自制药敏纸片对治疗大肠杆菌病效果好
纸片法与沙氏培养法对真菌敏感性的研究
纸片法与沙氏培养法对真菌敏感性的研究第一部分简介真菌是一类常见的生物，广泛分布在土壤、植物、动物和水体中。
它们不仅可以带来益处，比如发酵、生产抗生素，而且还会造成多种疾病，如皮肤感染、刺伤感染、白癜风等。
因此，了解真菌的敏感性是研究真菌学的关键内容。
本文将介绍两种常用的真菌敏感性检测方法：纸片法和沙氏培养法。
第二部分纸片法纸片法是一种广泛应用于微生物学中的敏感性测试方法。
这种方法将抗菌药物浸润在纸片上，然后将纸片置于含有细菌或真菌的琼脂平板中，观察菌落的生长情况来判断菌株对该药物的敏感性。
以下是纸片法的一些优点和缺点：优点•快速：纸片法能够在短时间内得出结果，使得医生能够及时掌握患者的病情，并对治疗方案进行调整。
•简单：纸片法的操作流程简单，不需要很多设备和材料。
•均匀性好：纸片法中的药物浓度均匀，死区小，有利于检测结果的准确性。
缺点•局限性较大：纸片法只能检测细菌或真菌的敏感性，对真菌的种类和品系等方面的检测却相对局限。
•容易出现假阳性或假阴性：纸片法受到琼脂平板质量的影响，如琼脂平板的 pH 值，还会受到操作者的影响。
第三部分沙氏培养法沙氏培养法是另一种广泛应用于微生物学中的敏感性测试方法。
这种方法是将含有不同浓度抗生素的琼脂平板，与培养真菌的琼脂平板对比观察，检测其对抗生素的敏感性。
以下是沙氏培养法的一些优点和缺点：优点•具有更加准确的测试结果：沙氏培养法能够测试到更细小的细菌和真菌层次并得到更加准确的测试结果。
•能够测试到药物最小有效浓度：沙氏培养法能够帮助科学家推断出一个药物是要达到多高的浓度才能够有效的杀死一种病菌。
•可以重复：沙氏培养法可以像纸片法一样进行重复的测试。
缺点•需要较长的时间：要进行沙氏培养法，不仅需要培养其生长所需的时间，还需要进行不同抗生素的重复测试，所以相较纸片法花费的时间更长。
•不稳定：沙氏培养法的测试因素非常多，如抗生素的摆放、药物配制等因素都会影响测试结果。
如何制作药敏试纸和药敏实验
近年来，随着抗菌药物的广泛应用，尤其是光谱及超光谱的抗菌药物的滥用，导致耐药性菌株逐年增多；环境的污染，以及养殖户的饲养管理意识跟不上，促使细菌性疾病的流行及发病率逐年上升；且使用抗菌素药物预防和治疗的效果越来越不理想，为了减少药物的滥用和耐药性的产生，在临床治疗前进行药敏试验筛选出有效的抗菌药物是十分必要的，正确选用药物是治疗和预防禽病的重要措施之一。
笔者根据近几年来的经验选用本公司的现有抗生素药物自制药敏片，通过药敏试验在临床上取得十分好的效果。
一、药敏片的制备1、纸片的选用在医疗器械公司购买定性滤纸，用0.6cm的打孔器把滤纸打成圆形纸片，分别装入洁净的青霉素小瓶内，50片/瓶，放入高压蒸汽锅内进行121℃灭菌20min，再放入60-100℃干燥箱烘干，冷却后放入洁净箱备用。
2、抗菌药液的配制选用本公司的抗菌药物，按我们习惯常用的药物浓度进行配比，如冀农杆特，规格为100g/瓶，习惯常用兑水量为400斤水，即用分析天枰称取0.2g的杆特5ml灭菌生理盐水置于灭菌的青霉素小瓶内，充分溶解后再吸取0.1ml于另一灭菌青霉素瓶内，加入3.9ml的灭菌生理盐水即可。
3、纸片的处理将以配制好的药物溶解加入装有纸片的青霉素小瓶内，每小瓶加0.5ml，应使纸片均匀的吸取药液，置4-8℃冰箱浸泡1小时左右，再将小瓶置37-50℃的温箱内2-3小时烘干。
制备好的干燥药敏片要密封好，置冰箱内8℃以下冷藏或零下14℃以下冷冻保存备用。
二、培养基制作1、选用市面上提供的营养琼脂，SS琼脂和麦康凯琼脂按说明配制（1）SS琼脂培养基的制作：称取SS琼脂粉5.8克，加入蒸馏水100毫升，加热煮沸溶解即可，冷至55℃倾注无菌平皿中备用。
（2）营养琼脂培养基的制作：称取营养琼脂3.8克，加至100ml蒸馏水中摇均匀，溶解煮沸121℃，高压灭菌15分钟，冷却至38℃，倾注无菌平皿中备用。
（3）麦康凯琼脂培养基的制作：称取5克麦康凯琼脂，加入蒸馏水100ml溶解摇均匀，煮沸，高压灭菌10磅15分钟，即可冷却至55℃，倾注无菌平皿中备用。
药敏纸片如何制作
药敏纸片如何制作
更新时间：2009-10-24 19:04:11 浏览次数：519
1、纸片的选择与制作
在医药公司购买新华1号定性滤纸，用打孔器把滤纸打成直径为6毫米的圆形纸片，装入干洁的青霉素小瓶内，每瓶装入5O只，将若干个装有纸片的小瓶放入高压锅内进行高压灭菌121度20分钟，冷却后置4～8℃条件下保存。
2 、药袖浓度的配比
选择现有的抗菌药物，根据药物的说明进行配比浓度，如规格为100克装的抗菌物，包装说明兑水400斤，即用天平称药物1克加50毫升的灭菌注射用水置于灭菌平皿内，充分溶解后吸出1毫升置于另一个灭菌容器中再加入39毫升的灭菌注射用水。
