2-巯基-6-羟基-4,5-二氨基嘧啶螯合-浊点萃取-HPLC测试金属离子的研究

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非蛋白质巯基含量检测试剂盒说明书微量法

非蛋白质巯基含量检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号：BC1435规格：100T/48S产品内容：提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体30mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存。

临用前加入2mL无水甲醇充分溶解备用。

标准品：粉剂×1支，10mg半胱氨酸，4℃保存。

临用前加入1.65mL提取液溶解为50µmol/ml的半胱氨酸标准溶液。

产品说明：生物体内巯基主要包括非蛋白质巯基和蛋白质巯基。

巯基化合物在体内具有重要的解毒功能，对生物体的自我调节具有非常重要的生理意义。

巯基基团与5,5’-二硫代-双-硝基苯甲酸（DTNB）反应，生成黄色化合物，在412nm处有最大吸收峰。

自备实验用品：可见分光光度计/酶标仪、离心机、恒温水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、甲醇、研钵/匀浆器和蒸馏水。

操作步骤：一、样品的制备1、动物、植物组织：称取约0.1g，加入1mL的提取液，制备成10%的匀浆，10000g，常温离心10min，取上清待测。

2、细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）然后10000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。

3、血清（浆），培养液：向0.1mL血清（浆）或培养液中加入1mL提取液，10000g，常温离心10min，取上清待测。

二、测定步骤1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至412nm，蒸馏水调零。

2、将50μmol/mL标准溶液用提取液稀释至0.4、0.3、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125μmol/mL的标准液，现用现配。

3、操作表对照管测定管标准管空白管上清液（μL）6060--标准品（μL）--60-试剂一（μL）130130130130试剂二（μL）-2020-O（μL）2080H2混匀，室温放置10min，吸取200μL于微量比色皿/96孔板中测定412nm吸光值，分别记为A对照、A测定、A标准、A空白，计算ΔA测定=A测定-A对照，算ΔA标准=A标准-A空白。

HPLC法测定大黄提取物中5种蒽醌的含量

HPLC法测定大黄提取物中5种蒽醌的含量作者：卓俊睿来源：《现代养生·下半月版》 2017年第5期【摘要】目的：采取HPLC 法测量评定中药材大黄中5 种蒽醌（芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄素和大黄酸）的含量。

方法：采用依利特ODS2 C18、柱(200mm×4.6mm,5μm)，流动相为无水甲醇- 浓度0.1% 磷酸(75:25,V/V），流速为1ml/min，检测波长为255nm，柱温26℃。

结果：芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄素和大黄酸的回归方程如下：Y=1.97X-0.35，相关系数R=0.99993;Y=0.98X-0.21，相关系数R=0.99996;Y=1.26X-0.16，相关系数R=0.99994;Y= 2.35X +0.17，相关系数R=0.99992;Y=1.93X+0.08，相关系数R=0.99992;5 种蒽醌的回收率如下：99.49%,97.37%,99.21%,98.84% 和98.74%。

结论：用HPLC 法测定大黄提取物中5 种蒽醌的含量不仅简单快捷，而且具有准确性高、重现性好的特点，可以用于推广。

【关键词】HPLC 法；芦荟大黄素；大黄素甲醚；大黄酚；大黄素；大黄酸目前对大黄的研究已较为深入，然而以HPLC 法对大黄蒽醌含量的测定仍然欠缺研究，因此开展本研究，希望提供参考。

1 研究材料大黄样品采用自成都市大黄中药材培植基地所产的掌叶大黄。

实验仪器为Ultimate3000高效液相色谱仪、赛多利斯BT125D 电子天平及KQ-250D 型超声波清洗器。

主要试剂方面，芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄素和大黄酸5 中对照品及磷酸、分析甲醇、色谱甲醇等均来自市场购买，去离子水由研究者自制。

2 研究方法2.1 色谱条件255nm 的检测波长；1ml/min 的流速；柱温26℃；色谱柱采用依利特ODS2C18、柱(200 mm x4.6 mm,5μm)。

高效液相色谱2光度法测定金属离子的进展

高效液相色谱-光度法测定金属离子的进展高效液相色谱( HPLC) 是有机、生化分析的重要工具,在无机分析方面也发展迅速。

高效液相色谱仪配置较多的是光度检测器,有关高效液相色谱-光度分析( HPLC-SP) 的报道也较多，HPLC2SP 法测定金属元素,一般需要将游离的金属离子与有机显色剂反应,进行衍生,生成金属螯合物。

光度法中选择性差,灵敏度高的显色剂,最适于HPLC-SP 法采用。

将各种富集技术与高效液相色谱法相结合,是扩大HPLC 在分离测定金属离子方面应用的重要手段。

杨越冬研究了用壳聚糖作富集柱,以二甲酚橙为柱前衍生试剂,分离测定海水中痕量铜、铁、锌的新方法。

台希等分别报道了采用固相萃取小柱富集相应金属, HPLC 分离测定的研究,检出限达到ng ·L - 1 级别,富集倍率可达100倍,可用于烟草、烟草添加剂、水样和中草药中金属离子的测定。

