柳树寄生提取物抗菌及抗肿瘤活性研究
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于 ２０ ｍＬ ＬＢ 液体培养基中，３７ ℃ １８０ 摇床培养 ６ ｈ，用 ＬＢ 液
体培养基稀释成 １×１０５ ＣＦＵ ／ ｍｌ 菌悬液。
本研究采用的是微量稀释法检测提取液的体外抑菌活
性。 称取适量的待测提取物，用 ＤＭＳＯ 配制成 ５０ ｍｇ ／ ｍＬ 的
基金项目：１． 昆明学院人才引进项目：绒毛钟花蓼提取物药理活性研究，编号为 ＹＪＬ１８００４；２． 云南省教育厅科学研究基
凋亡，抑制肿瘤细胞的增殖、迁移。 桑寄生多种溶剂的萃取
物在体外对 Ｋ５６２ 细胞有抑制增殖的作用，柳树寄生的内生
真菌也具有抑制肿瘤的效用。
综上所述，不同寄主桑寄生的提取物也具有明显的抗
炎、抗肿瘤、抗病毒等功效。 而柳树寄生作为常见的桑寄生
科植物之一，其提取物是否也具有抗炎、抗肿瘤以及抗菌活
性呢，这需要进一步验证。 故笔者利用柳树寄生分离得到不
的抑制作用，而 Ｌ－４、Ｌ－５ 和 Ｌ－６ 无抑制作用，其中 Ｌ－２ 的抑
制作用较好，对 ｈｅｌａ 和 ＨＣＴ１１６ 细胞抑制作用较强。
ｅｌａ
Ｈ４６０
ｈｅｐｇ－２
Ｌ－１（ ｍｇ ／ ｍｌ）
Ｌ－２（ ｍｇ ／ ｍｌ）
Ｌ－３（ ｍｇ ／ ｍｌ）
［４］ 肖义军，陈元仲，陈炳华，陈建华，林振兴，范延丽．不
同寄主红花桑寄生总黄酮提取物抗白血病细胞株 ＨＬ－６０ 的
研究［ Ｊ］ ．中国中药杂志，２００８（４） ：４２７－４３２．
［５］ Ｈｗａ Ｊｕｎｇ Ｃｈｏｉ，Ｊａｅ Ｈｙｏｕｎｇ Ｓｏｎｇ，Ｋｗｉ Ｓｕｎｇ Ｐａｒｋ，Ｄｕｒ
Ｈａｎ Ｋｗｏｎ．Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ ３－ｒｈａｍｎｏｓｉｄｅ ｏｎ ｉｎｆｌｕ⁃
省昆明市轿子雪山，除去杂质后自然阴干，并通过云南省中
①
国科学院植物所博士殷根深博士鉴定。
（ 二） 菌株、细胞及试剂
大肠杆菌 ＡＴＣＣ２５９２２、金黄色葡萄球菌 ＡＴＣＣ ２５９２３、枯
草芽孢杆菌 ＡＴＣＣ ６０５１ 均购于上海药物研究所。 肝癌细胞
ＨＥＰＧ２、结肠癌细胞 ＨＣＴ１１６、宫颈癌细胞 ＨＥＬＡ、肺癌细胞
ｈｅｐｇ－２ 生长的抑制作用，计数，以 １ × １０ ５ ｃｅｌｌｓ ／ ｗｅｌｌ 铺 ９６ 孔
板，置于 ５％ ＣＯ２ 、３７℃ 培养箱培养过夜，次日加 １μＬ 不同浓
度的提取物（４０、２０、１０、５ 、２．５ 、１．２５ ｍｇ ／ ｍＬ） 使其终浓度变
４００、２００、１００、５０、２５、１２． ５ μｇ ／ ｍＬ；空白对照加等体积 ＤＭＳＯ
金项目：一聚酮类化合物抗炎活性及机制研究，其编号为 ２０１９Ｊ０５７０；３． 云南省地方高校联合专项面上项目：水蛭麻醉镇痛消炎
活性成分的分离鉴定及活性机制研究，其编号为 ２０１９ＦＨ００１（ －０４４） ；（ 在研）４． 昆明学院人才引进项目：自溶链霉菌中新型抗肿
瘤药物自溶霉素的遗传改造，编号为 ＹＪＬ１８００６。
广西、西藏等地，具有补肝肾，祛风湿、止血、安胎等功效，常
用于治疗头晕目眩、腰膝疼痛、风湿麻木、崩漏、胎动不安。