3 、纸片的浸泡与干燥
取配好的药物溶液放入盛有纸片的青霉素小瓶内 (药液的多少以最透纸片为宜)，浸泡24小时后，将多余的药液倒掉，放在无菌条件下晾干或放在37℃的恒温箱内烘干，而后加盖置4～8℃的冰箱中保存备用。
药敏纸片的制备完整版
药敏纸片的制备HEN system office room 【HEN16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688】药敏纸片的制备及药敏试验方法抗菌药物对预防或治疗动物疾病发挥了巨大的作用，但随着抗菌药物在兽医临床的广泛使用，尤其为了防治疾病，常常以亚剂量水平的药物添加于饲料中，以致长期使用后病原微生物产生了耐药性，使本来对治疗病原微生物感染有效的抗菌药物失去作用，给兽医临床上有效地预防和治疗疾病的发生带来一定的困难。
通过制作自家药敏纸片进行试验,可快速进行药物的筛选,获得对病原微生物敏感的药物, 对指导临床合理用药，提高治疗效果，节约养殖过程的用药费用，有着重要的意义。
一. 药敏纸片的制备1.材料抗菌药物、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、冰醋酸、新华1号定性滤纸、50mL容量瓶、无菌过滤器或一次性过滤器等2．方法PBS的配制A.制备L储备液LNa2HPO4： +1000 mL蒸馏水或 +1000 mL蒸馏水L NaH2PO4: +1000 mL蒸馏水或 +1000 mL蒸馏水B.将两种储备液按下表比例，配制成不同pH值的PBS,室温保存备用L磷酸缓冲液的配制抗菌药物原液的配制和保存期限－20℃4℃抗菌药物溶剂浓度（?g/mL）青霉素 PBS 1280 3个月1周半合成青霉素类 PBS 1280 3个月1周头孢菌素类 PBS 1280 3个月1周氨基糖苷类 PBS 1280 3个月4周四环素类 PBS 12803个月1周PBS 12803个月2周多粘菌素B硫酸盐PBS 12803个月2周林可或氯林可霉素12803个月2周红霉素先用少量乙醇溶解，再用 PBS1280长期长期氯霉素先用少量乙醇溶解，再用 PBS12803个月1周利福平先用甲醇溶解，再用PBS万古霉素蒸馏水12803个月2周两性霉素B 蒸馏水12803个月1周12803个月2周5－氟胞嘧啶先用少量二甲基甲酰胺溶解，再用蒸馏水1280长期长期甲氧苄氨嘧啶先用L乳酸溶解再用蒸馏水稀释各种磺胺药先用NaoH溶解再用蒸2560长期长期配制方法A.按抗菌药物原液中药物百分含量的要求，计算出纯抗菌药物的重量，方法是：抗菌药物终浓度×终体积。
大肠杆菌药敏试验简易方法
大肠杆菌药敏试验简易方法近年来，随着养鸡业的迅猛发展，鸡大肠杆菌病的发病率和死亡率也不断增加，现已成为危害养鸡业（特别是肉鸡）最为重要的疾病之一，为细菌病之首。
因此，广大养鸡户谈之色变，没有比感染病毒病又继发大肠杆菌病更糟糕的了。
正因为如此，抗生素得到了大量广泛的应用，又由于大肠杆菌对抗生素容易产生耐药性，所以大肠杆菌的耐药性问题日益突出。
如何解决这个问题将是畜牧兽医工作者今后工作的重点。
而就目前来说，通过抗菌药物敏感性试验（药敏试验）选择敏感药物对鸡群进行预防和治疗是降低大肠杆菌病发病率和死亡率的有效手段。
标准的药敏试验（纸片扩散法）比较繁琐，要先进行细菌培养，再进行药敏试验，试验设备要求高，基层兽医诊疗机构很难做到，现介绍一种简易药敏试验方法（纸片扩散法［1］）。
1试验方法和步骤1.1试验设备恒温培养箱1台、干燥灭菌箱1台、酒精灯1个、接种棒（带接种环）1个（接种环可用回形针自制）、手术剪1把、镊子1个、普通营养琼脂1瓶、玻璃平皿（直径90mm）数个、烧杯（500ml）1个、玻璃棒1个、普通电炉1台、定性滤纸1盒、蒸馏水适量、生理盐水适量、小玻璃瓶（如链霉素瓶）数个（洗净晾干）、钢笔1支、细针头数个、高压蒸汽灭菌锅（可选）1个、普通天平1台、药勺1个、尺子1个。
1.2普通营养琼脂平皿制备1.2.1平皿消毒将玻璃平皿洗净，晾干。
用干燥灭菌箱120℃灭菌1小时；也可用酒精灯火焰消毒，将玻璃平皿内壁靠近火焰，同时慢慢转动平皿使之均匀受热，待平皿内壁上水珠烤干并发烫为止。
1.2.2琼脂消毒营养琼脂与蒸馏水（或生理盐水）以3g：100ml的比例加入烧杯（先加蒸馏水，后加营养琼脂），用电炉加热同时用玻璃棒搅拌，使营养琼脂溶化均匀。
如有高压蒸汽灭菌锅可将溶化的琼脂液装入生理盐水瓶中（不超过其容量的2/3），瓶口留一通气孔（一般用16号针头刺入瓶盖），将瓶站立放入锅内，加热至121℃保持15分钟即可；如无高压锅可直接用电炉加热至沸腾后立即将烧杯从炉上拿下来，待泡沫消了，再放到炉上，如此煮约20分钟（煮时不断搅拌）。
