HPLC测定小建中胶囊中芍药苷的含量

HPLC测定小建中胶囊中芍药苷的含量
赵仙文
【摘要】目的:建立以高效液相色谱法测定小建中胶囊中芍药苷含量的方法.方法:色谱柱为Kromasil C18,流动相为乙腈-0.1％磷酸溶液,检测波长为260 nm.结果:芍药苷在0.1 μg/mL～1.2μg/mL范围内线性关系良-(r=0.999 5),平均加样回收率为99.895％,RSD为0.9％(n=6).结论:本方法简便、灵敏、准确,可用于小建中胶囊的质量控制.
【期刊名称】《山西中医学院学报》
【年(卷),期】2011(012)006
【总页数】2页(P18-19)
【关键词】高效液相色谱法;小建中胶囊;芍药苷
【作者】赵仙文
【作者单位】山西省朔州市朔城区北城医院,山西朔州 030062
【正文语种】中文
【中图分类】R284.2
小建中汤出自汉代《伤寒论》，原方由芍药六两，桂枝三两去皮，甘草二两，生姜三两，大枣十二枚，饴糖一升组成，具有温中补虚、和里缓急之功效，用于腹中时痛，温按则痛减，舌淡苔白，脉弦细，或四肢痠楚，手足烦热，咽干口燥；或心中悸动，虚烦不宁，面色无华的虚劳里急证［1］。

中成药小建中胶囊是按传统处方
配伍，将单味中药经煎煮、浓缩、干燥后混合精制而成，与传统饮片使用相比虽然具有服用量少、携带方便、剂量准确、药物稳定、便于储存等优点，但也存在大量争议。

本实验用HPLC法对小建中胶囊中芍药苷的含量进行测定，现将结果总结
报道如下。

1 实验材料
1.1 实验仪器
日本岛津LC-2010高效液相色谱仪，CLASSVP色谱处理系统（配有四元梯度泵、在线脱气装置、自动进样器、柱温箱、紫外检测器），电子天平（METTLER AE-200）。

1.2 药品与试剂
芍药苷对照品购自中国药品生物制品检定所，批号：110736-200628；乙腈、甲
醇均为色谱纯；水为实验室专用纯水机XYD-10-H处理超纯水；其余试剂均为分
析纯。

小建中胶囊为我院自制，经我院药房主管药师鉴定。

2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱（4.6 mm×250 mm），十八烷基键合硅胶为填充剂，柱温检测为常温（30℃），检测波长为260 nm，以乙腈-0.1%磷酸（15∶85）溶液为流动相，流速1.0 mL/min，进样量为10 μL。

2.2 对照品溶液制备
精密称取经干燥的芍药苷对照品5.060 mg，置10 mL量瓶中，加无水乙醇，制
成每1 mL含芍药苷0.506 0 mg的对照品溶液。

2.3 供试品溶液制备［2-3］
精密称取经干燥后研细的样品0.6 g，置具塞锥形瓶中，精密加入无水乙醇30 mL，密塞，置40℃恒温水浴中温浸4 h，不时振摇，滤过，滤渣用无水乙醇洗涤5次，
每次10 mL，洗涤液与滤液合并，浓缩并定容于10 mL量瓶中，摇匀即可。

2.4 阴性对照品溶液制备
按本品处方去除白芍，按照制备工艺制成阴性对照品，并按照供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2.5 线性关系学考察
精密称取芍药苷对照品0.5 g，置100 mL容量瓶中，加稀乙醇溶液并稀释至刻度，摇匀，即得标准品储备液。

分别精密吸取上述标准品储备液1.0 mL、2.0 mL、4.0 mL、6.0 mL、8.0 mL、10.0 mL，分别稀释定容于25 mL量瓶中，各取20 μL
注入色谱仪中测定，按上述色谱条件依次进样测定峰面积，以进样量为横坐标，峰面积的积分值为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y=11 078.289X+3.569，
r=0.999 5，芍药苷在0.1 μg/mL～1.2 μg/mL之间呈良好的线性关系。

2.6 精密度实验
精密吸取0.506 0 mg/mL浓度的对照品溶液20 μL，注入液相色谱仪，连续进样
6次，测芍药苷峰面积，结果RSD为1.25%，表明仪器进样精密度良好。

2.7 重现性实验
取相同批次的小建中胶囊，按供试品溶液制备方法制备6份，分别进样20 μL，测峰面积，结果RSD为1.0%，表明测定方法重现性良好。

2.8 稳定性实验
取同一供试样品溶液分别在 0 h、2 h、4 h、8 h、20 h进样20 μL，结果表明供
试品溶液在10 h内稳定性良好。

2.9 加样回收率试验
精密称取6份已知含量的研细样品0.6 g，分别置具塞锥形瓶中，照2.3项方法进行操作，得到6份供试品溶液，分别吸取上述溶液各10 μL，注入液相色谱仪测定，结果见表1。

表1 小建中胶囊中芍药苷含量测定与加样回收率结果?
2.10 样品含量测定
取不同批次的小建中胶囊，照上述方法测定5批样品中芍药苷的含量，结果见表2。

表2 5批样品测定结果?
根据芍药苷测得的结果，将本品中芍药苷含量限度定为本品每丸含芍药苷
（C23H28O11）不得少于28 mg。

3 讨论
中药复方制剂中以芍药苷为指标进行含量测定的报道近年来比较多，研究报道，使用薄层色谱法测定小建中汤复方制剂中芍药苷的含量，其操作复杂，误差大，重现性不佳［4-5］。

我们使用高效液相色谱法进行小建中胶囊中芍药苷含量测定，结果表明选择性好，方法简便成熟。

在检测波长的选择上，芍药苷对照品溶液在
180 nm～600 nm波长范围内，最大吸收波长为260 nm，因此我们选择260
nm作为检测波长。

在流动相上我们比较了甲醇-磷酸二氢钾缓冲溶液、甲醇-磷酸二氢钾缓冲溶液-水、乙腈-磷酸溶液为流动相作试验，结果表明乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相分离效果最好。

在提取方法上我们比较了40℃恒温水浴中温浸4 h和
超声提取芍药苷两种方法，结果表明40℃恒温水浴中温浸的提取率高于超声提取，在该实验中我们采用了40℃恒温水浴中温浸法是可取的。

经实验表明，HPLC测
定小建中胶囊中芍药苷的含量结果准确，精密度、重现性良好，平均回收率为99.895%，RSD为0.9%，故芍药苷可作为小建中胶囊的质量控制指标。

参考文献
［1］许济群，王绵之，许子建，等.方剂学［M］.上海：上海科技出版社，1985：102.
［2］国家药典委员会.中华人民共和国药典［M］.北京：化学工业出版社，2010. ［3］张贵中.常用中药化学鉴定［M］.北京：化学工业出版社，2005：191.
［4］王绮秋.中药制剂成分现代分析法［M］.贵阳：贵州科技出版社，1991：18. ［5］梁宏，王春芳.高效液相色谱法测定八珍丸中芍药苷的含量［J］.药物分析杂志，1999，19（2）：44-45.。