显增加(P＜0．01)。
α-actin 蛋白表达较健康鼠明显减少(P＜0．01)。
病程3个月后α-actin 蛋白表达明显减少，有糖原沉积现象。
结论Collagen I呈现持续性增加是糖尿病鼠心肌纤维化的主要原因。
TGF-β1参与了心肌纤维化发生的早期过程。
糖原沉积和心肌型actin表达减少是糖尿病心肌病病理基础。
【关键词】糖尿病心肌病变；免疫组织化学；透射电镜；胶原蛋白；心肌型α肌动蛋白转化生长因子β1细胞学病变和心肌细胞间质纤维沉积及纤维化是临床上引起心肌舒张功能受损及糖尿病心肌病的一种重要因素。
间质性胶原基质围绕在心肌细胞的周围，以支持心肌细胞的正常结构及冠脉的微循环结构与功能的完整性。
除此之外，间质性胶原还决定着心室舒张功能及心室体积的大小，协调由心肌细胞产生的收缩力向心室腔中的传导[1]。
因此，心脏中的间质性胶原基质蛋白成分的降解或胶原成分过度的产生，都将破坏心肌的力学性质、心室的结构与功能。
研究资料表明[2]，心肌病变时心肌细胞骨架蛋白发生了异常表达。
但糖尿病心肌病细胞骨架蛋白病理性表达尚有不同的观点。
1 材料和方法1．1 动物体质量250~300 g大鼠36只，其中18只健康大鼠，18只为糖尿病大鼠。
随机分为6组：糖尿病大鼠1个月组(DM 1)、3个月组(DM 3)、6个月组(DM 6)和健康大鼠1个月组(C 1)、3个月组(C 3)、6个月组(C 6)。
利多卡因通过抑制NETs改善阿霉素引起的心脏毒性
㊃论 著㊃D O I :10.3969/j.i s s n .1672-9455.2024.09.011利多卡因通过抑制N E T s改善阿霉素引起的心脏毒性*陈 铃1,孟 文1,朱 霞2,刘文涛3,何学明4ә1.蚌埠医科大学附属连云港市东方医院老年医学科,江苏连云港222042;2.江苏省连云港市东方医院转化医学中心实验室,江苏连云港222042;3.南京医科大学药理学实验室,江苏南京211100;4.江苏省连云港市东方医院转化医学中心,江苏连云港222042摘 要:目的 通过动物实验验证利多卡因抑制中性粒细胞胞外诱捕网(N E T s)减轻阿霉素引起的心脏毒性㊂方法 将30只C 57B L /6小鼠随机分为对照组㊁阿霉素组(D O X 组)和利多卡因+阿霉素组(L I D O+D O X 组),每组10只㊂对照组单次腹腔注射生理盐水1m L /100g ;D O X 组单次腹腔注射阿霉素15m g /k g;L I D O+D O X 组尾静脉注射利多卡因6m g /k g ,30m i n 后腹腔注射阿霉素15m g /k g ㊂于第10天,取小鼠血清检测各组小鼠磷酸肌酸激酶(C K )㊁磷酸肌酸激酶同工酶(C K -M B )水平;采用酶联免疫吸附试验(E L I S A )检测各组小鼠血浆N E T s 标志物游离D N A (c f -D N A )㊁瓜氨酸组蛋白3(C i t H 3)㊁髓过氧化物酶-D N A (M P O -D N A )的水平;采用免疫荧光法检测各组小鼠心脏组织N E T s 相关标记物中C i t H 3㊁髓过氧化物酶(M P O )的表达量㊂结果 D O X 组小鼠血清C K ㊁C K -M B 水平明显高于对照组和L I D O+D O X 组小鼠(P <0.05)㊂E L I S A 检测结果显示,D O X 组与L I D O+D O X 组小鼠血浆M P O -D N A ㊁C i t H 3和c f -D N A 水平明显高于对照组(P <0.05),但L I D O+D O X 组小鼠血浆M P O -D N A ㊁C i t H 3和c f -D N A 水平明显低于D O X 组(P <0.05)㊂免疫荧光法检测结果发现,D O X 组小鼠心肌组织中M P O 和C i t H 3表达量明显高于对照组和L I D O+D O X 组(P <0.05)㊂结论 利多卡因可能是通过抑制N E T s 的表达来缓解阿霉素引起的心脏毒性㊂关键词:利多卡因; 阿霉素; 心脏毒性; 中性粒细胞胞外诱捕网中图法分类号:R 542文献标志码:A文章编号:1672-9455(2024)09-1241-05L i d o c a i n e i m p r o v e s d o x o r u b i c i n -i n d u c e d c a r d i o t o x i c i t y b y i n h i b i t i n g NE T s *C H E N L i n g 1,M E N G W e n 1,Z HU X i a 2,L I U W e n t a o 3,H E X u e m i n g4ә1.D e p a r t m e n t o f G e r i a t r i c s ,L i a n y u n g a n g O r i e n t a l H o s p i t a l A f f i l i a t e d t o B e n g b u M e d i c a l U n i v e r s i t y ,L i a n y u n g a n g ,J i a n g s u 222042,C h i n a ;2.L a b o r a t o r y o f T r a n s l a t i o n a l M e d i c i n e C e n t e r ,L i a n y u n g a n g O r i e n t a l H o s p i t a l ,L i a n y u n g a n g ,J i a n g s u 222042,C h i n a ;3.L a b o r a t o r y o f P h a r m a c o l o g y ,N a n j i n g M e d i c a l U n i v e r s i t y ,J i a n g s u ,N a n j i n g ,J i a n gs u 211100,C h i n a ;4.T r a n s l a t i o n a l M e d i c i n e C e n t e r ,L i a n y u n g a n g O r i e n t a l H o s p i t a l ,L i a n y u n g a n g ,J i a n gs u 222042,C h i n a A b s t r a c t :O b je c t i v e T o v e r if y t h a t l i d o c a i n e (L I D O )i n h i b i t s n e u t r o p h i l e x t r a c e l l u l a r t r a p s (N E T s )a n d a l l e v i a t e s d o x o r u b i c i n (D O X )-i n d u c e d c a r d i o t o x i c i t y b y a n i m a l e x pe r i m e n t s .M e t h o d s A t o t a l of 30C 57B L /6m i c e w e r e r a n d o m l y d i v i d e d i n t o c o n t r o lg r o u p ,d o x o r u b i c i n g r o u p (D O X g r o u p)a n d l i d o c a i n e +d o x o r u b i c i n g r o u p (L I D O+D O X g r o u p ),w i t h 10m i c e i n e a c h g r o u p .T h e c o n t r o l g r o u p w a s w i t h s i n g l e i n t r a pe r i t o n e a l i n -j e c t i o n of n o r m a l s a l i n e 1m L /100g ,th e D O X g r o u p w a s wi t h s i n g l e i n t r a p e r i t o n e a l i nj e c t i o n o f D O X 15m g/k g ,L I D O+D O X g r o u p w a s w i t h t a i l v e i n i n j e c t i o n o f L I D O 6m g /k g a n d i n t r a p e r i t o n e a l i n je c t i o n of D O X 15mg /k g a f t e r 30m i n .Th e e x p r e s si o n l e v e l s o f s e r u m C K a n d C K -M B w e r e d e t e c t e d b y o n t h e 10t h d a y.E n -z y m e l i n k e d i mm u n o s o r b e n t a s s a y (E L I S A )w a s a d o pt e d t o d e t e c t t h e l e v e l s o f f r e e D N A (c f -D N A ),c i t r u l l i n e H i s t o n e 3(C i t H 3),m y e l o p e r o x i d a s e -D N A (M P O -D N A ).I mm u n o f l u o r e s c e n c e w a s u e s e d t o d e t e c t t h e e x pr e s -s i o n o f C i t H 3a n d m y e l o pe r o x i d a s e (M P O )i n N E T s -r e l a t e d m a r k e r s .R e s u l t s T h e s e r u m l e v e l s of C K a n d C K -M B i n t h e D O Xg r o u p w e r e s i g n i f i c a n t l yhi g h e r t h a n t h o s e i n t h e c o n t r o l g r o u p an d t h e L I D O+D O X g r o u p (P <0.05).T h e r e s u l t s o f t h e E L I S A a s s a y sh o w e d t h a t t h e l e v e l s o f M P O -D N A ,C i t H 3,a n d c f -D N A i n t h e D O X g r o u p a n d t h e L I D O+D O X g r o u p w e r e s i g n i f i c a n t l y