人胚胎成纤维细胞的分离_培养和鉴_省略_殖细胞体外生长所需细胞因子的表达_王英

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细胞培养基本技术及免疫细胞的培养方法

细胞培养第一节细胞培养基本技术一、免疫细胞分离技术1、淋巴细胞的分离取肝素抗凝血1m1加Hanks液1m1稀释后，沿管壁徐徐滴流叠加盛有2m1淋巴细胞分离液的试管内(注意勿与分离液混合，然后2000r／min水平离心20min，管内分为4层，自上而下依次为血浆，单个核细胞，颗粒白细胞、红细胞(图2—1)。

用毛细管伸至单个核细胞层中(位于细胞分离液与血浆的界面上)，沿管壁轻轻吸出全部细胞。

然后用Hanks液洗两次，每次2000r／min离心10min，最后用RPMI l640培养液将细胞配成2×106／m1的细胞悬液备用。

2、T细胞及B细胞的分离将淋巴细胞悬液通过尼龙棉柱，B细胞粘附于尼龙棉上，T细胞则不粘附，先用RPMI l640培基洗脱尼龙棉柱，流下的细胞悬液含有丰富的T细胞。

然后用力反复挤压尼龙柱、挤出粘附在尼龙棉上的B细胞，并用少量的RPMI l640培基洗脱，此细胞悬液含有丰富的B细胞。

尼龙柱(塑料管)的长短和尼龙棉的多少，视分离细胞的多少而定。

3、CD4细胞及CD8细胞的分离（1）CD4细胞的分离：将一定量的T细胞悬液通过一根SephDdexC—10柱，然后用少量的RPMll640培养洗涤，收获的细胞悬液约含85％的CD4细胞。

（2）CD8细胞分离：用Tris缓冲液稀释羊抗鼠IgG(浓度为10μg／m1)包被一平皿表面，然后放置4℃过夜，没有包被上的抗体用PBS洗净。

然后将已标记有抗CD8单克隆抗体的T细胞(细胞浓度为1×l07／m1)3m1加入上述的平皿内，4℃放置2小时，用PBS轻轻洗净末粘附的细胞，然后用毛细管加入10m1 PBS吹打。

收集的脱落细胞经洗涤后悬浮在RPMI l640培基中备用。

CD4细胞亦可用此法分离。

4、单核巨噬细胞的分离单核巨噬细胞有粘附塑料或玻璃表面的特性，而淋巴细胞则无此特性，借此可将这两类细胞分开，其方法简述如下。

将待分离的细胞悬液(如实物动物的腹腔液)加入适当大小的塑料或玻璃平皿内，置于37℃ C02温箱内温育1小时，然后用RPMI 1640培基轻轻漂洗平皿表面，去除非粘附细胞，再将粘附有细胞的平皿表面用上述培基轻轻洗刷，收集粘附的单核巨噬细胞。

人血小板裂解液在人牙髓间充质细胞体外增殖与分化中的应用

人血小板裂解液在人牙髓间充质细胞体外增殖与分化中的应用
谢贤哲ꎬ徐燕ꎬ何家林ꎬ王腾飞ꎬ霍冬梅
摘要目的探索人血小板裂解液( ＨＰＬ) 在人牙髓间充质
细胞体外培养使用胎牛血清 ( ｆｅｔａｌｂｏｖｉｎｅｓｅｒｕｍꎬ
胎牛血清( ＦＢＳ) 提供依据ꎮ 方法分别使用不同浓度ＨＰＬ
光倒置显微镜 ( ＤＭＩ３０００Ｂꎬ德国Ｌｅｉｃａ公司) ꎻ茜素
红Ｓ法染色试剂盒、ＣＣＫ￣８试剂盒( 北京Ｓｏｌａｒｂｉｏ公
司) ꎻＴＲＩｚｏｌ( 美国Ｉｎｔｒｏｖｉｇｅｎ公司) ꎻ实时荧光定量聚
合酶链反应 ( Ｒｅａｌｔｉｍｅｑｕａｎｔｉｔｉｖｅ￣ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎ
ｔｏｓｉｓｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙꎬ ４５５８％ｉｎｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐａｎｄ３１５０％ｉｎｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ. Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ
用受到了极大的限制 [１] ꎮ 血小板裂解液 ( ｈｕｍａｎ
ｐｌａｔｅｌｅｔｌｙｓａｔｅꎬＨＰＬ) 作为可能的ＦＢＳ替代物受到广
泛的关注 [２－３] ꎮ 很多学者尝试使用ＨＰＬ对细胞进
行体外扩增ꎬ 但对于最适使用浓度的观点仍未统
一 [４] ꎮ
蛋白网分离ꎬ上清液于－８０ ℃ 与３７ ℃ 下反复冻融３
ｔｈｅｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅｗａｓｉｎｔａｃｔａｎｄｔｈｅａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｄｅｘｗａｓ３６１％ . Ｉｎｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐꎬ ｔｈｅｌｉｖｅｒｃａｂｌｅｓｔｒｕｃ￣