药敏纸片制备方法
药敏纸片制备方法嘿，咱今儿就来唠唠药敏纸片的制备方法，这可真是个有意思的事儿呢！药敏纸片，就像是医生手里的秘密武器，能帮咱找到对付细菌的最佳办法。
那怎么制备呢？首先，咱得有优质的药敏纸片原材料，这就好比做饭得有好食材一样。
然后就是调配，这可不能马虎，得精确再精确，就跟调鸡尾酒似的，比例不对可不行。
把药液均匀地涂在纸片上，这可不是随便涂涂就行的，得有耐心，得细致，不然这药敏纸片可就不灵光啦。
想象一下，要是涂得不均匀，那结果能准吗？那肯定不行呀！接着呢，得让这些涂好药液的纸片好好地干燥一下。
这就像是让它们去晒晒太阳，把水分都赶跑。
但可别晒过头了，不然它们可能就变得脆脆的，一碰就碎了。
等干燥好了，还得把它们好好保存起来。
这保存也有讲究呢，得放在合适的环境里，不能太潮湿，也不能太干燥，就像咱人得待在舒服的环境里一样。
不然，这些药敏纸片可能就失效啦。
你说这药敏纸片制备是不是挺有意思的？就好像在打造一件件小小的艺术品。
咱得用心，得认真，才能做出好用的药敏纸片来。
这可不是随便搞搞就能行的事儿呀！在这个过程中，每一步都很关键呢。
从选择材料到最后的保存，哪一个环节出了问题，都可能让药敏纸片失去作用。
这就跟盖房子一样，一块砖没砌好，可能整座房子都不牢固。
咱做药敏纸片制备的时候，可不能偷懒，不能敷衍。
这可是关系到能不能准确找到对抗细菌的方法呢！要是因为咱没做好，导致结果不准确，那可就麻烦啦。
所以啊，大家一定要认真对待药敏纸片制备这个事儿。
这不仅是一项技术活，更是一份责任呢！咱要为了能更好地对抗细菌，为了大家的健康，把药敏纸片制备得妥妥当当的。
总之呢，药敏纸片制备方法虽然听起来有点复杂，但只要咱用心去做，就一定能做好。
这就像生活中的很多事情一样，只要我们有决心，有耐心，就没有做不到的。
大家加油吧！让我们一起把药敏纸片制备这件事儿做得漂漂亮亮的！。
如何制作药敏试纸和药敏实验
近年来，随着抗菌药物的广泛应用，尤其是光谱及超光谱的抗菌药物的滥用，导致耐药性菌株逐年增多；环境的污染，以及养殖户的饲养管理意识跟不上，促使细菌性疾病的流行及发病率逐年上升；且使用抗菌素药物预防和治疗的效果越来越不理想，为了减少药物的滥用和耐药性的产生，在临床治疗前进行药敏试验筛选出有效的抗菌药物是十分必要的，正确选用药物是治疗和预防禽病的重要措施之一。
笔者根据近几年来的经验选用本公司的现有抗生素药物自制药敏片，通过药敏试验在临床上取得十分好的效果。
一、药敏片的制备1、纸片的选用在医疗器械公司购买定性滤纸，用0.6cm的打孔器把滤纸打成圆形纸片，分别装入洁净的青霉素小瓶内，50片/瓶，放入高压蒸汽锅内进行121℃灭菌20min，再放入60-100℃干燥箱烘干，冷却后放入洁净箱备用。
2、抗菌药液的配制选用本公司的抗菌药物，按我们习惯常用的药物浓度进行配比，如冀农杆特，规格为100g/瓶，习惯常用兑水量为400斤水，即用分析天枰称取0.2g的杆特5ml灭菌生理盐水置于灭菌的青霉素小瓶内，充分溶解后再吸取0.1ml于另一灭菌青霉素瓶内，加入3.9ml的灭菌生理盐水即可。
3、纸片的处理将以配制好的药物溶解加入装有纸片的青霉素小瓶内，每小瓶加0.5ml，应使纸片均匀的吸取药液，置4-8℃冰箱浸泡1小时左右，再将小瓶置37-50℃的温箱内2-3小时烘干。
制备好的干燥药敏片要密封好，置冰箱内8℃以下冷藏或零下14℃以下冷冻保存备用。
二、培养基制作1、选用市面上提供的营养琼脂，SS琼脂和麦康凯琼脂按说明配制（1）SS琼脂培养基的制作：称取SS琼脂粉5.8克，加入蒸馏水100毫升，加热煮沸溶解即可，冷至55℃倾注无菌平皿中备用。
（2）营养琼脂培养基的制作：称取营养琼脂3.8克，加至100ml蒸馏水中摇均匀，溶解煮沸121℃，高压灭菌15分钟，冷却至38℃，倾注无菌平皿中备用。
（3）麦康凯琼脂培养基的制作：称取5克麦康凯琼脂，加入蒸馏水100ml溶解摇均匀，煮沸，高压灭菌10磅15分钟，即可冷却至55℃，倾注无菌平皿中备用。
鸡大肠杆菌病的快速药敏试验方法
鸡大肠杆菌病的快速药敏试验方法发布日期：2008年11月12日来源：甘肃省张掖市动物疫病预防控制中心作者：何彦春随着养鸡业集约化程度的不断提高，各种条件性发生的疫病成为严重制约养鸡业发展的主要因素。
尤其是鸡大肠杆菌病的频繁发生，给养鸡业造成很大损失。
由于长期使用抗生素防制，使耐药菌株越来越多，抗生素防治的难度越来越大。
为了及时有效控制该病，须对致病菌进行药敏试验，以便选用高敏感药物，避免盲目滥用抗生素。
为了尽快取得药敏试验结果，使疫病得到早期控制，经多年来反复实践，总结出如下快速药敏试验方法。
1 药敏纸片的准备可以使用生化用品厂家提供的药敏纸片，也可以按有关资料介绍的方法进行自制。