Michael等采用在线固相萃取与反相离子对高效液相色谱相结合的技术测定矿石中镧系元素。

Wang Liang 等也报道了采用富集柱在线富集,并通过六通阀切换上分析柱测定汞、铅、镉的新方法。

Anna Tang 等以二乙基二硫代氨基甲酸盐(DDTC) 为衍生试剂,以Triton X2114 为萃取剂,采用浊点萃取(CPE) 技术富集、HPLC 分离测定的手段,成功地对Cr3 + 和Cr ( Ⅵ) 进行了分离测定,检出限分别为3. 4 和5. 2μg ·L - 1 。

浊点萃取是近年来出现的一种新兴的液2液萃取技术,它不使用挥发性有机溶剂,不影响环境。

将该技术与HPLC 结合,将为分析工作者提供广阔的研究空间。

随着HPLC2SP 法测定金属离子的研究不断深入,一些新的方法、应用也有见报道。

刘绍璞等基于变色酸2C 和TAN 双显色体系发展了一种同时测定μg ·L - 1 级铍、铬、铜、铁、镍的新RP2HPLC法。

与单种显色剂体系相比较,该法优点在于同时测定的金属离子的数目增多了,效率得到了提高,其缺点在于要同时找到两种显色剂与金属离子的适宜反应条件(包括流动相组成等) 是相当困难的。

基于巯基嘌呤多肽修饰的金纳米粒子的比色方法检测溶液中的镉离子

２＋４０μ ｍｏｌ／ＬＣｄ储备液，混合５ｍｉｎ后，再向其中加入１０μ Ｌ１ｍｍｏｌ／Ｌ的ＥＤＴＡ和４０μ Ｌ００２ｍｏｌ／Ｌ
ＮａＯＨ，１０ｍｉｎ后测其紫外可见吸收光谱。
２结果与讨论
２＋２．１体系对不同浓度Ｃｄ的响应２＋该体系对不同浓度Ｃｄ的响应变化比较明显。在最优条件（２％ＡｕＮＰｓ，１０ｍｍｏｌ／ＬＨＥＰＥＳ和
２＋ｖａｒｉｏｕｓｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｆＣｄｆｏｒ５ｍｉｎ（ｆｒｏｍｌｅｆｔｔｏ
２％ＡｕＮＰｓ的紫外可见最大吸收峰位置为５２２ｎｍ，
２＋ｄ浓度的增大，最大吸收峰位置逐渐红移至随着Ｃ
２＋２＋２＋２＋干扰离子（Ｃｏ、Ｐｂ、Ｈｇ和Ｚｎ）的影响，以确２＋定缓冲溶液的组成。体系中无Ｃｄ存在时，
２＋图１２％ＡｕＮＰｓ与不同浓度的Ｃｄ反应５ｍｉｎ后的
紫外可见吸收光谱Ｆｉｇ．１ＵＶＶｉｓｉｂｌｅｓｐｅｃｔｒａｏｆ２％ＡｕＮＰｓａｆｔｅｒａｄｄｉｎｇ
第６期
朱志军等：基于巯基嘌呤／多肽修饰的金纳米粒子的比色方法检测溶液中的镉离子
７１７
３ＣｄＳＯ · ８ＨＯ，Ｐｂ（ＣＨＣＯＯ），Ｈｇ（ＮＯ） · ２ＨＯ等，以上试剂均为分析纯，购自北京化工厂，实验用水均４２３２３２为超纯水（１８２Ｍ · ｃｍ）。 Ω １．２金纳米粒子的制备及功能化

中药何首乌中二苯乙烯苷的含量测定(HPLC法)(精)

再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，
静置，上清液滤过，取续滤液，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
注：本品按干燥品计算，含2，3，5，4’四羟基二苯乙烯-2-O-β-D一葡萄糖苷
(C20H22O9)不得少于1.0％。
依利特 P230/UV230+/EC2000型效液相色谱仪操作规程
统。
清
理
每次操作完毕后，应及时清理所用物品，
废液倒到废液容器内，所用的玻璃仪器及
时送到洗刷池。实验台面、仪器表面用柔
软的抹布擦拭干净，时刻保持实验台和仪
器的整洁。
洗时间约20～30分钟。再用高浓度甲醇（含甲醇
85%以上）溶液冲洗，约30～60分钟（注：不能直
接用有机溶剂冲洗，盐类易析出，堵塞色谱柱，
造成色谱柱永久性损坏；所用水最好是重蒸馏的
水。必须抽滤和脱气）。最后用纯甲醇冲洗约10 分钟，以保存色谱柱。
（2）不含盐的流动相的冲洗方法：操作结束
后，先用流动相冲洗约10～15分钟，再用
字至所需流速和最高和最低压力,再按“确
认”键。然后启动泵看压力是否超过范围。
（3）调波长：根据检品要求调“波长”。方法：打开“检测器”电源，按“操纵菜单”键,屏幕显示 “MENU1”后按“△”或 “▽”键进行波长设定,设定是按数字键后按 “确认”。
打开色谱工作站[ONLINE]
1.设置分析方法：根据检品所需设置分析方法（或直接调出本检品已保存的方法）等待进样。 2.进样：待色谱工作站中的基线平稳后，进样。用仪器配备的进样器，或用一次性注射器（进样器使用之前要用纯化水及供试品润洗2-3次），吸取一定量的待检液（不少于 20ul。因进样器定量环自动控制在20ul。），进样阀处于

