资料：笛梵面膜鸡蛋测试

检验报告单
一、CAMVA
1.1 实验结果
1.2 CAMVA评价
送检面贴膜20150817001在CAMVA中，NC评分为1.125，表现为应激性刺激，即无损伤性刺激。

此时毛细血管未有出血损伤。

送检面膜20150817002在CAMVA中，由于产品透明度不高，影响实验现象观测，故将该产品逐倍稀释，稀释3倍后，现象观测明显，此时NC评分为0，表现为无刺激，此评分无法对原产品刺激性进行有效评分。

另：原样产品在做NC值时，模糊观测下，有偶尔可数的出血现象。

检测审核
检验报告单
CAMVA
1、CAMVA检测
2、试验名称：鸡胚绒毛尿囊膜血管刺激试验（CAMVA）
3、试验原理：将一定量受试物直接与鸡胚尿囊膜接触，通过作用一段时间之
后观察绒毛尿囊膜血管损伤（如鬼影血管、毛细血管充血或出血）程度，对不同的血管损伤程度进行评分，从而判断受试物的刺激性大小。

4、试验材料和方法：
4.1鸡胚
4.1.1品系和来源
白莱杭鸡（White Leghorn chicken）受精鸡胚，应当选用SPF鸡胚，供应商应具有科技部门认可的《兽药生产、检验用SPF鸡(蛋)定点生产企业》资格，鸡胚质量应符合国家标准的要求。

4.1.2孵化条件
室温20℃-25℃，相对湿度45%-70%。

孵化温度37.5℃±0.5℃，相对湿度50%-60%。

将购买的0天龄胚，鸡胚应新鲜、干净、完好，用70%酒精清洁表面，置于孵箱（37±1℃）。

4.1.3 CAM制备
每天检查鸡胚存活状态，弃去任何异常的鸡胚。

孵化第14d，用牙科锯齿弯镊剥去气室端的蛋壳部分，暴露白色蛋膜，用吸管滴加几mL0.9% NaCl溶液使蛋膜湿润，将0.9% NaCl溶液倾出。

小心用镊子去除内膜，保证血管膜不受损。

用聚四氟乙烯树脂环置于每只鸡胚的CAM上，作为滴入稀释样品的作用区域。

4.2设备
4.2.1 照蛋器（光源）
4.2.2 带自动转盘的孵化器
4.2.3 微量加样器及一次性适配吸头
4.2.4 牙科手钻：用于蛋壳开孔
4.2.5 解剖器具：牙科用锯齿弯镊刀或尖头镊
4.2.6 超纯水或去离子水/双蒸水
4.2.7 玻璃器皿：灭菌锥形瓶100ml,烧杯250ml
4.2.8 特氟龙环（O-Ring)
4.2.9 照相机
4.2.10 聚光手电筒
4.3测试物及制备
测试样品用无菌水制成透明悬液。

化妆品如有需要可直接用成品进行检测（如：爽肤水、面膜液等水剂）
4.4对照物及制备
4.4.1溶剂对照：如果受试物用蒸馏水或植物油进行稀释，那么试验应设置0.9%的NaCl或植物油（如橄榄油、花生油）为溶剂对照。

如使用其它溶剂或载体，则这种溶剂/载体都应作为对照物质。

4.4.2空白对照：10个没有开壳的鸡蛋作为对照，每日检查存活状态，作为孵育和试验环境的对照。

4.4.3阳性对照：SLS作为阳性对照，用水稀释成浓度为0.01M。

4.5试验过程
4.5.1筛查试验
①筛查试验可选第10天龄鸡胚或第14天龄鸡胚，建议选用第14天龄鸡胚进
行。

②受试物从最高浓度开始向下稀释3-5个浓度梯度进行测试，每一浓度2-3
只鸡胚。

③取被测样品、SLS或溶剂40μl，加入每只鸡胚的内置环中。

④鸡胚置于孵箱环境中30±5min。

⑤孵育30±5min后，将鸡胚从孵箱中取出进行评分，移除封闭保鲜膜，剥去
蛋壳增加CAM视野。

⑥在辅助光照下（借助体视显微镜），观察并比较环内与环外CAM血管的变化，
评估环内血管损伤。

⑦记录每只鸡胚观察所见。

4.5.2主试验
①筛查试验中以出现阳性结果的最高受试物浓度为主试验的测试浓度。

②同一测试浓度下随机选择10只鸡胚用于试验。

③取被测样品、SLS或溶剂40μl，加入每只鸡胚的内置环中。

④鸡胚置于孵箱环境中30±5min。

⑤孵育30±5min后，将鸡胚从孵箱中取出进行评分，移除封闭保鲜膜，剥去
蛋壳增加CAM视野。

⑥在辅助光照下（可借助体视显微镜），观察并比较环内与环外CAM血管的变
化，评估环内血管损伤。

⑦拍照记录每只鸡胚血管变化。

5、实验结果：
5.1血管效应分类
⑴鬼影血管ghost vessel：指血管内无血液灌注的血管。

⑵充血hypermia：指血管内血液不流动或血管胀所致的血液充盈现象。

⑶出血hemorrhage：血液从血管内流出血管外，可以表现为血管外出现点状出
血或絮状的弥漫性出血等多种形式。

5.2评分标准
管效应评分观察描述
无反应0 观察不到反应，CAM正常。

鬼影血管 1 血管内无血流，血管清晰。

毛细血管损伤 2 充血，或CAM小血管血流增加。

极轻微出血 3 环内有可数的细小出血点（1-10个）。

轻微出血 4 环内有可数的细小出血点＞10或小出血
点不可数且覆盖环内区域不足12.5%。

极轻度出血 5 环内出血点覆盖面积12.5-25%，或环内没
有出血点但红晕覆盖面积不足25%。

轻度出血 6 环内出血点覆盖面积25-50%，或环内没有
出血点但红晕覆盖面积为25-50%。

中度出血7 环内大量出血点或小区域出血范围达到
50-75%（包括50%）。

严重出血8 环内出血点区域＞=75%；结痂可能形成。

5.3结果分析
5.3.1 NC值：根据血管损伤程度评分的平均分大小（即NC值）来比较受试物的刺激性
大小。

5.3.2评价标准：
⑴，“0﹤NC≦2”表现为应激性刺激，即无损伤性刺激。

此时毛细血管未有
出血损伤。

⑵，2﹤NC≦3，表现为轻微刺激，即此时已产生轻微损伤性刺激，此时毛
细血管出现轻微性出血损伤。

⑶，3﹤NC≦5，表现为中度刺激，即此时已产生较为严重的损伤性刺激，
此时毛细血管出现较为严重的出血损伤，可能为不可逆损伤。

⑷，NC＞5，表现为严重刺激，即此时已产生极为严重的损伤性刺激，此时
毛细血管大面积出血，且出血量较大，为不可逆损伤。