2 所用培养基的制备按使用说明用普通营养琼脂粉制作普通营养琼脂平板。
3 试验方法对病死鸡进行剖检，发现有肝周炎、心包炎、气囊炎等符合大肠杆菌病典型病变特征的病例，即可无菌采取肝、脾、心等置灭菌容器内备用。
采集病料时要注意采取多份典型病料。
用灭菌接种环多次取病料内部组织，反复划线接种于营养琼脂平板。
如病料较多时，每一个平板可重复接种2～3份病料。
划线时要纵横交错划满整个平皿，并特别注意不要划破培养基。
接种完后用灭菌镊子夹取药敏试纸小心帖附在培养基上，各纸片应相距15mm左右。
置37℃恒温箱培养24小时后观察结果。
4 结果判定药敏纸片周围20mm如无细菌生长，说明试验菌株对该抗生素极敏，15～20mm为高敏，10～15mm为中敏，小于10mm为低敏，无抑菌圈为不敏感。
如一个平皿接种多份病料，长出的细菌可能不止一种细菌、一种菌株，对药物的敏感性可能不一致，如有的纸片周围抑菌圈内有较稀疏的菌落生长，说明该抗生素对某些菌株不敏感。
药敏试验结果出来后，可选用对各菌株普遍敏感的抗生素对发病鸡群进行及时治疗，以便尽快控制病情。
如需做进一步研究，可继续对分离出的细菌进行详细实验室诊断，以便确定是何种细菌，细菌菌型、致病性等。
5 小结发生疫病时，广大养殖户最关心的是如何快速控制病情，减少损失。
纸片法抑菌试验实验报告
一、实验目的1. 掌握纸片法抑菌试验的基本原理和操作方法。
2. 了解抑菌试验在微生物学研究和临床医学中的应用。
3. 通过实验，学会分析实验结果，为临床用药提供参考。
二、实验原理纸片法抑菌试验是一种常用的微生物学实验方法，用于检测细菌对各种抗生素的敏感性。
其原理是将含有定量抗生素的纸片贴在接种有细菌的琼脂平板上，培养一段时间后，根据抑菌圈的大小判断细菌对相应抗生素的敏感性。
三、实验材料1. 细菌菌种：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌等。
2. 抗生素纸片：青霉素、氨苄西林、头孢唑啉、红霉素等。
3. 琼脂培养基：M-H琼脂培养基。
4. 实验器材：无菌平板、无菌镊子、无菌棉签、酒精灯、游标卡尺等。
四、实验步骤1. 将琼脂培养基融化后，待其冷却至50℃左右，倒入无菌平板中，均匀铺开，待其凝固。
2. 将待检菌接种于M-H琼脂平板上，用无菌棉签均匀涂抹。
3. 待菌液干燥后，用无菌镊子取抗生素纸片，贴在平板上，纸片间距大于24mm。
4. 将平板置于37℃恒温培养箱中培养18-24小时。
5. 观察并测量抑菌圈直径，记录数据。
五、实验结果与分析1. 金黄色葡萄球菌对青霉素、氨苄西林、头孢唑啉、红霉素等抗生素均表现为敏感，抑菌圈直径分别为15mm、12mm、18mm、20mm。
2. 大肠杆菌对青霉素、氨苄西林、头孢唑啉、红霉素等抗生素均表现为耐药，抑菌圈直径分别为0mm、0mm、0mm、0mm。
3. 肺炎克雷伯菌对青霉素、氨苄西林、头孢唑啉、红霉素等抗生素均表现为耐药，抑菌圈直径分别为0mm、0mm、0mm、0mm。
根据实验结果，金黄色葡萄球菌对青霉素、氨苄西林、头孢唑啉、红霉素等抗生素敏感，可作为临床治疗金黄色葡萄球菌感染的首选药物。
大肠杆菌和肺炎克雷伯菌对青霉素、氨苄西林、头孢唑啉、红霉素等抗生素均表现为耐药，需要根据耐药性选择其他抗生素进行治疗。
六、实验讨论1. 纸片法抑菌试验是一种简单、快速、经济的抑菌试验方法，广泛应用于微生物学研究和临床医学中。
药敏纸片的制备
药敏纸片的制备及药敏试验方法抗菌药物对预防或治疗动物疾病发挥了巨大的作用，但随着抗菌药物在兽医临床的广泛使用，尤其为了防治疾病，常常以亚剂量水平的药物添加于饲料中，以致长期使用后病原微生物产生了耐药性，使本来对治疗病原微生物感染有效的抗菌药物失去作用，给兽医临床上有效地预防和治疗疾病的发生带来一定的困难。
通过制作自家药敏纸片进行试验,可快速进行药物的筛选,获得对病原微生物敏感的药物, 对指导临床合理用药，提高治疗效果，节约养殖过程的用药费用，有着重要的意义。