浊点萃取分光光度法测定黄芪水煎液中的痕量铜

浊点萃取分光光度法测定黄芪水煎液中的痕量铜要如磊;王尚芝【摘要】为了建立一种测定痕量铜的新方法,选用8-羟基喹啉为铜的络合剂,Triton X-114为萃取剂,并将Cu(II)与8-羟基喹啉形成的络合物萃取到表面活性剂相,采用分光光度法进行测定.通过系列实验得出最优实验条件:铜Cu(II)与8-羟基喹啉络合物测定波长412 nm,缓冲溶液pH=7.0、用量为3.50 mL,8-羟基喹啉络合剂用量为0.70 mL,Triton X-114萃取剂用量为0.60 mL,选择平衡温度为45℃、时间为20 min.在最优实验条件下,检出限为0.014 mg/L,相对偏差为4.01％.该法用于黄芪水煎液中痕量铜的测定,回收率为95.5％～98.3％,结果令人满意.【期刊名称】《武汉工程大学学报》【年(卷),期】2018(040)004【总页数】4页(P391-394)【关键词】铜;黄芪;浊点萃取;分光光度法【作者】要如磊;王尚芝【作者单位】阳煤集团太原化工新材料有限公司,山西太原 030040;阳煤集团太原化工新材料有限公司,山西太原 030040【正文语种】中文【中图分类】O652.1铜为人体所必需的微量元素之一，铜元素的缺乏和过量储积都会造成严重的疾病［1-2］，而限制饮食中铜含量过少或过多则是预防和治疗铜中毒的方法之一。

测定铜通常采用电化学分析法、原子吸收光谱法、电感耦合等离子体发射光谱法、分光光度法、原子荧光光谱法等。

相对于前几种分析方法，分光光度法具有操作简单、价格低的优点。

黄芪是临床常用中药之一，含有皂苷、黄酮、多糖、氨基酸以及铜、锌等多种人体所需的微量元素。

由于多数黄芪采用水煎工艺服用，故实际服用水煎剂中的铜含量比原药材中的铜含量重要的多［3］。

本文选用山西省浑源县恒山产的地道黄芪，按常规煎制后，采用分光光度法对其铜含量进行了分析。

由于铜在黄芪中的含量极低，因此为了分析结果准确、可靠，在测定前需对样品中痕量铜进行分离富集。

环境样品前处理技术3

疏水性聚合物类固相萃取吸附剂
疏水性聚合物萃取吸附金属离子疏水性聚合物萃取吸附金属离子-螯合剂疏水性螯合物负载螯合剂的疏水性聚合物直接吸附萃取金属离子
其他基于疏水性作用的金属离子固相萃取形式
C60富勒烯微晶萘负载有机螯合剂
第七节固相萃取的展望
固相萃取技术在样品处理中的作用分两种：固相萃取技术在样品处理中的作用分两种：一是净化，二是富集,这两种作用可能同时存在。是净化，二是富集,这两种作用可能同时存在。其长处在于方便和消耗试剂少，其长处在于方便和消耗试剂少，短处在于批次间的重复性难以保证
结构局限性
矛盾1 矛盾1 液面的问题
当我们进行活化、净化，当我们进行活化、净化，洗脱等典型的固相萃取操作时，会使用不同溶剂，萃取操作时，会使用不同溶剂，这时的操作要求在液面下降到筛板时换加不同溶剂，加得太晚，在液面下降到筛板时换加不同溶剂，加得太晚，会使填料中干涸产生气泡，会使填料中干涸产生气泡，影响结果的稳定性（甚至会因为溶液的张力问题而使液面无法下）。相反如果加得太晚，相反，降）。相反，如果加得太晚，会使加入溶液和在筛板上的原有溶液混合，筛板上的原有溶液混合，产生一个其实是我们不希望存在的、无法预料极性的新洗脱液，希望存在的、无法预料极性的新洗脱液，使结果的可靠性大打折扣。的可靠性大打折扣。
亚氨基二乙酸基螯合型固相萃取吸附剂
含有三个配位原子，含有三个配位原子，起配位作用的原子是氮和氧多中金属离子形成配位化合物应用最早，应用最早，使用广泛
其他螯合型金属离子固相萃取吸附剂
二硫代氨基甲酸酯类氧肟酸类巯基及巯基苯并噻唑类氨基磷酸类异羟肟酸酯硅胶
基于疏水性相互作用的固相萃取
固相萃取的应用优势

