乌司他丁对大鼠肢体缺血再灌注性肺损伤的保护作用

乌司他丁对大鼠肢体缺血再灌注性肺损伤的保护作用
刘军;马熠;余相地
【摘要】Objective To investigate the role of pharmacological preconditioning by ulinastatin(UTI) in attenuating remote lung injury in the rats model of lower limb ischmia reperfusion. Methods Sixty-four male SD rats were randomly divided into four groups which were sham operation group(S), ischemia and reperfusion group(I/R), ischemic preconditioning group(IPR)and ulinastatin preconditioning(UTI). Results Immunohistochemical studies revealed an increased SLPI protein content within lungs of rats from the I/R groups with respect to Sham groups (P<0. 05, IHC), a significant expression of SLPI was evident in the IPR groups and UTI groups (when compared with I/ R groups P<0. 01 IHC, P<0. 01, IHC). Moreover, expression of SLPI after 4 hours reperfusion were more than that of 2 hours reperfusion in the IPR groups and UTI groups(P<0. 05). Conclusion Only after 2 hours reperfusion, lung injury can be induced by the limb ischemia, which was pathologically similar to the acute lung injury(ALI). The protective effect of ulinastatin can achieve considerable results with classical ischemic preconditioning%目的探讨乌司他丁对SD大鼠肢体缺血再灌注性肺损伤的保护作用.方法雄性SD大鼠64只,随机分为四组:假手术组(S),缺血再灌注组(I/R),缺血预处理组(IPR)及尿蛋白酶抑制剂(乌司他丁)预处理组(UTI).分别于再灌注2h和4h末取大鼠左肺组织制备石蜡标本,用免疫组化法测定蛋白酶抑制因子(SLPI的半定量和定位表达.结果免疫组化显示,与S组相比,I/R 组再灌注2、4 h可见SLPI保护蛋白有少量的表达(P<0. 01), IPR组及UTI组明显
上调SLPI的表达并达到保护肺损伤的作用(P<0. 0l),与再灌注2h相比,再灌注4h
仍可见其高表达状态(P<0. 05).结论大鼠肢体缺血2h再灌注2 h可引起远隔肺损伤,其病理表现类似急性肺损伤(ALI).乌司他丁的保护作用可以达到与经典缺血预处理相当的结果.
【期刊名称】《贵州医药》
【年(卷),期】2018(042)002
【总页数】2页(P146-147)
【关键词】词缺血预处理;乌司他丁;缺血再灌注
【作者】刘军;马熠;余相地
【作者单位】贵州省人民医院心外科, 贵州贵阳 550003;贵州省人民医院麻醉科,
贵州贵阳 550003;贵州省人民医院麻醉科, 贵州贵阳 550003
【正文语种】中文
【中图分类】R614
本文通过动物实验研究UTI对肢体缺血再灌注性肺损伤的保护作用，旨在探求一
种防治肢体缺血再灌注损伤的新途径。

1 材料和方法
1.1 实验动物、模型建立及分组雄性SD大鼠64只，随机分为四组：假手术组(S)、缺血再灌注组(I/R)、缺血预处理组(IPR)及尿蛋白酶抑制剂(乌司他丁)预处理组(UTI)。

假手术组(S,n=16)：仅钝性分离双侧腹股沟三角处股动脉，不予夹闭，作
为时间对照，术中使用公斤体质量1/3～1/2的水合氯醛维持麻醉至无体动反应。

缺血再灌注组(I/R,n=16)：股动脉夹闭前30 min颈内静脉给予生理盐水1 mL作
为溶剂对照。

制作双下肢缺血2 h、再灌注2 h(n=8)和4 h(n=8)模型。

缺血预处
理组(IPR,n=16)：股动脉夹闭前30 min实施缺血5 min、再灌注5 min，循环3次后余同I/R组。

乌司他丁处理组(UTI)：股动脉夹闭前30 min，颈内静脉给予公斤体质量50 000 U的乌司他丁，再灌注前10 min再给予公斤体质量50 000 U
的乌司他丁，余同I/R组。

