DNA提取方法的研究进展

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昆虫标本DNA提取的研究进展

关键词：昆虫干制标本；昆虫浸渍标本；ＤＮＡ提取方法
中图分类号：Ｑ９６３文献标识码：Ａ文章编号：１００１ — ４２７６一（２０１３）０１－０１６５－０６
ＳｕｍｍａｒｙｏｎＤＮＡｅｘｔｒａｃｔｉＯｎｏｆｉｎｓｅｃｔｓｐｅｃｉｍｅｎｓｐｒｅｓｅｒｖｅｄｉｎｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎｓ
昆虫分子系统学是一门从分子角度解释昆虫多样性、系统发育及进化规律（进化历史）的
学科（黄原等，１９９５）。获取有效高质的ＤＮＡ是进行昆虫分子系统学研究的基础。伴随着ＰＣＲ技术的产生和测序技术的不断完善，获取标本ＤＮＡ一维信息的技术也得到进一步的发展（庞俊峰和张亚平，２００１），这使得从馆藏标本中提取ＤＮＡ成为可能。此外，积累多年的馆藏标本，具有收藏标本量大、种类齐全、耗费人力物力成本低等优势，特别是标本中含有很多难以再获得的稀有类群，这些都将大大有利于昆虫分子系统学的研究（朴美花等，２００２；杜世章和
由于dna的化学性质极不稳定可以通过水解或氧化作用自发降解庞俊峰和张亚平2001所以对于干标本来说标本保留多少dna分子最关键的时期是从标本死亡到标本完全干燥的时间长短而与标本的保存年代没有相关性庞俊峰和张亚平2001
第２９卷
２０１３年１Ｏ月
武
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科
学
、１．２９０ｃｔ．２Ｏ１３
Ｚｅ — ＺｈａｎｇＨＵ，ＪｉａｎＨＵＡＮＧ，Ｚｈｕ－ＨｏｎｇＷＡＮＧ（ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＰｌａｎｔＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，Ｆｕｊｉ，ａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅａｎｄＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｕｚｈｏｕ，Ｆｕｊｉａｎ３５０００２，Ｃｈｉｎａ）

DNA提取方法的研究进展

DNA提取方法的研究进展Ξ裴杰萍　综述;端　青　审校(军事医学科学院微生物流行病研究所,北京　100071)摘　要:样本DNA的提取是PCR反应的关键步骤。

本文介绍了近年来国内外几种常用的DNA提取方法,如:传统法、螯合树脂法、玻璃粉法、磁珠法、免疫亲和法等,并对各种方法的优缺点进行了综合评述。

关键词:DNA;提取方法中图分类号:Q523 文献标识码:A 文章编号:100525673(2004)0320076203 自1985年PCR技术问世以来,这一技术已被应用到生命科学的各信息领域,因其敏感性高、特异性强、操作简便、所需时间短等优点,目前已被广泛用于病原微生物的检测。

PCR检测技术的第一步就是模板DNA的制备,即样本中DNA的提取,这直接影响着PCR反应的结果。

长期以来,样本中DNA的提取和纯化一直是耗时、繁琐的过程,严重减慢了检测速度。

因此,许多学者一直在探索各种DNA的提取方法,本文就近年来国内外有关DNA提取方法研究进展作综合评述。

样品中DNA的提取分为两个步骤:裂解细胞和提取核酸。

从样品中提取DNA首先要通过物理、化学或酶解作用裂解细胞,使DNA释放出来。

常用方法包括物理法(煮沸,冻融、微波、超声、研磨等)、化学方法(高盐、表面活性剂S DS、热酚等)和酶解法(裂解酶、溶菌酶、蛋白酶K等)。

1　传统的DNA制备方法一般依赖上述方法裂解细胞,某些情况需要用酶来消化蛋白质或降解一些细胞组分,然后细胞材料通常用溶剂抽提,常用酚/氯仿。

分离成两相后,核酸在水相中。

核酸进一步纯化可用乙醇沉淀法,再重新溶解在适宜的缓冲液中。

用这些技术得到的DNA是高纯度的,并适用于大部分分子生物学技术。

然而这些经典的技术不是快速的,它们需要作若干步操作和材料与试剂的转移,这些不容易做到自动化、也不适合加工大量标本。

当仅有少量材料供分析时,传统的DNA制备方法格外不适用。

另外,酚、氯仿等有机溶剂易造成环境污染,有损操作者的健康〔1〕。

核酸提取方法的发展路程

核酸提取方法的发展路程2008-01-03夏邦顺无论是从真核细胞或是从细菌病毒中提取核酸，涉及的基本原理是使细胞膜或细胞壁破裂，染色体DNA和蛋白质变性，再用某些有机溶剂抽提使核酸分离或使核酸吸附于某些颗粒的表面，再进行沉淀或洗脱，从而获取核酸。

随着基因诊断在临床疾病的诊断和监测中发挥着日益重要的作用，基因诊断赖以完成的前提技术——核酸提取技术也有了新的进展，高效、便捷、环保、大通量、自动化成为核酸提取技术发展的主流方向。