HPLC测定核黄素磷酸钠中核黄素的含量

HPLC 测定核黄素磷酸钠中核黄素的含量邓洁雄(广州市药品检验所四分所,广东广州510405)摘要:目的建立核黄素磷酸钠中核黄素的含量测定方法㊂方法高效液相色谱法,采用NH 2色谱柱,以乙腈⁃0.02mol /L 磷酸二氢钾(体积比67∶33)用稀盐酸调pH5.3为流动相,荧光检测,激发波长:445nm ,发射波长:520nm ㊂结果核黄素在0.1092~2.184μg /mL 范围与峰面积呈良好的线性关系(r =0.9999),平均回收率为99.1%,RSD 为1.5%㊂结论本方法准确,灵敏,快捷㊂关键词:核黄素;核黄素磷酸钠;HPLC中图分类号:R 文献标识码:A　文章编号:1006-8783(2006)01-0053-02作者简介:邓洁雄,女,42岁,西药师,主要从事药品检验㊂Determination of riboflavin in riboflavin sodium phosphate by HPLCDeng Jie⁃xiong (Guangzhou Institute for Drug Control ,The Fourth Branch Guangzhou ,510405China )Abstract :Objective To develop the assay methods of riboflavin in riboflavin sodium phosphate.Methods HPLC method was used to determine riboflavin in riboflavin sodium phosphate with NH2column.The mobile phase consisted of acetonitrile-0.02mol /L potassium dihydrogen phosphate (67∶33)(adjusted the solution with hydrochloride acid to pH 5.3).The fluorometric detector,excitation wavelength:445nm,emission wavelength:520nm.Results Riboflavin had a good linearity(r =0.9999)within 0.1092~2.184μg /mL.The average recovery was 99.1%,with the RSD of 1.5%(n =5).Conclusions The method is accurate,sensitive and rapid.Key words :riboflavin;riboflavin sodium phosphate;HPLC 核黄素磷酸钠中国药典[1]㊁美国药典[2]㊁英国药典[3]均有收载㊂中国药典没有对有关杂质进行测定,美国药典和英国药典均采用非极性的C 18柱进行分离测定㊂但由于核黄素的极性小,保留时间较长,整个分离分析约需45min,另外峰较宽,检测灵敏度较低㊂本文采用高效液相色谱法对核黄素磷酸钠的有关杂质核黄素进行含量测定,采用极性的NH 2柱,用荧光检测,核黄素的保留时间约2.9min,峰锐,大大缩短了分离分析的时间,方法灵敏,结果准确㊂1　仪器与试药岛津LC 10AT 液相色谱仪,带SIL 10AT 自动进样器,RF 10AXL 荧光检测器,Class⁃vp5.0色谱工作站㊂核黄素对照品为美国药典参考标准(USP R.S.)由广州药物研究中心提供㊂核黄素磷酸钠,批号:03704(由顺德南方生物制药有限公司提供);批号:0401181㊁040118 2(由珠海生物化学制药厂提供)㊂乙腈为色谱用试剂,磷酸二氢钾为分析纯试剂,稀盐酸按中国药2005年版二部配制,水用纯水器制备的高纯水㊂2　方法与实验2.1　溶液配制2.1.1　核黄素对照贮备液的制备　取核黄素对照品约10mg,精密称定,置100mL 棕色量瓶中,加36%盐酸0.2mL 使溶解后,加水稀释至刻度,摇匀,备用㊂2.1.2　对照品溶液的制备　精密量取核黄素对照贮备液3mL,置25mL 棕色量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,精密量取2mL,置20mL 棕色量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀㊂2.1.3　供试品溶液制备　取本品约10mg,精密称定,置50mL 棕色量瓶中,加水6mL 使溶解后,加流动相稀释至刻度,摇匀,精密量取2mL,置20mL 棕色量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇篮匀㊂2.2　测定方法2.2.1　色谱条件　色谱柱:Nucleosil NH 25μm (150mm ×4.6mm);流动相:乙腈⁃0.02mol /L 磷酸二氢钾(67∶33)用稀盐酸调pH5.3;流速:1.0mL /min;荧光检测,激发波长:445nm;发射波长:520nm㊂在上述色谱条件下,分离核黄素和核黄素磷酸钠的色谱图见图1㊂2.2.2　测定法　精密量取对照品溶液与供试品溶液各50μL,分别注入液相色谱仪,记录色谱图,按外标法以峰面积计算核黄素的含量㊂35第22卷第1期广　东　药　学　院　学　报Vol.22No.12006年2月JOURNAL OF GUANGDONG COLLEGE OF PHARMACYFeb.2006!"#$#%$""&""&'"&(!)*+,-%.%%.'%.( )/!"#$#%$"&'()*+,-$./!0"1%%1.%1- &21㊁3㊁4㊁5㊁6㊁8为未知相关物质;2㊁核黄素t R 2.86min 7㊁核黄素磷酸钠t R 18.34min 图1　核黄素对照品(A )和核黄素磷酸钠样品(B )色谱图Fig.1　Chromatogram of ribofavin (A )and ribofavin sodium phosphate (B )2.3　方法验证2.3.1　专属性试验　取本品,照 2.1.3”项下方法操作,测定㊂供试品溶液呈现与对照品溶液主峰保留时间㊁峰形一致的色谱峰㊂经供试品溶液与对照品溶液混合分离,以及调整流动相再分离,核黄素对照品主峰与供试品呈现相应的色谱峰始终重叠,峰形也没有改变,证实供试品呈现与对照品主峰保留时间一致的色谱峰为核黄素的色谱峰㊂2.3.2　标准曲线绘制　精密量取核黄素对照品贮备液3mL,置100mL 棕色量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,分别精密量取1.0㊁2.0㊁5.0㊁10.0㊁15.0㊁20.0mL,各置25mL 棕色量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,测定㊂以峰面积(A )为横座标,相应的质量浓度(ρ)为纵座标作图,求得一元线性回归方程:ρ=2.5664×10-7A -0.0042257,r =0.9999(n =6)㊂可见核黄素在0.1092~2.184μg /mL 浓度范围与峰面积呈良好的线性关系㊂2.3.3　重复性试验　制备两份对照品溶液,每份进样3次,结果核黄素的平均响应值为2.5609×10-7,RSD =0.7%㊂2.3.4　加样回收试验　取已测定核黄素含量的核黄素磷酸钠约8mg ,精密称定,置50mL 棕色量瓶中,制备6份,其中5份分别精密加入核黄素对照品贮备液1.0㊁2.0㊁4.0㊁6.0㊁8.0mL ,按供试品溶液制备自加6mL 水 ”起,同法操作,测定㊂按加样回收计算回收率,结果见表1㊂表1　加样回收测定结果Tab.1　Results of recovery testNO ρ(加入)/(μg㊃mL -1)ρ(测得)/(μg㊃mL -1)回收率/%平均值/%RSD /%10.1820.182100.020.3640.36299.530.7280.734100.899.1 1.54 1.092 1.06297.251.4561.42697.92.3.5　样品测定　按对照品溶液的制备与供试品溶液的制备和测定方法,测定3批样品,结果见表2㊂表2　样品测定结果Tab.2　Assay results of sample批号测得值/%平均值/%037042.112.10 2.1040118-13.803.80 3.8040118-23.573.553.63　讨论3.1　从样品色谱图可见,除核黄素和核黄素磷酸钠主峰外,在2.5㊁4.9㊁5.3㊁6.2㊁15.6㊁20.3min 还可见分出6个色谱峰,这与核黄素磷酸钠存在核黄素二磷酸盐和不同取代位的单磷酸盐相关㊂对于它们的归属,由于缺少对照品,有待进一步研究㊂3.2　本文的色谱分离,主要参考注射用水溶性维生素”(国家卫生部药品标准)的色谱条件,经调整选定㊂实验表明,增加流动相中乙腈的量,可改善核黄素峰与相邻未知峰的分离,但核黄素磷酸钠的保留延长,且与相邻峰的分离变差㊂在选定的色谱条件下,各组分的分离效果较好㊂3.3　核黄素磷酸钠中核黄素的含量测定属于杂质的含量测定,参考文献[4]经过实验,核黄素的最低定量限按信噪比10∶1计算为0.03μg /mL㊂如按本实验能准确精密测定的直观评价则为0.1μg /mL㊂3.4　测定3批样品,含核黄素均低于美国药典和英国药典不得过6.0%的要求㊂(本文得到广州市药品检验所胡家炽主任药师指导,特此致谢!)参考文献:[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典:二部[S ].北京:化学工业出版社,2005:601.[2]United States Pharmacopeial P 27[S ].USA :Boardof Trustees ,2000:1646.[3]British Pharmacopoeia Commission.Bp 2003[S ]UK :HMSO ,2003:1623.[4]ICH 指导委员会.药品注册的国际技术要求[M ].北京:人民卫生出版社,2000.50.(收稿日期:2005-11-01;修回日期:2006-02-10)45广东药学院学报,2006,22(1)。

