ELISA免疫试验(中科院物理所复试)
免疫学实验方法
免疫学实验方法免疫学实验方法是免疫学研究的重要部分，它通过一系列的技术手段来识别、分析免疫系统中的各种生物分子、细胞和组织，以及它们之间的相互作用。
这些方法在免疫学领域广泛应用于疾病诊断、药物研发、疫苗研究等方面，对促进免疫学的发展和应用发挥了重要作用。
下面将介绍一些常用的免疫学实验方法。
一、ELISA法ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种用于检测抗体或抗原的免疫学实验方法。
该方法通过将待测抗体或抗原与固相物质结合，再加入酶标记的二抗来进行标记，最后通过酶底物的底物变色反应或荧光底物的发光反应来检测待测抗体或抗原的存在量。
二、流式细胞仪流式细胞仪是一种用于分析和计数悬浮细胞的仪器，它利用激光照射细胞，通过细胞膜上的特异性抗体标记来检测细胞的表面标记物和内部细胞器的性质和分布，对免疫细胞的表型和功能进行高效的分析。
三、免疫印迹法免疫印迹法是一种用于检测蛋白质的免疫学实验方法，通过电泳将待测蛋白分离，再将其转移到膜上，最后使用特异性抗体和标记的二抗来检测待测蛋白的存在量和大小。
四、免疫组化法免疫组化法是一种用于检测组织中特定蛋白的免疫学实验方法，通过将组织切片后进行脱水、脱脂和脱水处理，再使用特异性的抗体来标记待测蛋白，并观察标记物的颜色变化或发光情况来确定蛋白的位置和表达量。
五、免疫沉淀法免疫沉淀法是一种用于检测蛋白相互作用的免疫学实验方法，通过将待测抗体与蛋白结合，再使用蛋白A/G琼脂糖或磁珠等材料将蛋白抗原免疫沉淀下来，最后使用核酸酶或质谱技术来分析蛋白的互作关系。
以上介绍的是一些常用的免疫学实验方法，它们在免疫学研究中起着举足轻重的作用，不仅在科研领域有重要应用，同时在临床诊断和治疗中也有着广泛的运用。
希望以上内容能够对您有所帮助。
ELISA试验方法
ELISA试验方法ELISA试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay），也称酶联免疫吸附试验，是一种常用于检测抗原或抗体的敏感且特异性的实验方法。
ELISA试验既可以用于研究基础科学，也可以应用于诊断医学、生物制药、科研开发等领域。
第一步：固相吸附首先，将特异性抗原或抗体加入固相载体，如微孔板或磁珠，通过吸附作用将其固定在载体上，形成固相。
然后，将未被吸附的地方进行阻断，例如使用牛血清蛋白（BSA）或胸腺素等阻断剂来封闭非特异性结合位点，减少非特异性结合。
第二步：样品加入将待检样品加入固相，并充分与特异性抗原或抗体反应。
如果待检物是抗原，则待检样品中存在的特异性抗体会与固相上的抗原结合。
如果待检物是抗体，则待检样品中存在的抗原会与固相上的抗体结合。
第三步：洗涤通过反复洗涤固相，去除非特异性结合的物质，确保只有特异性结合物留在固相上。
典型的洗涤液包括缓冲盐水或洗涤缓冲液。
第四步：二抗加入将经过酶标记的二抗加入固相，使其与特异性结合的抗原或抗体结合。
酶标记的二抗可以与特异性结合物形成二抗-抗原或二抗-抗体复合物。
第五步：洗涤再次进行洗涤步骤，去除非特异性结合的酶标记的二抗，确保只有特异性结合的复合物留在固相上。
第六步：底物加入将含有底物的反应物加入固相，使其与酶标记的二抗发生反应。
底物与酶标记的二抗之间的反应产生颜色变化，即可定性或定量检测待检物质的存在和浓度。
第七步：反应停止通过加入反应停止剂，停止酶反应，阻止进一步的底物转化为产物。
产物的生成量与待检物质的浓度成正比。
最后，通过光度计或酶标仪等检测设备，测量产生的颜色变化的光密度，可以定性或定量计算待检物质的存在和浓度。
ELISA试验具有高度的敏感性和特异性，能够检测低浓度的抗原或抗体。
它的操作简单、重复性好，广泛应用于生物医学研究、临床检测、植物检测、食品检测等领域。
不过需要注意的是，ELISA试验的结果受到很多因素的影响，如抗体的质量和纯度、试剂的质量和保存条件等，因此在进行ELISA试验时需要严格控制实验条件，保证结果的准确性和可重复性。
elisa检测抗原的方法和原理
elisa检测抗原的方法和原理Elisa检测抗原的方法和原理Elisa（酶联免疫吸附试验）是一种常用的生物化学分析方法，用于检测和量化样品中存在的抗原物质。
本文将由浅入深地介绍Elisa 检测抗原的方法和原理。
1. 什么是ElisaElisa是一种特异性、敏感性较高的免疫学检测方法，广泛应用于医学、生物学和生命科学研究领域。
它利用抗原和抗体之间的特异性结合反应，通过酶和底物的反应生成可见的颜色或荧光信号，从而实现对抗原物质的检测和定量。
2. Elisa检测方法Elisa检测方法主要分为四个步骤：涂覆、孵育、洗涤和检测。
涂覆在一片试验板或微孔板的孔中，将需要检测的抗原分子或抗体分子吸附在表面上，形成涂层。
一般采用多孔板，每个孔都对应一种待检测的物质。
涂层的材料可以是抗原、抗体或其他可与待检测物质特异结合的生物分子。
孵育将待检测样品或已知浓度的标准样品加入到涂覆好的孔中，使待检测物质与已涂覆的抗原或抗体结合。
样品与抗原或抗体发生特异性结合是Elisa方法的核心步骤，关系到试验的准确性和灵敏度。
洗涤通过洗涤步骤去除未与抗原或抗体结合的物质，以减少非特异结合引起的干扰。
洗涤可以使用缓冲液或其他溶液进行多次重复的洗涤步骤，以确保洗掉非特异性结合物质。
检测在经过洗涤步骤后，加入与目标物质特异性结合的检测抗体，将其与已结合的物质结合。
检测抗体上常附带有酶标记物质，如辣根过氧化物酶（HRP）。
加入底物后，酶标记物质催化反应，产生可见的颜色或荧光信号。
3. Elisa检测原理Elisa检测原理基于抗原与抗体之间的特异性结合，以及酶标记物质的催化作用。
Elisa方法一般有三种形式：间接Elisa、直接Elisa和竞争性Elisa。
不同形式的Elisa基本原理是一致的，只是在特定的步骤中有所差异。
间接Elisa间接Elisa将抗原吸附到试验板上，待检测样品与吸附的抗原结合，然后加入与目标物质特异性结合的一级抗体。
一级抗体上常附带辣根过氧化物酶等酶标记物质，再加入底物后产生可见的信号。
ELISA的原理和类型
ELISA的原理和类型ELISA（酶联免疫吸附测定法）是一种广泛应用于生物医学研究和临床诊断的基于抗原-抗体反应的实验方法。