h i g h e r t h a n t h o s e i n t h e c o n t r o l g r o u p (P <0.05),b u t t h e l e v e l s o f M P O -D N A ,C i t H 3a n d c f -D N A o f m i c e i n t h e L I D O+D O X g r o u p w e r e s i g n i f i c a n t l yl o w e r t h a n t h o s e i n t h e D O X g r o u p (P <0.05).I mm u n o f l u o r e s c e n c e a s s a y r e v e a l e d t h a t t h e e x pr e s s i o n s o f ㊃1421㊃检验医学与临床2024年5月第21卷第9期 L a b M e d C l i n ,M a y 2024,V o l .21,N o .9*基金项目:江苏省连云港市科技局重点研发计划项目(社会发展)(S F 2214);江苏省连云港市科学技术协会优选课题(L k x yx 2328)㊂ 作者简介:陈铃,女,硕士研究生,主要从事化疗性心脏病防治策略方向的研究㊂ ә通信作者,E -m a i l :152********@139.c o m ㊂M P O a n d C i t H3i n t h e m y o c a r d i a l t i s s u e s o f m i c e i n t h e D O X g r o u p w e r e s i g n i f i c a n t l y h i g h e r t h a n t h o s e i n t h e c o n t r o l g r o u p a n d t h e L I D O+D O X g r o u p(P<0.05).C o n c l u s i o n L i d o c a i n e m a y a l l e v i a t e a d r i a m y c i n-i n-d u c e d c a r d i o t o x i c i t y b y i n h i b i t i n g t h e e x p r e s s i o n o f N E T s.K e y w o r d s:l i d o c a i n e;d o x o r u b i c i n; N E T s;c a r d i o t o x i c i t y;n e u t r o p h i l e x t r a c e l l u l a r t r a p癌症一直是困扰人们的一大难题,其中由化疗药物引起的心脏毒性是癌症患者死亡的重要原因之一,病死率仅次于复发性恶性肿瘤[1]㊂所有化疗药物包括靶向药物都有潜在的心脏毒性,表现为亚临床左室功能障碍㊁充血性心力衰竭㊁心肌缺血甚至心脏猝死等㊂在众多化疗药物中,蒽环类是目前应用最广泛的一类化疗药物,其代表性药物阿霉素的抗癌作用强,化疗指数高,临床上用于治疗各种实体瘤及血液系统肿瘤,但因其心脏毒性严重限制了临床应用[2]㊂因此,寻找阿霉素化疗性心脏病新的治疗方案极其迫切㊂中性粒细胞胞外诱捕网(N E T s)是中性粒细胞的一种不同于凋亡和坏死的新型死亡方式,也是一种新型的防御模式㊂N E T s是从中性粒细胞排出的网状复合物,由游离脱氧核糖核酸(D N A)㊁组蛋白和中性粒细胞颗粒蛋白组成㊂中性粒细胞通过排出嵌入瓜氨酸组蛋白3(C i t H3)㊁髓过氧化物酶D N A(M P O-D N A)和其他细胞内分子的细胞外染色质来产生N E T s㊂N E T s成分通常起抗菌作用,但过量的N E T s 是有害的,并可能导致炎症和组织损伤[3]㊂N E T s大量分泌,引起游离D N A(c f-D N A)和中性粒细胞弹性蛋白酶(N E)同时释放,细胞c f-D N A和组蛋白促进促炎性细胞因子释放,导致严重的全身炎症反应[4]㊂利多卡因属于细胞钠通道抑制剂,可用于局部麻醉及抗快速性心律失常㊂有研究发现利多卡因还具有抗肿瘤的作用[5]㊂临床研究发现采用利多卡因麻醉的患者血液中N E T s水平降低,提示利多卡因可能具有降低N E T s生成的功能[6]㊂因此提出假说 利多卡因可能通过抑制N E T s缓解阿霉素引起的心脏毒性 ㊂本研究旨在探究利多卡因对阿霉素诱导的心脏毒性的保护作用机制,为临床有效预防化疗性心脏病提供新的思路㊂现报道如下㊂1材料与方法1.1实验动物30只S P F级C57B L/6小鼠购于河南斯克贝斯生物有限科技股份有限公司,体质量16~ 20g,6周龄,雌性,小鼠可以自由获取食物和水,环境温度21~25ħ,相对适度50%~60%,每笼5~6只,笼子底部有柔软的垫层㊂实验中小鼠饲养及取材均符合相关规定㊂1.2主要试剂和仪器盐酸多柔比星(G L P B i o,G C16994)㊁利多卡因粉剂(G L P B i o,G C17608);重组A n t i-H i s t o n e H3抗体[R M1001](A b c a m, a b281584);髓过氧化物酶(M P O)抗体(武汉三鹰,81610-1-R R);S y n e r g y2多功能酶标仪(美国B i o T e k 公司);C e n t r i f u g e5810R多功能大容量高速离心机(美国E p p e n d o r f公司);低速自动平衡离心机(美国E p p e n d o r f公司);C i t H3酶联免疫吸附试验(E L I S A)试剂盒(MM-13757H1)㊁M P O-D N A复合物E L I S A 试剂盒(MM-2467H1)㊂1.3方法1.3.1小鼠心脏毒性模型的建立与分组30只小鼠随机分为对照组㊁阿霉素组(D O X组)和利多卡因+阿霉素组(L I D O+D O X组),每组10只㊂对照组:给予小鼠腹腔注射生理盐水1m L/100g;D O X组:予以20m g/k g单次腹腔注射阿霉素制备急性心脏毒性模型,阿霉素给药剂量参考文献[7];L I D O+D O X组:予以小鼠尾静脉注射利多卡因6m g/k g,间隔30m i n 后腹腔注射阿霉素20m g/k g㊂然后每24h尾静脉注射一次利多卡因,连续注射10d㊂在第10天,用10%水合氯醛麻醉麻醉处死各组小鼠,手术剥离小鼠心脏组织,用福尔马林固定液保存㊂眼眶取血留存待测㊂1.3.2临床标本收集与处理收集连云港市东方医院10例未接受过阿霉素类化疗药物患者(未接受组)和10例接受过阿霉素类化疗药物患者(接受组)的外周血标本,将外周血标本离心(1000r/m i n,15m i n),分离血清,置于-80ħ条件下保存,用于后续研究㊂1.3.3c f D N A㊁C i t H3㊁M P O-D N A的检测采集各组小鼠血浆标本,置于有肝素抗凝剂的试管内,3000 r/m i n离心5m i n,分离血浆,置于-80ħ条件下保存待测;使用E L I S A检测血浆中c f-D N A㊁C i t H3㊁M P O-D N A水平㊂所有程序均严格按照E L I S A试剂盒说明书进行操作,显色后在酶标仪450n m波长下测定吸光度,通过标准曲线计算样品M P O-D N A㊁C i t H3㊁c f-D N A水平㊂使用人专用E L I S A试剂盒检测患者血清M P O-D N A㊁C i t H3㊁c f-D N A水平㊂1.3.4免疫荧光(I F)检测各组小鼠心脏组织中N E T s相关标志物中M P O㊁C i t H3的表达量脱蜡水化后将小鼠心脏组织切片浸入柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液中行抗原修复㊂3%H2O2溶液中浸泡15m i n 后,P B S冲洗3次,每次5m i n㊂加入一抗4ħ孵育过夜㊂加入二抗,放入湿盒中,37ħ放置20m i n,P B S 冲洗㊂二氨基联苯胺(D A B)工作液显色,苏木精-伊红复染,然后进行1%盐酸分化㊁脱水㊁透明㊁中性树脂封片㊂脒基苯基吲哚(D A P I)染色细胞核用奥林巴斯显微镜进行观察㊂1.3.5各组小鼠心肌细胞损伤评估通过全自动分㊃2421㊃检验医学与临床2024年5月第21卷第9期 L a b M e d C l i n,M a y2024,V o l.21,N o.9析仪检测各组小鼠血清中磷酸肌酸激酶(C K)㊁磷酸肌酸激酶同工酶(C K-M B)水平㊂1.4统计学处理采用S P S S22.0软件对收集的实验数据进行统计分析,符合正态分布的计量资料以xʃs表示,两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,多组间两两比较采用L S D-t检验㊂以P<0.05为差异有统计学意义㊂2结果2.1未接受组和接受组患者血清c f-D N A㊁M P O-D N A㊁C i t H3的水平比较接受组患者血清中c f-D N A㊁M P O-D N A和C i t H3水平均明显高于未接受组,差异均有统计学意义(P<0.05)㊂见表1㊂2.2各组小鼠血清C K㊁C K-M B水平比较D O X 组小鼠血清C K㊁C K-M B水平明显高于对照组和L I-D O+D O X组小鼠(P<0.05)㊂见表2㊂2.3各组小鼠血浆c f-D N A㊁M P O-D N A㊁C i t H3水平比较 D O X组与L I D O+D O X组小鼠血浆M P O-D N A㊁C i t H3和c f-D N A水平明显高于对照组(P<0.05),但L I D O+D O X组小鼠血浆M P O-D N A㊁C i-t H3和c f-D N A水平明显低于D O X组(P<0.05)㊂见表3㊂表1未接受组和接受组患者血清c f-D N A㊁M P O-D N A㊁C i t H3水平比较(xʃs,μg/L)组别n c f-D N A M P O-D N A C i t H3未接受组1068.86ʃ8.96388.62ʃ61.9640.57ʃ7.01接受组10114.77ʃ10.80637.57ʃ77.6478.89ʃ13.36 t-262.99-10095.86-236.01P<0.001<0.001<0.001表2各组小鼠血清C K㊁C K-M B水平比较(xʃs,U/L)组别n C K C K-M B对照组6106.17ʃ21.7316.67ʃ4.63D O X组61327.00ʃ284.55*521.00ʃ62.24* L I D O+D O X组6512.17ʃ134.02#263.17ʃ53.30# F70.04170.00P<0.001<0.001注:与对照组比较,*P<0.05;与D O X组比较,#P<0.05㊂表3各组小鼠血浆c f-D N A㊁M P O-D N A㊁C i t H3水平比较(xʃs,μg/L)组别n c f-D N A M P O-D N A C i t H3对照组67.37ʃ1.20121.56ʃ9.724.36ʃ1.11 D O X组623.06ʃ4.34*327.25ʃ35.44*16.88ʃ1.27* L