HPLC测定盐酸异丙嗪糖浆中盐酸异丙嗪的含量

HPLC测定盐酸异丙嗪糖浆中盐酸异丙嗪的
含量
作者：彭芳玲，阳利龙，龙荣，胡勤
【摘要】目的：建立高效液相色谱法测定盐酸异丙嗪的含量。

方法：以十八烷基硅烷键合硅胶（4.6 mm×150 mm，5 μm）为色谱柱，以0.5%三乙醇胺溶液（用磷酸调pH至2.5）∶乙腈（65∶35 v/v）为流动相，流速为1.0 mL/min，检测波长为249 nm。

结果：盐酸异丙嗪在 22.8～68.4 μg/mL（r=0.9999）范围内浓度与峰面积呈良好的线性关系，平均回收率为99.97%，RSD为0.45%。

结论：本测定方法简便、快速、准确，重复性好，可以有效控制盐酸异丙嗪糖浆的含量。

【关键词】高效液相色谱法；盐酸异丙嗪糖浆；盐酸异丙嗪；含量测定
［Abstract］ Objective: To establish an HPLC method for determination of promethazine hydrochloride in promethazine hydrochloride syrup. Methods: The chromatographic conditions were a Hypersil BDS C18 column (4.6 mm×150 mm, 5 μm), 0.5% Triethanolamine (with H3PO4 to adjust pH 2.5)∶acetonitrile (65∶35 v/v) as the mobile phase, a flow rate at 1.0 mL/min and a wavelength of 249 nm used for detection. Results: The peak area of promethazine hydrochloride showed a good linearity in the range of 22.8～68.4 μg/mL (r=0.9999). The average recovery was 99.97%, RSD= 0.45% (n=6). Conclusions: This method was simple
and fast and reproducible, and it can be used for quality control of promethazine Hydrochloride syrup.
［Key words］HPLC; Promethazine hydrochloride syrup; Promethazine hydrochloride; Determination
盐酸异丙嗪是常用的组胺H1受体拮抗剂，具有明显的抗过敏和镇静作用，因其不良反应小，临床应用广泛。

本院自制的盐酸异丙嗪糖浆应用于临床多年，主要用于小儿支气管过敏及上呼吸道感染引起的咳嗽。

盐酸异丙嗪属于吩噻嗪类药物，结构中的硫易氧化变色，配制成的糖浆在室温条件下仅能维持6 d［1］，因此，我们在自拟处方中加入了抗氧化剂，为了区分同类产品，防止在调配过程中发生差错，加入了适量色素亮兰。

在一定的条件下，未被氧化的硫与金属离子形成有色配位化合物，采用紫外分光光度法测定其含量［23］，由于加入了色素亮兰和羟苯乙酯，影响其结果，改用HPLC测定其含量，经过多次试验可消除单糖浆、抗氧剂、色素等的干扰，且方法快速、准确、灵敏，可以用于该制剂的质量控制。

1 仪器与试剂
1.1 仪器
Agilent 1100高效液相色谱议（G1311A四元泵，G131A自动进样器，G131A柱温箱，G1311A检测器，Chemstations工作站），BS210S 型电子天平（德国赛多利斯股份公司）。

1.2 试剂
盐酸异丙嗪对照品（中国药品生物制品检定所），甲醇为色谱纯
（天津科密欧化学试剂有限公司），水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯，盐酸异丙嗪糖浆（自制），其他辅料均符合《中国药典》（二部）2005版的规定。

1.3 处方
盐酸异丙嗪2.0 g，亚硫酸氢钠、羟苯乙酯、单糖浆、桔子香精、亮兰适量，纯化水加至1 000 mL。

2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱（大连依利特）：Hypersil BDS C18柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），柱温30 ℃；流动相：0.5%三乙醇胺溶液（用磷酸调pH至2.5）∶乙腈（65∶35 v/v）；流速：1.0 mL/min，检测波长249 nm［4］；进样量10 μL；定量方法为外标法。