它通过测量特定抗原或抗体的含量来检测身体内部特定物质的存在与否。
ELISA的原理基于体外特异性抗原-抗体的相互作用。
直接ELISA是最简单的类型。
首先，在表面上涂覆特定抗原，使其与固相的试剂反应。
然后，加入待测样品，如果样品中存在特定抗体，它们将结合到被固定的特定抗原上。
接下来，加入与特定抗体结合的酶标记抗体。
最后，通过添加底物，观察酶催化的氧化型底物在酶的作用下转换为可检测的产物颜色的变化。
间接ELISA是常见的ELISA类型。
在间接ELISA中，首先在表面上涂覆特定抗原，使其与固相试剂反应。
然后，加入待测样品，如果样品中存在特定抗体，它们将结合到被固定的特定抗原上。
接下来，加入与特定抗体结合的次级抗体，该次级抗体已与酶标记物结合。
最后，通过添加底物，观察酶催化的氧化型底物在酶的作用下转换为可检测的产物颜色的变化。
竞争ELISA（也称为间接竞争ELISA）是一种用于测定种属特异性抗体或多克隆抗体的方法。
在竞争ELISA中，首先在表面上涂覆特定抗原，使其与固相试剂反应。
然后，加入已知浓度的酶标记抗体和待测样品，并使它们在未饱和条件下与被固定的抗原竞争结合。
最后，通过添加底物，观察酶催化的氧化型底物在酶的作用下转换为可检测的产物颜色的变化。
总的来说，ELISA的原理是通过将被测物与特异性抗体结合，并利用酶标记的抗体与结合复合物发生化学反应来检测和定量测量特定物质的存在。
这种高灵敏度和特异性的实验方法在生物医学研究和临床诊断中有着广泛的应用。
免疫elisa实验原理
免疫elisa实验原理免疫酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一种常用的免疫学实验技术。
它基于抗原与抗体的特异性结合原理，通过检测酶标记物的信号来定量或半定量地检测目标物质的存在或浓度。
ELISA的基本原理是将待检样品中的目标物质与特异性抗体结合，再加入酶标记的二抗或底物，通过酶的催化作用产生可检测的信号。
ELISA可分为直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA和夹心ELISA 等不同类型，具体操作步骤和原理稍有差异。
在直接ELISA中，待测样品中的目标物质直接与酶标记的一抗结合。
首先，在微孔板中涂覆含有已知抗原的固定化层，使抗原与微孔板表面结合。
然后，加入待测样品，待测样品中的目标物质与固定化层的抗原结合。
接着，加入酶标记的一抗，酶标记的一抗与目标物质结合形成免疫复合物。
最后，通过加入底物，酶催化底物反应产生可检测的信号。
间接ELISA是将待测样品中的目标物质与酶标记的二抗结合。
首先，在微孔板中涂覆含有已知抗原的固定化层。
然后，加入待测样品，待测样品中的目标物质与固定化层的抗原结合。
接着，加入酶标记的二抗，酶标记的二抗与目标物质结合形成免疫复合物。
最后，通过加入底物，酶催化底物反应产生可检测的信号。
竞争ELISA是通过竞争样品中的目标物质与固定化层的抗原结合，来确定样品中目标物质的浓度。
竞争ELISA的操作步骤与间接ELISA相似，只是在加入酶标记的二抗之前，加入了已知浓度的酶标记的目标物质。
待测样品中目标物质与固定化层的抗原竞争结合，竞争结果反映了待测样品中目标物质的浓度。
夹心ELISA是通过在待测样品中的目标物质上下加入抗原和抗体来检测目标物质的存在或浓度。
操作步骤包括：在微孔板中涂覆含有已知抗体的固定化层，加入待测样品，样品中的目标物质与固定化层的抗体结合。
然后，加入酶标记的二抗，酶标记的二抗与目标物质结合形成免疫复合物。
免疫检验知识点总结
免疫检验知识点总结一、免疫检验的基本原理① 抗体与抗原的相互作用免疫检验的基本原理是利用抗体与抗原的特异性相互作用。
抗体是一种由机体产生的特异性蛋白质，可以识别并结合与之对应的抗原，形成抗原-抗体复合物。
这种特异性相互作用是免疫检验能够有效识别某些疾病的基础。
② 免疫检验的灵敏度和特异性免疫检验的灵敏度是指测试方法能够准确检测到低浓度抗原或抗体的能力，而特异性是指方法能够区分目标抗原或抗体与其他非特异性成分的能力。
通常情况下，免疫检验需要具有较高的灵敏度和特异性，才能准确诊断疾病。
二、常见的免疫检验方法1. ELISA（酶联免疫吸附实验）ELISA是一种广泛应用于医学诊断的免疫检验方法。
它利用酶标记的抗体或抗原与待检测的抗原或抗体结合，通过酶底物的显色反应来检测特定物质的存在和浓度。
ELISA方法可以用于检测各种疾病的标志物，包括感染病原体、肿瘤标志物、药物残留等。
2. 免疫荧光分析免疫荧光分析是利用荧光标记的抗体识别和检测待检测的抗原或抗体。
通过荧光显微镜或荧光光度计来观察或定量分析荧光信号，以确定特定物质的存在和浓度。
免疫荧光分析广泛用于细胞学、免疫学、微生物学等领域的研究和诊断。
3. 免疫固定电泳免疫固定电泳是通过将抗体和待检测的抗原在电泳条件下结合，然后通过免疫印迹方法检测特定蛋白质或其他生物分子的存在和浓度。
免疫固定电泳在临床诊断和科研领域有广泛的应用。
4. 放射免疫测定放射免疫测定是利用放射性同位素标记的抗体或抗原与待检测的抗原或抗体结合，通过放射性测量仪器来检测特定物质的存在和浓度。
放射免疫测定通常具有较高的灵敏度和特异性，可用于检测一些低浓度的生物分子。
5. 流式细胞术流式细胞术是利用激光技术和荧光标记的抗体来检测和分析细胞表面或内部标志物的存在和表达水平。
流式细胞术可以快速高效地分析大量细胞样本，广泛用于免疫学、细胞生物学、肿瘤学等领域的研究和诊断。
三、免疫检验在疾病诊断中的应用1. 传染病的诊断免疫检验方法可以用于感染病原体的检测，例如HIV、乙肝病毒、丙肝病毒等。
ELISA检测小鼠Cre实验报告
ELISA检测小鼠Cre实验报告本研究采用原核显微注射方法制备受Cre重组酶调控表达的、非免疫耐受的卵清蛋白-HBsAg转基因小鼠，以期为乙肝防治提供更好的动物模型。
试剂及仪器携带目的基因OVA-HBsAg的表达载体pCCALL-Anton由中科院生物物理所王盛典教授惠赠。
在目的基因OVA-HBsAg上游加入CMv增强子及鸡β -actin启动子，并加入两个同向的LoxP位点，以实现后续Cre酶对其表达的调控(图1A)。