I D O+D O X组613.55ʃ2.12*#186.37ʃ21.37*#10.51ʃ1.78*# F45.41110.20117.50P<0.001<0.001<0.001注:与对照组比较,*P<0.05;与D O X组比较,#P<0.05㊂2.4各组小鼠心肌组织中M P O㊁C i t H3表达量比较 D O X组小鼠心肌组织中M P O和C i t H3表达量明显高于对照组和L I D O+D O X组小鼠(P<0.05)㊂见表4㊂表4各组小鼠心肌组织中M P O㊁C i t H3表达量比较(xʃs)组别n M P O C i t H3对照组64.65ʃ1.837.48ʃ2.90D O X组618.94ʃ2.01#34.63ʃ4.10#L I D O+D O X组610.33ʃ1.39*16.88ʃ3.26*F93.6895.54P<0.001<0.001注:与对照组比较,#P<0.05;与D O X组比较,*P<0.05㊂3讨论阿霉素的化疗虽是癌症治疗的基石,但其临床应用和治疗价值却受到严重心脏毒性的阻碍,其结果甚至导致左心室功能障碍和充血性心力衰竭[8]㊂阿霉素引起的心脏毒性特别是急性心脏毒性引起的各种心律失常,包括室速㊁室颤㊁室缓等,均是癌症患者猝死的主要临床表现㊂但在如今的大部分癌症化疗中,用于治疗乳腺癌㊁肉瘤㊁肺癌㊁膀胱癌等其他各种癌症时,阿霉素都有一定疗效㊂其主要机制为药物本身抑制D N A合成的毒性作用㊁氧自由基(R O S)导致心肌细胞膜脂质过氧化和心肌细胞线粒体D N A的损伤作用及心脏转录因子的失调[9],这也是引起细胞衰老的主要机制㊂有研究表明细胞衰老在介导化疗性心脏病方面起着核心作用[10],明确细胞衰老机制会打开化疗性心脏病新型预防方法的大门㊂B I N E T等[11]发现中性粒细胞会生成一种特殊的形态N E T s,N E T s不仅可以介导缺氧㊁无菌性炎症和氧化应激等多种损伤,而且与衰老的病理性血管密切相关㊂N E T s在中性粒细胞受到强烈刺激后,被主动快速释放到细胞外来包裹及杀伤外来入侵的病原体㊂虽然具有消除病原体作用,但N E T s对宿主组织的损伤也是不能忽略的:通过促进自身免疫的发展并导致其他功能失调,包括细胞转移㊁血栓形成和不适当凝血[12]㊂尤其是血栓和不适当凝血造成的缺血缺氧,最终引起大量R O S和炎症因子的产生,又会进一步加剧N E T s的形成,这一种恶性循环的病理过程在新型冠状病毒感染㊁肿瘤㊁糖尿病㊁关节炎等多种疾病中发挥着至关重要的作用㊂在新型冠状病毒感染中,血管内N E T s的释放可能引发微血栓形成,其中c f-D N A 水平的升高与M P O和中性粒细胞弹性蛋白酶的其他特异性标志物有关[13]㊂在心血管疾病中,已经明确N E T s促进动脉粥样硬化㊁心肌梗死及缺血再灌注损伤的发生㊁发展[14]㊂本研究中,通过收集未接受D O X 化疗和接受过阿奇霉素化疗患者的血清并检测N E T s㊃3421㊃检验医学与临床2024年5月第21卷第9期 L a b M e d C l i n,M a y2024,V o l.21,N o.9相关标志物M P O-D N A㊁C i t H3和c f-D N A的水平,发现接受阿奇霉素化疗后的患者血清中M P O-D N A㊁C i t H3和c f-D N A水平明显升高㊂在此之前, T O D O R O V A等[15]研究发现,发生阿霉素诱导心脏毒性的乳腺癌患者血中N e t s水平升高㊂而后笔者检测到阿奇霉素建模小鼠血浆N E T s水平的升高同样验证了这个观点㊂本研究检测了利多卡因预处理后使用D O X干预的小鼠血清中C K及C K-M B的水平,与D O X组比较,利多卡因预处理后的小鼠心肌损伤明显减轻㊂L I 等[16]研究提出白细胞介素-37通过抑制中性粒细胞细胞外陷阱的形成来减轻柯萨奇病毒B3诱导的心肌损伤;R E N等[17]在临床试验中发现在围术期用利多卡因和右美托咪定静脉输注可降低肺癌患者N E T s 和肿瘤转移生物标志物的血清水平㊂这与本研究在利多卡因预处理后加入D O X相比仅用阿奇霉素处理后的小鼠心脏组织中的M P O-D N A㊁C i t H3和c f-D N A表达量降低相一致㊂进一步支持了利多卡因抑制N E T s生成可缓解心肌损伤的结论㊂本课题组前期实验发现利多卡因可通过激活AM P K-S O C S3信号通路,通过抑制组织因子和改善循环而缓解急性肺损伤[18]㊂有报道提出利多卡因通过AM P K-S O C S3抑制神经炎症从而缓解吗啡耐受[19];利多卡因与腺苷配合能增加失血性休克的存活率,其中p-AM P K的水平增加[20]㊂利多卡因又可以通过激活AM P K增加S O C S3的表达,最终抑制A S K1㊁组织因子和基质金属蛋白酶2/9(MM P-2/9)表达,达到缓解脓毒症引起的急性肺损伤的目的[18]㊂刘海波等[21]还发现利多卡因预处理可以明显改善心肌损伤小鼠死亡率㊂但是利多卡因如何通过调控AM P K-S O C S3信号通路来影响N E T s,其具体机制仍不明确㊂本研究已初步证实了利多卡因对阿霉素引起的心脏毒性具有缓解作用,为化疗患者的心脏保护用药提供了新思路,具有重要的临床意义㊂综上所述,本研究推测N E T s的表达影响阿霉素心脏毒性,并且证实利多卡因可以通过抑制N E T s的表达显著降低小鼠心脏毒性㊂利多卡因影响N E T s 生成的具体机制有待进一步深入研究㊂参考文献[1]G O D I S HA L A A,Y A N G S,A S N A N I A.C a r d i o p r o t e c t i o ni n t h e m o d e r n e r a o f c a n c e r c h e m o t h e r a p y[J].C a r d i o lR e v,2018,26(3):113-121.[2]B R A N D A O S R,C A R V A L HO F,AMA D O F,e t a l.I n-s i g h t s o n t h e m o l e c u l a r t a r g e t s o f c a r d i o t o x i c i t y i n d u c e db y a n t ic a n c e rd r u g s:a s y s te m a t i c r e v i e w b a s e d o n p r o-t e o m i c f i n d i n g s[J].M e t a b o l i s m,2022,134:155250. 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[15]T O D O R O V A V K,H S U P C,W E I J Y,e t a l.B i o m a r k e r so f i n f l a mm a t i o n,h y p e r c o a g u l a b i l i t y a n d e n d o t h e l i a l i n j u r y p r e d i c t e a r l y a s y m p t o m a t i c d o x o r u b i c i n-i n d u c e d c a r d i o-t o x i c i t y i n b r e a s t c a n c e r p a t i e n t s[J].A m J C a n c e r R e s, 2020,10(9)2933-2945.(下转第1249页)㊃4421㊃检验医学与临床2024年5月第21卷第9期 L a b M e d C l i n,M a y2024,V o l.21,N o.9为避免积液外渗,需要经过较多的胸腔正常组织㊂(3)一般不建议反复冲洗及引流,避免胸腔出血及引流管堵塞等情况㊂(4)穿刺时要在超声引导下进行,实时监测,避开粗大血管,如果患者出现出血情况,需要调整引流,及时使用止血药物㊂综上所述,在床旁超声引导下精准化穿刺置管引流术治疗急诊创伤性血气胸,可以提升疗效,减轻术后炎症反应,改善肺功能,降低术后并发症发生率,利于患者早日康复㊂参考文献[1]千冬维,罗伟利.围手术期全程复合保温策略对急诊创伤性血气胸手术患者凝血指标及并发症的影响[J].血栓与止血学,2022,28(3):677-678.[2]周攀,程玲玲,朱杰,等.胸腔镜下肋骨固定在严重钝性胸部损伤合并血气胸中的效果观察[J].实用临床医药杂志,2022,26(4):55-59.[3]罗雷,杨彦辉,李季,等.胸腔镜与开胸手术治疗创伤性血气胸及对应激因子㊁疼痛因子影响的对照研究[J].创伤外科杂志,2020,22(7):521-524.[4]张国良.实用胸部外科学[M].北京:中国医药出版社, 2007:392.[5]陈鹏,于浩,李海燕,等.肺大泡并发自发性血气胸患者的A P A C H EⅡ评分㊁S O F A评分㊁免疫功能指标的变化及危险因素分析[J].海南医学,2023,34(1):22-25. 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[21]刘海波,刘岳鹏,朱霞,等.利多卡因预处理减轻阿霉素引起的小鼠急性心肌损伤的效果及机制研究[J].河北医科大学学报,2022,43(5):506-511.(收稿日期:2023-09-09修回日期:2023-12-19)㊃9421㊃检验医学与临床2024年5月第21卷第9期 L a b M e d C l i n,M a y2024,V o l.21,N o.9。
2型糖尿病大鼠肺组织基质金属蛋白酶-2、9及其抑制因子-1的表达变化
ｃ ｌ ｇ ｎ ｆ ｒ ａ ｎ ｒ ａ ｅ ｂ ｉｕ ｌ ｎ ｌ ｎ ｉｓ ｅ ｏ ｉ ｂ ｔ ａｓ ｈ ｘ ｒ ｓ ｉｎ Ｏ ｏｌ ｅ ｂ ｅ ｗ ｓ ｉｃ ｅ ｓ ｄ ｏ ｖｏ ｓｙ ｉ ｕ ｇ ｔ ｕ ｆｄ ａ ｅｉ ｒ ｔ ，ｔ ｅ ｅ ｐ ｅ ｓｏ ｆＭＭＰ ２，ＭＭＰ ９，Ｔ ＭＰ一 ａ ｉ ｓ ｃ － － Ｉ １
穆 维新 沈 亚欣 崔 士杰 王 绵
【 摘要 】 目的
损伤 中的作用。方法
通过检 测 ２型糖 尿病 大鼠肺组 织 中基 质金 属蛋 白酶－（ Ｍ －）基 质金属 蛋 白酶＿ ２Ｍ Ｐ 、 ２ ９
通过 高糖、 高脂饮 食加腹 腔 注射 小剂量链脲 佐 菌素（ ｔ ｐｏｏ ｃ ，Ｔ ） ｓ ｅｔ ｔ ｉ Ｓ Ｚ 的方法 ， ｒ ｚｏｎ 建
１３ ０４
Ｅ 医药 ２ １ ０ ０年 ５月 第 ３ ２卷 第 ９期
Ｈ ｂｉ ｄｃｌ ｏｒａ．０ ０ Ｖ ｌ ２Ｍａ ｏ９ ｅｅ Ｍｅｉ ｕｎ１２ １ ． ｏ ３ ｙＮ ． ａＪ
・
论 著 ・
・
２型糖 尿 病 大 鼠肺 组 织基 质金 属 蛋 白酶 一、 其 ２ ９及 抑 制 因子 一 １的表 达 变化
Ｃｈ ｎ ｅ ｆ Ｍ Ｐ・ ａ ｇ ｓｏ Ｍ ２，Ｍ Ｍ Ｐ ９，Ｔ Ｍ Ｐ－ ｉ ｕ ｇ ｔ ｓ ｅ ｏ ｙ ｅ２ ｄ ａ ｅ ｉ ａ ｓ Ｍ Ｕ Ｗｅｘ ｎ ， ＨＥ Ｙ ｘ ｎ， Ｉ Ｉ １ ｎ ｌ ｎ ｓ ｕ ｆｔ ｐ ｉ ｂ ｔ ｒ ｔ ｉ ｃ ｉ ｉ Ｓ Ｎ ａ ｉ ＣＵ
