螺旋体和支原体
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人型支原体 Mycoplasma hominis
寄居于生殖道,女性多见 性接触传播 形态结构与溶脲脲原体相似;固体培养基上呈 典型“油煎蛋状”菌落;分解精氨酸,不分解 尿素和葡萄糖。 四环素与林可霉素敏感 微生物检验与溶脲脲原体相似
穿通支原体 M. penetrans
临床意义
Mpe感染可能是爱滋病的辅助致病因素
微生物检验
检验程序(图19-3)
标本采集:咽试子、痰、支气管分泌物、鼻咽
洗液等;快速接种、转运培养基
标本直接检查
涂片检查:G染色不易着色
电子显微镜观察无细胞壁
核酸检测:PCR检测肺炎支原体DNA
微生物检验
培养与鉴定: 培养基:牛心浸液+20%小牛血清+新鲜酵母浸液 +美兰、醋酸陀、青霉素 初次培养:液体培养基中增菌;生长后转种固体 培养基,观察菌落(致密圆形菌落或油煎蛋样菌落)
肺炎支原体(M. pneumoniae )
临床意义 呼吸道感染病原体,经飞沫传染 间质性肺炎,原发性非典型性肺炎 肺炎支原体是青少年急性呼吸道感染的主要病 原体之一,表现为上呼吸道感染综合症,也可 引起其他系统的肺外并发症。
流行特点:间歇性,长时期缓慢播散,可持续
数月至一年
感染呈全球性分布,平时散在发病,3-5年出
微生物学特性
培养特性
营养要求高,需加入10%-20%动物血清,还需
添加酵母液、组织液、核酸提取物和辅酶等,
形成“荷包蛋”状菌落
与细菌L型生物学性状的区别(表19-1)
生化反应:利用葡萄糖、精氨酸(-)、尿素 (-)、吸附红细胞 (表19-2)
“荷包蛋”状菌落
抵抗力
支原体耐冷 对热和干燥敏感 对ß-内酰胺类抗生素不敏感 对红霉素、多西环素、螺旋霉素等抗 生素敏感
现一次地区性流行
微生物学特性
形态结构:短细丝状,长2-5um,近细胞丝状体
尖端有一球状的特殊结构。典型的肺炎支原体类
似酒瓶状,没有细胞壁,仅有细胞膜。革兰染色
阴性,Giemsa 染色呈淡紫色。
抗原构造:细胞膜中的糖脂抗原和蛋白质抗原。 糖脂抗原抗原性强、特异性较差。 170k的DPI 膜蛋白和43kD的菌体蛋白特异性强。支原体PI 膜蛋白是其主要型特异性抗原,其抗原性常用 生长抑制试验(growth inhibition test, GIT) 与代谢抑制试验(metabolism inhibition test, MIT)鉴定。
标本直接检查
直接显微镜检查:暗视野显微镜观察形态和 运动,简便直观但检出率极低 核酸检查:PCR 快速,敏感性高 分离培养:BSK复合培养基 2-3周可观察生长, 甚至需培养12周
抗体检测
间接免疫荧光法(IFA):操作简便实用,但 类风湿关节炎及其他螺旋体病可出现假阳性。 ELISA:方便快捷,但全菌体ELISA特异性差, 仅用作筛选。
培养特性
营养要求较高,常用含10%兔血清的Korthof 培养基
最适生长温度28-30℃ ,在人工培养基中生长缓慢
微生物特性
抵抗力 对热抵抗力弱,对来苏、升汞、石碳酸
等敏感,对青霉素敏感
但是夏秋季酸碱度中性的湿土或水中可 存活20天,甚至数月
微生物检验
检验程序: 图18-2 标本采集
血液、CSF、尿液、疫水
梅毒 雅司病
性传播 皮肤损伤
品他螺旋体
地方性螺旋体
品他病
地方性梅毒
皮肤损伤
黏膜损伤
钩端螺旋体(Leptospira )
螺旋细密而规则 数目较多 菌体一端或两端弯 曲呈钩状
临床意义
典型人畜共患病 鼠和猪 人类主要感染途径是接触污染疫水 临床常见
流感伤寒型 黄疽出血型 肺出血型 脑膜脑炎型 肾功能衰竭型
性传播疾病,亦可通过母婴传播
致非淋菌性尿道炎(NGU)、男性不育 前列腺炎或附睾炎,阴道炎、宫颈炎,可致流产
致病机制:侵袭酶、毒性产物有关
微生物特性
形态结构: 液体培养基中以球形为主,能通过微孔滤膜; 没有细胞壁,革兰染色阴性,Giemsa 染色呈紫蓝色。 培养特性 营养要求高 培养基:牛心浸液+胆固醇+酵母+尿素等 温度:35-37℃,PH:5.5-6.5 气体环境: 95%N2和5%CO2 很小“荷包蛋”样菌落 水解尿素产氨,不分解葡萄糖和精氨酸