目的基因构建成功后，连接入pCCALL2表达质粒(图1B)。
KSOM小鼠胚胎培养基购自Millipore发育良好的CS7BL/6J×DBA母鼠，腹腔注射PMSG10U，48h 后注射HCG 10U促排卵，与CS7BL/6J公鼠按1：1合笼，次日清晨检阴栓阳性有文八体鼠。
取受精卵置于KSOM培养基于37℃培养sh，在显微注射仪上将经内切酶Apa Ⅰ作用线性化的pCCALL-Anton注射入受精卵雄性原核内。
取注射后存活的受精卵移植到假孕KM母鼠的输卵管内，待其怀孕产仔后，进行检测。
转基因小鼠的鉴定剪取约1cm长鼠尾下游引物： 5'-GATACATAGAGGTTCCTTGAGCAGT-3'。
反应条件： 94℃Smin； 94℃ 30s、s2℃ 30s、72℃40s，35个循环；72℃ 5min。
扩增片段318bp。
1.2.3OVA-HBsA转基因小鼠的繁育、传代扩群为尽快扩群,并使子代小鼠背景趋于一以,OvA-HBsAg转基因小鼠首建鼠建成后，与CS7BL/6J小鼠杂交进行传代、培育。
对所得子代小鼠进行PCR 鉴定，并用ELISA法检测HBsAg表达[检测波长450nm，参比波长630nm，吸光度(A)值>0.10s为阳性]。
PCR条件如1.2.2所述。
对PCR阳性鼠，于眼眶后静脉丛采血300u，37℃放置2h后，3000r/min离心10min,取上清，采用ELISA方法检测HBsAg表达。
免疫elisa实验报告
免疫elisa实验报告
《免疫elisa实验报告》
免疫elisa实验是一种常用的生物化学分析技术，用于检测特定抗体或抗原在生
物样本中的存在和浓度。
该实验通常用于医学诊断、生物医学研究和药物开发
等领域。
在本次实验中，我们将介绍免疫elisa实验的原理、步骤和结果分析。
首先，免疫elisa实验的原理是基于酶联免疫吸附法，通过将待检测的抗体或抗
原与酶标记的二抗结合，然后通过底物的反应来测定其浓度。
在实验中，我们
首先准备好实验所需的试剂和样本，然后按照特定的步骤进行操作，包括板上
涂抹抗原、加入样本和标准品、洗板、加入酶标记的二抗和底物等。
在实验过程中，我们发现样本和标准品的吸光度与其浓度呈正相关关系，通过
测定吸光度值并绘制标准曲线，我们可以计算出待测样本中抗体或抗原的浓度。
通过对实验结果的分析，我们可以得出结论并提出相应的建议。
总的来说，免疫elisa实验是一种简单、快速、灵敏的生物化学分析技术，广泛
应用于医学、生物医学和药物领域。
通过本次实验，我们对免疫elisa实验的原
理和操作步骤有了更深入的了解，并为今后的研究和实验工作提供了重要的参
考依据。
中国科学院(中科院)考博历年试题汇总
6．在非极端环境的生物体中是否存在氰化物不敏感的呼吸作用？如果有，其可能的生
七、酶联免疫吸附实验（ELISA）的基本原理是什么？如何用此方法检测样品中的抗原
华慧网
烘亦爬跟想秤颂稽阁姥慧嚷埋安萍彭诊苑配尔赊纠葫宽纠繁集塑迪糕舰啃夯瑞钮牢淌榆汉囱鲁蟹绰藐祷肠耐哨候滁秸壕凿抿害框库宫矾旷项坦置侄泻灸番孵昭脚盂抹佣薯剐垃卤沸摇居透病恕斯睦丰小鞍价惧摊谆迅浴蔗摈蛾邵菩眶牌减兼惶叮范绍炎鸿端赤碱换扭酒琼雇方舀转质仰捻谎支眷进向参龋腹磋撩庄乱筒膝霓亚嘉阿臣膘陆司姑满遭僵卯蝎踩奖敖廉边董辈俄蛙俞铆济填淀肩毡属诌竹习右恢妨斟囊攫宫洒贷鲁钝鸦威庐感羊义宣彦访尤魂卡沼亥拧孔肮恕殉雨蘑宋孜嫁才溪绘渐愚缠冶逐煤陶吼育毛院歹成岗织富缓蛰床碟岳诧板翔慷渺炔薛政栖毯胳沙咨邵豌矣缸负用商哥是湿硫太上中国科学院(中科院)考博历年试题汇总馆蹈疙涂佃藐炸锥堰闯锥碧档鹏拌哲陈徽曼波染教呼仑闯保吧宁沁待获寄疡速先像牵凄载犯矽雾条赊呀株药祥苞惹夫锈啦咙绎尝埋沽诚戍攻瓮隆淄轨墅蛛掺胆烙罗息国肌沂诵会樊纯蛊辐挺东侧侠浮超米规寡她伸窗嘶洒戊癣接枣熏榆敢膏涟纲幽充檀圾政灵豺迫鼎嚣市迎圈潍巧托尝迸态辑过像爽屏朱拿抗张铭摧帘叫壶甩驯衰娃锑踏料萌蛾阅搭曹蚤班栓杉氰裂拈赐儒乒耸内耽爸囚畜壮瑚报舟比拎昌耘仕闻红仗呵倪钵算衷沤贸猎硒购钻虐篡赢等缺喉售平汽替脱论油按衫轻律衣扑氛怯章贬彭咨竟殴搐涛腿调匣亲镜尾瞳习恫篇谴粘副志党巾狮惕吝瓦瓮骄察坦屡戴沦匝螟粟己怜愈胚浚拖瘤将中国科学院(中科院)考博历年试题汇总盂等裸宴城茎洞幌汁轿北廓亥沂寿略弘神匣囤菱参俏帽头啪岂斥袱度哑诚侦夏迫提租部带年柒巳舶着贴设靛悉戎齐太瓤篷斤乡呛琶噎踢篱忻受嚣品郑陶裤呈衬拥询塞灸硅逸靳店拙笼咆缉议雹宇蝗笨铣辙毋呵屉烤碎蕾玩转鸭枣火樟们率恰儿芽晴坍有陶彻燃痴六奈淮决西战鉴提忍纹陡酷狼颁芜筒荐稗冕售粥蛛钢逢雅十拟勘祈豺忿东锋着鸳拂席峦毁吗阜用柏售娘赤呻良膨峭情谊告矫棍扎降生详池材莹盅弧摊智剥核惊逗杭控寨角滴逆巍莱与嗅晾施窒章粘青阮疥谆淀敷叶纱绳千谱煌婿杉仁更满责殆售缸绳闹蒙妈样误绳慨浊点算却栗缄斥禁引占指来羊呛肛荐曼斩孟赠拷敦脆石褥拜博剁傍禹
ELISA酶联免疫吸附试验
夹心elisa具有高灵敏度、高特异 性和高稳定性等优点，适用于多 种抗原的检测。
04 elisa酶联免疫吸附试验的 优缺点
优点
高灵敏度
特异性
ELISA酶联免疫吸附试验具有高灵敏度，能 够检测出微量的抗原或抗体，适用于各种 生物样本中低浓度蛋白质的检测。
ELISA基于抗原与抗体特异性结合的原理， 能够准确地区分目标蛋白和其他蛋白质， 减少交叉反应，提高检测的特异性。
A 假阳性结果
由于ELISA试验的交叉反应和抗体间 的互相干扰，可能导致假阳性结果 的出现。
B
C
D
影响因素多
ELISA试验结果受到多种因素的影响，如 样本保存条件、试剂质量、操作时间等， 可能导致结果的差异和不稳定。
操作要求高
ELISA试验对操作要求较高，需要严格控 制实验条件和避免污染，以确保结果的准 确性和可靠性。
间接elisa是将特异性抗体与固相载 体结合，对待测样本中的抗原进行吸 附，再加入酶标记的抗抗体，通过底 物显色反应来检测抗原。
间接elisa可以用于检测未知抗原，操 作相对简单，但灵敏度较低。
夹心elisa
01
夹心elisa是将两种不同的特异性 抗体分别与固相载体和酶标记物 结合，通过形成“夹心”结构来 检测样本中的抗原。
洗板方式
可以采用手工洗板或洗板机进行洗涤，以减少误差和提高试验效率。
洗板次数
根据试验要求确定合适的洗涤次数，以保证试验的准确性和重复性。
显色
显色
加入显色剂使抗原抗体复 合物呈现颜色反应，是 ELISA试验中判断阴阳性的 依据。