基于TGF-β1
㊃心血管专栏㊃[收稿日期]2022-11-11[基金项目]河北省自然科学基金精准医学联合基金培育项目(H 2021206141);河北医科大学大学生创新性实验项目(U S I P 2022119)[作者简介]张诺琪(2001-),女,河北张家口人,河北医科大学基础医学院学生,从事临床医学学习㊂*通信作者㊂E -m a i l :w a n g y a l i n g81@163.c o m 基于T G F -β1/S m a d s 信号通路的m i R N A 在心肌纤维化的研究进展张诺琪1,于国慧1(综述),王亚玲2*(审校)(1.河北医科大学基础医学院2020级临床医学3大班,河北石家庄050017;2.河北医科大学第二医院心内科,河北石家庄050000) [摘要] 心肌纤维化(m y o c a r d i a l f i b r o s i s ,M F )是多种心血管疾病终末阶段的主要病理表现,转化生长因子β1(t r a n s f o r m i n gg r o w t h f a c t o r -β1,T G F -β1)/S m a d s (d r o s o p h i l am o t h e r s a g a i n s t d e c a p e n t a p l e g i c )信号通路的异常激活广泛参与纤维化疾病的发生,是导致心肌纤维化的关键通路;微小R N A (m i c r o R N A ,m i R N A )是一类内源性小分子非编码R N A ,具备调控功能,主要在转录后水平调控基因的表达㊂现有研究已表明,m i R N A 是影响T G F -β1/S m a d s 信号转导的重要调节因子,深入阐明T G F -β1/S m a d s 信号通路相关的m i R N A 在心肌纤维化中的调控机制,可以为预防㊁诊断及治疗心肌纤维化提供新的研究思路㊂[关键词] 心内膜心肌纤维化症;微R N A s ;T G F -β1/S m a d s 信号通路 d o i :10.3969/j .i s s n .1007-3205.2024.01.017 [中图分类号] R 542.23 [文献标志码] A [文章编号] 1007-3205(2024)01-0089-05心肌纤维化(m yo c a r d i a l f i b r o s i s ,M F )是多种心血管系统疾病发展到终末阶段的常见病理改变,其特征为心脏成纤维细胞异常激活分化为肌成纤维细胞㊁细胞外基质合成与降解间的平衡被打破㊁胶原纤维沉积过多且排列紊乱㊁各种胶原成分比例失调等,它不仅可以引起心脏舒缩功能显著减弱或不协调,还可能造成心脏发生结构重构和电重构,心脏功能减退加剧,最终诱导心律失常㊁心力衰竭等发生,是人类生命健康面临的巨大威胁之一,M F 的生物标志物及相关治疗靶点也是当下研究的热点之一[1]㊂M F 的出现可能与多种信号通路的异常激活密切相关,其中转化生长因子β1(t r a n s f o r m i n gg r o w t h f a c t o r -β1,T G F -β1)/S m a d s (d r o s o p h i l a m o t h e r s a g a i n s td e c a p e n t a p l e gi c )通路被认为是影响M F 的经典通路,其激活可以触发纤维化相关基因的过表达[2]㊂微小R N A (m i c r o R N A ,m i R N A )是一种主要在转录后水平调控基因表达的单链小分子非编码R N A ,普遍参与机体的病理及生理过程㊂近年来许多研究成果表明,m i R N A 广泛地参与了M F的发生与发展过程[3]㊂由于m i R N A 的功能及机制复杂,全面深入了解m i R N A 的作用非常必要,本文重点关注M F 发生发展过程中T G F -β1/S m a d s 信号通路相关m i R N A 的作用机制,并就研究现状及最新进展作简要综述㊂1 T G F -β1/S m a d s 信号通路T G F -β1是转化生长因子β(t r a n s f o r m i n g g r o w t h f a c t o r -β,T G F -β)三种亚型之一,它在M F 发展中发挥着最重要的作用㊂S m a d s 蛋白位于T G F -β家族的下游,是T G F -β家族的直接作用底物,参与T G F -β1信号转导的S m a d s 蛋白有S m a d 2/3/4/7㊂T G F -β1/S m a d s 信号转导途径为:T G F -β1活化后首先识别并结合细胞表面的转化生长因子β受体(t r a n s f o r m i n gg r o w t hf a c t o r -βr e c e p t o r ,T G F βR )Ⅱ,然后结合T G F βRⅠ的丝氨酸/苏氨酸激酶区并使其发生磷酸化,T G F -β1㊁T G F βRⅡ㊁T G F βRⅠ形成稳定的异源三聚体,异源三聚体募集并磷酸化下游的S m a d 2/3将信号传导至细胞质内,磷酸化的S m a d 2/3与S m a d 4在胞质结合形成稳定复合物,并转移到细胞核,在核内调控特定基因的转录㊂T G F βR Ⅲ㊁S m a d 7是T G F -β1介导S m a d s 通路的负向调控因子,能够减弱信号转导强度[4]㊂T G F -β1/S m a d s 通路对心脏的生理及病理过程具有调节作用,在M F 进程中的作用至关重要㊂㊃98㊃第45卷第1期2024年1月河北医科大学学报J O U R N A L O F H E B E I M E D I C A L U N I V E R S I T YV o l .45 N o .1J a n . 2024T G F-β1/S m a d s信号转导途径激活,诱导心肌细胞凋亡,激活成纤维细胞并促使其转化为肌成纤维细胞,内皮细胞表型及功能改变转分化为间质细胞,同时刺激细胞上调纤维化相关基因表达,基质金属蛋白酶(m a t r i xm e t a l l o p r o t e i n a s e s,MM P s)表达降低,其抑制剂(t i s s u e i n h i b i t o r o f m a t r i x m e t a l l o p r o t e i n a s e s,T I M P)呈相反趋势表达,细胞外基质异常增加,胶原过度沉积且成分比例失调[5]㊂最新研究发现扩心方可能通过抑制T G F-β1/S m a d2信号通路改善扩张型心肌病大鼠M F[6],基于T G F-β1/S m a d s信号通路逆转M F可能成为未来研究的重要方向㊂2m i R N Am i R N A是一类单链小分子非编码R N A,由内源基因编码,长度约22个核苷酸㊂多重因素影响下,R N A聚合酶Ⅱ作用于细胞核内编码m i R N A的基因,使其转录形成原始m i R N A(p r i-m i R N A),接着经R N a s eⅢ酶D r o s h a剪切,形成前体m i R N A (p r e-m i R N A),在核孔转运蛋白E x p o r t i n5的识别与转运作用下,p r e-m i R N A通过核孔复合体进入细胞质,经R N a s eⅢ酶D i s e r剪切形成长约22b p的双链m i R N A[7]㊂双链m i R N A的引导链参与了R N A 诱导沉默复合体(R N A-i n d u c e d s i l e n c i n g c o m p l e x, R I S C)的形成,与m R N A的3'U T R特定序列依照碱基互补配对原则相结合,在转录后水平抑制靶标m R N A翻译或者影响m R N A的稳定性,从而对基因表达进行负向调节,随从链则立即降解,这就是m i R N A在生物体内的经典作用机制,新的研究发现随从链也可能作为功能链发挥重要作用㊂此外, m i R N A还存在多种非经典作用机制,如结合其他功能蛋白㊁直接参与基因的转录过程㊁促进蛋白质表达㊁对线粒体相关基因m R N A进行靶向调控等[8]㊂近年来越来越多的研究表明,m i R N A在M F病理过程中发挥着不可忽视的调控作用,有望成为改善M F的新靶点[3]㊂3T G F-β1/S m a d s信号通路相关的m i R N A在心肌纤维化中的作用多种m i R N A通过直接或间接途径参与T G F-β1/S m a d s信号通路,对心肌纤维化的发生发展具有重要调控意义(图1)㊂图1m i R N A在T G F-β1/S m a d s信号通路介导的心肌纤维化中的作用正常箭头表示激活作用及核转位;T型箭头表示抑制作用3.1 m i R N A-21 在体外培养的心肌成纤维细胞中,过表达m i R N A-21能明显提高成纤维细胞的活力,且T G F-β1表达量大幅提升[9];用T G F-β1处理心肌成纤维细胞后,m i R N A-21表达明显增多[10]㊂m i R N A-21与T G F-β1之间存在相互促进的循环,这可能是加快M F进程的重要原因㊂将m i R N A-21模拟物转染至T G F-β1处理的心脏成纤维细胞,促进了T G F-β1对S m a d7的抑制作用,S m a d2和S m a d3的磷酸化水平进一步增加[11]㊂用血管紧张素Ⅱ(a n g i o t e n s i nⅡ,A n g-Ⅱ)处理m i R N A-21敲除小鼠的心脏成纤维细胞,T G F-β和p-S m a d2/3的表达减少,抑制m i R N A-21能够减弱A n g-Ⅱ诱导的T G F-β/S m a d s信号转导[12]㊂孟华等[13]通过数据库预测发现,m i R N A-21-5p可与S m a d7的3'U T R区结合,在调控S m a d7表达方面具有潜在的功能;进一步检测表明,m i R N A-21-5p过表达组S m a d7的m R N A及蛋白质含量均显著下调㊂朱参战等[9]利用双荧光素酶报告基因检测证实,m i R N A-21-5p对S m a d7具有靶向调控作用,m i R N A-21-5p通过靶向抑制心肌成纤维细胞S m a d7的表达而促进胶原沉积和心脏纤维化过程;此外,m i R N A-21-5p对心肌成纤维细胞的促纤维化作用可以因为S m a d7的过表达而发生逆转㊂通过下调T G F-β1/S m a d s信号通路负调节因子S m a d7蛋白的表达进而实现对该通路的激活,提高心脏成纤维细胞的活力,促进其增殖和迁移,最终导致M F,这可能是m i R N A-21-5p 发挥作用的重要方式之一㊂m i R N A-21还能通过下调T G F-β1信号的负调控因子WW结构域蛋白1使T G F-β1/S m a d2信号通路激活,从而显著提高了心脏成纤维细胞的增殖能力[14]㊂上述研究一致表明,m i R N A-21在提高心肌成纤维细胞的增殖和迁移等能力㊁推动M F发生发展过程中发挥重要作用,㊃09㊃河北医科大学学报第45卷第1期激活T G F-β1/S m a d s信号通路可能是m i R N A-21促使成纤维细胞发挥生物学作用的重要靶途径㊂m