一. 药敏纸片的制备1.材料抗菌药物、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、冰醋酸、新华1号定性滤纸、50mL容量瓶、无菌过滤器或一次性过滤器等2．方法2.1 PBS的配制A.制备0.2mol/L储备液0.2mol/LNa2HPO4 ：35.61g Na2HPO4.2H2O+1000 mL蒸馏水或71.62g Na2HPO4.12H2O+1000 mL蒸馏水0.2mol/L NaH2PO4 :31.2g NaH2PO4.2H2O+1000 mL蒸馏水或27.6g NaH2PO4.H2O+1000 mL蒸馏水B.将两种储备液按下表比例，配制成不同pH值的PBS,室温保存备用0.2mol/L磷酸缓冲液的配制2.2 抗菌药物原液的配制和保存期限2.2.1抗菌药物配制溶剂和保存期限抗菌药物溶剂浓度（ g/mL）－20℃4℃青霉素pH6.0 PBS 1280 3个月1周半合成青霉素类pH6.0 PBS 1280 3个月1周头孢菌素类pH7.8 PBS 1280 3个月1周氨基糖苷类pH7.8 PBS 1280 3个月4周四环素类pH4.5 PBS 12803个月1周多粘菌素B硫酸盐pH6.0 PBS 12803个月2周林可或氯林可霉素pH7.8 PBS 12803个月2周12803个月2周红霉素先用少量乙醇溶解，再用pH7.8 PBS1280长期长期氯霉素先用少量乙醇溶解，再用pH6.0 PBS12803个月1周利福平先用甲醇溶解，再用pH6.0PBS万古霉素蒸馏水12803个月2周两性霉素B 蒸馏水12803个月1周12803个月2周5－氟胞嘧啶先用少量二甲基甲酰胺溶解，再用蒸馏水1280长期长期甲氧苄氨嘧啶先用0.1mol/L乳酸溶解再用蒸馏水稀释2560长期长期各种磺胺药先用NaoH溶解再用蒸馏水稀释2.2.2 配制方法A.按抗菌药物原液中药物百分含量的要求，计算出纯抗菌药物的重量，方法是：抗菌药物终浓度×终体积。
自家药敏纸片制备方法的建立及应用效果观察
表 １ 不 同方 法制 备 药 敏 纸 片 的抑 菌 效 果 表
其 它 治 疗 量 的 试 验 药 物 的 抑 菌 效 果 具 有 不 同 的 针 对 性 ， 可 应 用 于 临 床 用 药 参考。
３ 讨 论
治 疗 量
２７
２ ５
３Ｏ
２馈 治疗薰
４倍 治疗 量
３ ０ ３ １
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喘 速 治
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（ ）利 用 兽 医 临 床 常 用 抗 菌 药 物 ３
所 制 作 的 药 敏 纸 片 ．能 解 决 人 用 抗 菌 Ｈ 佗 ＂ 药 物 标 准 药 敏 纸 片 的 药 敏 试 验 的 结 果
对 兽医ｌ 临床 的 指 导 性 不 强 的 难 题 ．方
生 较 理 想 的 抑 菌 效 果 ， 与 喘 速 治 成 份
为 复 方 北 里 霉 素 可 溶 性 粉 的 抗 菌 特 性
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有 关 【。本 研 究 应 用 两 种 不 同 的 培 养 ９ ＝ Ｉ 】 ｏ
庆 大 霉 素
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抑 菌效 果 上 升 而 引 起试 验误 差 。
× × × × × × × ×
垫 底 的 平 皿 中烘 干 ，密 封 备 用 。 （ ） 细 菌 学 检 查 ： 在 无 菌 条 件 下 ３ 取 烘 干 后 的 药 敏 纸 片加 人 到 灭 菌 的 肉
自制药敏片体外筛选鸡大肠杆菌敏感药物的试验
５ 猪结节虫
（ ３ ）引进 种猪 及后 备猪 转入 生产 区前 １ ０ ｄ 应进 行驱 虫 ，种 公 为 灰 白色 的小 棍棒 状 虫体 ，寄生 在 猪 的大肠 里 。虫 卵 随猪 粪 猪 应 在 每 年在 １ 、４ 、７ 、１ ０ 月 份各 驱 虫 一 次 ，用 “ 肯维 灭 ” 等 拌 便排 出体 外 ，在适 当的环境 中，经２ ～３ ｄ 孵 出幼 虫 ，再经４～ ８ ｄ 变 料 ，添加按 ５ ０ ｏ ｇ ／ ｋ ｇ ￣料 ，连用 ７ ｄ 。 为 侵袭 性 幼虫 。猪 食 入 含有 这种 幼虫 的饲料 或 饮水 后 即被 感染 ， （ ４）由于蠕 虫 的 感染 能 引 起母 猪 泌 乳 下 降 和仔 猪 下 痢 ，因
３ 姜 片吸虫
对 驱 杀猪 蛔 虫 、棘头 虫 都有 一 定效 果 。左 咪唑 ，内服 ，剂量 ：２ Ｏ 虫 体 扁 平 ，像 生 姜 片 一 般 ，呈 肉红 色 。成 虫 雌 雄 同体 ，主 ｍ ｇ ／ ｋ ｇ ￣ 重 ，对棘 头虫 感染有 效 。 要 寄 生 在 猪 小 肠 的 黏 膜 上 。 虫 卵 随 猪粪 便 排 出后 流 人 水 中 ，在 （ ４ ）敌 百虫 ，内服 ，剂 量 ：０ ． ２ ～ ０ ． ５ ｇ ／ ｋ ｇ ￣ 重 ，对 驱杀 猪 蛔 适 宜 的 条 件 下 孵 出 毛 蚴 。 毛 蚴 钻人 扁 卷 螺 体 内寄 生 ，发 育 为 尾 虫 、结节 虫 、鞭 虫 、 胃虫 、姜 片吸 虫等 均 有很 好 的效 果 ，但 容 易 蚴 。 以后 尾 蚴 离 开 螺 体 ，附 着 在水 生植 物上 ，如 ，红 菱 、水 浮 引起 猪群 中毒 ，中 大猪 如果 使 用 ，必须 事 先准 备好 肾上腺 素 、阿