1、经典的核酸提取方法经典的核酸提取方法是随着分子生物技术的发展而发展起来的。

从质粒中提取核酸采用SDS碱裂解法：将细菌悬浮液暴露于高pH值的强阴离子洗涤剂中，会使细胞壁破裂，染色体DNA和蛋白质变性，将质粒DNA释放到上清中。

尽管碱性溶剂使碱基配对完全破坏，闭环的质粒DNA双链仍不会彼此分离，这因为它们在拓扑学上是相互缠绕的。

只要OH-处理的强度和时间不要太过，当pH值恢复到中性时，DNA双链就会再次形成。

在裂解过程中，细菌蛋白质破裂的细胞壁和变性的染色体DNA会相互缠绕成大型复合物，后者被SDS 包盖，当用钾离子取代纳离子时，这些复合物会从溶液中有效地沉淀下来。

离心除去变性剂后，就可从上清中回收复性的质粒DNA。

从真核细胞中提取核酸可采用蛋白酶K和苯酚处理细胞裂解液。

用去垢剂如SDS溶解细胞膜并使蛋白质变性，再用蛋白酶K消化细胞或组织，核酸通过有机溶剂苯酚抽提进行纯化。

污染的RNA通过RNase消化消除，小分子质量物质通过透析去除。

最后用乙醇洗涤沉淀DNA。

也有用高浓度甲酰胺替代苯酚从细胞裂解物的蛋白酶K消化物中分离抽提DNA，甲酰胺是一种离子化溶剂，能分离蛋白质-DNA复合物并使蛋白变性和释放，因其不影响蛋白酶K的活性，特别适于分离高分子质量的DNA，其分离物用火棉胶袋透析，去除变性蛋白进而纯化DNA。

或者不用有机溶剂抽提，直接用异丙醇/乙醇沉淀分离细胞裂解物的蛋白酶K消化物中的DNA。

乙肝病毒DNA检测2种不同核酸提取方法的性能验证情况分析

乙肝病毒DNA检测2种不同核酸提取方法的性能验证情况分析董剑;许小华【摘要】目的:对乙肝病毒DNA(HBV-DNA)检测的2种不同核酸提取方法,即手工法(煮沸法)和全自动核酸提取仪法(磁珠法),在使用相同的检测试剂和核酸扩增仪的条件下进行性能验证,以评价其验证结果.方法:依据《医学实验室质量和能力认可准则》《全国临床检验操作规程》等相关文件,由同一操作人员应用中山达安公司生产的HBV-DNA检测试剂盒和ABI7500实时荧光核酸扩增仪,分别采用手工法和全自动核酸提取仪法提取HBV-DNA进行临床样本的批内精密度、批间精密度、正确度、线性范围性能验证实验.结果:手工法的高值血清批内精密度为2.18％,低值血清批内精密度为3.76％;高值质控品批间精密度为3.29％.全自动核酸提取仪法的高值血清批内精密度为1.78％,低值血清批内精密度为2.44％;高值质控品批间精密度为2.84％.正确度验证分别取浓度为2.0×103、2.0×104、2.0×105、2.0×106copies/ml的可溯源标准品进行验证,手工法偏倚分别为-4.88％、-2.51％、-2.46％,-2.12％,全自动核酸提取仪法偏倚分别为-2.37％、-0.95％、0.74％、-1.33％.线性范围验证中,手工法和全自动核酸提取仪法的相关系数分别为0.9660、0.985 8,均能满足临床检测的需求.结论:全自动核酸提取仪法较手工法提取核酸有利于简化HBV-DNA提取流程,实现分子生物实验室自动化提取核酸.【期刊名称】《医疗卫生装备》【年(卷),期】2019(040)006【总页数】4页(P40-43)【关键词】乙型肝炎病毒DNA定量检测;手工(煮沸法);全自动核酸提取仪法(磁珠法);性能验证;血清【作者】董剑;许小华【作者单位】联勤保障部队第909医院检验科,厦门大学附属东南医院检验科,福建漳州363000;联勤保障部队第909医院检验科,厦门大学附属东南医院检验科,福建漳州363000【正文语种】中文【中图分类】R318;R446.10 引言乙型肝炎也被称为乙肝，是目前世界上最常见的一类传染病，据不完全统计[1] ，在全世界范围每年至少有100万以上的患者死于乙肝。

土壤DNA提取研究进展

一
ＤＮＡ恢复方法，该研究为应对某一具体的土样提供了指导便于选择适当的ＤＮＡ提取和纯化方法。有人在此基础上，改进了方案，来提取几种性质不同的土壤样品ＤＮＡ，并得到了较好的结果。而有些土壤样品来自于极端环境或由于本身特性，提取出满足用于分子分析的ＤＮＡ比较困难。这时结合使用不同的细胞裂解方法就显得特别重要（常见的细胞裂解方法见表１）。例如引进土壤预洗涤程序用于提取一般有机质（腐植酸）和金属离子含量比较高的森林土样ＤＮＡ，ＤＮＡ提取产量和质量可以得到改善。风沙土壤本身微生物数量较低，需要采取特殊的土壤处理方法，以获得足够产量的ＤＮＡ，张颖等人也报道了一种风沙土壤微生物总ＤＮＡ提取方法，获得的ＤＮＡ可直接用于ＰＣＲ分析㈣。还有，一些极端环境如火山土壤样品ＤＮＡ提取面临着粘土和其他矿物含量高的难题，ＲｕｔｈＭ．Ｈｅｎｎｅｂｅｒｇｅｒ等［１１］尝试了各种提取方法，最终成功地提取到了效果较好的ＤＮＡ，这都证明了结合使用不同提取处理的重要性。ＤＮＡ提取技术除了在土壤样品上的应用外，还有很多其他的环境样品如沉积物、堆肥、植物组织、动物标本、消化物或粪便、骨骼牙齿、化石冰与冻土、碳酸盐岩石、唾液等。另一方面，ＤＮＡ提取技术的不断发展与成熟也促进了市场上出现了许多各种各样的商业化ＤＮＡ提取试剂盒。ｓ．Ｍ．Ｄｉｎｅｅｎ等旧比较了６种商业ＤＮＡ提取试剂盒用于三种土样细菌孢子的ＤＮＡ提取，结果表明ＦａｓｔＤＮＡ￣ＳＰＩＮｋｉｔ提取ＤＮＡ产率最高，而Ｅ．ｚ．Ｎ．Ａ．０ＳｏｉｌＤＮＡ和ＰｏｗｅｒＳｏｉｌ￣ＤＮＡＩｓｏｌａｔｉｏｎｉｔｋｓ在去除壤土提取物中ＰＣＲ抑制物方面表现出最高的效率。以上所诉的大多属于直接法，直接法虽然产量高，但是纯度一般较低，有时需要进一步的纯化，获得的ＤＮＡ片段也较小；相对而言，间接法虽然需要另外的特殊处理材料和足够的土壤数量，耗时长，但获得的ＤＮＡ纯度高、长片段多，且含有更少的真核基因序列，在进行深入３Ｉ。