分别于再灌注2 h和4 h末取大鼠左肺组织制备石蜡标本，用免疫组化法测定SLPI的半定量和定位表达(n=8)。

1.2 免疫组织化学测定Ⅱ套切片采用SP法测定大鼠肺SLPI的半定量和定位表达
的表达。

1.3 统计学方法全部数据以表示。

多组间比较用单因素方差分析，最小显著差数
法(LSD)行两两比较。

用SPSS16.0统计软件包进行数据处理，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果
大鼠肺组织SLPI的定位和半定量表达：SLPI的表达主要在肺支气管上皮细胞、血管内皮细胞及炎症细胞，肺泡上皮细胞也可见表达。

I/R组可见其低水平表达状态与S组比较差异有统计学意义(P<0.01)，IPR组和UTI组SLPI表达水平都较I/R
组明显增加(P<0.01)，且再灌注4 h时IPR组和UTI组都较再灌注2 h表达升高
明显(P<0.05)。

见表1，图1。

表1 SD大鼠肺组织SLPI的表达变化组别再灌注后2h再灌注后4hS组
7．5±2．015．3±3．9∗I/R组11．9±3．3#29．1±1．2#∗IPR组
36．4±1．7#▲100．2±3．0#▲∗UTI组44．2±1．7#▲89．9±4．1#▲∗
注：与S组相比，#P<0.01；与I/R组相比，▲P<0.01；与前组相比，*P<0.05。

图1 乌司他丁对SD大鼠肢体缺血再灌注性肺组织病理学变化的影响
3 讨论
本实验证实了肢体缺血2 h、再灌注2或4 h可以引起远隔肺损伤，其主要表现为血管通透性的增加和中性粒细胞的炎症浸润，病理表现同急性肺损伤。

SLPI的表
达上调有助于减轻肺损伤，其表达主要分布在支气管上皮细胞、炎症细胞，肺泡上皮细胞也可见少量表达。

缺血预处理(IPR)是在组织器官长时间的缺血再灌注前实
施短暂的缺血/再灌注循环或者给予一定的药物干预，提前调动机体的内源性保护
作用，而且其对远隔脏器的损伤也起到了保护作用。

乌司他丁是一种广谱的蛋白水解酶抑制剂，可以抑制体内多种蛋白水解酶的活性；调节炎症细胞因子的释放，抑制中性粒细胞的激活、黏附和跨内皮迁移，减少炎细胞浸润；在抑制中性粒细胞组织毒性物质释放等过程中发挥多层次的抗炎作用；抑制心肌抑制因子(MDF)的产生，改善微循环、稳定溶酶体膜，抑制溶酶体酶的释放、清除氧自由基等功能。

临床和动物试验均检测到乌司他丁能抑制多种器官缺血再灌注过程中细胞因子IL-6、IL-8、TNF-α的过度生成及ICAM-1的表达[1-2]，明显减轻中性粒细胞在器官内黏附、浸润，改善器官缺血再灌注损伤。

SLPI是一种可以对抗各种丝氨酸蛋白酶活性的12kDa阳离子蛋白，其羧基末端具有抑制糜蛋白酶、胰弹性蛋白酶活性，氨基末端具有抗细菌、抗真菌、抗逆转录病毒活性[3]等作用。

SLPI的抗炎活性主要表现为下调脂多糖引起的单核细胞、巨噬
细胞等的TNF、IL-1、NF-ΚB、IL-8、IL-10等多种炎症因子的表达[4]。

近来研究[5]发现，SLPI可通过生长增殖、细胞凋亡、组织改建等多种途径来调控创伤微环境。

已有研究[6]表明乌司他丁能够促进SLPI在组织中的表达，从而对组织损伤产生一定的保护作用。

综上，本实验证实乌司他汀预处理能够减轻大鼠肢体缺血再灌注引起的肺损伤，但其机制尚需要进一步证实。

参考文献
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