临 床 兽 医
中国畜牧兽 医文摘
鸡大肠杆菌的简易药敏试验
2018年第6期在鸡群患大肠杆菌病时，为及时有效控制病情，避免盲目滥用抗生素，应通过药敏试验选择敏感药物进行治疗。
1试验原理将不同的复方药品按治疗剂量放大相同倍数配制药液，制作药敏片。
药敏片上含有的抗菌药物向琼脂培养基扩散，通过对细菌的抑杀作用而影响细菌生长繁殖，在药敏片周围形成抑菌圈，根据抑菌圈的大小确定药物抗菌能力强弱。
2试验设备、药品高压蒸汽灭菌锅、恒温培养箱、干燥灭菌箱、普通天平、酒精灯、手术剪、镊子、普通营养琼脂、玻璃棒、定性滤纸、打孔器、蒸馏水、药匙、尺子、灭菌棉拭子、小玻璃瓶（如青霉素瓶，10个）、玻璃平皿（直径90mm ，10个）、烧杯等。
3试验步骤将烧杯、玻璃平皿、玻璃棒、小玻璃瓶用干燥灭菌箱160℃灭菌2h ，冷却备用。
用打孔器将定性滤纸打成圆形药敏纸片若干份（直径约6mm ，100片/份），干燥灭菌箱灭菌备用。
先向烧杯中加入100mL 蒸馏水，再加入4.5g 普通营养琼脂，边混合边搅拌，使琼脂全部溶化。
然后将烧杯放入高压蒸汽灭菌锅，加热至121℃20min 。
稍作冷却后，缓慢解压。
然后，趁热将琼脂倒入平皿中，每个平皿约需20～25mL 琼脂液，琼脂厚度约3～5mm ，倒完盖上平皿。
冷却后放入冰箱（2～8℃）备用，可保存5～7d。
将不同的复方制剂分别按治疗剂量的不同倍量加入蒸馏水，制作药敏片，经过多次试验和临床实践，大多数药品的药敏片在50倍治疗量浓度下抑菌圈较大，便于观察和测量，抑菌效果明显。
我们将50倍量作为快速简易药敏试验的药液浓度标准。
将常用大肠杆菌治疗药物分别取1g 于烧杯中，加蒸馏水50倍量溶解，分别放入100片药敏纸片，充分浸泡4h。
然后用镊子把药敏纸片夹入玻璃平皿中，用牙签将药敏纸片摆平分开，不重叠。
放入恒温箱（37℃）24～48h 烘干。
烘干后，用镊子将制好的药敏片放入小玻璃瓶中，加盖密封，粘上口缺纸，标注药品名称，放入冰箱（2～8℃）保存备用，有效期为6个月。
药敏片的研制及其抑菌效果观察
目前， 微生物感染引发的疾病是危害养殖业的重要原因 之一。而在治疗 这 些 疾 病 时， 抗 菌 药 物 发 挥 了 重 要 的 作 用。 但 在 长 期 用 药， 特 别 是 不 合 理 用 药 的 过 程 中， 容易诱导细菌 产生耐药性， 使疗效越来越差， 必须进行药物敏感性实验， 以 确定最佳药物， 指导临床生产实践。由于新型药物的不断出 现， 市售药敏片受到种类所限， 已满足不了临床需要， 所以必 须 自 制 兽 用 药 敏 片， 以 便 在 最 短 时 间 内 选 择 最 佳 治 疗 药 物。 笔者选择部分常用抗菌药物研制药敏片， 并与市售药敏片进 行对比， 从而建立一种简单、 快速的药敏片制备方法， 为临床 通过药敏实验选择有效抗菌药物提供合适的药敏片。 D D ID D ID I D 材料与方法 材料 药品。注 射 用 氨 苄 西 林 钠 (KL （ 批 号 $!’$’$， 河北远
药液浓度 药片浓度 B Y 5: ! , $$$ X$$ ’ $$$ ’ "$$ X$$ ’ $$$ ’ "$$ X $$$ ’$ $$$ ’’ $$$ ’ $$$ # $$$ # "$$ , "$$ # $$$ # "$$ X$$ ’ $$$ ’ "$$ ’ $$$ B Y 5: ! ,$ X ’$ ’" X ’$ ’" X$ ’$$ ’’$ ’$ #$ #" ," #$ #" X ’$ ’" ’$
注： 吸 " 5: 无菌蒸馏水溶解， 则 ’$$ 5B Y 5: 吸 取 ! 氨苄西林钠为粉剂， $ I , 5: 即可。
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基金项目 作者简介 收稿日期
药 敏 纸 片 的 制 备。 分 别 无 菌 吸 取 抗 菌 药 液 (KL、
兽用药敏纸片的制备及其抑菌效果分析
兽用药敏纸片的制备及其抑菌效果分析张浩;郭虹彩;马文奎;曹金元【摘要】[目的]旨在探索常用的兽用药敏纸片的制作方法,节约药敏试验成本.[方法]选取兽医临床上常用的青霉素G、卡那霉素、庆大霉素、氧氟沙星、链霉素、头孢噻呋钠6种抗生素药物,按照治疗量(标记1×)、2倍治疗量(标记2×)和4倍治疗量(标记4×)3个浓度梯度制备药敏纸片.然后利用自制药敏纸片与市售药敏纸片进行药敏试验,对比其抑菌效果.[结果]除头孢噻呋钠外,其余5种常见抗菌药物的2倍治疗量自制药敏片与市售药敏纸片抑菌效果一致.[结论]该试验制备的常用兽用药敏纸片的方法是成功的.【期刊名称】《畜牧与饲料科学》【年(卷),期】2018(039)009【总页数】3页(P110-112)【关键词】兽用药敏纸片;制备方法;抑菌效果【作者】张浩;郭虹彩;马文奎;曹金元【作者单位】北京农业职业学院,北京 102442;北京农业职业学院,北京 102442;北京农业职业学院,北京 102442;北京农业职业学院,北京 102442【正文语种】中文【中图分类】S859.796目前，动物细菌性疾病十分普遍，严重危害我国畜牧业的发展。
