清热化滞颗粒微生物限度检查法的研究

Ａ ｓｒ ｃ ： ｉｃｉｅＴ ｓａ ｌ ｈ ｔｅ ｍｅｈ ｄ ｆｒｄ ｔｒ ｎ ｔ ｎ ｏ ｒ ｒｒ ｎ ｅ ｎ ｌｃ ｓ ｅ ｉ ｎ ｏ ｇ ｉｇ ａ ｓ ｌ．Ｍｅｈ ｄ ： ｂ ｔａ ｔ０ｂｅｔ ：ｏ ｅ ｔｂｉ ｈ ｔｏ ｏ ｅｅｍｉａｉ ｆＰＩ ａｉ ａ ｄ Ｐ ｏ ｙ ｇｕ ｏ ｉ ｎ Ｇｅ Ｔ ｎ Ｐｎ Ｃ ｐ ｕｅ ｖ ｓ ｏ ｅ ｎ ｄ ｔｏ ８ Ｃ ｎ ｉｏ ｆＨＰ Ｃ ｗ ｓ山ｅ ａ ａｙｉａ ｏｕ Ｃ （ ．ｍｍ ２ ０ ｏ ｄｔ ｎ ｏ Ｌ ａ ｉ ｎ ｌｔ ｌｃ ｌｍｎ ４６ ｃ ｘ ５ ｍｍ ，１ｍ） ｈ ｏｕ ｅ ｅ ａｕｅ ｗ ｓ３ ℃ ． ｈ ｂｌ ｈ ｓ ａ ５ｘ ，ｔｅｃ ｌｍｎｔｍｐ ｒｔｒ ａ ０ Ｔ ｅｍｏ ｉ ｐ ａｅｗ ｓ ｅ ｃ ｍｐ ｓｄｏ ｔｏ 、ｃ ｔｎｔ ｌ ｎ ａｅ １ ：０８ ）ｔ ｏ ａｅｏ ．ｍｌｍｉ；ｈ ｖ ｌｎ ｔ ｆＵＶ ｄ ｔｃｏ ｓ２ ０ ｍ． ｅ ｕｔ ｏ ｏｅ ｆ ｈ ａ ａ ｅｏ ｉｉ ａ ｄ ｗ ｔｒ（ ０ １ ：０ ａ ｆ ｗ ｒｔ ｆ１０ Ｊ ｎＴ ｅｗａ ｅｅ ｇｈ ｏ ｅｅ ｔｒｗａ ５ ｎ Ｒ ｓ ｌ ｍｅ ｌ ｒｅ ａｌ ：
北方药学 ２ １ 年第 ９卷第 ６ ０２ 期
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清 热化 滞 颗 粒 微 生 物 限度 检 查 法 的研 究
齐云桥 胡晓梅 庞春雪 陈宝鑫 高宝丽 赵金玲 （德颈复 业集团有限 承 康药 公司 承德 ０７０ ６００ ）
摘要 ： 目的 ： 建立清热化滞颗粒微生物限度的检查方法。方法： 根据该样品的微生物限度标准 ， 按照《 中国药典｝ ００版一部附录 ２１ 微生物限度检查法的验证试验指导原 则 ， 用三 个批 号的清热化滞颗粒进行验证试验 。结果 ： 养基稀释 法验证 结果表 明， 菌 培 各 种的回收率均 大于 ７ ％。在控制 茵常规 法验证 中试验组检 出试验 菌。结论 ： ０ 通过对该品种的微 生物限度检查 法的方法学验证 ， 确认该品种微 生物限度 中， 细菌、 霉菌及酵母 菌检 查可采用培养基稀释法检验 ； 控制菌可采 用常规法进行检验 。 关键词 ： 清热化滞颗粒 常规 法 培养基稀释法 方法验证 中图分 类号 ： ９ ７ Ｒ ２ 文献标识码 ： Ｂ 文章编号 ：６ ２ ８ ５ （ ０ 】６ ０ ０ — ２ １７ — ３ １２ １ ０ — ０ ３ ０ ２ 清热化滞颗粒为 承德 颈复康药业集 团有 限公司生产 的中 ２３细菌、 ． 霉菌及酵母菌的菌落计数方法验证 ， 常规法。 药制剂 ， 由大黄 （ 酒炒 ）焦槟榔 、 、 大青叶、 北寒水石 、 山楂（ ）薄 ２３１ 焦 、 ．． 菌液组 ： 取上述 已制备 的菌液 ｌ ｌ测定每一株菌 的实验 ｍ， 荷、 化橘红、 草豆蔻 、 广藿香 、 前胡 、 麦芽（ ） 焦 十一味中药组成 ． 本 菌数 。 品清热化滞 ， 表里双解 。用 于乳 食内积 ， 久滞 化热兼外感风热 ２３２ ．．试验组 ：取上 述供试液 ｌ ｌ ｍ 和菌液 １ ，分别 注入平皿 ｍｌ 症。症见脘腹胀满， 食欲不振 ， 恶心呕吐， 大便不调 ， 口干 ， 发热 咽 中 ， 即注入琼脂 。细菌 ３ ￣培养 ４ 立 ４Ｃ ８小时 ； 真菌 ２ ℃培养 ７ ５ ２ 红咽痛， 鼻塞流涕。因为药材大黄 、 大青叶等中药具有一定的抑菌 小时 ， 观察结果 。 