DNA提取方法及在古DNA中的应用

DNA提取方法及在古DNA中的应用摘要：考古遗址留存下来的人类、动物遗骨遗骸和植物残留是古代生物信息的载体，为我们提供了重要的基因信息。

文章概述了几种古DNA提取常用的方法及原理，并介绍了这些方法在古DNA研究中的一些应用实例。

关键词：考古；遗骸；古DNA；提取方法我国墓葬、考古遗址中经常发掘出土大量猪、马、牛、羊等动物遗骨遗骸、古尸以及植物残留[1-6]，这些遗存为我们提供了古代动物、植物和人类重要的基因信息。

古DNA是古代生物的信息载体，作为分子生物学研究的一个工具，在建立DNA动力学模型、探索环境改变与生物多样性的关系、详述灭绝动物的饮食、验证过去群落结构和基因流动障碍、表现生物两性的特性、推断古代和现代人类传播模式、澄清系统发育关系、阐明进化发育生物学等方面已经得到了广泛的应用[7-11]。

古DNA对考古学、古生物学以及人类学科具有深远的影响，对于研究物种的起源与进化具有重要意义。

文章阐述了几种提取古DNA的主要方法及原理，并列举了一些应用实例。

1DNA提取的主要方法1、1Chele-100法原理：当检材比较少时或者基因分型仅需要少量的DNA时，可用Chele-100提取方法来提取DNA。

Chele-100由苯乙烯、二乙烯苯共聚体组成，是一种螯合树脂，含有亚氨基二乙酸盐离子，可以整合多价金属离子，且比一般的离子交换剂具有更强的金属离子选择性和较高的结合力，可螯合镁离子、钙离子等核酸必需的金属阳离子，防止DNA降解。

在低离子强度、碱性及煮沸的条件下，可使细胞膜破裂，并使蛋白质变性，且结合其他有可能会影响进一步分析的外源物质。

经过离心，除去了Chele-100颗粒，同时使得与DNA结合在Chele-100上的物质分离，保证了下一步的PCR反应，DNA分析也不受抑制剂的干扰[12]。

方法：以血液DNA提取为例。

取微量血液用约400μl纯水震荡破碎红细胞；13，000r、min离心去上清，收集沉淀；向沉淀中加入200μl5%Chele-100溶液（使用前要充分振摇），在振荡器上反复振荡，放入56°C保温30min以上；取出后振荡混匀，100℃保温8min，振荡后，13，000r、min离心3min，上清用于PCR扩增，或放4°C保存备用。

质粒DNA提取方法的研究进展

质粒DNA提取方法的研究进展自从人类基因被测序以来，研究质粒DNA的重要性越来越受到重视。

质粒DNA是细胞外环境中存在的循环DNA分子，具有独立自主的复制和遗传特性。

质粒DNA在微生物学和分子生物学等研究领域中都具有重要意义，因此开发有效的质粒DNA提取方法是十分必要的。

本文将简要介绍质粒DNA提取方法研究的进展。

传统的质粒DNA提取方法包括聚乙烯醇沉淀、凝胶过滤、离心柱层析等。

这些方法效果不稳定，且受到样品来源和配料操作等方面的影响。

为此，新的质粒DNA提取方法得到了广泛的关注和研究。

一种新型的质粒DNA提取方法是用离心柱层析结合玻璃纤维膜的方法。

该方法以离心柱层析作为初步提取步骤，然后用玻璃纤维膜进行产物修饰和增强。

该方法可以提高提取效率，并且易于操作。

该方法适用于多种来源的样品。

获得的质粒DNA质量也很高。

另一种新型的质粒DNA提取方法是漆酚-氯仿法。

这种方法利用开放性的原理和化学破壳技术来提取环状DNA。

这种方法适用于一定范围内的DNA分子，且操作相对简单。

然而，这种提取方法的质量还不能与传统的离心柱层析法相比较。

灭活化学分离法是一种最新的质粒DNA提取方法。

该方法是将不同宿主细胞中的质粒DNA进行破壳和纯化，并通过灭活方法，使DNA达到经济可行的水平。

这种方法可以消除质粒DNA的外源性和回卷性。

同时，该方法也可以用于提取细胞外的DNA。

总的来说，随着分子生物学和微生物学等领域的研究的不断深入，质粒DNA提取方法也不断得到改进和创新。

目前新的提取方法主要有离心柱层析法和漆酚-氯仿法等。

未来，基于这些方法的改进和创新将进一步提升质粒DNA提取方法的效率和质量。

DNA粗提取与鉴定

DNA粗提取与鉴定“dna的粗提取与鉴定”实验研究综述文摘：在“DNA粗提取与鉴定”实验中，实验原理较为抽象复杂，实验步骤较多，实验效果不理想。

因此，目前我国在实验材料的选择、实验试剂和工具的处理、实验方法的优化、实验教学设计的创新等方面进行了大量的研究。

本文综述了粗DNA提取与鉴定的实验研究进展和教学。

关键词：DNA的粗提取与鉴定实验改进教学设计中文图纸分类号：G633-91“dna的粗提取与鉴定”实验是人教版高中生物选修1《生物技术实践》专题五课题1的实验内容，教材中详细介绍了动植物细胞dna提取、分离、提纯所涉及到的一般原理、方法和实验材料的选取，但并没有以哪一种材料为例具体介绍其操作过程。

