三黄鸡免疫重组禽流感病毒（H5+H7)二价灭活疫苗血清抗体检测试验报告

与血清抗体检测试验。本试验的完成不仅可以了解贺州 市不同地区三黄鸡养殖场的 H5 及 H7 亚型禽流感抗体水 平，还可以根据检测结果，了解抗体消长规律，指导养 殖场制定合理的免疫程序，为有效的防控禽流感的发生 与流行提供参考依据。
一、材料与方法
1. 试验鸡群。在贺州市选择 4 家饲养水平良好的三 黄鸡规模化养殖场，分别标记为 A 场、B 场、C 场、D 场， 全部采用全进全出养殖模式，养殖规模为 9000-27000 只。
较强的数据综合分析能力。 我国各省市、区县每年都要投入大量的资金来支持
重大动物疫病防控免疫效果的评估工作，但检测结果常 因疫苗来源的不同、检测方法及检测试剂不一致造成一 定的偏差，尤其是在样本较少的情况下，检测结果的差 异化更加明显。所以，笔者认为通过运用不同方法进行 试验比对，探索出一套免疫抗体监测体系，能够更客观 的评价疫苗质量，更全面的评估疫苗免疫效果及免疫效 力，为疫苗用户提供更为优质化的技术服务。
日龄
离散度
别
数量 阳性数量 率 % 值 (log2)
60( 第 0 d) 60 60
0
0.00
0
75( 第 15 d) 60 60 100% 7.73 0.078
A 90( 第 30 d) 60 60 100% 9.27 0.093
105( 第 45 d) 60 60 100% 6.30 0.188
二、结果与分析
1.H5 亚型血清抗体检测结果。1500 份血清样品的 H5 亚型血清抗体检测结果见表 1 和图 1。结果表明：该 疫苗免疫三黄鸡后，可较好的刺激机体产生 H5 HI 抗体， 且四个场的 HI 抗体消长规律基本一致，其平均抗体水平 均呈现随日龄增加先上升后下降再平稳回升的明显变化。 一免后 H5 HI 抗体迅速上升，在一免后第 15 d 时，四个 场的抗体均可达到平均抗体滴度 5.0 log2 以上的合格水 平。加强免疫后（一免后第 21 d），H5 HI 抗体迅速升 高，该疫苗在加强免疫后第 9 d（一免后第 30 d）H5 HI
图 1 不同日龄 H5 亚型血清抗体平均值的变化曲线 2.H7 亚型血清抗体检测结果。1 500 份血清样品的 H7 亚型血清抗体检测结果见表 2 和图 2。结果表明：该 疫苗免疫三黄鸡后，可较好的刺激机体产生 H7 HI 抗体，
表 1 H5 亚型血清抗体的检测结果
组
检测 H5 抗体 阳性 抗体平均
5. 抗 体 测 定。 检 测 方 法 及 结 果 判 定 参 照 GB/ T18936-2003 高致病性禽流感诊断技术进行。
抗体水平达到高峰，此时 A、B、C、D 四个场的 H5 HI 抗体滴度分别为 9.27 log2、6.88 log2、8.15 log2、9.10 log2； 到加强免疫后第 39 d（一免后第 60 d）H5 HI 的抗体水 平均保持在 6.0 log2 以上。此外，在一免后第 15 ～ 60 d 期间四个养殖场的抗体阳性率均高于 80%。
2. 试验疫苗。重组禽流感病毒 (H5+H7) 二价灭活 疫苗，简称（H5+H7）二价灭活苗（下同），为国内某 厂家生产，生产批号为：2017103。
3. 检测试剂。禽流感 H5 亚型、H7 亚型血凝抑制（HI） 试验抗原及标准阳性血清购自哈尔滨维科生物技术有限 责任公司。鸡红细胞混悬液（1%）及磷酸盐缓冲液（PBS） 由本实验室自行配制。
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兽医实验室 20ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ8 年第 10 期

4. 试验分组与采样。A、B、C、D 四家养殖场鸡只 均在 60 日龄时进行第一次免疫，一免后第 21 d 进行第二 次免疫，两次免疫的免疫剂量均为 0.5 ml/ 羽，采取颈 部皮下注射进行免疫接种。各场分别在免疫后第 0 d、第 15 d、第 30 d、第 45 d、第 60 d 随机选择 60 只鸡，翅静 脉采血 2 ml/ 羽，分离血清后 -20℃保存，统一检测。
使用口蹄疫全病毒作为结合抗原，全病毒含有结构蛋白 和非结构蛋白，相比竞争 ELISA 方法反应程度更强。但 随着稀释滴度的增加，抗原抗体反应特异性更加明显， 受客观客观因素的影响会越来越小，两种方法测得的抗 体效价对应关系趋于稳定。
两 种 方 法 都 通 过 仪 器 设 备 判 定 结 果， 无 人 为 因 素 干 扰， 这 样 会 大 大 提 高 检 测 结 果 的 准 确 性。 相 比 竞 争 ELISA 方法，液相 ELISA 操作步骤繁多，试验所需时间 长，同时要求检测人员技术熟练，要求技术评估人员有

2018 年第 10 期 兽医实验室
三黄鸡免疫重组禽流感病毒 (H5+H7) 二价 灭活疫苗血清抗体检测试验报告
李志贤 虞与理 禹婷婷 / 广西贺州市动物疫病预防控制中心
禽流感（avian influenza，AI）是禽流感病毒（AIV） 感染家禽后引起的各种综合征，从无临床症状感染到呼 吸道疾病和产蛋下降，到死亡率接近 100% 的严重全身 性疾病不等。根据禽流感病毒的致病性和毒力的不同， 可将其分为高致病性禽流感（HPAI），低致病性禽流感 （LMPAI）。高致病性禽流感可导致严重的家禽群体发病 和死亡，不仅给家禽养殖业带来毁灭型的打击，还可以 不断地跨种间传播感染人类，人感染后死亡率高达 60%。 其中 H5N1 与 H7N9 就是近年两种常见人禽共患禽流感 病毒亚型。且 H7N9 流感病毒已由原来的对禽的低致病 性变异为高致病性，自 2016 年 12 月～ 2017 年 5 月，两 广地区出现暴发式禽流感 H7N9 疫情，并且多地有人感 染 H7N9 的报道。我国决定从 2017 年秋季起，在家禽全 面免疫禽流感 H5 的基础上，逐步全面开展 H7N9 免疫。 为了解重组禽流感病毒 (H5+H7) 二价灭活苗免疫在不同 地区不同养殖场的免疫效果，本试验团队于 2017 年 10 月， 在贺州市随机选取了 4 个三黄鸡养殖场开展了疫苗免疫