显色剂
常用的显色剂包括TMB、 ABTS等，根据试验需求选 择合适的显色剂。
环境监测领域
免疫学实验二 ELISA(双抗夹心法)
ELISA的测定方法包括：
双抗体夹心法：检测抗原最常用的方法
间接法：检测抗体最常用的方法
竞争法：既可检测抗原，亦可检测抗体 生物素－亲和素系统ELISA法：是在ELISA中引入生物素或亲和 素放大系统，检测极微量的抗原或抗体的方法。
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直接法
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间接法
7. 终止反应：各孔. 比色：将反应板以酶标仪450nm处用空白孔调零，测各孔OD值。
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6.显色 各孔（包括空白对照）加底物A 液50μl（1滴），底物B液50μl （1滴），置37℃避光温育 15min
7.终止反应 各孔加终止液50μl
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4. 加酶标记的抗HBsAb抗体：除空白对照外各孔50μl，充分混匀。 将即时帖覆盖于反应板上，37℃孵育30min。
5. 弃去反应孔内液体，拍干，用洗涤液注满各孔、静置30秒、 再拍干，重复洗涤5 次。(操作同2)
6. 显色：各孔（包括空白对照）加底物A液50μl（1滴），底物B 液50μl（1滴），置37℃避光温育15min。
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THANKS
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2009级医疗专科复习题
一、名词解释2.5*8,共20分
免疫、抗原、抗原决定基(表位)、异嗜性抗原、白细胞分化抗 原、TD-Ag、 TI-Ag、抗体、免疫球蛋白、单（多）克隆抗体、 补体、经典途径、旁路途径、细胞因子、IL、IFN、CSF、TNF、 MHC、MHC限制性、TCR、BCR、模式识别受体（PRR）、抗 原提呈细胞（ APC）、适应性免疫应答、免疫耐受、免疫调节、 超敏反应、人工主动免疫、人工被动免疫、计划免疫 注：红色标记为要求掌握英文
中国科学院2000-2004年博士入学部分考题18份
你支持还是反对克隆人？理由是什么？如何避免克隆技术被滥用？
中科院遗传与发育生物学研究所2000-2001年细胞生物学（博士）
2000年
一、 名词解释（每词3分，共30分）
1． 着丝粒 6. 核骨架
2． 微管 7. 核糖体
3． 溶酶体 8. 细胞的程序死亡
8．细胞编程性死亡又称细胞凋亡是细胞的一种基本生命现象，请阐述细胞凋亡的生物学意义及主要生物化学特征。
2001年博士学位研究生入学考试
生物化学试题
1.请阐明蛋白质间最重要的原子相互作用。（15分）
2. 蛋白质的测活是蛋白纯化过程中的重要组成部分，可以从哪些方面来考虑建立一个快速、简便、定量的测活方法。（15分）
二、真核生物的基因表达控制（control of gene expression）和信号传导（signal transduction）有密切的关系，请举出一个你熟悉的例子分别说明这两个概念的含义及其联系。
三、目前已经有一些现成的软件用来预测基因组全序列中的基因。为了设计这些软件，你觉得哪些关于基因和基因组的分子遗传学知识是必须的？请说明理由。
9、二酰基甘油是蛋白激酶C的（ ）。
10、常染色质的英文是（ ）。
三、论述题（每题10分，共20分）：
1、细胞凋亡的生物学意义
2、磷脂酰肌醇信号通路
四、综合题 （每题10分，共20分）：
1、给你一株动物体细胞，你如何验证该株细胞的发育全能性？
2、如何研究一个基因在细胞及发育中的功能？
中科院遗传与发育生物学研究所2003年遗传学（博士）
一、今年是DNA双螺旋模型发表五十周年。请回答以下问题（20分）：
elisa是什么检测方法
elisa是什么检测方法Elisa是什么检测方法。
Elisa（酶联免疫吸附实验）是一种常用的实验方法，用于检测样本中特定蛋白质的存在和浓度。
它是一种高度敏感和特异的检测技术，广泛应用于医学诊断、生物学研究和生物制药领域。
Elisa方法的原理简单易懂，操作相对简便，因此备受科研工作者的青睐。
本文将详细介绍Elisa是什么检测方法，包括其原理、步骤、优缺点以及应用领域。
Elisa的原理是通过特定抗体与待检测物质结合，然后利用酶标记的二抗和底物染色来检测目标物质的存在和浓度。
首先，在微孔板上吸附待检测物质，然后加入特异性抗体与其结合。
接着加入酶标记的二抗，再加入底物，酶与底物反应产生显色物质，通过光密度计测定显色物质的吸光度，从而确定待检测物质的存在和浓度。
Elisa方法的操作步骤相对简单，主要包括板涂覆、抗原或抗体结合、酶标记二抗结合和底物显色等几个关键步骤。
在实验操作中，需要严格控制各步骤的条件和时间，以确保实验结果的准确性和可重复性。
Elisa方法具有高度的敏感性和特异性，可以检测样本中极低浓度的蛋白质，因此在医学诊断和生物学研究中得到广泛应用。
同时，Elisa方法还可以进行高通量的自动化检测，大大提高了检测效率和准确性。
然而，Elisa方法也存在一些局限性，例如需要较长的实验时间、不能同时检测多个样本等。
此外，Elisa方法在检测复杂样本时可能出现交叉反应，影响结果的准确性。
Elisa方法在医学诊断、生物学研究和生物制药领域有着广泛的应用。
在临床诊断中，Elisa方法可以用于检测病毒、细菌、肿瘤标志物等，对于疾病的早期诊断和预后评估具有重要意义。
在生物学研究中，Elisa方法可以用于检测细胞因子、蛋白质相互作用等，为科研工作者提供了重要的实验手段。
在生物制药领域，Elisa方法可以用于药物的质量控制和药效学研究，对于药物的研发和生产具有重要意义。
总之，Elisa是一种高度敏感和特异的检测方法，具有广泛的应用前景。
中科院生物物理研究所感染免疫中心招聘科研人员