近来研究发现，黄酮类化合物具有多方面的抗菌抗肿瘤作
用，而桑寄生科的植物普遍富含黄酮类化合物，但不同寄主
的桑寄生科植物所含黄酮类化合物的含量不同。 现如今对
不同寄主的桑寄生研究发现，从红花桑寄生中所提取到的总
乙酯、正 丁 醇 等 有 机 试 剂 均 购 于 上 海 生 工 生 物 工 程 有 限
公司。
（ 三） 仪器
酶标仪（ 美国 ＢＯＴＥＫ 公司） ，二氧化碳培养箱 （ Ｔｈｅｒｍｏ
ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ 公司） ，灭菌锅，倒置显微镜，紫外超净台，离心机，
恒温培养箱。
三、 方法
（ 一） 提取物的制备
将柳树寄生全株粉碎称取 １４１ｇ 干燥的柳树寄生捣，加
Ｈ４６０ 均购于上海药物研究所。 ＤＭＥＭ 培养基、胎牛血清、Ｌ－
谷氨酰胺溶液、胰蛋白酶溶液（０．０５％ ） 含酚红、青霉素－链霉
素溶液（ 双抗） 均购于 Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｄｉｃａｔｏｒ 公司，四甲基偶氮
唑盐（ ＭＴＴ） 、二甲基亚砜（ ＤＭＳＯ） 均购于碧云天生物试剂公
司，蛋白胨、酵母提取物、牛肉膏和琼脂，乙醇、石油醚、乙酸
微量稀释法检测柳树寄生各极性萃取部位抑菌活性并测定其 ＭＩＣ（ 最小抑菌浓度） 值。 结果显示，柳树寄生的乙醇提取物、石油
醚提取物及乙酸乙酯提取物具有抗肿瘤及抗细菌活性，其中石油醚提取物具有较好的抗细菌活性，而二氯甲烷提取物、正丁醇
提取物、水提取物均无明显抗细菌、抗肿瘤活性。
关键词：柳树寄生；抗菌；抗肿瘤
２５０
２５０
６３
３２
６３
Ｌ－４（ μｇ ／ ｍＬ）
＞５００
＞５００
＞５００
Ｌ－６（ μｇ ／ ｍＬ）
＞５００
＞５００
＞５００
Ｌ－５（ μｇ ／ ｍＬ）
环丙沙星（ μｇ ／ ｍＬ）
＞５００
＜２
＞５００
＜２
＞５００
＜２
由结果可知，柳树寄生提取物 Ｌ－１、Ｌ－２ 和 Ｌ－ ３ 均有抗
细菌活性，其中 ＭＩＣ 最小的是 Ｌ－２ 这个组分，而 Ｌ－４、Ｌ－５ 和
黄酮提取物具有抗白血病的功效，从其他桑寄生中提取的槲
皮素 、槲皮苷等具有抗病毒的功效，而柳树作为其常见寄
主，寄生在柳树上的桑寄生可以积累柳树的水杨苷成分，增
强祛风湿的功效，更能有效提高水杨酸的提取率，这也使柳
树寄生得到了越来越多的关注。 桑寄生抗肿瘤作用明显，其
浸膏剂有明显降压作用，而桑寄生中槲皮素可诱导肿瘤细胞
一、 引言
柳树寄生是一种民间常用的中药材，为桑寄生科植物柳
叶钝果寄生（ Ｔａｘｉｌｌｕｓ ｄｅｌａｖａｙｉ（ ｖａｎ Ｔｉｅｇｈ．） Ｄａｎｓｅｒ） 的带叶茎
枝。 生长于海拔 １５００ ～ ３５００ ｍ 的高原或山地阔叶林或针叶、
阔叶混交林中，寄生于花楸、山楂、樱桃、梨树、桃树、马桑或
柳属、桦属、栎属、槭属、杜鹃属等植物上，主要分布于西南及
京：中国医药科技出版社，２０１５．
［２］ 汪晶． 桑 寄 生 研 究 概 况 ［ Ｊ］ ． 实 用 中 医 内 科 杂 志，
２０１８，３２（１） ：７４－７７．
［３］ 朱开昕，卢栋，裴河欢，赵明惠，李永华． 桑寄生在广
西的分布及其寄主状况调查［ Ｊ］ ． 广西中医药，２０１０，３３（ ２） ：