挑战杯

5.方茴说："那时候我们不说爱，爱是多么遥远、多么沉重的字眼啊。

我们只说喜欢，就算喜欢也是偷偷摸摸的。

"6.方茴说："我觉得之所以说相见不如怀念，是因为相见只能让人在现实面前无奈地哀悼伤痛，而怀念却可以把已经注定的谎言变成童话。

"7.在村头有一截巨大的雷击木，直径十几米，此时主干上唯一的柳条已经在朝霞中掩去了莹光，变得普普通通了。

“挑战杯”全国大学生课外学术科技作品竞赛简介参加“挑战杯”科技竞赛的作品一般分为三大类：自然科学类学术论文、社会科学类社会调查报告和学术论文、科技发明制作，凡在举办竞赛终审决赛的当年７月１日起前正式注册的全日制非成人教育的各类高等院校的在校中国籍本专科生和硕士研究生、博士研究生（均不含在职研究生）都可申报参赛。

每个学校选送参加竞赛的作品总数不得超过６件（每人只限报一件作品）、作品中研究生的作品不得超过３件，其中博士研究生作品不得超过１件。

各类作品先经过省级选拔或发起院校直接报送至组委会，再由全国评审委员会对其进行预审，并最终评选出８０％左右的参赛作品进入终审，终审的结果是，参赛的三类作品各有特等奖、一等奖、二等奖、三等奖、且分别约占该类作品总数的３％、８％、２４％和６５％。

竞赛的宗旨：崇尚科学、追求真知、勤奋学习、锐意创新、迎接挑战。

竞赛的目的：引导和激励高校学生实事求是、刻苦钻研、勇于创新、多出成果、提高素质，并在此基础上促进高校学生课外学术科技活动的蓬勃开展，发现和培养一批在学术科技上有作为、有潜力的优秀人才。

竞赛的方式：高等学校在校学生申报自然科学类学术论文、哲学社会科学类社会调查报告和学术论文、科技发明制作三类作品参赛；聘请专家评定出具有较高学术理论水平、实际应用价值和创新意义的优秀作品，给予奖励；组织学术交流和科技成果的展览、转让活动。

第五届“挑战杯”一等奖获奖名单清华大学浦志勇《十字路口看乡企》--中国农村乡镇企业转制问题调查报告清华大学白继红蛋白质去折叠与折叠机制的研究清华大学陈益钢基于界面设计的多层膜技术获得新型合金1."噢，居然有土龙肉，给我一块！"2.老人们都笑了，自巨石上起身。