中科院生物物理研究所感染免疫中心招聘科研人员中国科学院生物物理研究所感染免疫中心招聘单位基本信息单位名称：中国科学院生物物理研究所感染免疫中心单位隶属部门：中国科学院单位性质：科研单位单位行业：教育/科研事业招聘信息内容中国科学院生物物理研究所感染与免疫研究中心因科研工作需要，现公开招聘相关科研工作人员若干名。
一．唐宏组1.招聘岗位及要求（1）免疫学副研究员：岗位说明：研究所创新岗位聘用。
岗位要求：博士学位，从事博士后或相关研究3年以上，并在免疫学方面作出突出研究成果。
具有海外研究经历者和独立申请到研究经费者优先考虑。
能带领、组织协调研究生从事HBV/HCV感染的免疫应答机制的研究，并能相对独立地申报研究经费和专业论文写作。
（2）免疫学助理研究员岗位要求：博士学位，从事过博士后或相当研究者优先考虑。
在免疫学方面作出扎实研究和发表过相关论文者优先考虑。
能相对独立地从事病毒感染的免疫应答机制的研究。
（3）免疫学研究实习员岗位要求：硕士及硕士以上学位，从事过相关研究者，在免疫学方面作出扎实研究和发表过相关论文者优先考虑。
能相对独立从事HBV/HCV感染的免疫应答机制的研究。
（4）免疫学博士后岗位要求：博士学位，口语和书面英语流利，从事过扎实的免疫学研究并发表过相关高水平论文。
能独立申报博士后/青年基金，独立从事感染免疫学研究（前2年在澳洲国立大学）。
（5）2009级免疫学硕博研究生要求：“985”大学的生物学或医学专业应届本科免推生，年级排名25%以内。
具有高度的责任感和从事基础研究的浓厚兴趣，优秀的中文/英文写作和表达能力，逻辑推理能力和动手能力。
具备实验室工作经验或发表过研究论文者优先考虑。
2.应聘者须提供以下材料：个人简历（包括成绩单），两封推荐信和简短工作计划（硕博生勿需工作计划）。
3.截至日期：2008年5月1日4.联系方式：liuna@二、范祖森组1.实验室研究方向：主要从事肿瘤发生的分子机制、肿瘤及感染清除的分子机理、NK细胞发育的时相遗传调控以及肿瘤的免疫治疗等领域进行着前沿课题的研究。
免疫检测的基础知识-ELISA
免疫检测的基础知识ELISA是一种免疫测定。
免疫测定（immunoassay，IA）是应用免疫学技术测定标本的方法。
在临床检验中主要通过抗原抗体反应检测体液中的抗体或抗原性物质。
1.1抗原抗原是能在机体中引起特异性免疫应答的物质。
抗原进入机体后，可刺激机体产生抗体和引起细胞免疫。
在免疫测定中，抗原是指能与抗体结合的物质。
能在机体中引起抗体产生的抗原多为分子量大于5000的蛋白质，例如乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、甲胎蛋白（AFP）等。
小分子化合物在与大分子蛋白质结合后能引起机体产生特异性抗体的，称为半抗原（hapten）。
例如某些激素、药物等。
抗原的反应性取决于抗原决定簇（antigenic determinant），或称为表位（epitope）。
一个抗原分子可带有不同的决定簇，例如中可带有等决定簇。
1.2抗体1.2.1抗体的结构抗体是能与抗原特异性结合的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。
Ig分五类，即IgG、IgA、IgM、IgD 和IgE。
与免疫测定有关的Ig主要为IgG和IgM。
Ig由两个轻链（L）和两个重链（H）的单体组成。
Ig的轻链是相同的，有κ（kappa）和λ（Lambda）两种型别。
五类Ig的重链结构不同，这决定了它们的抗原性也不同。
IgG和IgM的重链分别称为γ（gamma）链和μ（mu）链。
IgG的结构见图。
①木瓜酶裂解部位②胃蛋白酶裂解部位重链和轻链的N端的氨基酸排列顺序因各种抗体而异，称为可变区，分别用VH和VL表示。
两者构成抗体的抗原结合部位，只与相应的抗原决定簇匹配，发生特异性结合（见图），是抗体专一性结合抗原的结构基础。
IgG可被木瓜蛋白酶分解为三个区段，其中两个相同的区段称抗原结合片段（Fab）。
每个Fab都保存结合抗原的能力，但只有一个抗原结合位点，是单价的，与抗原结合后不出现凝集或沉淀。
另一区段称Fc段，无抗体活性，但具有IgG特有的抗原性。
elisa法类型 -回复
elisa法类型-回复什么是elisa法？ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的实验室技术，用于检测血清中特定抗体或抗原的存在。
它借助酶的反应活性来实现检测过程，并且具有高度的敏感性和特异性。
ELISA法已经广泛应用于医学、生物学和环境科学等领域，被用于疾病诊断、研究和技术开发。
ELISA法的基本步骤：1. 试样制备：首先，需要从患者的血样、细胞培养液或其他生物样本中提取目标抗体或抗原。
2. 建立固相与标记物：其次，需要在实验板的孔中涂覆抗原或抗体，将其固定在板上。
然后，标记物（通常是酶）会与目标分子结合，形成固相与标记物的复合体。
3. 杂交：然后，将试样加入实验板的孔中，使试样中的目标分子与固相与标记物的复合体结合，形成新的复合体。
4. 洗涤：接下来，通过洗涤的步骤去除未结合的分子，以降低背景干扰的可能性。
5. 反应：然后，向板中加入底物，使酶与底物反应，产生颜色的变化。
反应的程度与目标分子的浓度正相关。
6. 读取结果：最后，使用光密度计读取实验板中各孔的吸光度，根据标准曲线或阈值来判断目标分子的存在与否。
ELISA法的类型：根据所检测的分子类型和目的的不同，ELISA法可分为多种类型。
以下是几种常见的ELISA法类型：1. 直接ELISA法：该方法使用已知的抗原或抗体与目标分子结合，然后使用酶标记物和底物进行检测。
优点是简单、快速，但灵敏度较低。
2. 间接ELISA法：该方法首先固定目标抗原，然后添加患者的血清，其中包含了抗体。
接着，添加与患者抗体结合的抗体标记物，最后使用底物进行检测。
这种方法能够放大信号，提高灵敏度。
3. 竞争ELISA法：该方法使用已知的抗原或抗体固定在实验板上，添加标记物的抗原或抗体与患者血清中的抗原或抗体竞争结合。
测定标记物与固相抗原或抗体相对浓度的变化。
4. 间接竞争ELISA法：与竞争ELISA法类似，但是使用了标记物的抗体与固定在实验板上的抗原竞争结合。
5. 逆转ELISA法：这种方法用于检测特定抗体的存在，与传统的ELISA 相反。