５９－６１．
ａｕｒｅｕｓ） 。 用的测试方法是微板观察法检测其 ＭＩＣ 值，用阳
性药环丙沙星处理作为阳性对照，其结果如下表所示。 由结
果可知乙醇提取部位、石油醚和二氯甲烷提取部位对大肠杆
菌、枯草芽孢杆菌以及金黄色葡萄球菌生长均有抑制作用。
其中，石油醚提取部位的活性较好，对大肠杆菌的抑制作用
最强，其最小抑菌浓度为 ３２ μｇ ／ ｍＬ。
４）０．７０３ｇ， 正 丁 烷 提 取 物 （ Ｌ － ５） ０． １５ｇ， 水 提 取 物 （ Ｌ － ６）
０．１２６ｇ，乙醇提取物（ Ｌ－１）５．００ｇ。
（ 二） 体外抑菌活性检测
分别将大肠杆菌、金黄色葡萄球菌以及枯草芽孢杆菌接
种于 ＬＢ 固体培养基，３７ ℃ 培养 ２４ｈ 后，挑取单菌落 ２ ～ ３ 个
·１７６·
综 述
储存液，并用 ０．２２ μｍ 微孔滤膜过滤。 取无菌的 ９６ 孔板，外
周 ３６ 孔分别加入 １００ μＬ 无菌水，其余每孔加入 １００ μＬ １×
１０５ ＣＦＵ ／ ｍｌ 菌悬液。 用 ＤＭＳＯ 倍比稀释上述药物储存液，获
处理，每组重复 ３ 个复孔。 继续培养 ４８ ｈ，加 ２０ μＬ ５ ｍｇ ／
ｍＬ ＭＴＴ 继续培养 ４ ｈ 后，弃去培养液，加入 １５０ μＬ ＤＭＳＯ
低速摇床上震荡 １０ ｍｉｎ，待紫色结晶充分溶解后，在 ５７０ ｎｍ
测 ＯＤ 值（ Ａ） ，将 Ａ 值作为反映细胞活性及代谢状况的参
数，各实验重复三次，抑制率按公式（２） 进行计算。
入 ９５％ 的乙醇浸没材料，超声提取 ３０ 分钟，过滤得到乙醇提
取液，该过程重复三次。 将三次超声提取得到的乙醇提取液
减压浓缩成浸膏（５ｇ） ；加入适量的水溶解浸膏，得到的乙醇
提取物水溶液依次使用石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、正丁烷
萃取，再将各溶剂萃取液经减压浓缩得石油醚提取物（ Ｌ－２）
０．５３７ｇ，乙酸乙酯提取物（ Ｌ－ ３） １．０５３ｇ，二氯甲烷提取物（ Ｌ－
生长抑制率％ ＝ Δ 空白对照－ΔＡ 待测提取物 ΔＡ 空白对
照×１００％ （２）
利用 ＳＰＳＳ 软件求算 ＩＣ ５０ 值（ 抑制率达到 ５０％ 时的药
物浓度） 。
四、 结果与分析
（ 一） 不同提取物的抗菌活性
本实验采用的受试菌株为枯草杆菌（ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ） 、
大肠杆菌（ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ） 、金黄色葡萄球菌（ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ
储存液，倍比 稀 释 储 存 液， 获 得 浓 度 分 别 为 ０． ８、 ０． ４、０． ２、
０．１、 ０．０５、 ０．０２５、 ０．０１２５、 ０．００６２５ ｍｇ ／ ｍＬ 的工作溶液，分别
加入 ９６ 孔板中，每孔 １ μＬ，使其终浓度分别为 ８、４、２、 １、
０．５、０．２５、 ０．１２５、０．０６２５ μｇ ／ ｍＬ。 ＤＭＳＯ 作空白对照，且每个