在基层疾病诊疗过程中，大量使用抗菌药物的情况极其普遍，导致细菌耐药性不断增强，甚至个别养殖户在饲料中添加多种抗菌药以减少疾病的发生。
由于长期滥用抗生素致使细菌产生耐药性，造成养殖成本增加，畜产品存在药物残留，严重影响养殖户的经济效益，同时危及人类的健康。
在治疗畜禽疾病时，通过药敏试验判断抗生素药物对病原微生物抑菌效果，从而在最短的时间内找出最有效的抗菌药物，解决生产实践中的实际问题，在临床上可以防止滥用抗生素［1］。
为了节约药敏试验成本，该试验选取常用的抗菌药物，按照不同的浓度梯度制成药敏纸片来检测大肠杆菌对药物的敏感度，并与市场上销售的药敏纸片进行对比，从而建立一种简单快速制备药敏纸片的方法，有效地指导兽医临床用药。
自制药敏片体外筛选鸡大肠杆菌敏感药物的试验
自制药敏片体外筛选鸡大肠杆菌敏感药物的试验
黄名英;傅安静;靳新刚
【期刊名称】《四川畜牧兽医》
【年(卷),期】2013(040)004
【摘要】本试验选取鸡典型大肠杆菌病的临床病料进行细菌培养鉴定,再用自制药敏片体外筛选对鸡大肠杆菌敏感的药物用于临床治疗,并观察这些药物的治疗效果.【总页数】2页(P25-26)
【作者】黄名英;傅安静;靳新刚
【作者单位】成都农业科技职业学院,四川成都611130;成都农业科技职业学院,四川成都611130;河北省保定冀中药业有限公司,河北保定071000
【正文语种】中文
【中图分类】S859.794
【相关文献】
1.药敏试验在筛选治疗鸡大肠杆菌病药物中的应用 [J], 孟素珍;高敏
2.肉鸡大肠杆菌对几种抗菌药物的药敏试验 [J], 张金玲
3.复方兽药的药敏试验(药敏片法)与药物选择 [J], 马述臣
4.自制药敏片体外筛选鸡大肠杆菌敏感药物试验及临床效果观察 [J], 黄名英;傅安静;靳新刚
5.氟喹诺酮药物对鸡大肠杆菌体外药敏试验 [J], 崔红兵;朱欢
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药敏纸片的制备
药敏纸片的制备及药敏试验方法抗菌药物对预防或治疗动物疾病发挥了巨大的作用，但随着抗菌药物在兽医临床的广泛使用，尤其为了防治疾病，常常以亚剂量水平的药物添加于饲料中，以致长期使用后病原微生物产生了耐药性，使本来对治疗病原微生物感染有效的抗菌药物失去作用，给兽医临床上有效地预防和治疗疾病的发生带来一定的困难。
通过制作自家药敏纸片进行试验,可快速进行药物的筛选,获得对病原微生物敏感的药物, 对指导临床合理用药，提高治疗效果，节约养殖过程的用药费用，有着重要的意义。
一. 药敏纸片的制备1.材料抗菌药物、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、冰醋酸、新华1号定性滤纸、50mL容量瓶、无菌过滤器或一次性过滤器等2．方法2.1 PBS的配制A.制备0.2mol/L储备液0.2mol/LNa2HPO4 ：35.61g Na2HPO4.2H2O+1000 mL蒸馏水或71.62g Na2HPO4.12H2O+1000 mL蒸馏水0.2mol/L NaH2PO4 :31.2g NaH2PO4.2H2O+1000 mL蒸馏水或27.6g NaH2PO4.H2O+1000 mL蒸馏水B.将两种储备液按下表比例，配制成不同pH值的PBS,室温保存备用0.2mol/L磷酸缓冲液的配制2.2 抗菌药物原液的配制和保存期限抗菌药物溶剂浓度（?g/mL）－20℃4℃青霉素pH6.0 PBS 1280 3个月1周半合成青霉素类pH6.0 PBS 1280 3个月1周头孢菌素类pH7.8 PBS 1280 3个月1周氨基糖苷类pH7.8 PBS 1280 3个月4周四环素类pH4.5 PBS 12803个月1周多粘菌素B硫酸盐pH6.0 PBS 12803个月2周林可或氯林可霉素pH7.8 PBS 12803个月2周12803个月2周红霉素先用少量乙醇溶解，再用pH7.8 PBS1280长期长期氯霉素先用少量乙醇溶解，再用pH6.0 PBS12803个月1周利福平先用甲醇溶解，再用pH6.0PBS万古霉素蒸馏水12803个月2周两性霉素B 蒸馏水12803个月1周12803个月2周5－氟胞嘧啶先用少量二甲基甲酰胺溶解，再用蒸馏水1280长期长期甲氧苄氨嘧啶先用0.1mol/L乳酸溶解再用蒸馏水稀释2560长期长期各种磺胺药先用NaoH溶解再用蒸馏水稀释2.2.2 配制方法A.按抗菌药物原液中药物百分含量的要求，计算出纯抗菌药物的重量，方法是：抗菌药物终浓度×终体积。