且在dna分离、提纯过程中理想的方法应该是通过离心来不断分离、提纯，而一般中学的实验室又不具有离心设备，这就对本实验的可行性带来了一定的影响。

为了使实验变得简单、可行，许多学者对该实验进行了研究与改进。

1.实验原理真核生物dna核蛋白的溶解度随nacl浓度的变化而改变。

在0.14mol/l时,溶解度最小,而在纯水或1～2mol/l的盐溶液中,溶解度则较大。

利用这一原理,可以将dna溶于nacl溶液中,而与其他物质分开。

在dna的提取物中常常含有蛋白质及其他一些杂质,而使dna提取物呈黄色。

为了去除这些杂质(主要是蛋白质),利用十二烷基磺酸钠(sds)使蛋白质变性的原理,使蛋白质与dna分开。

dna不溶于酒精,而细胞中有些物质则可溶于酒精。

在中等浓度单价阳离子(2mol/l1nacl)存在下,酒精易使DNA沉淀，这就是为什么教科书实验使用2mol/lnacl溶液溶解DNA而不是蒸馏水。

2.实验材料的选择2.1原材料改进的原因根据教材的介绍，该实验的材料可以选择动物材料(如鸡血)，也可以选择植物材料(如菜花、洋葱等)。

但是，选用dna含量相对较高的生物组织，实验成功的可能性更大。

课本推荐使用的实验材料是鸡血,优点是细胞易破裂,dna含量大,现象明显;缺点一是费用太高,对普通学校来说,买活鸡显然不现实,与市场上的小商贩联系购买新鲜鸡血,很难定时、定量地保证供应;二是实验步骤烦琐,操作要求高,学生一堂课很难完成实验。

质粒DNA提取方法的研究进展

理样品的能力高，可以在短时间内处理大量发酵后产生的菌体。因此，同一时间处理菌体越多越好，在然而，菌体浓度太高往往造成裂解不充分和给后续操作造成困难，对质粒提取反而不利。热裂解实验将菌体裂解液浓度提高到０等于１０Ｄ０，这个浓度是传统碱裂解法菌体浓度的２倍。．５传统煮沸法要求在１００％的热水浴中进行裂解，太高的温度既浪费能源，实际操作中又难以控制。在连续热裂解的方法中，在进行热裂解前，增加了一步骤３ ℃温浴２ｒｉ，７０ｎ这可以让裂解缓冲液中的溶菌酶和ａＴｉｎＸＯｒｏ — Ｉ０有充足的时间与菌体作用，而可以将热裂解温度降低到ｔ从
科技信息
高校理科研究
质粒ＤＮ提取方法硇砥究进展Ａ
云南师范大学体育学院赖成婷
【摘要］目前质粒ＤＡ的提取方法有很多，Ｎ本文综合阐述及比较了几种方法的利弊，试验证明异丙醇提取法所得质粒ＤＡ浓度Ｎ和纯度都很高，简便、快速，复性好，同时处理大量试样，重能所得ＤＮＡ有一定纯度，可满足限制酶切割、电泳分析的需要，适合大多
一
质粒ＤＮＡ是一种基因运载工具，在分子生物学中有着极为广泛的应用前景，而质粒ＤＡ的分离提取是分子生物学试验中最基本的工Ｎ作。质粒ＤＡ的提取效率和纯度直接影响到分子生物学试验的成功与Ｎ否，比如酶切、连接、大肠埃希菌的转化、ＣＰＲ扩增等。从细菌中分离质粒ＤＡ的方法一般都包括３Ｎ个基本步骤：培养细菌使质粒扩增；收 ① ② 集和裂解细菌； ③分离和纯化质粒ＤＡ。一般来说，Ｎ质粒越小，提取的效果越好，质粒越大，特性与染色体ＤＡ越接近，离提取也就越其Ｎ分难。要达到良好的分离效果，就必须寻找出溶菌的最适ＰＨ值、Ｄ浓ＳＳ度、溶菌温度和时间等，以便使质粒ＤＡ保持完整而染色体ＤＡ变ＮＮ性。此外，提取质粒时，细菌浓度也非常重要。溶菌时，菌体浓度过高可能因溶菌液与菌液不易很快混合而使溶菌不彻底，导致质粒的回收率降低，菌体浓度过低则因溶菌过于充分而使蛋白质、染色体和菌体碎片过多，沉淀时易携带质粒共沉而损失质粒。由于细菌质粒ＤＡ的提取是分子生物学研究中最基本的一项常Ｎ规技术，因此已经报道了几种较为成熟的提取方法。归纳起来，主要有碱裂解法、煮沸法及ＳＳＤ裂解法［５１。本文将对这几种提取方法的最新研究做综述。