Ｌ－６ 在浓度为 ５００ ｍｇ ／ ｍＬ 时均无明显抗细菌活性。
（ 二） 不同提取物的抗癌活性
本实验采用的是经典的 ＭＴＴ 法检测柳树寄生各组分提
取物对几种肿瘤细胞（ ＨＣＴ１１６、ｈｅｌａ、Ｈ４６０、ｈｅｐｇ － ２） 细胞的
成活率的影响。 其结果如下表所示。 结果表明，柳树寄生提
取物中 Ｌ－１、Ｌ－２ 和 Ｌ－３ 对四种肿瘤细胞生长均有不同程度
梯度设 ３ 个复孔，慢慢混匀。 然后将该 ９６ 孔板置于 １２０ ｒ ／
ｍｉｎ 的 ３７℃ 恒温摇床培养，２４ ｈ 后观察菌体生长情况，检测
药物的抗细菌 ＭＩＣ 值。
（ 三） 体外抗肿瘤活性检测
实验采用 ＭＴＴ 法检测细胞的存活率。 首先检测六个不
同提 取 物 ５００ μｇ ／ ｍＬ 对 四 种 癌 细 胞 ＨＣＴ１１６、 ｈｅｌａ、 Ｈ４６０、
同极性试剂萃取物，同时对其抗菌和抗肿瘤活性进行筛选，
这一结果对其药用价值的研究提供一定的理论依据，也为后
续分离纯化抗菌及抗肿瘤单体药物的提供更多的生物资源。
二、 材料与仪器
（ 一） 药材
柳树寄生，又叫柳叶钝果寄生，是桑寄生科簇生叶组灌
木植物，植物的全株可供药用，出自《 贵州中草药名录》 ，具有
补肝肾，祛风湿，止血，安胎之功效。 药材于夏季采集于云南
得浓度分别为 ５０、２５、１２．５、６．２５ 、３．１２５ 、１．５６２ ｍｇ ／ ｍＬ 的工作
溶液，分别加入 ９６ 孔板菌悬液中，每孔 １ μＬ，使其终浓度为
５００、２５０、１２５、６２．５、３１．２５、１５．６２ μｇ ／ ｍＬ。 同时，选取环丙沙星
作为阳性对照，称取环丙沙星，用 ＤＭＳＯ 配制成 ８ ｍｇ ／ ｍＬ 的
表 １ 各提取物 ＭＩＣ 值
提取物编号
Ｌ－１（ μｇ ／ ｍＬ）
Ｌ－２（ μｇ ／ ｍＬ）
Ｌ－３（ μｇ ／ ｍＬ）
枯草杆菌
大肠杆菌
金黄色葡萄球菌
（ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ） （ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）（ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）
１２５
１２５
２５０
１２５
３９．１７５±０．３２
４３±０．３５
３６．９±０．１５
２５．９９６±０．２５
２１２．９±０．２７
２１９．５±０．３４
６８．２±０．２８
１０５．９±０．１５
１５８．１±０．１６
１０５．２±０．１４
１０８．２±０．１４
１１８．３±０．１８
（ 通讯作者：蒋明星）
参考文献：
［１］ 国家药典委员会．中华人民共和国药典：一部［ Ｓ］ ．北
ｅｎｚａ Ａ ｖｉｒｕｓ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ［ Ｊ］ ．Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ
柳树寄生提取物抗菌及抗肿瘤活性研究
①
毕晓旭 张国斌 苏源 蒋明星
摘 要：文章研究中药柳树寄生枝条不同极性溶剂萃取部位（ 石油醚部位、乙酸乙酯部位、二氯甲烷部位、正丁醇部位） 的抗