HPLC法测定奥美拉唑中间体(2-巯基-5-甲氧基苯并咪唑)的纯度

349927 969063 1588891 2199725 3167027
平均峰面积 350026 968989 1586941 2202546 3165355
RSD(%)
0.04 0.03 0.20 0.13 0.05
峰面积与样品浓度的线性关系如下图所示：
4000000
峰面积与样品浓度的线性关系 A=10555C R2=0.9996
3.讨论 (1)本方法供试品溶液制备方法简便易行，在该色谱条
件下2-巯基-5-甲氧基苯并咪唑分离效果良好，系统适应性和精密度试验均符合要求，结果理想。
(2)本品采用三乙胺缓冲液作为流动相以减小主峰的拖尾，效果良好。
(3)根据对流速的考察，发现当流速为1.0mL/min时，2巯基-5-甲氧基苯并咪唑分离效果更好，出峰时间更适中。
平均值
3165438.2
RSD(％)
0.04％
方法精密度——最大单个杂质（批号：090201 ）
序号
1
2
3
4
5
6
最大单个杂质（％） 0.06 0.06 0.06 0.06 0.06 0.06
平均（％）Biblioteka 0.06偏差（％）
0
0
0
0
0
0
方法精密度——总杂质（批号：090201 ）
序号
1
2
3
4
5
6
总杂质（％） 0.18 0.19 0.18 0.18 0.18 0.18
124 当代化工研究 Chenmical Intermediate
生物制药与研究
2017·02
浓度（ug/ml）
30 90 150 210 300

HPLC法测定贝林司他中有关物质的含量

HPLC法测定贝林司他中有关物质的含量作者：孙朋杰张莉杜超李伟卓秋琪来源：《中国药房》2021年第08期中图分类号 R917 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2021）08-0973-06DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2021.08.13摘要目的：建立贝林司他中有关物质的含量测定方法。