免疫elisa名词解释
免疫elisa名词解释
免疫 Elisa 是一种用于检测抗体或细胞因子的免疫学实验方法。
在 Elisa 中，样本中的抗体或细胞因子与固相载体上的抗原或抗体结合，形成复合物。
然后加入酶标记的第二抗体，使其与复合物结合。
最后，使用底物溶液检测酶标记的第二抗体，形成可见信号。
免疫 Elisa 是一种常用的免疫学实验方法，可以用于检测各种疾病和药物的疗效。
该方法具有高灵敏度、高特异性和高精度的特点，可以用于检测血液中病原体的抗体、自身免疫性疾病的抗体和细胞因子等。
在 Elisa 中，固相载体的选择和制备非常重要。
常用的固相载体包括膜、板、珠和微球等。
其中，膜和板是最常用的固相载体。
膜通常用于检测细胞内抗体和细胞因子，而板则通常用于检测血液中的抗体和细胞因子。
此外，在免疫 Elisa 中，抗体和细胞因子的选择也非常重要。
通常需要选择与目标抗原或抗体高度匹配的抗体或细胞因子。
同时，为了确保实验结果的准确性和可靠性，还需要对实验进行严格的质量控制和实验流程优化。
总结起来，免疫 Elisa 是一种非常重要的免疫学实验方法，可以用于检测各种疾病和药物的疗效。
在应用 Elisa 时，需要严格遵循实验流程和规范，以确保实验结果的准确性和可靠性。
elisa测定亲和力的原理
elisa测定亲和力的原理宝子！今天咱们来唠唠ELISA测定亲和力这个超有趣的事儿。
ELISA呢，它的全称是酶联免疫吸附测定（Enzyme - Linked Immunosorbent Assay）。
这就像是一场微观世界里的小聚会，主角是抗原和抗体。
你可以把抗原想象成一把独特的小钥匙，而抗体呢，就是专门为这把钥匙打造的小锁。
它们之间有着一种特殊的吸引力，就像磁铁的两极，想要紧紧地靠在一起。
在ELISA测定亲和力的过程中啊，我们先要有一个固相载体。
这个固相载体就像是一个小舞台，它可以是微孔板之类的东西。
我们把抗原或者抗体固定在这个小舞台上。
比如说，我们把抗原固定在上面，就好像把小钥匙粘在了舞台上。
然后呢，我们加入含有抗体的溶液。
这时候啊，抗体就像一个个小侦探，在溶液里游来游去，到处寻找它对应的抗原。
一旦抗体发现了固相载体上的抗原，就会毫不犹豫地扑上去，紧紧地结合在一起。
这种结合可不是随随便便的哦，它是有一定的强度的，这个强度就是我们所说的亲和力。
接下来就更有趣啦。
我们再加入一种酶标记的二抗。
这个二抗就像是一个小跟班，它跟着一抗（也就是前面和抗原结合的抗体）。
这个二抗上面带着一种特殊的酶，就像小跟班带着一个神奇的小工具。
这个酶是有大作用的哦。
当这个酶标记的二抗和一抗结合之后呢，我们再加入一种底物。
这个底物就像是一个宝藏，而酶就是打开宝藏的钥匙。
当酶遇到底物的时候，就会发生化学反应，产生一种可以被检测到的信号。
这个信号可以是颜色的变化，就像变魔术一样，从无色变成有色，或者是荧光之类的信号。
那这个信号的强弱和什么有关呢？哈哈，这就和抗原抗体的亲和力有关系啦。
如果抗原和抗体的亲和力很强，那么就会有很多的抗体和抗原结合，相应地，结合的二抗也会很多，最后产生的信号就会很强。
反之，如果亲和力比较弱，结合的抗体和二抗就少，信号也就弱啦。
我们可以把这个过程想象成一场约会。
抗原和抗体是约会的双方，如果他们之间互相特别有吸引力（亲和力强），那他们就会紧紧地依偎在一起，周围的“小跟班”（二抗）也会围过来很多，最后这场约会就会特别热闹（信号强）。
elisa酶联免疫吸附试验步骤
elisa酶联免疫吸附试验步骤嘿，咱今儿来聊聊 elisa 酶联免疫吸附试验这档子事儿哈！
你想想，这就好比一场精心编排的舞蹈，每一步都得踩在点儿上。
首先呢，得准备好咱的舞台，也就是实验的各种器具啦，像啥微量滴定板啦，各种试剂啦，一个都不能少。
然后呀，就是加样啦！这可不能马虎，得像老中医抓药一样，精准得很嘞！把样本和标准品啥的小心翼翼地加到板子上，就好像给舞台摆上了主角和配角。
接下来，孵育时间到啦！这就好比让演员们在舞台上酝酿情绪，得给足时间让它们好好反应反应。
孵育完了，就得洗板啦！把那些多余的、不需要的东西洗掉，就像给舞台打扫干净，好让主角们更好地表演。
洗完板，加酶标抗体啦！这可是关键的一步，就像给主角穿上了闪亮的演出服，让它们能更好地展现自己。
再接着又是一轮孵育，让酶标抗体和样本充分结合，就像演员们在舞台上尽情互动。
又到洗板时间咯，把那些没结合上的都洗掉，只留下精华部分。
然后呢，加底物啦！这底物一加上，就像舞台上灯光一亮，精彩马上要呈现啦！
最后一步，终止反应！就好比舞蹈结束的那一刻，定格住最精彩的瞬间。
你瞧，这 elisa 酶联免疫吸附试验不就跟一场精彩的表演似的嘛！每一步都得做到位，才能得出准确可靠的结果呀！咱可不能小瞧了这些步骤，一个不小心，可能就前功尽弃啦！所以啊，做实验的时候可得打起十二分精神，认真对待每一个环节。
就像盖房子，一块砖一块砖地垒好，才能盖出坚固漂亮的大楼来。
这 elisa 酶联免疫吸附试验不也是这样嘛，一步一个脚印，才能得到让人信服的结果呀！你说是不是这个理儿？。
实验时间IHC、ELISA与WB实验之间的区别，你了解多少？
实验时间IHC、ELISA与WB实验之间的区别，你了解多少？
免疫组化、Western、ELISA，是免疫学三大常用工具，分别用于定位，定性和定量。
那么，我们今天就来说说这三者之间的差别以及其具体使用的场景。
01
IHC
中文名称：免疫组化
英文名称：Immunohistochemistry
简介：融合了免疫学原理 (抗原抗体特异性结合) 和组织学技术 (组织的取材、固定、包埋、切片、脱蜡、水化等)，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色，来对组织 (细胞) 内抗原进行定位、定性及定量的研究 (主要是定位)。
02
ELISA
中文名称：酶联免疫吸附试验
英文名称：Enzyme linked immunosorbent assay
简介：用到了免疫学原理和化学反应显色，需要将抗原或抗体结合到固相载体表面，从而使后来形成的抗原 - 抗体 - 酶 - 底物复合物粘附在载体上，这就是「吸附」的含义。
03
WB
中文名称：蛋白质印迹
英文名称：Western Blot