菌和抗肿瘤活性，采用 ＭＴＴ 法检测柳树寄生各极性萃取部位对肿瘤细胞（ ＨＣＴ１１６、ｈｅｌａ、Ｈ４６０、ｈｅｐｇ－２） 细胞增殖的抑制率，采用
体培养基稀释成 １×１０５ ＣＦＵ ／ ｍｌ 菌悬液。
本研究采用的是微量稀释法检测提取液的体外抑菌活
性。 称取适量的待测提取物，用 ＤＭＳＯ 配制成 ５０ ｍｇ ／ ｍＬ 的
基金项目：１． 昆明学院人才引进项目：绒毛钟花蓼提取物药理活性研究，编号为 ＹＪＬ１８００４；２． 云南省教育厅科学研究基
凋亡，抑制肿瘤细胞的增殖、迁移。 桑寄生多种溶剂的萃取
物在体外对 Ｋ５６２ 细胞有抑制增殖的作用，柳树寄生的内生
真菌也具有抑制肿瘤的效用。
综上所述，不同寄主桑寄生的提取物也具有明显的抗
炎、抗肿瘤、抗病毒等功效。 而柳树寄生作为常见的桑寄生
科植物之一，其提取物是否也具有抗炎、抗肿瘤以及抗菌活
性呢，这需要进一步验证。 故笔者利用柳树寄生分离得到不
的抑制作用，而 Ｌ－４、Ｌ－５ 和 Ｌ－６ 无抑制作用，其中 Ｌ－２ 的抑
制作用较好，对 ｈｅｌａ 和 ＨＣＴ１１６ 细胞抑制作用较强。
ｅｌａ
Ｈ４６０
ｈｅｐｇ－２
Ｌ－１（ ｍｇ ／ ｍｌ）
Ｌ－２（ ｍｇ ／ ｍｌ）
Ｌ－３（ ｍｇ ／ ｍｌ）
［４］ 肖义军，陈元仲，陈炳华，陈建华，林振兴，范延丽．不
同寄主红花桑寄生总黄酮提取物抗白血病细胞株 ＨＬ－６０ 的
研究［ Ｊ］ ．中国中药杂志，２００８（４） ：４２７－４３２．
［５］ Ｈｗａ Ｊｕｎｇ Ｃｈｏｉ，Ｊａｅ Ｈｙｏｕｎｇ Ｓｏｎｇ，Ｋｗｉ Ｓｕｎｇ Ｐａｒｋ，Ｄｕｒ
Ｈａｎ Ｋｗｏｎ．Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ ３－ｒｈａｍｎｏｓｉｄｅ ｏｎ ｉｎｆｌｕ⁃
省昆明市轿子雪山，除去杂质后自然阴干，并通过云南省中
①
国科学院植物所博士殷根深博士鉴定。
（ 二） 菌株、细胞及试剂
大肠杆菌 ＡＴＣＣ２５９２２、金黄色葡萄球菌 ＡＴＣＣ ２５９２３、枯
草芽孢杆菌 ＡＴＣＣ ６０５１ 均购于上海药物研究所。 肝癌细胞
ＨＥＰＧ２、结肠癌细胞 ＨＣＴ１１６、宫颈癌细胞 ＨＥＬＡ、肺癌细胞
ｈｅｐｇ－２ 生长的抑制作用，计数，以 １ × １０ ５ ｃｅｌｌｓ ／ ｗｅｌｌ 铺 ９６ 孔
板，置于 ５％ ＣＯ２ 、３７℃ 培养箱培养过夜，次日加 １μＬ 不同浓
度的提取物（４０、２０、１０、５ 、２．５ 、１．２５ ｍｇ ／ ｍＬ） 使其终浓度变
４００、２００、１００、５０、２５、１２． ５ μｇ ／ ｍＬ；空白对照加等体积 ＤＭＳＯ
金项目：一聚酮类化合物抗炎活性及机制研究，其编号为 ２０１９Ｊ０５７０；３． 云南省地方高校联合专项面上项目：水蛭麻醉镇痛消炎
活性成分的分离鉴定及活性机制研究，其编号为 ２０１９ＦＨ００１（ －０４４） ；（ 在研）４． 昆明学院人才引进项目：自溶链霉菌中新型抗肿
瘤药物自溶霉素的遗传改造，编号为 ＹＪＬ１８００６。
广西、西藏等地，具有补肝肾，祛风湿、止血、安胎等功效，常
用于治疗头晕目眩、腰膝疼痛、风湿麻木、崩漏、胎动不安。
近来研究发现，黄酮类化合物具有多方面的抗菌抗肿瘤作
用，而桑寄生科的植物普遍富含黄酮类化合物，但不同寄主
的桑寄生科植物所含黄酮类化合物的含量不同。 现如今对