i R N A-21也可作用于心肌细胞参与M F,但目前仍存在争议㊂在缺氧处理不同时间的心肌细胞中,m i R N A-21㊁T G F-β1㊁S m a d3表达均增高,且m i R N A-21与T G F-β1/S m a d3存在显著正相关;在缺氧心肌细胞中过表达m i R N A-21后,T G F-β1和S m a d3表达明显升高,抑制m i R N A-21表达得到相反的结果[15]㊂由这一结果推测m i R N A-21可能通过激活T G F-β1/S m a d3通路诱导心肌细胞凋亡,刺激心脏进行瘢痕修复,生成大量胶原纤维,同时高表达的T G F-β1也可通过旁分泌激活心脏成纤维细胞,与前述m i R N A-21的促纤维化作用相一致㊂但史东东等[16]研究表明,m i R N A-21-5p通过靶向下调T G F-β1的表达水平,增加心肌细胞存活率并抑制其凋亡,具有保护心脏的作用,袁媛等[17]㊁范丽等[18]的研究也认为m i R N A-21能够改善心肌细胞的损伤㊂动物实验同样表明,m i R N A-21具有调控M F 的作用㊂m i R N A-21抑制剂能够有效减轻缺血/再灌注损伤后的心脏重塑[19]㊂使用柯萨奇病毒B3诱导小鼠慢性病毒性心肌炎心肌纤维化模型,较模型组而言,m i R N A-21抑制剂组T G F-β1蛋白的心脏表达量明显降低,S m a d7蛋白表达量显著升高,M F 程度降低,心脏功能得到有效改善[20]㊂结扎小鼠左冠状动脉前降支建立心肌梗死模型,向小鼠心肌注射m i R N A-21抑制剂,S m a d2和S m a d3的磷酸化水平下降,改善了心肌梗死后的纤维化[11]㊂m i R N A-21与T G F-β1/S m a d s通路之间存在复杂的交互作用,上述研究有助于深入理解M F的发病机制,并为抗纤维化的临床治疗提供理论指导作用㊂但目前仍未完全阐明M F过程中m i R N A-21发挥作用的生物学机制,还需要进一步研究证明㊂3.2 m i R N A-195大鼠心肌梗死模型中,m i R N A-195㊁T G F-β1㊁S m a d3表达水平显著升高,S m a d7表达降低;m i R N A-195拮抗剂处理后,T G F-β1/ S m a d s信号通路被抑制,纤维化程度有所改善[21]㊂m i R N A-195过表达的原代心肌细胞的培养基中, T G F-β1浓度显著升高,用该培养基处理成纤维细胞后,其S m a d2/3蛋白磷酸化水平明显增加,同时纤维化相关基因表达上调[22]㊂由此推测m i R N A-195的作用机制之一可能为:m i R N A-195促进心肌细胞分泌T G F-β1,T G F-β1作用于成纤维细胞激活T G F-β1/S m a d s信号通路发挥一系列生物学效应,进而调控大鼠心肌梗死后M F的发生发展㊂D i n g 等[23]通过体内体外实验证实,抑制m i R N A-195-5p 可以抑制内皮间质转化,能够有效减轻糖尿病性心肌病大鼠的M F程度,其机制可能与m i R N A-195-5p对s m a d7的靶向作用有关;在高糖处理的内皮细胞中过表达m i R N A-195-5p的同时引入T G F-β1/ S m a d s通路的抑制剂,内皮间质转化被抑制,反向证明m i R N A-195-5p通过T G F-β1/S m a d s信号发挥对M F的调节作用㊂m i R N A-195可以通过多种途径调节M F的发生,T G F-β1/S m a d s信号通路的激活可能是它发挥作用的机制之一,更多机制还需更深入的研究㊂3.3 m i R N A-199为使T G F-β1/S m a d3信号通路处于激活状态,用A n g-Ⅱ刺激分离培养的小鼠心肌成纤维细胞,发现m i R N A-199a转录本㊁m i R N A-199a-3p㊁-5p的表达均上调;S m a d3抑制剂处理后, m i R N A-199a转录本㊁m i R N A-199a-3p㊁-5p表达均显著降低[24]㊂将m i R N A-199a-3p模拟物瞬时转染至体外培养的心肌成纤维细胞,细胞纤维化相关基因m R N A和蛋白质均呈现高表达状态,作用机制可能为m i R N A-199a-3p通过靶向抑制S m a d1表达,提高S m a d3磷酸化水平,发挥促纤维化作用[25]㊂过表达m i R N A-199a-5p也能发挥同样的作用,它可以靶向抑制沉默信息调节因子1表达,使其无法发挥去乙酰化功能,加剧S m a d3乙酰化程度,同时上调S m a d3磷酸化水平,增强T G F-β1/S m a d3信号,促进M F发展[24]㊂m i R N A-199a-3p,-5p可以加强T G F-β1/S m a d s信号转导,从而刺激胶原纤维形成,而T G F-β1/S m a d s信号通路的激活又可以提高m i R N A-199a-3p,-5p的表达,形成正反馈循环,进一步加重了M F程度㊂在高血压大鼠心脏重构过程中,m i R N A-199b-5p㊁T G F-β1㊁S m a d3表达量显著升高,用药物贝那普利干预后,表达量下降,心脏重构程度减轻,提示m i R N A-199b-5p与T G F-β1/S m a d s通路之间的潜在作用[26]㊂研究人员证实,m i R N A-199b-5p在心肌成纤维细胞的细胞核中高度表达,核m i R N A-199b-5p可以在体内外激活细胞周期依赖蛋白9表达,而细胞周期依赖蛋白9诱导S m a d3接头的磷酸化,这对于T G F-β1/S m a d s信号的完全激活是不可或缺的[27]㊂所以,在心脏重塑过程中T G F-β1/ S m a d3信号转导很可能介导了m i R N A-199b-5p诱导纤维化相关基因表达的作用㊂目前就m i R N A-199在M F发生发展㊁诊断治疗的关系的研究仍然不完善,还需要进一步的研究㊂3.4m i R N A-23 心房颤动患者右心耳组织中, m i R N A-23和T G F-β1表达水平均大幅提高,且二者表达呈正相关[28],对m i R N A-23进行基因干扰能㊃19㊃河北医科大学学报第45卷第1期够降低T G F-β的表达,显著改善风湿性心脏病大鼠M F的严重程度[29]㊂另一研究发现,小鼠脓毒症模型中,心肌组织m i R N A-23b表达水平上调,T G F-β1/S m a d2/3信号通路激活,加入m i R N A-23b抑制剂阻止了脓毒症诱导的T G F-β1和S m a d2/3的高表达,作用机制可能为m i R N A-23b靶向抑制T G F-β1/S m a d2/3信号通路的转录抑制因子来促进T G F-β1/S m a d2/3信号通路的激活,从而介导脓毒症晚期心脏纤维化重塑[30]㊂杨真祯等[31]发现,在分离培养的人心房肌成纤维细胞中,成纤维细胞的活力㊁增殖能力㊁迁移能力不因为m i R N A-23b-3p 的过表达而发生显著变化,但会导致纤维化相关基因的表达大幅上调;m i R N A-23b-3p可与T G F-βR Ⅲ特定位点靶向结合抑制其表达,无论是沉默T G FβRⅢ还是过表达m i R N A-23b-3p均能使纤维化相关蛋白表达水平明显升高以及S m a d3磷酸化水平大幅上调,提示m i R N A-23b-3p通过靶向抑制T G F-β1/S m a d s信号通路的负调控因子T G F-βRⅢ,从而激活该通路,促进胶原沉积和心脏纤维化过程㊂有关m i R N A-23与M F的研究尚不全面, m i R N A-23在M F的发生发展中具体发挥的作用及其重要性还有待进一步的探讨㊂3.5其他m i R N A m i R N A-125b在心肌成纤维细胞过表达后,与纤维化有关的基因表达水平显著升高,T G F-β1/S m a d s通路相关蛋白T G F-β1的表达水平及S m a d2/S m a d3蛋白磷酸化水平均有明显上调,这些结果提示,m i R N A-125b对心肌成纤维细胞的一系列调控作用可能是通过T G F-β1/S m a d s通路实现的[32]㊂m i R N A-10a过表达可促进心房组织T G F-β1表达㊁降低S m a d7表达从而激活T G F-β1/ S m a d s信号通路,提升了心脏成纤维细胞的增殖能力并加速心房颤动诱导的心脏纤维化[33]㊂制备急性心肌梗死大鼠模型并上调m i R N A-208a在模型大鼠体内的表达,发现T G F-β1㊁S m a d2㊁S m a d3表达异常升高,沉默m i R N A-208a得到相反结果,提示m i R N A-208a对T G F-β1/S m a d s通路的调节作用[34]㊂在小鼠心肌成纤维细胞转染m i R N A-140-5p 模拟物后,S m a d s依赖的T G F-β1信号通路相关蛋白T G FβRⅠ明显下调㊁S m a d2磷酸化程度降低㊁S m a d7的表达明显增加,m i R N A-140-5p能够靶向作用于T G FβRⅠ抑制T G F-β1/S m a d s信号降低纤维化程度[35]㊂在缺氧条件下培养的心肌成纤维细胞中,m i R N A-130a过表达能够下调T G FβRⅠ表达㊁减弱S m a d3磷酸化程度,且T G FβRⅠ是m i R N A-130a的靶基因,m i R N A-130a靶向作用于T G FβRⅠ抑制T G F-β1/S m a d s信号转导,阻碍了成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化,从而发挥抗纤维化特性[36]㊂m i R N A-126能够使心肌梗死大鼠T G F-β1㊁S m a d2和S m a d3相对表达量显著降低,阻断T G F-β1/S m a d s信号的促纤维化作用[37]㊂大鼠心梗模型显示,m i R N A-1908过表达后T G F-β1和S m a d2/3的表达被抑制,从而显著改善了心脏功能㊁降低M F程度,可能机制为m i R N A-1908通过靶向T G F-β1抑制T G F-β1/S m a d s通路的激活改善M F[38]㊂4展望M F是多种心血管疾病发展到一定阶段的共同病理变化,发病机制纷繁复杂,目前对其了解尚不全面,缺乏有效的治疗手段与措施㊂关于m i R N A的研究已在M F发生机制等方面获得了重大突破,从表观遗传学角度丰富了M F的发病机制,有可能是疾病的生物学标志物和潜在治疗靶点㊂而T G F-β1/S m a d s通路被认为是影响M F的经典信号通路,广泛参与了M F发展过程㊂m i R N A是影响T G F-β1/S m a d s信号转导的重要调节因子,两者之间存在着精细复杂的调节,但作用机制尚未完全明确,部分存在争议,在今后的研究中需要更深入的探索㊂多项动物实验表明,调节T G F-β1/S m a d s信号通路相关m i R N A的表达能够在一定程度上改善心肌纤维化,m i R N A很可能成为治疗心肌纤维化的干预靶点,但目前缺乏临床证据的支持㊂尽管如此,这些发现仍为M F的早期诊断㊁精准治疗和良好预后指明新的道路,利用m i R N A预测疾病,通过调控m i R N A进而调控T G F-β1/S m a d s通路实现有效抑制M F的发生发展,从而改善患者预后㊁提高患者生命质量,这将是未来心血管药物研发的一个重要的发展方向㊂有理由相信随着研究的深入和技术的发展,M F的治疗有望实现开创性突破㊂[参考文献][1] T r a v e r s J G,T h a r p C A,R u b i n o M,e t a l.T h e r a p e u t i c t a r g e t sf o rc a r d i a cf i b r o s i s:f r o m o l ds c h o o l t on e x t-g e n[J].JC l i nI n v e s t,2022,132(5):e148554.[2]杨萍芬,牛艳芬.T G F-β1/S m a 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肝纤维化大鼠血清及肝组织基质金属蛋白酶-1及其抑制因子表达的变化