奋森疏螺旋体 专性厌氧,常与梭形梭杆菌寄生于人类口腔牙 龈部,条件致病菌,奋森咽峡炎、牙龈炎、口 颊坏疽、溃疡性口腔炎;革兰染色镜检或直接 暗视野观察
密螺旋体
螺旋细密、规则、两端尖,数目多
致病性
苍白螺旋体 苍白亚种 地方亚种 极细亚种 品他螺旋体 梅毒 地方性梅毒 雅司病 品他病 性传播 污染餐具 直接接触皮肤 皮肤损伤
但技术要求高,费时费钱。
抗梅毒螺旋体抗体的微量血凝分析(MHA-TP):最简易的 方法,效价在1:80以上可判为阳性。 ELISA:价廉、保存时间久且稳定,是目前梅毒血清学 诊断试验的首选方法。
TPPA:用于筛选试验阳性标本的确证试验。
MHA-TP
TPPA
血清学试验的选择
先天梅毒的诊断
支原体(Mycoplasma)
微生物特性
抗原构造 多糖抗原和蛋白质抗原
脲酶抗原—种特异性抗原
抵抗力
对渗透作用敏感,对热敏感, 对作用细胞壁 的抗生素不敏感,对影响胞浆蛋白合成的抗菌 药物敏感。
微生物检验
检验程序:图19-5
标本采集:尿液、前列腺液、精液、分泌物、羊水、血液等
直接检查 核酸检测:敏感、稳定可靠、快速简便,将成为临床快速 诊断的重要试验手段。 ELISA:可测定血清型别及IgG类型,敏感、特异性强,有
生化反应
血清学鉴定:GIT和MIT 将支原体分成若干血清型
抗体检测
ELISA:敏感、特异性高、快速经济。
补体结合试验:常用血清学方法。双份血清效价4倍以上增
长或单份血清>=1:64-1:128,老年病人阴性不能排除。敏 感性和特异性90%左右。检测IgM,初次感染阳性,再次感 染常不出现阳性。 间接血凝试验:操作简便,敏感性略高于CF试验,主要检
梅毒螺wk.baidu.com体
临床意义
梅毒的病原体,人是唯一传染源
传播途径 母婴传播
性传播
输血传播
获得性梅毒,临床上分为三期:初期、中期、晚期
先天性梅毒
微生物学特性
形态与染色
8-14个致密而规则小螺旋,两端尖直,运动活泼 Fontana 镀银染色染成棕褐色 暗视野观察形态和运动方式
培养特性
不能在无活细胞人工培养基中生长繁殖
伯氏疏螺旋体
回归热螺旋体 赫姆疏螺旋体 奋森疏螺旋体
莱姆病
流行性回归热 地方性回归热 多种口腔感染
硬蜱
体虱 软蜱 条件致病
分类与命名
Ⅴ钩端螺旋体:螺旋细密规则,一端或两端弯 曲呈钩状
问号钩端螺旋体
钩端螺旋体病 接触疫水
Ⅷ密螺旋体:8-14个细密规则的螺旋,菌体硬 直,两端尖
梅毒螺旋体 雅司螺旋体
一类缺细胞壁、形态多样、能通过除菌 滤器,在无生命培养基中能生长繁殖的 最小原核细胞型微生物。
分类与命名
支原体目、支原体科(支原体属和脲原体属)
对人致病的主要有
肺炎支原体(M. pneumoniae)
人型支原体(M. hominis)
生殖器支原体(M. genitalium) 穿通支原体(M. penetraus) 溶脲脲原体(U. urealyticum)
形态结构:长10-40um,宽0.1-0.3um,两端稍尖, 运动活泼。革兰染色阴性,但不易着色。姬氏或 瑞氏染色效果好。
培养特性:营养要求高,微需氧,适宜温度35 ℃。生长慢,需培养2-3周才可观察到生长情况。 抵抗力:抵抗力弱,对青霉素、红霉素等敏感。
微生物检验
标本采集:病损皮肤组织、淋巴结抽出液、血 液、关节滑膜液、脑脊液、尿液等
微生物特性
形态结构 螺旋细密而规则,菌体一端或两端弯 曲呈问号或C、S形 基本结构:外膜 内鞭毛(两根) 原生质圆柱体
微生物特性
抗原构造
属特异性抗原 只存在钩端螺旋体属中
血清学诊断,分类及抗原结构分析
群特异性抗原 型特异性抗原 菌体脂质多糖复合物 表面抗原,多糖蛋白复合物
血清群和血清型分类
Fontana 镀银染色镜检
直接荧光检测法
暗视野显微镜检查
镀银染色
微生物检验
标本直接检查 核酸检测 采用PCR检测标本中梅毒螺旋体的特异性
DNA 片段
体外培养
迄今仍未解决
抗体检测
非密螺旋体抗原试验