性 ， 以应对其检查方法进行科学的验证 ， 所 从而找到更准确的微 ２３３ ．．供试 品对照组 ： 菌落计 数方法测定供试品本底对照。 按 生物限度检查方法 ， 能够准确检 出供试品 中存在的活的微 生物 以上实验均进行 了三次独立的平行试验 。并分别计算各 的数量及存在致病菌 的种类『 。故本实验对清热化滞颗粒的微 试验菌每次试验的回收率。实验结果见表 １ １ ． 。 生物限度检查进 行了常规法 、 培养基 稀释法的验证 ， 以确定该 实验组菌 回收率 （ ＝ 试 验组平均菌落数一 ％） （ 供试品对照 药品的微生物限度正确的检验方法 ， 从而确保药 品的质量 。 组平均菌落数 ）菌液组平 均菌落数 ｘ ０ ％。 ， １０
表 １试验结果 表明清热 化滞颗 粒对金黄 色葡萄球菌 、 枯 草芽孢杆菌 、白色念珠菌在常规法 的微生物 限度检查下有抑 中国药 品生物制品检定所提供 （ 菌种均为第三代 ） 。 １ 培养基 ． ３ 菌性 ， 回收率均小 于 ７ ％。而常规法 中大肠埃希菌 、 曲霉 的 ０ 黑 ０ 故对 金黄 色葡萄球菌 、 枯草芽孢杆 菌 、 白 营养 肉汤培养 基 （ 号 ０ １ １ ） 改 良马 丁培养基 （ 号 回收率均大 于 ７ ％， 批 ９２５ 、 批 １０ １ ）改 良马丁琼脂培养基（ ０ ８０ 、 批号 １ ０ ４ ）营养琼脂（ ０７２ 、 批号 色念珠菌 的微生物限度检查法进行重新验证 。 ． 霉菌及酵母菌的菌落计数方法验证 ， 培养基稀释法。 １０ １ ）玫瑰红纳琼脂 （ 号 １０ １４ 、 １６ ３ 、 批 ０ １ １ ）胆盐 乳糖 培养基 （ 批 ２４细菌 、 号 １０ １２ 、一 １４ １ ）４ 甲基伞形酮 葡糖苷酸 （ Ｇ）培养基 （ 号 ２４１ ＭＵ 批 ．． 菌液组 ： 取上述 已制 备的菌液 ｌ ｌ测定每一株菌 的实验 ｍ， １１ ２ ） ０ ０ ０ 。以上均 由中国药品生物制品检定所 提供 。对所 用的 菌数 。 ２４２试验组 ： ．． 取上述供试 液 ０２ ｌ 菌液 ｌ ， ．ｍ 和 ｍｌ分别注人平皿 培养基进行 了培养基适用性试 验 ， 均符合规定 。 １ ． ４仪器 中 ， 即注入琼脂 。细菌 ３ 培养 ４ 立 ４Ｃ ８小时 ； 真菌 ２ ＇培养 ７ ５ Ｅ ２ 观察结果 。 电热恒温培养箱 、 电热鼓风 干燥 箱、 卧式矩形压力蒸汽灭 小时 ， 菌器、 移液器。 ２ ．供试 品对照组 ： 试液 ｌ １ ．３ ４ 取供 ｍ 分别 注入 ５ 个平皿 ， 每个平
１ 料 与 仪 器 材 １ 样 品 ． Ｉ 清热化滞颗粒 （ 承德颈 复康药业 集 团有 限公 司 ，批 号 ：
１０ ８ 、９ ８ 、９ １７ ９ １ ５ １ ０１ ６ １ ０ ８ ｏ
表 １ 细菌、 菌、 菌的计数 方法常规法验证结果的回收率％ 霉 酵母
１ ． 证 用 菌 种 ２验 枯草芽孢杆菌 （ ＭＣ （ ６ ５ １２ ） Ｃ Ｃ Ｂ）３０ — ８ 、金 黄色葡萄球菌 （ ＭＣ （ ）６ ０ ）大肠埃希菌（ ＭＣ （ ４ １ ２ 、 Ｃ Ｃ Ｂ２０３、 Ｃ ｃ Ｂ）４ ０ ） 白色念珠菌 （ ＭＣ （ ）８ ０ ）黑曲霉 （ ＭＣ （ ）８０ ） Ｃ Ｃ Ｆ９ ０ ２ 、 Ｃ Ｃ Ｆ ９ ０ ３ 。以上菌种均有
北方 药学 ２ １ 年第 ９卷第 ６ ０２ 期
Ｈ Ｌ Ｐ Ｃ法 同时测 定根痛平胶 囊 中芍药苷和葛根素的含量