2.2 盐酸异丙嗪贮备液的制备
精密称取经105 ℃干燥至恒重的盐酸异丙嗪对照品11.4 mg置100 mL棕色容量瓶中加水溶解至刻度，摇匀，配成0.114 mg/mL的贮备液，用0.45 μm的微孔滤膜过滤，滤液放于冰箱内（2～8 ℃）保存备用。

2.3 空白样品的制备
按处方比例配制不含盐酸异丙嗪的空白溶液，用0.45 μm的微孔滤膜过滤，滤液放于冰箱内（2～8 ℃）保存备用。

2.4 供试品溶液的制备
精取盐酸异丙嗪糖浆2 mL置100 mL容量瓶中，加水定容至刻度，
摇匀，用0.45 μm的微孔滤膜过滤，滤液放于冰箱内（2～8 ℃）保存备用。

2.5 空白干扰试验
在上述色谱条件下，分别进样盐酸异丙嗪对照品（22.8 μg/mL）和盐酸异丙嗪供试品溶液及空白样品各10 μL，盐酸异丙嗪保留时间6.15 min，盐酸异丙嗪峰形尖锐对称，并能与制剂中辅料的色谱峰很好分离，见图1。

2.6 标准曲线的制备
精密称取“2.2”的贮备液2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL分别置10 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。

按上述色谱条件进样10 μL测定，以盐酸异丙嗪峰面积（A）为纵坐标，浓度（C）为横坐标，绘制成标准曲线，得回归方程为A=41.7162C+50.59（r=0.9999），盐酸异丙嗪在22.8～68.4 μg/mL范围内，浓度与峰面积呈良好的线性关系。

2.7 进样精密度试验
精取贮备液配成45.6 μg/mL和57.0 μg/mL的对照品溶液，按上述色谱条件测定，连续进样6次，每次10 μL，测定峰面积，结果表明精密度良好，RSD分别为0.95%和1.2%。

2.8 重复性试验
精取同一批供试品5份，按“2.4”处理样品，按上述色谱条件测定，记录峰面积得RSD=1.1%，结果表明重复性良好。

2.9 稳定性试验
取供试品（批号061110）在室温下放置，分别在0、1、3、6个
月测定峰面积，盐酸异丙嗪的RSD=1.3%，结果表明盐酸异丙嗪糖浆制剂在6个月内稳定。

2.10 加样回收率试验
精密移取已知含量的样品（批号071011，1.93 mg/mL）1 mL 6份，分别置100 mL容量瓶（棕色）中，再分别加入高、中、低3个浓度的盐酸异丙嗪对照品各2份，用蒸馏水定容，摇匀，按样品测定方法测定其含量，计算回收率，见表1。

表1 回收率试验结果
2.11 样品测定
取3批样品分别精取2 mL，均按“2.4”供试品溶液制备，在上述的色谱条件下，测定每一供试品的峰面积，计算含量，结果见表2。

表2 样品测定结果(n＝3)
批号样品含量（mg/mL）平均含量（mg/mL）RSD（%）0709182.082.062.032.061.240710111.931.921.941.930.520711081. 891.911.871.881.25
3 讨论
药典测定盐酸异丙嗪用盐酸（9→1 000）作溶剂定容［4］，本文使用盐酸（9→1 000）和重蒸馏水作为溶剂［56］，分别在200～400 nm范围内扫描，结果显示，两种溶剂作为空白，在200～400 nm 范围内扫描，盐酸异丙嗪的曲线结果一致，且吸收峰强度相同，因此用重蒸馏水代替盐酸，简化了操作步骤，节约了检验成本。

本文对流动相甲醇、水、0.5%三乙醇胺溶液及乙腈的不同比例进行了多次试验，结果表明：选用0.5%三乙醇胺溶液（用磷酸调pH至
2.5）∶乙腈（65∶35 v/v）为流动相能得到满意的色谱效果［79］。

盐酸异丙嗪可采用提取中和法、萃取分光光度法、氯化钯比色法、差示分光光度法等的测定方法［1012］，但大都需经提取分离，操作繁琐、费时，提取所需溶剂量大，易引入误差，本文方法不经任何处理，直接采用HPLC测定盐酸异丙嗪含量，具有专属性强，操作简易，结果准确的优点，符合医院制剂的质量控制要求。

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