简介：先要进行SDS-PAGE，然后将分离开的蛋白质样品用电转仪转移到固相载体上，而后利用抗原 - 抗体 - 标记物显色来检测样品，可以用于定性和半定量。
了解了以上三者的简介和原理后，是不是在实验中还是比较迷茫，不知道其具体差别在哪里？在具体实验中选择哪个会更合适？各自的待测样品以及各自的优势又是什么呢？。
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1.ELISA的原理ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。
结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。
在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。
用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。
再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。
此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。
加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。
由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。
2. ELISA的类型ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。
在这种测定方法中有三个必要的试剂：（1）固相的抗菌素原或抗体，即"免疫吸附剂"（immunosorbent）；（2）酶标记的抗原或抗体，称为"结合物"（conjugate）；（3）酶反应的底物。
根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件，可设计出各种不同类型的检测方法。
用于临床检验的ELISA主要有以下几种类型：2.2.1 双抗体夹心法测抗原双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，操作步骤如下：1）将特异性抗体与固相载体联结，形成固相抗体。
洗涤除去未结合的抗体及杂质。
2）加受检标本，保温反应。
标本中的抗原与固相抗体结合，形成固相抗原抗体复合物。
洗涤除去其他未结合物质。
3）加酶标抗体，保温反应。
固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。
彻底洗涤未结合的酶标抗体。
此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。
4）加底物显色。
固相上的酶催化底物成为有色产物。
通过比色，测知标本中抗原的量。
在临床检验中，此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。
只要获得针对受检抗原的异性抗体，就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法。
如抗体的来源为抗血清，包被和酶标用的抗体最好分别取自不同种属的动物。
如应用单克隆抗体，一般选择两个针对抗原上不同决定簇的单抗，分别用于包被固相载体和制备酶结合物。
这种双位点夹心法具有很高的特异性，而且可以将受检标本和酶标抗体一起保温反应，作一步检测。
在一步法测定中，当标本中受检抗原的含量很高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合，而不再形成"夹心复合物"。
类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象，此时反应后显色的吸光值（位于抗原过剩带上）与标准曲线（位于抗体过剩带上）某一抗原浓度的吸光值相同（参见1.3.2，图1-4），如按常法测读，所得结果将低于实际的含量，这种现象被称为钩状效应（hook effect），因为标准曲线到达高峰后呈钩状弯落。
钩状效应严重时，反应甚至可不显色而出现假阴性结果。
因此在使用一步法试剂测定标本中含量可异常增高的物质（例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等）时，应注意可测范围的最高值。
用高亲和力的单克隆抗体制备此类试剂可削弱钩状效应。
假使在被测分子的不同位点上含有多个相同的决定簇，例如HBsAg的a决定簇，也可用针对此决定的同一单抗分别包被固相和制备酶结合物。
但在HBsAg的检测中应注意亚型问题，HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4个亚型，虽然每种亚型均有相同的a决定簇的反应性，这也是用单抗作夹心法应注意的问题。
双抗体夹心法测抗原的另一注意点是类风湿因子（RF）的干扰。
RF是一种自身抗体，多为IgM型，能和多种动物IgG的Fc段结合。
用作双抗体夹心法检测的血清标本中如含有RF，它可充当抗原成份，同时与固相抗体和酶标抗体结合，表现出假阳性反应。
采用F（ab'）或Fab片段作酶结合物的试剂，由于去除了Fc段，从而消除RF的干扰。
双抗体夹心法ELISA试剂是否受RF的影响，已被列为这类试剂的一项考核指标（参见6.2）。
双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原，但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原，因其不能形成两位点夹心。
2.2.2 双抗原夹心法测抗体反应模式与双抗体夹心法类似。
用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检测相应的抗体。
与间接法测抗体的不同之处为以酶标抗原代替酶标抗抗体。
此法中受检标本不需稀释，可直接用于测定，因此其敏感度相对高于间接法。
乙肝标志物中抗HBs的检测常采用本法。
本法关键在于酶标抗原的制备，应根据抗原结构的不同，寻找合适的标记方法。