梁世 昌 黄远征 。． （广州市妇女 １ 儿童医 心 广州 ５ ６３ ． 州白 和记 疗中 １ ２； 广 云山 黄埔中 有限公司 广州 ５０１ ０ ２ 药 １ ５ ５）
摘要 ： 目的 ： 立以 Ｒ — Ｌ 建 Ｐ ＨＰ Ｃ法同时测定根痛平胶 囊中葛根素和 芍药苷含 量的方法 。方法 ： 采用 Ａ ｉ ｎ Ｃ８４６ ｍｘ ５ ｍ ｇ ｅｔ １ ． ｌ （ ｍ ２ ０ ｍ， ５ ｍ） ｔ 色谱柱 ， ｘ 流动相为 乙腈一 甲醇一 １：０８ ） 柱温为 ３ ｃ ， 水（０１：０ ； ０Ｃ 流速 为 １ ｍＬｍ ｎ检 测波长为 ２ ０ ｍ ． ／ ｉ； ０ ５ ｎ 。结果 ： 葛根素在 ０ ０ ６ ． ０一 ３ Ｏ６ １ ￣ ． ２ ｇ范围 内进样量 与峰 面积 有 良好 线性关 系， ０ 平均加样收率为 ９ ． ％， Ｓ ９２ Ｒ Ｄ为 ０４ ％； ４ ． ４ 芍药苷在 ０ ５２ ０ ７５范围 内 ． ０～． ５ ３ ８ 进 样量 与峰 面积 有 良好 线性 关 系 ，平均加 样 回收率 为 ９ ． ％ ，Ｓ ９１ Ｒ Ｄ为 ０ １ ０ ． ％。３批样 品 中葛根素 和芍 药苷的含 量分别 为 ７ ２８ ６ 粒 、． １ ｇ粒 ；． ５ ／ 、．３ｍ＃粒；． ２ ｇ 、． ５ ￣粒。结论： ． ｍ ５ ４２ ｒ ／ ２８ ｍｇ ４２ ０ ３ａ ５ 粒 ２８ ｍ ／ ４２ ｍ ５ 粒 ２ 所建方法简便 、 灵敏 、 准确 ， 专属性较 强， 可作为 根痛平胶囊 中芍药苷和 葛根素含量泱 定的方法。 １ 关键词 ： 根痛平胶 囊 芍药苷 葛根素 含 量测定 中图分类号 ： ２ ４１ Ｒ８． 文献标识码 ： Ｂ 文章编号 ：６ ２ ８ ５ （ ０ ）６ ０ ０ — ２ １７— ３ １２ １ ０ —０ ４ ０ ２
２方法 与 结 果 ２１ ．菌液制备
皿 ０２ 。 ． ｍｌ
以上实验均进行 了三次独立 的平行试验 。并分别计算各 。 取 经 ３ ℃培养 ２ ４ ４小时 的金黄色葡萄球菌、 枯草芽孢杆菌 、 试验菌每次试验的 回收率。实验结果见表 ２ 霉菌 酵母菌 的菌落计数方法培养基稀释法验证结果 大肠埃希菌的营养 肉汤培养物 Ｉ ｌ ｍ ，加 ９ ｌ． ｍ Ｏ ％氯化钠灭菌溶 表 ２ 细菌 、 、 ９ 液， 依次 １ 倍稀释至细菌数为 ５ 一 Ｏ ｃｕ ｌ做活菌计 数备用。 ０ ０ ｌＯ ｆ ｍ ， ／ 取经 ２＇培养 ４ ５ Ｅ ８小时白色念珠菌的改 良马丁培养基 的液体培 养物 ｌ ｌ加 ０ ％无菌氯化钠溶液 ， ｍ， ． ９ 依次 ｌ ０倍稀释至细菌数约 为 ５～Ｏｃ ／ｌ ０ ｌＯｆｍ ， ｕ 做活菌计数备用。 接种黑曲霉 的新鲜培养物至 改 良马丁琼脂斜 面培养 基上 ，５ ２ ℃培养 ５ ７天 ，加入 ５ ｌ — ｍ 含 ０ ５ ｍｈ１ 山梨酯 ８ 的 ０ ％的无菌氯化钠溶液洗下斜面 ． ％（ ｌ ） ０ ｎ聚 ０ ． ９ 的真菌孢子 ， 然后吸出孢子悬液。（ 用管 口带有薄的无菌棉花或 纱布的毛细吸管 ）至无菌管 中，作为 原液 。然后取 ｌ 加含 ｍｌ ０ ５ Ｉ／ ） ． ％（Ｉ 聚山梨酯 ８ ０ ｒ“ ｌ ０的 ０ ％的无菌 氯化钠溶液 ， ． ９ 依次 １ ０ 倍稀释至 １＿ ， Ｏ４细菌数约为 ５～Ｏｃ ／ｌ ０ ｌＯｆ ｍ ， ｕ 做活菌计数备用。 ２２ ．供试液制备 称取供试品 １ｇ ０ 研碎 ， Ｐ ． 加 Ｈ７ ０的无菌氯化钠 一 白胨缓 蛋 表 ２数据显示 ， 清热化滞颗粒对金 黄色葡萄球菌 、 枯草芽 冲液至 ｌ Ｏ ｌ制成浓度为 １１ Ｏｍ ， ： ０的供试液 。