方法：采用高效液相色谱法检测并以加校正因子的主成分自身对照法进行计算。

以ODS-AM为色谱柱，以1.02%磷酸二氢钾缓冲液（用磷酸调节pH值至3.5）-乙腈（85 ∶ 15，V/V）为流动相A、1.02%磷酸二氢钾缓冲液（用磷酸调节pH值至3.5）-乙腈（30 ∶ 70，V/V）为流动相B进行梯度洗脱，流速为1.0 mL/min，柱温为30 ℃，检测波长为220 nm，进样量为10 μL。

结果：贝林司他及杂质A、D、F、G、H的线性范围分别为0.113～1.693、0.050～1.496、0.117～1.750、0.098～1.471、0.120～1.799、0.100～1.506 μg/mL（r≥0.999 7），后5个杂质的校正因子分别为1.0、1.0、1.2、1.5、1.0;检测限分别为0.250、0.590、0.490、0.600、0.500 ng，定量限分别为0.500、1.170、0.980、1.200、1.000 ng，回收率为90.18%～111.48%（RSD为1.52%～4.78%，n=9），稳定性（100 h）、精密度试验的RSD均不大于16%，耐用性良好。

3批贝林司他原料药中检测出杂质A、D、H，含量分别为0.030%～0.038%、0.019%～0.022%、0.012%～0.013%，其他最大单体杂质含量为0.012%～0.013%，总杂质含量为0.075%～0.084%，未检出杂质B、C、F、G。

结论：成功建立了测定贝林司他中有关物质含量的方法，且方法准确、专属性好。

4,6-二羟基嘧啶双极膜分析方法

DHP分析方法（双极膜）液相色谱仪：Agliengt1200色谱柱：C18流动相：乙腈：水=50：50波长：λ=254nm流速：1.0mL/min1.DHP标准品的配制称取0.05g标准品于100 mL容量瓶中，加适量NaOH溶液至标品溶解，再加水定容，用大肚移液管移取5 mL于50 mL容量瓶中并定容。

进样量20.0μL2.DHP原液总碱含量：称取约0.4g（10d）原液于锥形瓶中，加适量蒸馏水，加2滴酚酞指示剂，用0.1000mol/mL HCl标准溶液滴定至粉红色消失30s不变DHP含量：称取约0.1g（2滴）原液于100mL容量瓶中，调酸至PH=7左右，定容。

进样量20.0μL。

3.DHP处理后物料（双极膜）总碱含量：称取约1.0g（1mL）原液于锥形瓶中，加适量蒸馏水，加2滴酚酞指示剂，用0.1000mol/mL HCl标准溶液滴定至粉红色消失30s不变DHP含量：称取约0.1g（2滴）反应液于100mL容量瓶中，（基本不调酸）定容。

进样量20.0μL。

4.DHP处理后碱液（双极膜）总碱含量：称取约0.4g（10d）原液于锥形瓶中，加适量蒸馏水，加2滴酚酞指示剂，用0.1000mol/mL HCl标准溶液滴定至粉红色消失30s不变DHP含量：称取约1.0g（1mL）反应液于100mL容量瓶中，调酸至PH=7左右，定容。

进样量20.0μL。

5. DHP产品含量的测定（酸碱滴定）空白：移取50 mL 0.1000mol/mL NaOH非标准溶液于锥形瓶中，用0.1000mol/mL HCl标准溶液滴定至粉红色变淡，记空白组HCl消耗量V0产品：称取约0.1g产品于锥形瓶中，移取50 mL 0.1000mol/mL NaOH非标准溶液将样品完全溶解，呈黄色。

加2滴酚酞指示剂，用0.1000mol/mL HCl标准溶液滴定至粉红色消失30s不变.6.直接酸化处理后母液、洗液母液：称取0.4000g（约10滴）母液于25.0 mL容量瓶中，加碱调PH=7左右，定容。

氨基和巯基修饰磁性吸附剂脱除汞离子和镉离子的试验

氨基和巯基修饰磁性吸附剂脱除汞离子和镉离子的试验王靓;黄亚继;关正文;李睦;周军;孙青柯【摘要】The magnetic ferric oxide nanoparticle adsorbents modified by amino and thiol were prepared for the removal of mercury ions and cadmium ions in solutions.Results showed that in the case of single ion solution,90％ of the metal ions could be removed after 25 min with the adsorbent dosage at 1 g/L,or after 20 min with the dosage at 2.5g/pared comprehensively,the thiol-modified adsorbent had better adsorption effect than the amino-modified sorbent.As to the case of dual ion solution,required amounts of both the adsorbents increased.Both the adsorbents had better selective adsorption for mercury than cadmium.%分别制备了由氨基和巯基修饰的磁性氧化铁纳米粒子吸附剂以吸附脱除溶液中的汞离子和镉离子.结果表明,当溶液中仅有单种离子时,采用1 g/L的投加量,25 min后两种吸附剂均可吸附90％的金属离子;而采用2.5 g/L的投加量,20 min后也可达到90％的脱除效果.综合比较,巯基修饰吸附剂的吸附效果优于氨基修饰吸附剂.当两种金属离子同时存在时,所需的吸附剂量增加.两种吸附剂对汞的选择吸附效果均好于镉.【期刊名称】《净水技术》【年(卷),期】2017(000)003【总页数】6页(P79-84)【关键词】吸附剂;改性;磁性;汞离子;镉离子【作者】王靓;黄亚继;关正文;李睦;周军;孙青柯【作者单位】东南大学能源热转换及其过程测控教育部重点实验室,江苏南京210096;东南大学能源热转换及其过程测控教育部重点实验室,江苏南京210096;中建中环工程有限公司,江苏南京210008;中建中环工程有限公司,江苏南京210008;中建中环工程有限公司,江苏南京210008;东南大学能源热转换及其过程测控教育部重点实验室,江苏南京210096【正文语种】中文【中图分类】TK16重金属污染是最突出的水污染问题之一，其中汞元素和镉元素由于具有显著的毒性和生物富集性而格外引人关注。

