实验十二 反相高效液相色谱法分析尼泊金酯综述

实验十二 反相高效液相色谱法分析尼泊金酯
一、目的要求
1. 熟悉高效液相色谱仪器操作技术；
2. 学习HPLC 保留值定性方法和归一化定量方法。

（了解定制报告编辑方法）。

二、基本原理
尼泊金酯（对羟基苯甲酸酯）混合物中含有尼泊金甲、乙、丙、丁酯，均属于强极性化合物，可用反相HPLC 进行分析，选用非极性的C 18烷基键合固定相，甲醇水溶液作流动相。

在一定色谱条件下，酯类各组分t R 保持恒定，相同条件下可用t R 定性。

面积归一化法定量计算公式：
%100%1
⨯=∑=n i i
i
i
A
A p
三、仪器、试剂
1.恒流泵 Series Ⅲ
2. 500型紫外检测器
3. 高压六通进样阀（20ul ）
4.分析之星色谱数据工作站
5.超声波发生器、过滤器
6.进样器 1ml
7.10ug/ml 对羟基苯甲酸甲、乙、丙、丁酯甲醇溶液；混和试样。

四、实验条件
1. 色谱柱：250mm ×4.6mm i.d 固定相：C 18烷基键合相 5um
2. 流动相：甲醇：水（85：15） 1ml/min
3. 检测器：紫外光度监测器，254nm ，灵敏度 0.02
4. 进样量 20ul 五、实验步骤
1. 将过滤配好的85％甲醇开盖置于超声波发生器脱器15min 。

2. 按仪器操作规程打开数据工作站，据给定仪器条件启动HPLC 至基线平直。

3. 用甲醇清洗进样注射器、进样阀（10ml 容量瓶取甲醇适量，用干净的1ml 注射器操作）。

4. 取干净10ml 容量瓶5只，分别取10ug/ml 的对羟基苯甲酸甲、乙、丙、丁酯甲醇溶液及混
合试样适量，贴标签，备用。

5. 用干净的1ml 注射器取样0.4～0.6ml ，排气泡，加过滤头，注入进样阀（LOAD 位），接着
按仪器操作规程“10”进样操作。

各样重复进样3次，换样用甲醇清洗进样器、阀。

试样测定结果各Ai,积分后记录。

6. 实验完毕按仪器操作规程停机。

六、数据记录与处理
1.标样分析表
2.试样分析结果表。