ＬＵＯ Ｇｕ ｏ ｂ ｉ ａ ｏ Ｓ ＨＵ Ｊ ｉ ａ ｎ ｃ ｈ ａ ｎ ｇ Ｄｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｇａ ｓ ｔ ｒ ｏ ｅ ｎ ｔ ｅ ｒ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ，Ｇｕ ａ ｎ ｇ ｚ ｈ ｏ ｕ Ｒｅ ｄ Ｃｒ ｏ ｓ ｓ Ｈｏ ｓ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ Ａｆ ｆ ｉ ｌ ｉ ａ ｔ ｅ ｄ ｔ ｏ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｃｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ｏ ｆ Ｊ ｉ ｎ ａ ｎ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔｉ ｏ ｎ ａ ｌ ｉ ｎ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｃ ａ ｒ ｂ ｏ ｎ ｔ ｅ ｔ ｒ ａ ｃ ｈ ｌ ｏ ｒ ｉ ｄ ｅ ． Ａ ｌ ｌ ｒ ａ ｔ ｓ ｗ ｅ ｒ ｅ ｓ ａ ｃ ｉ ｒ ｉ ｆ ｃ ｅ ｄ ａ ｔ ｔ ｈ ｅ ｓ ａ ｍｅ ｔ ｉ ｍ ｅ ａ ｆ ｔ ｅ ｒ １ ２ ｗ ｅ ｅ ｋ ｓ ． Ｔ ｈ ｅ ｌ ｅ ｖ ｅ ｌ ｓ ｏ ｆ
【 文献 标识 码】 Ａ
【 文章 编 号】 １ ６ ７ ３ — ７ ２ １ ０ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ８ （ ｂ） 一 ０ ０ ２ ２ — ０ ３
Ｃｈ ａ ｎ ｇ ｅ ｓ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｍａ ｔ ｒ ｉ ｘ ｍｅ ｔ ａ Ｕ ０ ｐ ｒ ０ ｔ ｅ ｉ ｎ ａ ｓ ｅ 一 １ ａ ｎ ｄ ｉ ｔ ｓ ｉ ｎ ｈ ｉ ｂ ｉ ｔ ｏ ｒ
［ 摘 要】目的 检测肝 纤 维化 大 鼠血 清及 肝 组织 中基质 金属 蛋 白酶一 １ （ ＭＭＰ 一 １ ） 和基 质金 属蛋 白酶组 织 抑制 因子 一 １ （ Ｔ Ｉ ＭＰ 一 １ ） 表达 ． 探 讨 ＭＭＰ 一 １和 Ｔ Ｉ ＭＰ 一 １ 在 肝 纤 维 化 中的作 用 。 方 法 ２ ０只雄 性 Ｓ Ｄ大 鼠随 机均 分 正 常 组及 模 型组 ， 每 组各 １ ０只 ， 其 中模 型 组 以 四氯 化碳 腹 腔 注射 方 法 制作 大 鼠肝 纤 维化 模 型 ， １ ２周 后 同 时处 死 大 鼠 ， 用 酶
心力衰竭合并心房颤动与心房纤维化研究
・ ９ ６ ・
物螺 内酯 ， 可 明显 降低 心 衰 犬 或 心肌 梗 死 后 心 衰 也 大 鼠心房 纤 维 化 ； 螺 内酯 治 疗 心 衰 的患 者 ， 用 可 以使 左心 房 内径缩 小 ， 同时 通 过 抑制 心 肌 胶 原 的 合 成 阻止 心肌 纤维 化 ， 善 心 衰患 者 心 肌 结 构 重构 和 改
纤 维化 程度 ， 进 房 颤 发 生 。研 究 表 明 ， 固 酮 促 醛 可使 ＡＴ１ 因敲 除小 鼠 Ｃ ＧＦ表 达增 加 ， 进 心 ａ基 Ｔ 促
基 金 项 Ｅ ： 龙 江 省 留 学 资金 （ Ｃ ８ ３ ） ｌ黑 Ｌ ０ Ｃ ６
肌 纤维 化 ， 固酮受 体 拮 抗剂 —— 依普 利 酮 可 以 明 醛
Ｔ —１ 致 心 肌 纤 维 化 的生 长 因 子 之 一 ， ＧＦ ｌ 是 ３ 可
达 ， 进心肌 纤 维化 ， 制 炎症 因子 或 ＭＭＰ 促 抑 ｓ活 性 可能 是预 防心 衰房颤 发生 的一个 新途 径 。
２ ４ 氧 化 应 激 ．
通过 促进 胶原 、 连 蛋 白 和层 黏 蛋 白等 细胞 外 基 质 纤
醛 固酮 可 以 直 接 诱 导 成 纤 维 细 胞 产 生 细胞 外 基 质和 金 属 蛋 白酶 ［ 促 进 心 肌 纤 维 化 。虽 然 血 １ ，
管 紧张 素转 换 酶抑 制 剂 （ Ｅ ） 有 效 降低 心 衰犬 ＡＣ Ｉ能
心房肌 纤 维 化 ， 长 期 应 用 会 出 现 醛 固 酮 逃 逸 现 但
重构 ， 低 心 房 纤 维 化 ， 少 房 颤 发 生 ＿ 。心 衰 患 降 减 ６ ］
者 ， ＡＤ Ｈ 氧化 酶 活性 增 强 ， ＯＳ产生 增加 ， 量 Ｎ Ｐ Ｒ 过 Ｒ ＯＳ可 通过 促 进 成 纤 维 细胞 增 殖 和 ＭＭＰ 组 织 ｓ／
肺纤维化动物模型的研究进展
3、影像学评估
影像学评估是利用X线、CT、MRI等影像学手段对肺纤维化动物模型进行评估。 X线平片可以观察到肺部纹理的改变和肺野的浸润影，CT和MRI可以更准确地判断 肺部病变的位置、范围和程度。此外，采用分子影像学技术，如光学成像、磁共 振成像等，可以进一步了解肺部病变的分子机制。
二、肺纤维化动物模型
1、博来霉素诱导的肺纤维化模型：博来霉素是一种由轮枝链霉菌产生的碱 性糖肽类物质的多组分复合抗生素，被广泛用于诱导肺纤维化。通过在动物身上 注射博来霉素，可以引发炎症和纤维化反应。这种模型已被广泛应用于研究肺纤 维化的病因和病理生理过程。
2、石棉诱导的肺纤维化模型：石棉是一种已知的致癌物，可导致肺癌和肺 纤维化。通过让动物吸入石棉，可以模拟石棉诱发的肺纤维化。这种模型有助于 研究石棉对肺部的影响以及开发新的预防和治疗策略。
3、遗传工程模型：某些基因的突变已被发现与特发性肺纤维化有关。利用 基因编辑技术，科学家们已经成功地创建了这些突变的动物模型。这些模型有助 于研究这些基因在肺纤维化中的作用，以及可能的治疗方法。
三、研究进展
1、炎症在肺纤维化中的作用：近年来，越来越多的研究表明，炎症在肺纤 维化的发病过程中起着关键作用。通过使用各种动物模型，科学家们已经发现了 一些炎症介质和细胞因子在肺纤维化中的重要性，这为开发新的治疗方法提供了 新的途径。
参考内容
一、引言
肺纤维化是一种慢性进行性疾病，其特征为肺组织逐渐被纤维组织替代，导 致肺部功能逐渐丧失。此疾病可由多种原因引发，包括石棉、某些药物或放射治 疗，以及一些遗传因素。在过去的几十年中，尽管科学家们已经尝试了各种方法 来研究肺纤维化的发病机制和寻找治疗方法，但该疾病仍然是一个重要的医疗难 题。在这篇文章中，我们将讨论肺纤维化动物模型的研究进展，以及这些模型如 何帮助我们理解疾病的发展过程和测试新的治疗策略。
血管紧张素Ⅱ通过抑制人心房成纤维细胞ＢＫＣａ通道诱导心房纤维化
基金项目：泸州市人民政府西南医科大学科技战略合作项目（２０２１ＬＺＸＮＹＤ Ｚ０７，２０２１ＬＺＸＮＹＤ Ｊ２６）通信作者：于风旭，Ｅ ｍａｉｌ：ｙｕｌｕｃｈｕａｎ＠１６３．ｃｏｍ·论著·血管紧张素Ⅱ通过抑制人心房成纤维细胞ＢＫＣａ通道诱导心房纤维化贾春森 李磊 李劲平 谭宏伟 周伟 聂永梅 于风旭（西南医科大学附属医院心脏大血管外科，四川泸州６４６０００）【摘要】目的 探讨在血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）诱导心房纤维化的过程中，大电导钙激活钾通道（ＢＫＣａ通道）的作用机制。
方法 通过组织块贴壁法获取原代人心房成纤维细胞，使用免疫荧光染色进行鉴定。
用浓度为５００ｎｍｏｌ／Ｌ的ＡｎｇⅡ处理人心房成纤维细胞２４ｈ，实时荧光定量ＰＣＲ与蛋白质印迹法用于检测处理前后纤维化标志基因α 平滑肌肌动蛋白（α ＳＭＡ）、胶原蛋白Ⅰ（ｃｏｌｌａｇｅｎⅠ）和胶原蛋白Ⅲ（ｃｏｌｌａｇｅｎⅢ），以及ＢＫＣａ通道的α与β亚基的ｍＲＮＡ和蛋白表达水平，全细胞膜片钳技术检测ＡｎｇⅡ处理前后的ＢＫＣａ通道的电流变化。
结果 （１）人心房成纤维细胞经ＡｎｇⅡ处理后，α ＳＭＡ、ｃｏｌｌａｇｅｎⅠ和ｃｏｌｌａｇｅｎⅢ的ｍＲＮＡ和蛋白表达水平升高；（２）经过ＡｎｇⅡ处理后，ＢＫＣａ通道α及β亚基ｍＲＮＡ和蛋白表达水平降低；（３）人心房成纤维细胞存在功能正常的ＢＫＣａ通道，具有电压依赖性；（４）人心房成纤维细胞ＢＫＣａ通道的宏观电流幅度在经ＡｎｇⅡ处理后降低；（５）在人心房成纤维细胞上过表达ＢＫＣａ通道α亚基后，纤维化标志物α ＳＭＡ、ｃｏｌｌａｇｅｎⅠ和ｃｏｌｌａｇｅｎⅢ的表达受到了明显抑制。
结论 ＡｎｇⅡ可能通过抑制人成纤维细胞ＢＫＣａ通道的表达和功能来诱导人心房成纤维细胞的纤维化，并最终导致心房纤维化。