重组人表皮生长因子在毕赤酵母X33中的构建、表达和纯化

重组人表皮生长因子在毕赤酵母X33中的构建、表达和纯化高云鹏;赵雨;王新宇;白雪媛;王佳雯【摘要】在毕赤酵母X33中表达人表皮生长因子并纯化,对表皮生长因子(EGF)进行密码子优化,构建pPICZa A-EGF真核表达质粒,转化X33感受态细胞;利用抗性筛选以及PCR鉴定阳性菌株.经过甲醇诱导和镍柱纯化,聚丙烯酰胺凝胶电泳检测蛋白分泌表达情况.成功构建了表达pPICZa A-EGF真核表达质粒,转入X33中获得阳性菌株,成功诱导蛋白分泌表达并纯化.在毕赤酵母X33中成功表达人表皮生长因子,纯化后纯度为80％,收率为5.8 mg/L.【期刊名称】《科学技术与工程》【年(卷),期】2018(018)017【总页数】4页(P141-144)【关键词】表皮生长因子;毕赤酵母;蛋白表达;纯化【作者】高云鹏;赵雨;王新宇;白雪媛;王佳雯【作者单位】长春中医药大学中医药与生物工程研究开发中心,长春130117;长春中医药大学中医药与生物工程研究开发中心,长春130117;长春中医药大学中医药与生物工程研究开发中心,长春130117;长春中医药大学中医药与生物工程研究开发中心,长春130117;长春中医药大学中医药与生物工程研究开发中心,长春130117【正文语种】中文【中图分类】Q786表皮生长因子(EGF)首次从成熟小鼠的颌下腺中分离出来[1]。

而人的肾脏、十二指肠、胰腺、肝脏以及乳腺中都发现了人表皮生长因子(hEGF)存在[2, 3]。

hEGF是包含有53个氨基酸残基，具有三个二硫键的6.2 kDa大小的多肽。

EGF能够与表皮生长因子受体(EGFR)结合并使其激活，活化后的EGFR由单体转化为二聚体并发生自磷酸化，进一步激活下游包括MAPK/Akt和JNK在内的一系列通路，诱导细胞增殖[4]。

hEGF刺激皮肤、角膜、肺、器官以及胃肠道表皮细胞的增殖和分化。

hEGF同时能够促进角质细胞的生长和迁移，提高成纤维细胞和胚胎细胞的增殖[4,5]。

一种鸡胚胎成纤维细胞体外三维培养和分离的方法

一种鸡胚胎成纤维细胞体外三维培养和分离的方法1. 从鸡胚体内收集成纤维细胞：使用灭菌的工具和培养介质，从鸡胚体内收集成纤维细胞。

2. 细胞培养基的制备：制备适宜的细胞培养基，比如DMEM（Dulbecco's Modified Eagle's Medium），其中包含适当的营养物质和补充物。