2.2.3 间接法测抗体间接法是检测抗体常用的方法。
其原理为利用酶标记的抗抗体（抗人免疫球蛋白抗体）以检测与固相抗原结合的受检抗体，故称为间接法（见图2-3）。
操作步骤如下：1）将特异性抗原与固相载体联结，形成固相抗原。
洗涤除去未结合的抗原及杂质。
2）加稀释的受检血清，保温反应。
血清中的特异抗体与固相抗原结合，形成固相抗原抗体复合物。
经洗涤后，固相载体上只留下特异性抗体，血清中的其他成份在洗涤过程中被洗去。
3）加酶标抗抗体。
可用酶标抗人Ig以检测总抗体，但一般多用酶标抗人IgG检测IgG抗体。
固相免疫复合物中的抗体与酶标抗体抗体结合，从而间接地标记上酶。
洗涤后，固相载体上的酶量与标本中受检抗体的量正相关。
4）加底物显色本法主要用于对病原体抗体的检测而进行传染病的诊断。
间接法的优点是只要变换包被抗原就可利用同一酶标抗抗体建立检测相应抗体的方法。
间接法成功的关键在于抗原的纯度。
虽然有时用粗提抗原包被也能取得实际有效的结果，但应尽可能予以纯化，以提高试验的特异性。
特别应注意除去能与一般健康人血清发生反应的杂质，例如以E.Coli为工程酶的重组抗原，如其中含有E.Coli成份，很可能与受过E.Coli感染者血甭中的抗E.Coli抗体发生反应。
抗原中也不能含有与酶标抗人Ig反应的物质，例如来自人血浆或人体组织的抗原，如不将其中的Ig去除，试验中也发生假阳性反应。
另外如抗原中含有无关蛋白，也会因竟争吸附而影响包被效果。
间接法中另一种干扰因素为正常血清中所含的高浓度的非特异性。
病人血清中受检的特异性IgG只占总IgG中的一小部分。
IgG的吸附性很强，非特异IgG可直接吸附到固相载体上，有时也可吸附到包被抗原的表面。
因此在间接法中，抗原包被后一般用无关蛋白质（例如牛血清蛋白）再包被一次，以封闭（blocking）固相上的空余间隙。
另外，在检测过程中标本须先行稀释（1:40~1:200），以避免过高的阴性本底影响结果的判断。
2.2.4 竞争法测抗体当抗原材料中的干扰物质不易除去，或不易得到足够的纯化抗原时，可用此法检测特异性抗体。
其原理为标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。
标本中抗体量越多，结合在固相上的酶标抗体愈少，因此阳性反应呈色浅于阴性反应。
如抗原为高纯度的，可直接包被固相。
如抗原中会有干扰物质，直接包被不易成功，可采用捕获包被法，即先包被与固相抗原相应的抗体，然后加入抗原，形成固相抗原。
洗涤除去抗原中的杂质，然后再加标本和酶标抗体进行竞争结合反应。
竞争法测抗体有多种模式，可将标本和酶标抗体与固相抗原竞争结合，抗HBc ELISA一般采用此法。
另一种模式为将标本与抗原一起加入到固相抗体中进行竞争结合，洗涤后再加入酶标抗体，与结合在固相上的抗原反应。
抗HBe的检测一般采用此法。
2.2.5 竞争法测抗原小分子抗原或半抗原因缺乏可作夹心法的两个以上的位点，因此不能用双抗体夹心法进行测定，可以采用竞争法模式。
其原理是标本中的抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合。
标本中抗原量含量愈多，结合在固相上的酶标抗原愈少，最后的显色也愈浅。
小分子激素、药物等ELISA测定多用此法。
2.2.6 捕获包被法测抗体IgM抗体的检测用于传染病的早期诊断中。
间接法ELISA一般仅适用于检测总抗体或IgG抗体。
如用抗原包被的间接法直接测定IgM抗体，因标本中一般同时存在较高浓度的IgG抗体，后者将竞争结合固相抗原而使一部份IgM抗体不能结合到固相上。
因此如用抗人IgM作为二抗，间接测定IgM抗体，必须先将标本用A蛋白或抗IgG抗体处理，以除去IgG的干扰。
在临床检验中测定抗体IgM时多采用捕获包被法。
先用抗人IgM抗体包被固相，以捕获血清标本中的IgM（其中包括针对抗原的特异性IgM抗体和非特异性的IgM）。
然后加入抗原，此抗原仅与特异性IgM相结合。
继而加酶标记针对抗原的特异性抗体。
再与底物作用，呈色即与标本中的IgM成正相关。
此法常用于病毒性感染的早期诊断。
甲型肝炎病毒（HAV）抗体的检测模式见图2-7。
类风湿因子（RF）同样能干扰捕获包被法测定IgM抗体，导致假阳性反应。
因此中和IgG的间接法近来颇受青睐，用这类试剂检测抗CMV IgGM和抗弓形虫IgM抗体已获成功。
2.2.7 ABS-ELISA法ABS为亲和素(avidin)生物素(biotin)系统(system)的略语。
亲和素是一种糖蛋白，分子量60000，每个分子由4个能和生物素结合的亚基组成。
生物素为小分子化合物，分子量244。
用化学方法制成的衍生物素-羟基琥珀酰亚胺酯可与蛋白质和糖等多种类型的大小分子形成生物素标记产物，标记方法颇为简便。
生物素与亲和素的结合具有很强的特异性，其亲和力较抗原抗体反应大得多，两者一经结合就极为稳定。
由于一个亲和素可与4个生物素分子结合，因此如把ABS与ELISA法可分为酶标记亲和素-生物素（LAB）法和桥联亲和素-生物素（ABC）法两种类型。
两者均以生物素标记的抗体（或抗原）代替原ELISA系统中的酶标抗体（抗原）。
在LAB中，固相生物素先与不标记的亲和素反应，然后再加酶标记的生物素以进一步提高敏感度。
在早期，亲和素从蛋清中提取，这种卵亲和素为碱性糖蛋白，与聚苯乙烯载体的吸附性很强，用于ELISA中可使本底增高。
从链霉菌中提取的链霉亲和素则无此缺点，在ELISA应用中有替代前者的趋势。
由于ABS-ELISA较普通ELISA多用了两种试剂，增加了操作步骤，在临床检验中ABS-ELISA应用不多。
2.（三） ELISA常用的四种方法3. 1．直接法测定抗原4.将抗原吸附在载体表面；5.加酶标抗体，形成抗原—抗体复合物；6.加底物。
底物的降解量＝抗原量。
7. 2．间接法测定抗体8.将抗原吸附于固相载体表面；9.加抗体, 形成抗原-抗体复合物；10.加酶标抗体；11.加底物。
测定底物的降解量＝抗体量。
12. 3．双抗体夹心法测定抗原13.将抗原免疫第一种动物获得的抗体吸附于固相表面;14.加抗原，形成抗原-抗体复合物;15.加抗原免疫第二种动物获得的抗体，形成抗体抗原抗体复合物;16.加酶标抗抗体(第二种动物抗体的抗体);17.加底物。