电泳跑胶原理
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电泳跑胶原理
电泳是一种基于电荷作用原理的分离技术。
在生物学、生化学中,电泳技术被广泛应
用于分离和分析不同大小、形状、电荷的生物分子。
跑胶电泳是电泳技术中最常用的一种
方法,通常用于分离和分析蛋白质、核酸等生物分子。
跑胶电泳的原理是利用电场对带电分子的移动进行分离。
跑胶电泳中,待分离的样品
溶液被加入到聚丙烯酰胺凝胶中,凝胶中的聚丙烯酰胺纤维形成了一张网络结构,样品分
子在这个网络中的移动速度受凝胶孔道大小及样品分子大小、形状的影响。
电泳过程中,电场力是分离样品的主要驱动力。
通常使用水平的电场,使得样品分子
从一个电极带电荷,向另一个电极运动,最终在凝胶中被分离出来。
电荷性质是决定样品
移动方向和速度的关键因素。
样品分子表面带有的正负电荷,决定了它们在电场中的移动
方向和速度。
电泳电场对带电分子产生的作用力,即迁移速度,由带电荷物质的电荷数量、电荷分布、凝胶孔道大小等因素决定。
如样品分子电荷数量多,迁移速度就会较快。
跑胶电泳中,还要考虑到凝胶孔道大小的影响。
孔道大小决定样品分子平均的迁移距
离和分离效果。
凝胶溶液浸泡在初始状态的缓冲盐水中,以确保凝胶孔道中的盐浓度与样
品溶液中的盐浓度相同。
在孔道中的纤维之间就会形成许多的孔道,孔径大小受制于聚丙
烯酰胺的浓度和聚合程度的影响,这些控制凝胶密度和双重质量的哈维凝胶参数。
跑胶电泳中,样品移动会遭遇两种阻力:摩擦阻力和电泳升力。
摩擦阻力是指分子在
凝胶中的纤维之间运动时所产生的阻力,它与样品分子大小、形状、凝胶孔径大小、凝胶
密度等因素有关。
电泳升力是指由于带电样品在电场中移动所产生的气泡或液流,它又会
导致凝胶中孔径分布的非均匀性、带电样品在凝胶表面或凝胶内移动速度的不同。
跑胶电泳的分离效果得到加强和进一步细化的方法是双向电泳和多角度光散射分析。
双向电泳要解决由一次电泳引起的样品分子产生交叉物质、阵列畸变等问题,采用双向电
泳的技术,可使样品分子在水平方向和竖直方向均受到电场作用力的影响,以减少样品分
子的迁移方向的影响,有利于提高分离效果。
多角度光散射分析一般与多角度光散射仪一
起运用,由于光学特性而推测出物质的大小、形状、电荷等特性,从而可更好的控制跑胶
电泳的分离效果。