基因克隆技术及其进展

基因克隆技术及其进展一、本文概述随着科学技术的飞速发展，基因克隆技术已成为现代生物学领域的重要分支，对人类社会的未来发展具有深远影响。

本文旨在全面概述基因克隆技术的基本概念、发展历程、应用领域以及当前面临的挑战与未来的发展趋势。

通过深入剖析这一领域的最新研究成果和技术进展，我们期望能为读者提供一个清晰、全面的视角，以便更好地理解和把握基因克隆技术的现状和未来方向。

在本文中，我们首先介绍基因克隆技术的基本概念，包括其定义、原理以及与其他相关技术的区别。

接着，我们将回顾基因克隆技术的发展历程，从早期的理论探索到现代的高效实践，展现这一领域的科技进步和突破。

我们还将重点介绍基因克隆技术在医学、农业、工业等多个领域的应用，探讨其如何为人类社会的各个领域带来革命性的变革。

然而，基因克隆技术的发展也面临着诸多挑战和争议。

我们将对这些问题进行深入剖析，包括伦理道德、生物安全、知识产权等方面的考虑。

我们还将展望基因克隆技术的未来发展趋势，探讨其在未来可能带来的机遇和挑战。

通过本文的阐述，我们期望能够增进公众对基因克隆技术的了解，推动这一领域的科技进步，并为相关领域的研究人员和实践者提供有益的参考和启示。

二、基因克隆技术的基本原理基因克隆技术是一种强大的生物技术，其基本原理主要基于分子生物学的几个核心概念。

要了解的是DNA的复制和转录过程。

DNA，作为生命的遗传蓝图，携带着所有生物体的遗传信息。

通过DNA复制，这些信息能够在细胞分裂过程中被精确复制，从而确保遗传信息的传递。

而转录过程则是DNA信息转化为RNA的过程，这为后续的蛋白质合成提供了模板。

基因克隆技术利用这些基本的生物学过程，通过人工手段将特定的DNA片段（即基因）从一种生物体中提取出来，并插入到另一种生物体的DNA中。

这个过程通常涉及到三种主要的酶：限制性内切酶、DNA连接酶和DNA聚合酶。

限制性内切酶能够识别并切割特定的DNA 序列，从而创造出适合插入新基因的切口。

环境微生物DNA提取方法研究进展

环境微生物DNA提取方法研究进展阳静;张静;邹伟;赵兴秀;赵长青【摘要】环境微生物DNA提取是应用分子生物学技术研究微生物群落的基础,DNA提取的纯度及其结构完整性直接影响后续试验结果.环境样品多种多样,包括水样、土壤、活性污泥、传统发酵食品、白酒酿造环境等,使得DNA的提取方法没有统一的标准.目前DNA的提取方法有很多,大致可以分为直接提取法和间接提取法.直接提取法操作简便,耗时短,而杂质较多;间接提取法操作复杂,耗时长,但纯度较高.文章在对比各种DNA提取方法的基础上,重点介绍了白酒酿造环境中DNA 的提取方法和大片段DNA的提取及其研究进展.%Environmental microbial DNA extraction is the foundation of microbial community research by molecular biology techniques,and its structural integrity and the purity of DNA extracted is directly related to the subsequent experiment results.DNA extraction method is not a unified standard because of various environmental samples,including water,soil and activated sludge,the traditional fermented food,liquor-making environment,etc.Now,there are many methods of DNA extraction,they can be divided into direct and indirect extraction ones.The direct extraction methods are simple,less time-consuming,while presenting impurities.However,complex indirect extraction operations are time-consuming,but the products are pure.Based on the comparison of the different DNA extraction methods,we focus on the research progress of DNA extractions of liquor brewing environment and the large fragments.【期刊名称】《食品与机械》【年(卷),期】2017(033)003【总页数】5页(P207-210,215)【关键词】DNA提取;白酒酿造;大片段DNA【作者】阳静;张静;邹伟;赵兴秀;赵长青【作者单位】四川理工学院,四川自贡643000;酿酒生物技术及应用四川省重点实验室,四川自贡643000;四川理工学院,四川自贡643000;酿酒生物技术及应用四川省重点实验室,四川自贡643000;四川理工学院,四川自贡643000;酿酒生物技术及应用四川省重点实验室,四川自贡643000;四川理工学院,四川自贡643000;酿酒生物技术及应用四川省重点实验室,四川自贡643000;四川理工学院,四川自贡643000;酿酒生物技术及应用四川省重点实验室,四川自贡643000【正文语种】中文从1953年J.D.Watson和F.H.C.Crick发现了DNA分子双螺旋结构到现在，随着分子生物学的发展，人们对DNA的了解越来越多。

水稻基因组DNA提取方法的研究进展

水稻基因组DNA提取方法的研究进展摘要：水稻基因组DNA的提取方法主要有SDS法和CTAB法。

在此基础上又提出了快速制备法、简易提取法、无需液氮研磨提取法、微量提取法等多种方法。

从试验提取材料、方法等方面对以上各种方法的优缺点及应用范围进行了综述。

关键词：水稻；基因组DNA；提取方法水稻是世界上最主要的三大粮食作物之一，已被列为模式作物，有着丰富和深入的基因组研究基础。

其DNA的制备是深入进行分子生物学研究的前提。

为使所得DNA纯度高，断裂降解程度小、量足，在提取时应根据不同研究需要，保证其结构的相对完整性；尽量排除其他大分子成分如蛋白质、多糖等的污染。

前人已就植物基因组DNA的提取总结了一系列的方法，如SDS法、CTAB法。

但在DNA提取过程中，有机试剂处理次数过多，所得DNA分子片段偏小，纯度不高，得率也低。

且CTAB等试剂价格昂贵，增加了成本。

目前，针对不同的研究目的和试验需要，提取水稻基因组DNA的材料和方法的侧重点不尽相同，各有其优缺点。

1材料目前提取水稻基因组DNA所用的材料主要有：水稻干种子、幼嫩茎段、叶片、幼穗老叶、发芽幼苗等。

不同材料对提取的DNA纯度和浓度以及所适用的范围也不同。

研究表明，植物组织中的多糖及其他一些次生代谢产物，如脂、萜等。

会对DNA的提取造成很大的困难，而且这些物质的含量随植物组织器官的生长而增加，如果不能有效地去除，植物组织中的酚类物质会氧化成醌，溶解在抽提液中与蛋白质、DNA结合。

