定量测定蛋白质含量的方法及原理
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定量测定蛋白质含量的方法及原理
在生物化学和分子生物学研究中,准确测定样品中蛋白质的含量至关重要。
本文将介绍几种常用的定量测定蛋白质含量的方法及其原理。
1. 琼脂糖凝胶电泳法。
琼脂糖凝胶电泳法是一种经典的方法,用于估计样品中蛋白质的含量。
其步骤包括:
1. 制备样品:将样品以一定比例加入变性剂,使蛋白质变性并均匀分散。
2. 电泳分离:将变性后的样品加载到琼脂糖凝胶中,利用电场将蛋白质分离成带状,根据蛋白质的迁移距离估算其含量。
3. 染色与显影:使用蛋白质染色剂如银染法或共染法,显现蛋白带,通过比较样品带的强度与已知浓度的标准品带进行定量分析。
2. BCA法(双硫键还原比特琳腙试剂法)。
BCA法是一种常用的化学法测定蛋白质含量,其基本原理如下:
1. 还原与螯合:试剂中的Cu^2+离子在还原剂的作用下被还原为Cu^1+,并与蛋白质中的蛋白质中的蛋白质中的蛋白质中的蛋白质中的蛋白质中的蛋白质中的。