【关键词】心房纤维化；血管紧张素Ⅱ；人心房成纤维细胞；大电导钙激活钾通道【ＤＯＩ】１０ １６８０６／ｊ．ｃｎｋｉ．ｉｓｓｎ．１００４ ３９３４ ２０２３ １１ ０２０ＡｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎⅡＩｎｄｕｃｅｓＡｔｒｉａｌＦｉｂｒｏｓｉｓｂｙＩｎｈｉｂｉｔｉｎｇＢＫＣａＣｈａｎｎｅｌｉｎＨｕｍａｎＡｔｒｉａｌＦｉｂｒｏｂｌａｓｔＪＩＡＣｈｕｎｓｅｎ，ＬＩＬｅｉ，ＬＩＪｉｎｐｉｎｇ，ＴＡＮＨｏｎｇｗｅｉ，ＺＨＯＵＷｅｉ，ＮＩＥＹｏｎｇｍｅｉ，ＹＵＦｅｎｇｘｕ（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒＳｕｒｇｅｒｙ，ＴｈｅＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＳｏｕｔｈｗｅｓｔＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｌｕｚｈｏｕ６４６０００，Ｓｉｃｈｕａｎ，Ｃｈｉｎａ）【Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｌａｒｇｅｃｏｎｄｕｃｔａｎｃｅｃａｌｃｉｕｍ ａｃｔｉｖａｔｅｄｐｏｔａｓｓｉｕｍｃｈａｎｎｅｌ（ＢＫＣａ）ｉｎａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎⅡ（ＡｎｇⅡ） ｉｎｄｕｃｅｄａｔｒｉａｌｆｉｂｒｏｓｉｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｐｒｉｍａｒｙｈｕｍａｎａｔｒｉａｌｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄｂｙｔｉｓｓｕｅｂｌｏｃｋａｔｔａｃｈｍｅｎｔｍｅｔｈｏｄａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｂｙｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｓｔａｉｎｉｎｇ．ＨｕｍａｎａｔｒｉａｌｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓｗｅｒｅｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈＡｎｇⅡ（５００ｎｍｏｌ／Ｌ）ｆｏｒ２４ｈ．Ｒｅａｌ ｔｉｍｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲａｎｄＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｍＲＮＡａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆｆｉｂｒｏｓｉｓｍａｒｋｅｒｇｅｎｅｓα ＳＭＡ，ｃｏｌｌａｇｅｎⅠａｎｄｃｏｌｌａｇｅｎⅢ，ａｓｗｅｌｌａｓαａｎｄβｓｕｂｕｎｉｔｓｏｆＢＫＣａｃｈａｎｎｅｌｓｂｅｆｏｒｅａｎｄａｆｔｅｒｔｒｅａｔｍｅｎｔ．ＡｎｄｗｈｏｌｅｃｅｌｌｐａｔｃｈｃｌａｍｐｔｅｃｈｎｉｑｕｅｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｃｕｒｒｅｎｔｃｈａｎｇｅｓｏｆＢＫＣａｃｈａｎｎｅｌｓｂｅｆｏｒｅａｎｄａｆｔｅｒＡｎｇⅡｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ （１）ＡｆｔｅｒＡｎｇⅡｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｈｕｍａｎａｔｒｉａｌｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ，ｔｈｅｍＲＮＡａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆα ＳＭＡ，ｃｏｌｌａｇｅｎⅠａｎｄｃｏｌｌａｇｅｎⅢｉｎｃｒｅａｓｅｄ；（２）ＡｆｔｅｒＡｎｇⅡｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ｔｈｅｍＲＮＡａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＢＫＣａｃｈａｎｎｅｌαａｎｄβｓｕｂｕｎｉｔｓｄｅｃｒｅａｓｅｄ；（３）ＨｕｍａｎａｔｒｉａｌｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓｅｘｉｓｔｎｏｒｍａｌＢＫＣａｃｈａｎｎｅｌ，ｗｈｉｃｈａｒｅｖｏｌｔａｇｅｄｅｐｅｎｄｅｎｔ；（４）ＭａｃｒｏｃｕｒｒｅｎｔａｍｐｌｉｔｕｄｅｏｆＢＫＣａｃｈａｎｎｅｌｉｎｈｕｍａｎａｔｒｉａｌｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓｄｅｃｒｅａｓｅｄａｆｔｅｒＡｎｇⅡｔｒｅａｔｍｅｎｔ；（５）ＡｆｔｅｒｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＢＫＣａｃｈａｎｎｅｌαｓｕｂｕｎｉｔｏｎｈｕｍａｎａｔｒｉａｌｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ，ｔｈｅｍＲＮＡａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆｆｉｂｒｏｓｉｓｍａｒｋｅｒα ＳＭＡ，ｃｏｌｌａｇｅｎⅠａｎｄｃｏｌｌａｇｅｎⅢｄｅｃｒｅａｓｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ＡｎｇⅡｍａｙｉｎｄｕｃｅｆｉｂｒｏｓｉｓｉｎｈｕｍａｎａｔｒｉａｌｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓｂｙｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆＢＫＣａｃｈａｎｎｅｌ，ａｎｄｆｉｎａｌｌｙｉｎｄｕｃｅａｔｒｉａｌｆｉｂｒｏｓｉｓ．【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】Ａｔｒｉａｌｆｉｂｒｏｓｉｓ；ＡｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎⅡ；Ｈｕｍａｎａｔｒｉａｌｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ；Ｌａｒｇｅｃｏｎｄｕｃｔａｎｃｅｃａｌｃｉｕｍ ａｃｔｉｖａｔｅｄｐｏｔａｓｓｉｕｍｃｈａｎｎｅｌ 心房颤动（房颤）是临床上最为常见的心律失常，有较高的发病率与死亡率，其发病机制复杂，其中以心房纤维化为代表的结构重构是重要始动因素［１］。
糖调节异常者基质金属蛋白酶9及其抑制因子1水平变化与大血管病变的临床意义
糖调节异常者基质金属蛋白酶9及其抑制因子1水平变化与大血管病变的临床意义摘要】目的探讨糖调节受损者基质金属蛋白酶9(MMP-9) 及其特异性抑制剂（基质金属蛋白酶组织抑制因子 TIMPs）与大血管病变的临床意义。
方法采用酶联免疫吸附法测定了40例对照组和80例IGR者(其中IGR者40例，合并大血管病变者40例)血清中的MMP-9和TIMP-1的水平，分析其与大血管病变危险因子之间的关系。
结果大血管病变组血清中MMP-9、TIMP-1的水平显著高于单纯IGR 组和正常对照组。
经多元逐步回归分析显示，血清MMP-9与总胆固醇（TC）、餐后2小时血糖（PBG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、颈动脉中层内膜的厚度（IMT）呈正相关；TIMP-1与总胆固醇（TC）、颈动脉中层内膜的厚度（IMT）呈正相关。
血清MMP-9、TIMP-1、总胆固醇、餐后2小时血糖是IGR大血管病变的危险因素。
结论血清中MMP-9、TIMP-1水平的检测对监测IGR及大血管病变的发生、发展有重要的临床意义。
【关键词】糖调节受损基质金属蛋白酶9 基质金属蛋白酶组织抑制因子1 动脉粥样硬化糖调节受损（IGR）所代表的是一个以糖代谢紊乱为首要表现的阶段,这个阶段被认为已经具备代谢综合征和糖尿病的全部或部分特征。
中国20岁以上的成人糖尿病患病率已达9.7%，而糖尿病前期(空腹血糖受损和糖耐量减低IGR)的患病率已经达15.5%[1]。
IGR是糖调节正常人群（NGT）与2型糖尿病之间的过渡阶段，其发生糖尿病的危险比非IGR人群高约100倍。
国际糖尿病联盟的研究报告显示几乎所有的2型糖尿病发病前都要经过IGR阶段。
正如糖尿病血管病变一样，IGR人群的血管病变同样涉及多个环节。
其中内皮细胞与白细胞在血管基底膜局部的激活以及释放大量的炎性介质是组织损伤的关键[2]。
这些损伤进一步引起血管基底膜的降解与重构机制发生异常。
基质金属蛋白酶9(MMP-9)是基质金属蛋白酶家族(MMPs)的一员，主要参与血管基底膜重要结构成分—Ⅳ型胶原的降解，在动脉粥样硬化(AS)的发生、发展中起关键性作用。
视屏终端工作者泪液中基质金属蛋白酶-9、组织金属蛋白酶抑制剂-1浓度与眼表检查相关性研究
视屏终端工作者泪液中基质金属蛋白酶-9、组织金属蛋白酶抑制剂-1浓度与眼表检查相关性研究范媛媛;阮余霞;杨新【摘要】目的探讨视屏终端(VDT)工作者泪液当中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、组织金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)与眼表检查间潜在相关性.方法前瞻性横断面研究VDT工作者45例(45只眼),进行眼表疾病指数问卷(OSDI)对眼部症状进行登记.依次行泪膜破裂时间(TBUT)、角膜荧光染色、基础泪液分泌试验(SchirmerI).采集受试者右眼泪液标本,应用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测泪液眼中MMP-9、TIMP-1的浓度(ng/ml).结果视屏终端工作者中干眼患病构成比为13.3％,VDT 工作者泪液中MM-9浓度与VDT使用时间、角膜荧光染色分级正相关,与泪膜破裂时间负相关.TIMP-1与VDT使用时间、角膜荧光染色分级正相关.结论测量泪液中MMP-9、TIMP-1浓度具有辅助诊断干眼和量化干眼程度的临床意义.【期刊名称】《临床眼科杂志》【年(卷),期】2016(024)001【总页数】4页(P5-8)【关键词】视屏终端;基质金属蛋白酶9 (MMP-9);组织金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1);眼表疾病指数问卷【作者】范媛媛;阮余霞;杨新【作者单位】830002 乌鲁木齐市眼耳鼻喉专科医院眼科;430399 武汉,江汉大学第三附属医院眼科;830002 乌鲁木齐市眼耳鼻喉专科医院眼科【正文语种】中文视屏终端(visual display terminal,VDT)工作者有眼疲劳、困倦、眼部刺激感、眼痛、视物模糊、眼部充血、视力波动、复视等许多眼部不适症状[1]。
有研究结果显示VDT的使用是产生眼部不适症状的危险因素[2] ，而眼部不适的症状的出现往往与泪液渗透压增加、眼表损害和炎症反应相关[3]。
在干眼的病理机制研究中发现细胞因子、趋化因子水平与多种临床诊断学方法，例如Schirmer试验、泪膜破裂时间(tear break-up time,TBUT)、泪液清除率、角膜结膜染色等有显著相关性[4，5]。
基质金属蛋白酶-9与肝纤维化关系的研究进展