多用牛心肌的心脂质作为抗原,测定血清中的反应素; 可定性和半定量,半定量可用来评价疗效和判断是否有再 感染等 性病研究实验室(Venereal Disease Research Laboratory, VDRL)玻片试验
早期(1周内)血液阳性率高,1周后尿和脑脊液等的阳性率高。 感染6-10天取血可检出抗体,第3-4周达最高水平。 尸检:肝、肾、脑、肺等
微生物检验
直接检查
直接显微镜检查:差速离心,取沉淀涂片,暗 视野检查或采用Fontana 镀银染色镜检 核酸检测
微生物检验
分离培养 取血液、尿液、CSF等接种Korthof 培养基 鉴定 已知诊断血清鉴定血清群和血清型 抗体检测 病初和发病3-4周采双份血清 显微镜凝集试验:>1:300或双份血清效价增高4倍以上 间接凝集试验:单份血清标本活性碳凝集效价>1:8, 乳胶凝集效价>1:2,双份血清效价增高4倍以上更有诊 断价值 ELISA:被检血清OD值为阴性对照的2倍 动物试验 分离钩端螺旋体的敏感方法 幼龄豚鼠或金地鼠腹腔接种
疏螺旋体
有3~10个稀疏而 不规则的螺旋, 呈波状,运动活 泼
伯氏疏螺旋体
莱姆病的主要病原体, 主要传播媒介是硬蜱
分类
DNA同源性分析莱姆病菌株 伯氏疏螺旋体:美国和欧洲 伽氏疏螺旋体:欧洲和日本 埃氏疏螺旋体:欧洲和日本 分类尚未统一,一般以伯氏疏螺旋体作为莱姆 病病原体的统称。
生物学特性
抵抗力
抵抗力极弱,对温度和干燥特别敏感 ,4 ℃ 3天死亡 对青霉素,四环素,红霉素,庆大霉素或砷剂敏感
微生物检验
检验程序:图18-5 标本采集 下疳分泌物、皮疹渗出液、淋巴结穿刺液、 组织块(制成组织悬液) 标本要及时检查
微生物检验
标本直接检查
直接显微镜检查:暗视野显微镜检查
(适用Ⅰ、Ⅱ期梅毒)
早期诊断意义。
免疫斑点试验:敏感、特异性强,快速,不需特殊仪器。
微生物检验
培养与鉴定
增菌:液体培养基(含酚红和尿素)
阳性转种新的液体培养基和固体培养基(尿素 和MɡSO4 ) 涂片作G染色、姬娒萨染色和细胞壁染色观察菌 体形态,根据形态和生化反应作出初步鉴定,
MIT和GIT作进一步鉴定。
抗体检测:意义不大
快速血浆反应素环状卡片试验(Rapid Plasma Reagin circle card, RPR),可进行半定量,进行疗效评价和判 断是否有再感染。 注意:假阳性、假阴性问题
抗体检测
密螺旋体抗原试验 不能区别不同种的密螺旋体及所致疾病 荧光密螺旋体吸收试验(FTA-ABS):具高度特异性和敏 感性,适用于早期梅毒的诊断,可持续数年至终身。 梅毒螺旋体荧光抗体双染色试验(FTA-ABS-DS):对早期 和晚期梅毒均有很高敏感性和特异性,且阳性出现时间早,
测IgM,特异性尚不理想。
冷凝集试验:冷凝集素是支原体感染后机体产生的一类IgM
型自身抗体,非特异试验。效价>=1:64为阳性,效价越高或
双份血清4倍以上升高,近期感染的可能性越大。
溶脲脲原体
Ureaplasma urealyticum ,Uu 非淋病尿道炎患者的尿道分泌物中分离得到 寄居于人泌尿生殖道,男性尿道、阴茎包皮和女性阴道, 偶可自呼吸道分离出。 临床意义
螺旋体和支原体
螺旋体(Spirochete)
一类细长、柔软、弯曲呈螺旋状、运动活泼的原核
细胞型微生物,生物学地位介于细菌与原虫之间。
分类与命名
分类依据:大小、螺旋数目、螺旋规则程度和 螺旋间距
分类与命名
一目一科:螺旋体目
螺旋体科:分为8个属(Ⅰ-Ⅷ)(表18-1)
Ⅰ疏螺旋体:3-10个稀疏不规则的螺旋,波纹状
免疫印迹技术:有助于排除ELISA的假阳性。
动物实验 经典方法,但烦琐,有生物危害,一般实验室 很少使用。
回归热疏螺旋体:人类回归热病原体
虱传回归热(流行性回归热):病原体为回归热疏螺旋体, 通过体虱传播。
蜱传回归热(地方性回归热):病原体为杜通疏螺旋体等15 种,软蜱传播,储存宿主为啮齿类动物。 反复发作的发热与缓解—螺旋体外膜蛋白的变异。 取外周血用暗视野显微镜观察;直接涂片染色;培养; 动物实验 抗原易自发变异,血清学诊断困难。