ELLMAN试剂法测定自由巯基和二硫键

E L L M A N试剂测定自由巯基试验基于的原理：5,5’-dithiobis-2-nitrobenzoicacid(DTNB)5,5-二硫基-双(2-硝基苯甲酸)5,5-二硫基-双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)在412nm没有吸收，与巯基反应后，生成2-硝基-5-巯基苯甲酸（TNB）[1]。

TNB2-在412nm有很强的吸收，可以用于对肽段的自由巯基进行定量分析[2]。

DTNBTNB2-根据文献记载，TNB的吸光系数在13.6*103M-cm-~14.25*103M-cm-之间[3,4]。

吸光度测量的最灵敏范围在0.2-0.7之间。

A=εbc，其中A为吸光度，ε是摩尔吸收光系数或消光系数，ε单位为升/（摩尔·厘米）[L/(mol·cm）]。

以吸光度下限0.2来计算（吸光系数取14.15*103M-cm-），需要TNB的浓度为c=0.2/（14.15*103LM-cm-*1cm）=1.4*10-5mol/L(1.4*10-8mol/ml)，需要蛋白浓度为1.4*10-5mol/L*18790g/mol=0.2631g/L=0.2631mg/ml.我们的条件可以达到这个检测限度。

ELLMAN试剂法测定自由巯基主要的影响因素有：1.EDTA的适量加入有助于TNB显色的稳定和成梯度线性关系[5]。

2.在不同缓冲液中，TNB的最大吸收波长略微不同，所以它们在412nm的吸收也不3.同，要根据选择的缓冲液来确定[5]。

另外，TNB的分光光度法分析对SDS很敏感[6]。

4.DTNB随着pH的升高，降解速度加快。

在pH7.0，其降解速度为0.02%/h，在5.pH值8.0，其降解速度为0.2%/h,随着pH值得升高，降解速度加快，在pH12时，15min之内会完全降解[7,8]。

6.摩尔吸收光系数在不同的温度下不同，随温度的升高而下降[4].试验方案主要材料：1.材料PEG-G-CSF批号：080229浓度4.32mg/mlG-CSF批号：080126浓度6.9mg/ml10k超滤膜PALL2.试剂SequencingGradeModifiedTrypsin,Promega，lot#237826。

6-甲基-2-巯基-4-羟基嘧啶的合成及提纯

乙酸乙酯求助编辑百科名片乙酸乙酯无色透明液体。

有水果香。

易挥发。

对空气敏感。

能吸水分，水分能使其缓慢分解而呈酸性反应。

能与氯仿、乙醇、丙酮和乙醚混溶，溶于水(10%ml/ml)。

能溶解某些金属盐类（如氯化锂、氯化钴、氯化锌、氯化铁等）。

相对密度0.902。

熔点-83℃。

沸点77℃。

折光率1.3719。

闪点7.2℃（开杯）。

易燃。

蒸气能与空气形成爆炸性混合物。

半数致死量（大鼠，经口）11.3ml/kg 。

有刺激性。

中文名：乙酸乙酯外文名： acetic ether 别名：醋酸乙酯分子式：CH3COOC2H5 相对分子质量：88.11 化学品类别：有机物-酯管制类型：不管制储存：密封阴凉干燥保存目录简介管制信息用途安全措施物理性质紧急处理理化性质乙酸乙酯 ethyl acetate 简写 EA外观与性状主要用途注意事项毒理学资料危险特性实验室制法检测展开简介管制信息用途安全措施物理性质紧急处理理化性质乙酸乙酯ethyl acetate 简写EA外观与性状主要用途注意事项毒理学资料危险特性实验室制法检测展开编辑本段简介结构简式：CH3COOCH2CH3 ，化学式：CH3COOC2H5，[1]分子式：C4H8O2管制信息乙酸乙酯（夏季禁运）该品属于国家首批重点监控的危险化学品。