基质金属蛋白酶-9与肝纤维化关系的研究进展张素梅;谢玉梅;张颖;贾战生【摘要】Liver fibrosis is caused by the imbalance between matrix metalloproteinases (MMPs) and tissue inhibitor of metalloproteinasas (TIMPs) , which can result in the deposition of a large number of extracellular matrix in the interstitial cells and the pathological changes. The current studies have found that MMP-9 plays an important role in the process of inducing and promoting liver fibrosis. On the contrary, there are some opinions that MMP-9 can reverse liver fibrosis and there is a negative correlation between MMP-9 and liver fibrosis. Therefore, this review will elucidate the new advances on the function of MMP-9 in recent years.%肝纤维化是由于基质金属蛋白酶( matrix metalloproteinases,MMPs)及其组织抑制因子(tissue inhibitor of metalloproteinasas,TIMPs)比例失调,造成细胞外基质大量沉积在细胞间质中,引起的病理改变.目前研究发现MMP-9在肝纤维化形成过程中有诱发和促进作用,但也有一些相反的意见,认为其具有逆转肝纤维化的作用,与肝纤维化呈负相关.因此,本文就近年来对MMP-9功能的研究作一概述.【期刊名称】《胃肠病学和肝病学杂志》【年(卷),期】2012(021)006【总页数】3页(P586-588)【关键词】基质金属蛋白酶-9;肝纤维化;进展【作者】张素梅;谢玉梅;张颖;贾战生【作者单位】第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心,陕西西安 710038;第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心,陕西西安 710038;第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心,陕西西安 710038;第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心,陕西西安 710038【正文语种】中文【中图分类】R575肝纤维化是所有慢性肝病的共同病理变化，其病理基础是由于细胞外基质(ECM)的合成与降解失衡，导致ECM在细胞间质中大量沉淀所致［1-2］。
血清MMP-9 TIMP-1浓度及左房内径与心房颤动类型的关系
ａｒａ ａ ｉｇｉｄ ｃ ｄａｒａ ｉｒ ｌｔｏ ＪＭｏ ｌ ａｄｉｌ２ ０ ｔ ｌｐ ｃｎ —ｎ ｕ ｅ ｔ ｌ ｆｂ ｌａｉｎ． ｌＣｅｌＣ ｉ ｉ ｉ ｒ ｏ， ０ ８
构 性 重 塑 有 关 。 金 属 蛋 白酶 组 织 抑 制 因子 （ Ｉ ｓ是 ＭＭＰ ＴＭＰ ） ｓ
脉血 ４ｍｌ 。采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ ＬＳ Ｅ ＩＡ法 ） 测定 血清 ＭＭＰ９ 一 浓度 和 ＴＭＰ１ Ｉ ． 浓度 ， 试剂盒购 自武 汉博 士德公 司。 操作步骤按照试剂盒说 明进行 。 １ 统计学处理 ： ． ３ 计量资料用 ± 表示 。 行单 因素方差分析 ，
的复合物 ， 抑制 ＭＭＰ９的活化及其对基质的降解 。本文研究 一
ＭＭＰ９和 ＴＭＰ １ 一 Ｉ 一 及左房 内径对不 同类型心房颤动 的影 响和
４ 患者血清 中 ３种测定指标结果 ： 组 见表 ２ 。
相互关系。
１ 资料 与 方 法
１１ 临床资料 ： ． 选取 ２ ０ ０ ９年 １ 月至 ２ １ ０ ０ ０年 １ ０月在太钢总 医院心 内科住 院的孤立性心房颤动患者 ７ ５例 ，其 中持续性 房颤组 、 阵发性心房颤动组 、 永久性 房颤组各 ２ 。心房颤 ５例
Ｈｅ ｒ ａｔ Ａｓｏ ｉｔｏ ｓ Ｆ ｒ ｅ ｏ ａ ｔｃ Ｇｕ ｄ ｌｎ ｓ ａ ｄ ｈ ｓ ｃ ａ ｉｎ Ｔａ ｋ ｏ ｃ ｎ Ｐｒ ｃ ｉｅ ｉ ｅｉ ｅ ｎ ｔ ｅ
Ｅ ｒｐｃ ，０ ０ １ （） ３ １３ ７ ｕｏ ａｅ２ １ ，２ ３ ：７－７ ．
肺纤维化小鼠肺组织中MMP—9和TGF—β1的表达及意义
肺纤维化小鼠肺组织中MMP—9和TGF—β1的表达及意义作者：张玉昆来源：《中国现代医生》2014年第04期[摘要] 目的探讨肺纤维化小鼠肺组织中基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和转化生长因子-β1（TGF-β1）的表达及意义。
方法将60例C57BL/6小鼠随机均分为实验组、治疗组和对照组，其中实验组和治疗组采用博莱霉素诱导建立肺纤维化小鼠模型，其余20例健康小鼠作为对照组，采用免疫组化SP法测定实验组和对照组肺组织中MMP-9和TGF-β1蛋白的表达情况。
并采用格列卫对治疗组进行干预，对治疗前后肺组织中MMP-9和TGF-β1的表达情况进行比较。
结果对免疫组化测得的光密度值进行比较，实验组MMP-9和TGF-β1的值明显高于对照组，差异有统计学意义（P < 0.05）。
将治疗组中进行干预的20只小鼠进行MMP-9和TGF-β1的光密度值测定，干预前后进行比较，差异有统计学意义（P < 0.05）。
结论肺纤维化小鼠肺组织中MMP-9和TGF-β1呈高表达，格列卫对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化程度可能有抑制作用。
[关键词] 肺纤维化小鼠；MMP-9；TGF-β1；格列卫[中图分类号] R563.9 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2014）04-0014-03肺纤维化是间质性肺疾病病理特征之一，间质性肺疾病病变早期以弥漫性肺泡炎为主，其后逐步出现肺间质纤维化。
特发性肺纤维化是其中最常见的一个类型，该病发病机制不明，临床预后很差，中位生存期仅2.8年，目前无特效的治疗方法[1]。
因此，深入研究肺纤维化的发病机制并探索有效的治疗途径是目前研究的热点和重点[2]。
本研究通过建立肺纤维化小鼠动物模型探讨肺组织中MMP-9和TGF-β1蛋白表达及意义，现报道如下。
1 材料与方法1.1 实验动物选取由广州医科大学SPF动物实验中心提供的健康雌性C57BL/6小鼠60只作为研究对象，均为周龄4～6周、体重16～18 g的健康清洁级小鼠。
CKIP1对小鼠皮肤纤维化及TGFβ1和collagen1表达的影响
实用口腔医学杂志(J Pract Stomatol)2019Mar,35(2)-165•-基础医学研究-：CKIP-1对小鼠皮肤纤维化及TGF.pl和collagen-1表达的影响胡奥刘富伟李云鹏唐明胡张晏源黄鑫靳丹侯燕高晔孔亮【摘要】目的：分析CKIP-1基因敲除后对皮肤纤维化的作用，并检测其对TGF-pi和collagen-1表达的影响。
方法：取6月龄CKIP-1基因敲除小鼠作为实验组，与同窝雄性野生型小鼠进行对照，观察小鼠皮肤大体形态变化,再通过HE和masson染色分析皮肤的组织学改变,最后通过免疫组化检测皮肤纤维化相关的重要细胞因子TGF-pi和collagen-1的分子表达情况。
结果：CKIP-1基因敲除小鼠皮肤较硬、弹性较差，镜下观察皮肤角化增加，表皮层和真皮层增厚，纤维扭曲、增粗，胶原含量显著增加，免疫组化检测发现TGF-pi和collagen-1分子表达增加，且TGF-01在表皮及真皮交界处表达增加最为显著。
结论：小鼠CKIP-1基因敲除后皮肤出现明显的纤维化改变,可能与TGF-pi表达增加相关【关键词】TGF-pi；CKIP-1；皮肤纤维化；丨型胶原The effects of CKIP-1on skin fibrosis and the expression of TGF-pi and collagen-1in miceHU Ao,LIU Fuwei,U Yunpeng,TANG Mingyue,ZHANG Yanyuan,HUANG Xin,JIN Dan,HOU Yan,GAO Ye, KONG Liang.710032,State Key laboratory of Military Stomatology&National Clinical Research Center for Oral Diseases&S haanxi Clinical Research Center for Oral Diseases,Department Oral and Maxillofacial Surgery,School of Stomatology,Tfie Fourth Military Medical University,China[Abstract]Objective:To study the effects of Casein kinase2interacting protein1(CKIP-1)on skin fibrosis and the expression ofT(；F-01and collagen-1in mice.Methods:6-month-old mice with CKIP-1knockout(Vi0)were used as the experimental group,the wild-type littermates were used as the controls.The niacroscopical changes of skins of the mice were observed,HE and masson staining were used to evaluate the histological feature.The expression of TGF-pi and collagen-1was investigated by immimohistochemistry. Results:Vi0mice showed harder but less elastic of the skin compared with controls.HE and masson staining showed hyperkeratosis of skin,thickened rplidermis and dermis,in which fibers were tortuous and thick,and the contents of collagen increased.Irnniunohisto-chemistry showed that the expression()「TGF-01and collagen-1increased,especially in(Irrinal-eplidrrmal junction.Conclusion: There are fibrotic changes in the skin of CKIP-1knockout mice,possibly associated with the increased expression of TGF-pl and collagen-1.[Key words]TGF-从；CKIP-1；Skin fibrosis；Type I collagen中图分类号:R782.4文献标志码:A doi：10.3969/j.issn.1001-3733.2019.02.001皮肤是人体最大的器官，其真皮层受损后引起的纤维化，常导致外观和功能受损'。