不同寄主的桑寄生研究发现，从红花桑寄生中所提取到的总
乙酯、正 丁 醇 等 有 机 试 剂 均 购 于 上 海 生 工 生 物 工 程 有 限
公司。
（ 三） 仪器
酶标仪（ 美国 ＢＯＴＥＫ 公司） ，二氧化碳培养箱 （ Ｔｈｅｒｍｏ
ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ 公司） ，灭菌锅，倒置显微镜，紫外超净台，离心机，
恒温培养箱。
三、 方法
（ 一） 提取物的制备
将柳树寄生全株粉碎称取 １４１ｇ 干燥的柳树寄生捣，加
Ｈ４６０ 均购于上海药物研究所。 ＤＭＥＭ 培养基、胎牛血清、Ｌ－
谷氨酰胺溶液、胰蛋白酶溶液（０．０５％ ） 含酚红、青霉素－链霉
素溶液（ 双抗） 均购于 Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｄｉｃａｔｏｒ 公司，四甲基偶氮
唑盐（ ＭＴＴ） 、二甲基亚砜（ ＤＭＳＯ） 均购于碧云天生物试剂公
司，蛋白胨、酵母提取物、牛肉膏和琼脂，乙醇、石油醚、乙酸
微量稀释法检测柳树寄生各极性萃取部位抑菌活性并测定其 ＭＩＣ（ 最小抑菌浓度） 值。 结果显示，柳树寄生的乙醇提取物、石油
醚提取物及乙酸乙酯提取物具有抗肿瘤及抗细菌活性，其中石油醚提取物具有较好的抗细菌活性，而二氯甲烷提取物、正丁醇
提取物、水提取物均无明显抗细菌、抗肿瘤活性。
关键词：柳树寄生；抗菌；抗肿瘤
２５０
２５０
６３
３２
６３
Ｌ－４（ μｇ ／ ｍＬ）
＞５００
＞５００
＞５００
Ｌ－６（ μｇ ／ ｍＬ）
＞５００
＞５００
＞５００
Ｌ－５（ μｇ ／ ｍＬ）
环丙沙星（ μｇ ／ ｍＬ）
＞５００
＜２
＞５００
＜２
＞５００
＜２
由结果可知，柳树寄生提取物 Ｌ－１、Ｌ－２ 和 Ｌ－ ３ 均有抗
细菌活性，其中 ＭＩＣ 最小的是 Ｌ－２ 这个组分，而 Ｌ－４、Ｌ－５ 和
黄酮提取物具有抗白血病的功效，从其他桑寄生中提取的槲
皮素 、槲皮苷等具有抗病毒的功效，而柳树作为其常见寄
主，寄生在柳树上的桑寄生可以积累柳树的水杨苷成分，增
强祛风湿的功效，更能有效提高水杨酸的提取率，这也使柳
树寄生得到了越来越多的关注。 桑寄生抗肿瘤作用明显，其
浸膏剂有明显降压作用，而桑寄生中槲皮素可诱导肿瘤细胞
一、 引言
柳树寄生是一种民间常用的中药材，为桑寄生科植物柳
叶钝果寄生（ Ｔａｘｉｌｌｕｓ ｄｅｌａｖａｙｉ（ ｖａｎ Ｔｉｅｇｈ．） Ｄａｎｓｅｒ） 的带叶茎
枝。 生长于海拔 １５００ ～ ３５００ ｍ 的高原或山地阔叶林或针叶、
阔叶混交林中，寄生于花楸、山楂、樱桃、梨树、桃树、马桑或
柳属、桦属、栎属、槭属、杜鹃属等植物上，主要分布于西南及
京：中国医药科技出版社，２０１５．
［２］ 汪晶． 桑 寄 生 研 究 概 况 ［ Ｊ］ ． 实 用 中 医 内 科 杂 志，
２０１８，３２（１） ：７４－７７．
［３］ 朱开昕，卢栋，裴河欢，赵明惠，李永华． 桑寄生在广
西的分布及其寄主状况调查［ Ｊ］ ． 广西中医药，２０１０，３３（ ２） ：
５９－６１．
ａｕｒｅｕｓ） 。 用的测试方法是微板观察法检测其 ＭＩＣ 值，用阳
