霍乱弧菌实时荧光PCR方法的建立

霍乱弧菌实时荧光PCR方法的建立
沈月华;徐德顺;吴晓芳
【期刊名称】《中国卫生检验杂志》
【年(卷),期】2009(0)1
【摘要】目的:利用荧光定量PCR技术,建立霍乱弧菌快速敏感特异的检测方法。

方法:以霍乱弧菌CT基因作为靶序列,设计一对引物和探针,以霍乱弧菌菌株提取核
酸DNA作为模板,优化引物和探针的浓度比和Mg2+浓度,同时验证方法的特异性、敏感性和重复性。

结果:本方法建立的反应体系在引物和探针的浓度为0.6μmol/L、0.6μmol/L,Mg2+浓度为3.5 mmol/L时,具有良好的特异性和敏感性,与副溶性血
性弧菌等7种相关细菌均无交叉反应。

在纯菌条件下,检测灵敏度21 cfu/ml。

稳
定性分析表明,同一样品重复检测3次Ct值的变异系数均小于5%。

检测水源和海产品结果表明该方法较传统方法敏感、快速、简便。

结论:建立的实时荧光PCR方法特异、灵敏、快速,适用于水源、海产品和疫情暴发的霍乱弧菌快速检测。

【总页数】3页(P28-29)
【关键词】霍乱弧菌;TaqMan探针;荧光定量PCR;CT基因
【作者】沈月华;徐德顺;吴晓芳
【作者单位】浙江省湖州市疾病预防控制中心
【正文语种】中文
【中图分类】R378.3
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