3. 细胞培养底物处理：在培养器中涂覆适宜的细胞培养底物，比如胶原蛋白、明胶或聚二甲基丙烯酸甲酯（PDMA）等。

4. 细胞预处理：将收集到的鸡胚胎成纤维细胞在预处理培养基中预处理一段时间，以提高细胞的存活率和增殖速度。

5. 细胞接种：将经过预处理的细胞接种至培养器中的培养底物上，使细胞附着并形成单层或多层细胞。

6. 体外三维培养的创建：将培养器中的细胞培养至一定程度，使细胞形成三维结构，如球状或纺锤状。

7. 细胞增殖和细胞养护：提供适宜的培养条件，包括合适的培养基、温度、湿度和氧气含量，以促进细胞增殖和维持细胞的健康状态。

8. 培养基的更换：定期更换培养基，以排除废弃物和维持细胞的正常功能。

9. 细胞监测和分析：使用显微镜和其他细胞学技术，定期监测和分析培养器中的细胞状态、数量和生长速度。

10. 细胞传代：当细胞达到一定密度时，可以进行细胞传代，将细胞分离、稀释并重新接种，以维持细胞的健康状态和继续培养。

11. 细胞分离：使用适当的消化酶（如胰蛋白酶）或细胞分离缓冲液，将三维细胞结构分离为单个细胞。

12. 细胞计数：使用细胞计数仪或显微镜，对分离的细胞进行计数，以确定细胞的数量。

13. 细胞检测：采用细胞培养板或微孔板等细胞培养容器，将分离的细胞均匀地分配在不同孔或区域上，以进行后续的细胞检测和分析。

14. 细胞培养条件的优化：在细胞分离过程中，根据不同实验目的，优化培养条件，如培养基的配方、温度、湿度和氧气含量等。

15. 细胞培养的存活率和生长速度的分析：通过计算存活细胞的比例和细胞增殖速率，评估细胞培养的效果。

人成纤维细胞的体外分离、纯化培养及细胞鉴定

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中国老年学杂志 2012 年 3 月第 32 卷
化学染色，细胞质中有棕色颗粒。成纤维细胞的标志物 Vimen- tin 为阳性，证明提取细胞为成纤维细胞。见细胞培养第 2 天； c：细胞培养第 12 天细胞生长呈鱼群状； d：细胞培养第 14 天，细胞生长呈漩涡状
5 Keisuke T，Jin H，Taranova O，et al. Generation of insulin-secreting isletlike clusters from human skin fibroblasts〔J〕. Science，2008； 283 （ 46 ）： 31601-7.
2结果 2. 1 成纤维细胞分离、纯化及培养通过酶消化法及贴壁筛选法，成功分离出人成纤维细胞。 2. 2 形态学观察倒置显微镜观察细胞形态，接种第 2 天可见细胞散在生长，分布不均的单个贴壁细胞呈梭形，成纤维细胞样。待细胞培养 10 ～ 14 d 时，细胞生长已达 80% ～ 90% ，呈鱼群样或漩涡状排列。见图 1。 2. 3 细胞 HE 染色成纤维细胞的形态呈梭形，也可见大多角形和扁平星形等。核仁明显，核呈椭圆形，可见 1 ～ 2 个核仁，胞体较大，胞质弱嗜碱性，染色质疏松着色浅。当细胞汇流时，呈鱼群样或漩涡状排列，细胞在 15 代内形态保持不变，经 HE 染色可以更清楚地观察到这些表现。见图 2。 2. 4 细胞免疫组化结果对第 6 代成纤维细胞进行免疫细胞
人成纤维细胞的体外分离、纯化培养及细胞鉴定
王玲玲1 马峰2 张玉成杜珍武张桂珍（吉林大学中日联谊医院中心研究室，吉林长春 130033）
〔摘要〕目的对人皮肤成纤维细胞进行分离、纯化、培养及细胞鉴定，探讨一种高效的分离及纯化方法，为细胞移植提供种子细胞。方法使用酶消化法原代提取人成纤维细胞，快速贴壁法纯化细胞，对细胞进行形态学观察、HE 染色，免疫细胞化学鉴定细胞标志物 Vimentin。结果利用倒置显微镜及 HE 染色，可见细胞为散在分布的梭形贴壁细胞，当细胞汇流时，呈鱼群样或漩涡状排列，且细胞在 15 代内形态保持不变。结论成功地发现快速提取成人成纤维细胞的方法，为成人自体细胞移植的研究奠定了基础。

人胚胎成纤维细胞对人胚胎生殖细胞生长的作用

人胚胎成纤维细胞对人胚胎生殖细胞生长的作用陈永珍;李芳;陈谦;余水长;朱旻;张苏【期刊名称】《解剖学杂志》【年(卷),期】2005(028)006【摘要】目的:研究人胚胎成纤维细胞对人胚胎生殖细胞(EG细胞)生长的作用.方法:采用组织块体外培养法体外培养人EG细胞,不添加任何细胞因子,利用源于胚胎组织自身的成纤维细胞作为饲养层,收集培养3 d和9 d的上清液,用抗体夹心ABC-ELISA法定量检测其白血病抑制因子(LIF)、干细胞生长因子(SCF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的含量.培养的细胞用免疫细胞化学法进行SSEA-3、OCT-4的检测.结果:培养9 d的上清液中3种因子均含量为LIF 55.25 pg/ml、SCF 90.39pg/ml、bFGF 26.06 pg/ml,均高于培养3 d相应的平均含量.培养的细胞SSEA-3、CCT-4呈强阳性表达.结论:上清液中LIF、SCF和bF-GF的含量与胚胎成纤维细胞的生长呈正比,胚胎成纤维细胞能分泌这些细胞因子,以维持EG细胞体外增殖并抑制其分化.【总页数】4页(P625-628)【作者】陈永珍;李芳;陈谦;余水长;朱旻;张苏【作者单位】苏州大学医学院组织学与胚胎学教研室,苏州,215123;苏州大学医学院组织学与胚胎学教研室,苏州,215123;苏州大学医学院组织学与胚胎学教研室,苏州,215123;苏州大学医学院组织学与胚胎学教研室,苏州,215123;苏州大学医学院组织学与胚胎学教研室,苏州,215123;苏州大学医学院组织学与胚胎学教研室,苏州,215123【正文语种】中文【中图分类】R32【相关文献】1.人胚胎成纤维细胞对人胚胎干细胞生长的作用 [J], 徐令;黄绍良;李树浓;吴旋2.人胚胎成纤维细胞的分离、培养和鉴定及人胚胎生殖细胞体外生长所需细胞因子的表达 [J], 王英;何津;李玉林3.人成纤维细胞对人胚胎干细胞生长的支持作用 [J], 钱坤;陈红;张苏明;朱桂金4.人胚骨髓基质细胞饲养层对人胚胎生殖细胞生长的作用 [J], 姜景岩;孔北华;刘星霞;侯怀水;马秀峰;沈柏均;时庆5.人胚胎成纤维细胞对人胚胎生殖细胞生长的作用 [J], 王莉;曹宇静;等因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