影响DNA的解链或降低Taq酶的活性。

而使提取出来的DNA限制性内切酶无法酶切。

所以，在DNA的提取过程中必须将酚类、多糖和蛋白质等化合物除去。

为了避免上述物质的影响。

在选取材料时，应尽可能挑取处于生长旺盛期的幼嫩组织。

所以在以往的研究中大多数学者都以水稻新鲜叶片或幼苗或水稻幼嫩茎段作为提取材料。

但在进行品种鉴定和纯度分析时，用新鲜幼叶或幼苗提取DNA，不仅费时费成本，而且需要液氮。

质粒DNA提取方法的研究进展

质粒DNA提取方法的研究进展【摘要】质粒DNA提取是分子生物学研究中常见的实验步骤，有效的提取方法对实验结果具有重要影响。

本文综述了PCR法、柱式纯化法、离心法、电泳法和超声法在质粒DNA提取中的应用进展。

PCR法具有快速、高效的特点；柱式纯化法适用于大规模提取和纯化；离心法适用于提取大量DNA样本；电泳法适用于提取低浓度DNA样本；超声法则有助于破碎细胞壁，提高提取效率。

虽然质粒DNA提取方法不断完善，但仍存在局限性和待解决的问题。

未来的发展方向包括开发更快速、高效的提取方法，以满足不同实验需求。

选择适合的提取方法对于研究质粒DNA至关重要。

【关键词】质粒DNA，提取方法，PCR法，柱式纯化法，离心法，电泳法，超声法，研究进展，不断完善，实验需求，发展方向。

1. 引言1.1 质粒DNA提取方法的研究进展质粒DNA提取方法是分子生物学研究中常用的重要技术之一。

随着科学技术的不断发展，质粒DNA提取方法也在不断完善和改进。

近年来，研究人员提出了一系列新的方法和技术，以提高质粒DNA提取的效率和纯度，满足不同实验需求的需要。

现今，PCR法在质粒DNA提取方法中得到广泛应用。

PCR法可以快速、高效地扩增目标序列，从而可以提取到更纯净的质粒DNA。

柱式纯化法和离心法也被广泛应用于质粒DNA提取中，能够有效地去除杂质和杂菌，提高纯度。

电泳法和超声法也在质粒DNA提取方法中发挥了重要作用。

电泳法可以帮助研究人员迅速鉴别目标DNA并分离出来，而超声法则可以通过超声波的作用将细胞破碎，释放DNA。

2. 正文2.1 PCR法在质粒DNA提取方法中的应用PCR法在质粒DNA提取方法中的应用是一种快速、高效的提取方法。

PCR法基于聚合酶链式反应(PCR)，通过引物的特异性结合，扩增目标质粒DNA片段。

相比传统提取方法，PCR法无需使用酶切、琼脂糖凝胶电泳等步骤，大大简化了提取过程并节省了时间。

在使用PCR法提取质粒DNA时，首先需要设计引物，通常选择能够特异性结合目标DNA片段的引物。

质粒DNA提取方法的研究进展

质粒DNA提取方法的研究进展质粒DNA提取是分子生物学研究中的重要步骤之一，用于从细菌或酵母等单细胞生物中提取质粒DNA，以进一步进行基因克隆、转染、测序等实验。

随着技术的发展，质粒DNA 提取方法也不断改进和创新。

本文将对质粒DNA提取方法的研究进展进行综述。

质粒DNA提取的传统方法主要包括酸碱抑制法、琼脂糖破碎法、酚氯仿提取法等。

酸碱抑制法通过改变细胞的环境PH值，使细胞壁破裂，释放细胞内质粒DNA。

琼脂糖破碎法则是通过琼脂糖溶液使质粒DNA凝聚成粒状，然后通过离心去除细胞残渣。

酚氯仿提取法是一种物理分离法，通过差别溶解度和密度来分离DNA、RNA和蛋白质。

这些传统方法存在一些缺点，如提取效率较低、样品处理时间较长、对实验操作者要求较高等。

近年来研究者提出了一系列新的质粒DNA提取方法，以克服传统方法存在的问题。

一种改进的质粒DNA提取方法是利用商用DNA提取试剂盒，其中包含了经过优化的试剂组合和提取步骤。

这些试剂盒可以有效地提取质粒DNA，且操作简便、快速，适用于高通量实验。

Qiagen的QIAprep Spin Miniprep Kit和Promega的Wizard Plus SV Miniprep DNA Purification System等试剂盒广泛应用于质粒DNA提取。

一些新的质粒DNA提取方法利用表面改性技术，通过改善质粒DNA的离心沉积性能，提高提取效率。

研究者可以表面修饰磁性颗粒，将其与质粒DNA结合，然后利用磁力进行快速定位和分离。

这种方法提取效率高、操作简单，可用于大规模质粒DNA提取。

一些研究还尝试利用纳米材料（如纳米碳管、纳米颗粒）等进行质粒DNA的高效提取。

还有一些质粒DNA提取方法利用PCR扩增原理进行提取。

这种方法通过PCR酶的特异性结合，从细菌细胞中选择性放大质粒DNA，然后用琼脂糖凝胶电泳等方法分离和纯化。

这种方法操作简单、快速，适用于数量较少的样品。

质粒DNA提取方法的研究进展主要集中在提高提取效率、简化操作步骤、缩短提取时间等方面。

DNA提取方法的研究进展

DNA提取方法的研究进展
DNA提取是分子生物学和遗传学研究中至关重要的一步，目
前在DNA提取方法方面有一些研究进展，包括以下几个方面：
1. 提取方式改进：研究人员对传统的DNA提取方法进行改进，以提高提取效率和纯度。