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自制药敏纸片对治疗大肠杆菌病效果好
近年来鸡大肠杆菌病严重威胁着家禽业的发展，给养殖户造成较大的经济损失。
市场上治疗大肠杆菌病的药品繁多，其主要成份往往不写明，造成养禽户在发生疾病时用同一种成份、不同品名的药物替换使用，既增加损失，又延误病情。
而自制药敏纸片就能减少这些损失。
在测得药品对该菌的敏感程度后再用药，效果较好。
一、病原
禽大肠杆菌病原为艾希氏大肠杆菌，该菌系肠道正常菌群之一。
但它有一些致病血清型，科研人员在大肠杆菌病鸡体内一般只能分离出某种特定血清型，比如O1、O2、O78、O35、O16等等。
本菌呈多形性，有时接近球菌的形态，有时呈细长杆状或发丝状，但多数为两端钝圆，革兰氏染色阴性，中等大小的杆菌。
二、临床症状及病理变化
1.大肠杆菌病夏季较多见，雏鸡及体弱鸡易感，病鸡精神沉郁、腹泻，排出黄白色、绿色粪便，病鸡不喜走动，关节肿胀。
败血型常引起呼吸道症状，产蛋鸡产蛋下降，砂皮蛋、白皮蛋增多，后期可见腹部胀大。
在发生大肠杆菌病的鸡群中还发现个别鸡一侧或双侧眼失明和肿头现象。
2.剖检可见纤维素性浆膜炎。
心外膜和心包膜上附着有多量灰白色纤维素性渗出物，气囊壁增厚，有黄白色干酪样渗出。
肝脏有灰白色坏死点，有时肝表面形成一层纤维素性渗出物。
经卵感染的雏鸡有卵黄囊炎，卵黄肿胀充血，其中充满棕色水样物；肉鸡关节红肿即滑膜炎，母鸡感染大肠杆菌病后在输卵管有干酪样渗出物，形成输卵管炎和腹膜炎，粘液型大肠杆菌常引起小肠、盲肠、肠系膜或肝脏出现肉芽肿。
三、细菌分离培养及鉴别
1.无菌采取新鲜病鸡心血，涂片，革兰氏染色镜检可见阴性中等杆菌。
接种在普通琼脂培养基上培养18～24小时，形成圆形湿润、半透明隆起的乳白色中等大小菌落，挑取生长良好的菌落分别接种在伊红美蓝琼脂培养基、麦康凯培养基和普通肉汤试管内，经37℃、培养18～24小时后观察。
在伊红美蓝琼脂培养基上形成紫黑色带金属光泽的菌落，在麦康凯培养基上生长有圆形、边缘不齐、均匀一致的粉红色菌落，在普通肉汤试管内底部有黄白色絮样沉淀物，取肉汤内沉淀物镜检观察与剖检鸡的检出菌一致。
2.产气杆菌与大肠杆菌外观极相似。
产气杆菌MR试验显阴性，VP试验显阳性，而大肠杆菌正相反。
如果大肠杆菌接种在远腾氏培养基上则不能生长，产气杆菌则能生长。
四、药敏纸片的制做及用药、治疗原则
1. 将滤纸用打孔器打成0.5cm 直径的圆纸片。
高压灭菌后干燥放置备用。
将普通培养基制成平板，将营养肉汤培养的待试菌均匀涂布于平皿表面，将大肠杆菌的治疗药物按所用剂量10倍稀释，装于小瓶中，并注明品名、代号，取备用无菌纸片蘸取药液置于涂有细菌的平板上，37℃培养18～24小时观察敏感程度。
选择敏感药物做为治疗药。
中草药也可测试敏感程度，将中药研成粉未，按1∶1加开水浸泡30分钟，过滤、高压灭菌后装入小瓶备用，试验方法同上。
2.在治疗过程中,药物最好现用现兑，以防效价降低，对败血型大肠杆菌病应选择药浓度高，药效持续长的药品。
在实际工作中本院多采用中西结合方法（选择敏感中西药物联合使用）,效果极佳。
3.鸡大肠杆菌病易继发于其它疾病。
即继发性大肠杆菌病。
这就要"标"、"本"兼治，分清主次，正常家禽自然感染大肠杆菌病的机率很低，家禽只有在某些致病因素的作用下，机体抵抗力下降继发大肠杆菌病。
例如，新城疫、支原体病、传染性法氏囊炎均易继发大肠杆菌病。
一定要分清主次，找出病因之根本
，这样才能彻底治愈。
大肠杆菌是一种条件性致病菌，当疾病发生时除了对症治疗还应加强饲养管理，提高卫生条件。
能起到很好的辅助治疗作用。
五、病因分析及防制措施
1.饲养环境差、卫生条件不标准、水源不洁净、抗菌素的滥用、空气污染、各种应激、饲料变质、其它疾病的发生均系诱发大肠杆菌病的病因。
2.防制此病就应查找病因，对因防制。
当鸡群流行其它传染病时，首先查其根本，追其先后。
"标"、"本"兼治，这样才能有效地预防和治疗该病。
六、思考
自制药敏纸片不仅对治疗大肠杆菌病有很好的作用,其它细菌引起的疾病也同样适用,凡是细菌培养中长势较好的细菌,均能做药敏试验。
我院在实践过程中,曾直接于营养肉汤内增菌20小时再做药敏试验,这样能缩短时间,提早用药,但应注意,当该疾病存在两种或两种以上的病原菌时,往往药敏结果有些差异,而中西结合用药能有效地减少这些情况的发生。
预防重于治疗,这是养殖业中应始终遵循的原则。