青狐尾草丛生芽诱导研究

青狐尾草丛生芽诱导研究
摘要将青狐尾草作为研究C4光合作用的模式植物，其转化体系还不成熟。

由成熟种子胚诱导的愈伤组织再生获得植株效率较低，该试验对比含有不同浓度的6-BA和2，4-D诱导培养基对青狐尾草的丛生芽诱导效果，结果表明：改良后的MS培养基并添加6-BA 2 mg/L和2，4-D 0.5 mg/L组成的诱导培养基效果较好。

因此，为青狐尾草的遗传转化寻找到一种比较好的转化对象。

关键词青狐尾草；丛生芽；6-BA；2，4-D；诱导培养基
青狐尾草是NADP-ME型的C4植物，为单子叶植物[1]，是研究C4光合作用方面具有较大潜能的模式植物[2]。

但在单子叶植物的遗传转化中，利用组织培养获得再生植株效率很低。

因此，该试验探索了丛生芽的诱导浓度。

1 材料与方法
1.1 种子的灭菌及播种
用次氯酸钠溶液灭菌后，将种子稍稍晾干，用药匙均匀撒在MS基本培养基上。

1.2 外植体获得
将培养皿放在培养箱中置于（23±2）℃、黑暗条件下萌发。

3~4 d后种子开始萌发，在胚轴生长到0.5~2.0 cm时，切取幼苗的芽尖放在诱导培养基上诱导丛生芽。

根据姜素云等黑麦草丛生芽的培养方法[3]，设置了含有不同浓度6-BA和2，4-D的诱导培养基（表1）。

MS基本培养基选用康奈尔大学Burtnell实验室培养青狐尾草愈伤组织的MS基本培养基配方。

1.3 培养条件
培养的条件为：18 h时光照，6 h黑暗；光照强度为600~800 lx；温度（23±2）℃。

2周后形成丛生芽块，可看到明显膨大的叶鞘。

将叶鞘和幼叶剥离丛生芽块，计算丛生芽的芽原基数及芽尖数。

2 结果与分析
播种在基本培养基上的青狐尾草种子暗培养3~5 d后，大部分开始萌发。

在黑暗条件下，下胚轴伸长较快，在芽轴长度小于2 cm时将0.5 mm的芽尖切下摆放在诱导培养基上，每皿可摆放25个芽尖。

在丛生芽的诱导过程中，外源激素的浓度配比非常重要。

通过统计诱导出的芽尖数和平均芽原基数，选择效果较好的浓度。

通过对比发现，当2，4-D浓度为0.5 mg/L、6-BA浓度为2 mg/L时，产生丛生芽的芽尖数、平均芽原基数最多。

因此，选择培养基G为诱导培养基（表2）。

3 讨论
在诱导培养过程中，2，4-D与细胞分裂有关，6-BA与植株再生细胞的分化有关[4-6]。

通过对比不同激素组合的诱导培养基的诱导效果，在不含2，4-D和6-BA的培养基中，芽尖很快褐化死亡；在6-BA浓度低于2 mg/L、2，4-D浓度低于0.5 mg/L时，产生丛生芽的芽尖数较少，大部分芽尖死亡；当6-BA浓度高于2 mg/L时，不管2，4-D浓度高低，芽尖切口产生的白色细胞团较小，细胞分裂少，进而产生的丛生芽芽原基很少，而且芽尖容易生长成为绿色叶片，不再具有分裂能力；当6-BA浓度适宜、2，4-D浓度过高时，芽尖切口细胞能力较强，容易分裂膨大为一个细胞团，水渍化严重，后期不容易转变为丛生芽，分化能力不强。

通过对比发现，当2，4-D浓度为0.5 mg/L、6-BA浓度为2 mg/L时，产生丛生芽的芽尖数、平均芽原基数最多。

因此，选择该激素组合添加入诱导培养基中，其与已有的再生体系相比，青狐尾草丛生芽获得再生植株比较容易，被认为是一个比较好的转化材料[7-9]。

4 参考文献
[1] KELLOGG E A.Phylogenetic aspects of the evolution of C4 photosynthesis[M]//R F SAGE，MONSON R K，C4 Plant Biology.San Diego，CA：Academic Press，1999：411-444.
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