例如，使用化学试剂和酶解剂的组合，可以有效地去除细胞质和蛋白质等干扰物质，从而提高DNA
的纯度。

2. 高通量提取方法：随着高通量测序技术的发展，需要提供足够的DNA样本量来进行测序。

因此，研究人员致力于开发高
通量的DNA提取方法，可以同时处理多个样本，并提高提取
效率。

3. 无细菌DNA污染方法：细菌DNA在DNA提取过程中常常
会污染目标DNA，影响后续分析。

现在有研究人员针对这个
问题进行研究，开发了一些方法来去除细菌DNA的污染，例
如使用特定的酶解剂或改良DNA提取试剂。

4. 小样本DNA提取方法：例如从微生物、稀有细胞或胎儿等
低样本量来源提取DNA。

这些样本通常含量较少，提取DNA
的难度相对较大。

研究人员在这方面进行了一些探索，提出了一些针对小样本DNA提取的方法，以尽可能提高提取效率和
纯度。

DNA提取方法的研究一直在不断进展，致力于提高提取效率
和纯度，以满足越来越复杂的分析需求，并应用于新兴的领域和技术。

质粒DNA提取方法的研究进展

质粒DNA提取方法的研究进展随着分子生物学技术的不断发展，质粒DNA的提取技术也得到了广泛的应用和研究。

质粒DNA提取是一项基础性研究手段，一直在基础研究、疾病诊断和生物制药领域中发挥着重要作用。

本文主要介绍目前常用的几种质粒DNA提取方法及其优缺点。

一、常规手工提取法常规手工提取法是最早也是最简便的质粒DNA提取方法。

通常采用离心法将大肠杆菌等细菌离心收集细胞，取上清液加入裂解液进行裂解，裂解后进行碱/SDS离解，使用氯仿等有机溶剂酚/氯仿提取质粒DNA颗粒，最后用TE溶液进行洗涤和回收。

该方法操作简便，而且适用于大多数常见的质粒DNA提纯。

但是，由于其需求人力较多且一般提取较少的DNA，所以适用范畴比较小，且受到污染的影响较大。

因此，该方法已经逐渐被新的自动高通量质粒提取系统所代替。

二、离心柱提取法离心柱提取法是根据DNA的理化性质，利用离心柱等介质进行柱式层析纯化。

常用的离心柱包括纯化柱、快速浄化柱和离心管柱。

通常，先将大肠杆菌等细菌离心采集细胞，将上清液通过离心柱进行层析，然后使用旋转式/真空吸口式洗涤柱进行洗涤和回收。

该方法具有准确性高、操作简单、提纯效率较高、DNA量大和自动化程度高的优点，适用于大规模的DNA提取，但是成本较高。

三、自动化高通量质粒提取系统自动化高通量质粒提取系统是一种先进的自动化质粒DNA提取技术，通常将细胞裂解与DNA纯化结合在一起。

相比于上述提取方法，该系统可以高效地提高样品输出和准确性，同时获得较高的DNA得率和纯度。

由于其自动化程度高、灵敏度高、样品处理量大、作业时间短等优点，被广泛应用于基础生物学研究、生物制药和医学诊断等多个领域。

此外，该系统的缺点是设备成本较高，且其操作体积较大，不适用于小规模实验室和初学者。

总之，随着分子生物学研究和应用的不断发展，质粒DNA的提取方法逐步升级与改进，不同的提取方法各自有其优缺点。

因此，在进行质粒DNA提取时应根据实验需要和实验室条件选择合适的方法。

基于磁珠法的肉制品DNA快速提取方法研究

分析检测基于磁珠法的肉制品DNA快速提取方法研究肖兴玉，张永哲，张凯华，陈惠杰，尹锐*（吉林农业科技学院生物与制药工程学院，吉林吉林 132000）摘要：本研究建立了一种基于磁珠法的肉类DNA快速提取技术。

该技术以十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）为裂解液，70%乙醇为漂洗液，羟基磁性微球为DNA吸附介质，从裂解液浓度、裂解时间、漂洗次数3方面进行优化。

研究发现裂解液为2% CTAB、裂解时间10 min，漂洗次数2次时，基因组DNA提取效果最优。

本研究建立的磁珠法肉类DNA提取技术可作为基层实验室自建肉类DNA提取方案，用于肉类DNA的快速提取，为肉类食品安全检测提供技术保障。

关键词：磁珠法；肉制品；DNA提取；CTABResearch on Rapid DNA Extraction Method of Meat Products Based on Magnetic Bead MethodXIAO Xingyu, ZHANG Yongzhe, ZHANG Kaihua, CHEN Huijie, YIN Rui* (College of Biological and Pharmaceutical Engineering, Jilin Agricultural Science and TechnologyUniversity, Jilin 132000, China)Abstract: This study established a rapid meat DNA extraction technology based on magnetic bead method. The technology uses sodium CTAB as the lysate, 70% ethanol as the rinse solution and hydroxyl magnetic beads as the DNA adsorption medium. It optimized in terms of the lysate concentration, lysis time and rinsing frequency. The study found that the genomic DNA extraction eﬀect was the most optima when the lysate was 2% CTAB, the lysis time was 10 min, and the number of rinses were twice. The magnetic bead meat DNA extraction technology established in this study can be used as a self-built and internal meat DNA extraction scheme in the grass-roots laboratory for the rapid extraction of meat DNA, providing technical support for meat food safety detection.Keywords: magnetic bead method; meat products; DNA extraction; CTAB肉类是人们生活中重要的食物来源，一直以来肉类的食品安全受到社会和消费者的密切关注。