乙酸乙酯为第3.2类中闪点易燃液体侵入途径：吸入、食入、经皮吸收健康危害：对眼、鼻、咽喉有刺激作用。

高浓度吸入可引起进行性麻醉作用，急性肺水肿，肝、肾损害。

持续大量吸入，可致呼吸麻痹。

误服者可产生恶心、呕吐、腹痛、腹泻等。

有致敏作用，因血管神经障碍而致牙龈出血；可致湿疹样皮炎。

慢性影响：长期接触本品有时可致角膜混浊、继发性贫血、白细胞增多。

用途萃取剂，从水溶液中提取许多化合物（磷、钨、砷、钴）。

有机溶剂。

分离糖类时作为校正温度计的标准物质。

检定铋、金、铁、汞、氧化剂和铂。

测定铋、硼、金、铁、钼、铂、钾和铊。

生化研究，蛋白质顺序分析。

巯基乙酸-中国食品药品检定研究院

附件1化妆品中巯基乙酸的检测方法（征求意见稿）1 范围本方法规定了离子色谱法测定化妆品中巯基乙酸的含量。

本方法适用于化妆品中巯基乙酸及其盐类和酯类含量的测定。

2 方法提要样品中的巯基乙酸经水溶解提取后，用离子色谱仪分离巯基乙酸根与无机离子，电导检测器检测，以保留时间定性，峰面积定量。

本方法巯基乙酸的检出限5.8ng，定量下限20ng。

取样量为0.5g时，检出浓度为46μg/g，最低定量浓度0.15mg/g。

3 试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯或以上规格，水为GB/T6682规定的一级水。

3.1 巯基乙酸，优级纯。

3.2 甲醇，优级纯。

3.3 三氯甲烷，分析纯。

3.4 氢氧化钠，分析纯。

3.5 硫酸溶液[φ（H2SO4）=10%]：取硫酸（ρ20=1.84g/ml）10mL，缓慢加入到90mL水中，混匀。

3.6 盐酸溶液[φ（HCl）=10%]：取盐酸（ρ20=1.19g/ml）10mL，加入90mL水中，混匀。

3.7 淀粉溶液（10g/L）：称可溶性淀粉1g，加水5mL调成溶液，再加入沸水95mL，煮沸，并加水杨酸0.1g或氯化锌0.4g防腐。

3.8 氢氧化钠溶液（500g/L）：称取氢氧化钠50g，加水适量使溶解并至100mL。

再量取一定量用经超声脱气的水稀释到淋洗液浓度。

3.9 重铬酸钾标准溶液[c(1/6K2Cr2O7)=0.1000mol/L]：准确称取已于120℃±2℃电烘箱中干燥至恒重的重铬酸钾基准物质4.9031g ，溶于水并转移至1000mL 量瓶中，定容至刻度，摇匀。

3.10 硫代硫酸钠标准溶液(0.1mol/L)：称取硫代硫酸钠（Na 2S 2O 3▪5H 2O ）26g （或无水硫代硫酸钠16g ）溶于1000mL 新煮沸放冷的水中，加入氢氧化钠0.4g 或无水碳酸钠0.2g ，摇匀，贮存于棕色瓶内，放置两周后过滤，用重铬酸钾标准溶液标定其浓度，标定方法如下：准确吸取重铬酸钾标准溶液（3.9）25.00mL 于500mL 碘量瓶中，加碘化钾2.0g 和硫酸溶液（10%）20mL ，立即密塞，摇匀，于暗处放置10min 。

危险废物鉴定-草甘膦的测定

危险废物鉴定-草甘膦的测定中国科学院广州化学研究所分析测试中心事业部--卿工--189-3394-6343附录L固体废物草甘膦的测定高效液相色谱-柱后衍生荧光法1范围本方法适用于固体废物中的草甘膦的高效液相色谱-柱后衍生荧光法测定。

本方法在试剂水、地下水和脱氯处理过的自来水中的检出限分别为6，8.99，5.99μg/L。

2原理水样过滤后，用阳离子交换柱进行HPLC等度分析。

在65°C下，被测物用次氯酸钙氧化，其产物氨基乙酸（glycine）用含有2-巯基乙醇的邻苯二甲醛在38°C进行反应，得到有荧光相应的物质。

荧光检测的激发波长为340nm，发射波长为>455nm。

3试剂和材料3.1HPLC流动相3.1.2试剂水，高纯水3.1.3取0.005M KHPO4(0.68gm)溶于960ml试剂水中，加入40ml HPLC级甲醇，用浓磷酸将pH调至1.9。

混匀后用0.22μm过滤膜过滤并脱气。

3.2柱后衍生溶液3.2.1次氯酸钙溶液，取1.36gKHPO4,11.6gNaCl和0.4gNaOH溶于500ml去离子水中。

加入将15mgCa(ClO)2溶于50ml去离子水的溶液。

将溶液用去离子水稀释至1000ml。

用0.22μm膜过滤备用。

建议该溶液每天新鲜配制。

3.2.2邻苯二甲醛(OPA)反应液3.2.2.1将10ml2-巯基乙醇和10ml乙腈以1：1比例混合。

密封储存在通风橱中。

3.2.2.2硼酸钠（0.025mol/L），将19.1g硼酸钠（Na2B4O7·10H2O)溶于1.0L试剂水中。

如果在使用前一天配制，硼酸钠在室温下会完全溶解。

3.2.2.3OPA反应液，将100±10mg邻苯二甲醛（OPA）（熔点：55-58℃）溶于10ml甲醇中。

加入1.0L0.025mol/L硼酸钠溶液。

混匀，用0.45μ膜过滤后，脱气。

加入10μl2-巯基乙醇溶液并混匀。

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