性药环丙沙星处理作为阳性对照，其结果如下表所示。 由结
果可知乙醇提取部位、石油醚和二氯甲烷提取部位对大肠杆
菌、枯草芽孢杆菌以及金黄色葡萄球菌生长均有抑制作用。
其中，石油醚提取部位的活性较好，对大肠杆菌的抑制作用
最强，其最小抑菌浓度为 ３２ μｇ ／ ｍＬ。
４）０．７０３ｇ， 正 丁 烷 提 取 物 （ Ｌ － ５） ０． １５ｇ， 水 提 取 物 （ Ｌ － ６）
０．１２６ｇ，乙醇提取物（ Ｌ－１）５．００ｇ。
（ 二） 体外抑菌活性检测
分别将大肠杆菌、金黄色葡萄球菌以及枯草芽孢杆菌接
种于 ＬＢ 固体培养基，３７ ℃ 培养 ２４ｈ 后，挑取单菌落 ２ ～ ３ 个
·１７６·
综 述
储存液，并用 ０．２２ μｍ 微孔滤膜过滤。 取无菌的 ９６ 孔板，外
周 ３６ 孔分别加入 １００ μＬ 无菌水，其余每孔加入 １００ μＬ １×
１０５ ＣＦＵ ／ ｍｌ 菌悬液。 用 ＤＭＳＯ 倍比稀释上述药物储存液，获
处理，每组重复 ３ 个复孔。 继续培养 ４８ ｈ，加 ２０ μＬ ５ ｍｇ ／
ｍＬ ＭＴＴ 继续培养 ４ ｈ 后，弃去培养液，加入 １５０ μＬ ＤＭＳＯ
低速摇床上震荡 １０ ｍｉｎ，待紫色结晶充分溶解后，在 ５７０ ｎｍ
测 ＯＤ 值（ Ａ） ，将 Ａ 值作为反映细胞活性及代谢状况的参
数，各实验重复三次，抑制率按公式（２） 进行计算。
入 ９５％ 的乙醇浸没材料，超声提取 ３０ 分钟，过滤得到乙醇提
取液，该过程重复三次。 将三次超声提取得到的乙醇提取液
减压浓缩成浸膏（５ｇ） ；加入适量的水溶解浸膏，得到的乙醇
提取物水溶液依次使用石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、正丁烷
萃取，再将各溶剂萃取液经减压浓缩得石油醚提取物（ Ｌ－２）
０．５３７ｇ，乙酸乙酯提取物（ Ｌ－ ３） １．０５３ｇ，二氯甲烷提取物（ Ｌ－
生长抑制率％ ＝ Δ 空白对照－ΔＡ 待测提取物 ΔＡ 空白对
照×１００％ （２）
利用 ＳＰＳＳ 软件求算 ＩＣ ５０ 值（ 抑制率达到 ５０％ 时的药
物浓度） 。
四、 结果与分析
（ 一） 不同提取物的抗菌活性
本实验采用的受试菌株为枯草杆菌（ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ） 、
大肠杆菌（ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ） 、金黄色葡萄球菌（ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ
储存液，倍比 稀 释 储 存 液， 获 得 浓 度 分 别 为 ０． ８、 ０． ４、０． ２、
０．１、 ０．０５、 ０．０２５、 ０．０１２５、 ０．００６２５ ｍｇ ／ ｍＬ 的工作溶液，分别
加入 ９６ 孔板中，每孔 １ μＬ，使其终浓度分别为 ８、４、２、 １、
０．５、０．２５、 ０．１２５、０．０６２５ μｇ ／ ｍＬ。 ＤＭＳＯ 作空白对照，且每个
Ｌ－６ 在浓度为 ５００ ｍｇ ／ ｍＬ 时均无明显抗细菌活性。
（ 二） 不同提取物的抗癌活性
本实验采用的是经典的 ＭＴＴ 法检测柳树寄生各组分提