质粒DNA提取与酶切方法的比较研究

结论总的来说，各种质粒DNA提取方法和酶切方法都有其优缺点。在选择方法时，应根据具体的研究需求和实验条件进行选择。常规提取方法虽然操作繁琐，但成本低廉且产量高；快速提取方法和生物素法则具有快速、简便和高纯度的优点，但成本较高。对于酶切方法，单一酶切操作简便但适用范围有限；双酶切和全酶切则能实现复杂切割，但操作较复杂且成本较高。
（2）双酶切
双酶切是使用两种不同的限制性内切核酸酶对DNA进行切割。该方法可实现对复杂基因组或多个位点的精确切割，适用范围更广。但是，双酶切操作相对复杂，需要更多时间进行优化和调整。
（3）全酶切
全酶切是使用一种或多种限制性内切核酸酶以及修饰酶等对DNA进行切割。该方法可根据实验需求对DNA进行的优点是高度灵活，适用范围广泛。然而，全酶切需要更多的实验设计和操作技巧，且成本较高。
比较研究
1、操作难易程度及成本
在操作难易程度方面，快速提取方法和生物素法相对简单，而常规提取方法较为繁琐。在成本方面，生物素法和快速提取方法所需试剂和设备成本较高，而常规提取方法成本较低。
2、纯度和产量
在纯度方面，生物素法和快速提取方法纯度较高，而常规提取方法纯度相对较低。在产量方面，常规提取方法和快速提取方法产量较高，而生物素法产量较低。
质粒DNA提取方法
1、常规提取方法
常规提取方法是一种经典的分步提取方法，包括裂解细胞、分离质粒DNA、洗涤和纯化等步骤。该方法的主要优点是适用范围广，可从各种细胞中提取质粒 DNA。但是，该方法操作繁琐，提取周期较长，需要使用大量试剂和设备。
2、快速提取方法
快速提取方法是通过优化常规提取方法中的某些步骤，实现快速、简单的质粒DNA提取。该方法主要优点是操作简便、快速，可减少试剂和设备的使用。但快速提取方法可能会牺牲一些纯度或产量。

植物油DNA 提取和基因检测的研究进展

植物油DNA 提取和基因检测的研究进展作者：李晓萌来源：《现代食品》 2018年第5期李晓萌（沈阳食品检验所微生物检验室，辽宁沈阳110000）摘要：为了对植物油的质量安全提供更好的保障，人们以分子生物学理论为基础，建立了有效的分析方法，发挥高灵敏度、操作简便、快速准确等优势，在植物油转基因成分、掺假检测中广泛应用。

但是，植物油一般都进行了加工精制，DNA 含量较少，完整度较低，因而在提取检测植物油基因的过程中难度较大。

为此，对高质量 DNA 有效提取，是植物油基因检测的重点内容。

基于此，对植物油 DNA 提取和基因检测开展了研究。

关键词：植物油；DNA 提取；基因检测中图分类号：TS221植物油属于酯类物质，主要由高级脂肪酸、甘油组成，常温状态为液态。

植物油在人们生活中占据着不可替代的位置，而当今市场上植物油掺假、转基因植物油标识混乱的情况，极大地影响了消费者权益，同时也威胁到了人们的身体健康[1] 。

为此，需要采取有效措施了解植物油转基因成分及真实性，常规方法主要包括仪器分析、理化分析等，随着分子生物学的发展，也可以此为基础，采取新的基因检测方法。

DNA 热稳定性、酸碱耐受性良好，为分子生物学检测提供了可能。

1 植物油 DNA 提取1.1 提取步骤植物油 DNA 提取中，主要步骤包括裂解、纯化等。

通过裂解将 DNA 在裂解体系中释放，通过纯化使有利 DNA 和裂解体系中盐、多糖、蛋白质等其他成分进一步去除分离[2] 。

在裂解过程中，可以采用机械裂解、酶裂解、化学裂解等方法。

纯化当中，使用氯仿、酚等作为有机溶剂，经过抽提后将 DNA 沉淀出，使用磁珠、吸附树脂等吸附 DNA，然后将 DNA 洗脱。

在DNA 提取的不同方法中，主要差异存在于裂解、纯化等过程，可以对裂解、纯化方法加以优化，进而使植物油 DNA 提取效率提升。

不同于其他物质，植物油属于高度深加工纯化产品，含有较高的油脂类物质，严重破坏 DNA，并大幅降低含量。

3种植物DNA提取法中多糖类物质去除效果的研究

3种植物DNA提取法中多糖类物质去除效果的研究高洪晓;杨凯;刘建斌【摘要】To find an efficient method for the removal of polysaccharide in plant DNA extract process, the CTAB, high salt and Chlorobenzene methods were used to extract the genome DNA of three Syringa plants. Agarose gel electrophoresis and ultraviolet spectrophotometer methods were adopted to test the DNA quality, and the concentration changes of polysaccharid in the DNA extraction process were tested with anthraquinone hydrate-sulfuric. The result showed that the removal efficiency of polysaccharide in the three methods were similar. The highsalt method was safer and convenienter than the other two methods. The influence of polysaccharide in the high salt methods was removed in a special step. The result provided theoretical basis for the removal of polysaccharide in plant DNA extraction process.%为探明DNA提取过程中去除多糖的有效方法,以丁香属3种植物为材料,用3种DNA提取方法(普通CTAB法、氯苯法和高盐法)提取丁香属植物基因组DNA.对提取的DNA质量采用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计法进行检测,并采用蒽酮硫酸法测定DNA提取过程中多糖含量的变化.结果表明:3种方法的多糖去除率相近且都比较高.高盐法与前两种方法相比对人体和环境危害较小且操作简单,是最适合该属植物的DNA提取方法.该方法采用了专门的去除多糖的步骤,为DNA提取过程中多糖的去除提供了一定的理论依据.【期刊名称】《北京农学院学报》【年(卷),期】2011(026)001【总页数】3页(P70-72)【关键词】多糖;DNA;高盐法【作者】高洪晓;杨凯;刘建斌【作者单位】北京农学院,园林学院,北京,102206;北京农学院农业应用新技术北京市重点实验室,北京,102206;北京农学院,园林学院,北京,102206【正文语种】中文【中图分类】S685.26多糖作为植物细胞的结构组成物质和营养储存物质在植物细胞中大量存在[1]。