取物对几种肿瘤细胞（ ＨＣＴ１１６、ｈｅｌａ、Ｈ４６０、ｈｅｐｇ － ２） 细胞的
成活率的影响。 其结果如下表所示。 结果表明，柳树寄生提
取物中 Ｌ－１、Ｌ－２ 和 Ｌ－３ 对四种肿瘤细胞生长均有不同程度
梯度设 ３ 个复孔，慢慢混匀。 然后将该 ９６ 孔板置于 １２０ ｒ ／
ｍｉｎ 的 ３７℃ 恒温摇床培养，２４ ｈ 后观察菌体生长情况，检测
药物的抗细菌 ＭＩＣ 值。
（ 三） 体外抗肿瘤活性检测
实验采用 ＭＴＴ 法检测细胞的存活率。 首先检测六个不
同提 取 物 ５００ μｇ ／ ｍＬ 对 四 种 癌 细 胞 ＨＣＴ１１６、 ｈｅｌａ、 Ｈ４６０、
同极性试剂萃取物，同时对其抗菌和抗肿瘤活性进行筛选，
这一结果对其药用价值的研究提供一定的理论依据，也为后
续分离纯化抗菌及抗肿瘤单体药物的提供更多的生物资源。
二、 材料与仪器
（ 一） 药材
柳树寄生，又叫柳叶钝果寄生，是桑寄生科簇生叶组灌
木植物，植物的全株可供药用，出自《 贵州中草药名录》 ，具有
补肝肾，祛风湿，止血，安胎之功效。 药材于夏季采集于云南
得浓度分别为 ５０、２５、１２．５、６．２５ 、３．１２５ 、１．５６２ ｍｇ ／ ｍＬ 的工作
溶液，分别加入 ９６ 孔板菌悬液中，每孔 １ μＬ，使其终浓度为
５００、２５０、１２５、６２．５、３１．２５、１５．６２ μｇ ／ ｍＬ。 同时，选取环丙沙星
作为阳性对照，称取环丙沙星，用 ＤＭＳＯ 配制成 ８ ｍｇ ／ ｍＬ 的
表 １ 各提取物 ＭＩＣ 值
提取物编号
Ｌ－１（ μｇ ／ ｍＬ）
Ｌ－２（ μｇ ／ ｍＬ）
Ｌ－３（ μｇ ／ ｍＬ）
枯草杆菌
大肠杆菌
金黄色葡萄球菌
（ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ） （ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）（ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）
１２５
１２５
２５０
１２５
３９．１７５±０．３２
４３±０．３５
３６．９±０．１５
２５．９９６±０．２５
２１２．９±０．２７
２１９．５±０．３４
６８．２±０．２８
１０５．９±０．１５
１５８．１±０．１６
１０５．２±０．１４
１０８．２±０．１４
１１８．３±０．１８
（ 通讯作者：蒋明星）
参考文献：
［１］ 国家药典委员会．中华人民共和国药典：一部［ Ｓ］ ．北
ｅｎｚａ Ａ ｖｉｒｕｓ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ［ Ｊ］ ．Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ
柳树寄生提取物抗菌及抗肿瘤活性研究
①
毕晓旭 张国斌 苏源 蒋明星
摘 要：文章研究中药柳树寄生枝条不同极性溶剂萃取部位（ 石油醚部位、乙酸乙酯部位、二氯甲烷部位、正丁醇部位） 的抗
菌和抗肿瘤活性，采用 ＭＴＴ 法检测柳树寄生各极性萃取部位对肿瘤细胞（ ＨＣＴ１１６、ｈｅｌａ、Ｈ４６０、ｈｅｐｇ－２） 细胞增殖的抑制率，采用