人类干细胞的分离与扩增技术

人类干细胞的分离与扩增技术干细胞是具有自我更新能力和多能性分化潜能的细胞，具有重要的生物医学研究和临床应用价值。

然而，由于其数量极少、纯度低和复杂的分化途径等问题，限制了其应用范围。

因此，开发高效、稳定、可重复的干细胞分离和扩增技术至关重要。

一、干细胞来源人类干细胞主要来源于自体和异体，自体干细胞主要来自组织、骨髓、血液和脂肪等。

异体干细胞来源包括胚胎干细胞和诱导多能性干细胞。

二、干细胞的分类按照分化潜能和来源不同，干细胞主要分为胚胎干细胞、成体干细胞和诱导多能性干细胞。

（一）胚胎干细胞胚胎干细胞是从早期胚胎中分离获得的干细胞，具有广泛的分化潜能，在人类生长发育早期具有重要的调控作用。

由于采集胚胎干细胞需要牺牲胚胎，具有一定的伦理问题，目前只能在限制条件下使用。

（二）成体干细胞成体干细胞是成熟组织中存在的干细胞，可分为两类：一种是持续产生血细胞的造血干细胞；另一种是多种细胞系的祖细胞，如神经干细胞、骨髓间充质干细胞、脂肪干细胞等。

成体干细胞分离和扩增技术相对成熟，但纯度较低。

（三）诱导多能性干细胞诱导多能性干细胞是通过基因转染和化学诱导等方法在体外培养中经过重新编程后获得的多能性干细胞。

诱导多能性干细胞来源具有广泛性，能够在一定程度上避免伦理问题，但在分化潜能和稳定性方面存在争议。

三、干细胞的分离和扩增技术干细胞分离和扩增技术主要通过细胞表面标记物和培养条件的优化来实现细胞纯度和数量的控制。

（一）流式细胞术流式细胞术是通过细胞表面标记物的检测和筛选实现干细胞的分离。

常用的标记物有CD34、CD44、CD90、CD105、CD133等，通过针对不同标记物的单抗进行免疫联合筛选，可以获得纯度较高的干细胞群体。

（二）磁性细胞分选法磁性细胞分选法是通过细胞表面标记物和磁性颗粒的结合实现干细胞的分离和纯化。

常用的标记物有CD34、CD44、CD90、CD105、CD133等，通过针对不同标记物的磁性颗粒进行筛选，可以获得纯度较高的干细胞群体。

人皮肤成纤维细胞原代培养及生物学特性_王晓华

人皮肤成纤维细胞原代培养及生物学特性王晓华，王扬，蒋涛，付立业，姜又红（中国医科大学附属第一医院肿瘤研究所，沈阳110001）摘要：目的探索和建立人皮肤成纤维细胞原代培养的方法，为皮肤成纤维细胞在临床医学中的应用提供可靠的科学依据。

方法胰蛋白酶消化法分离培养人皮肤成纤维细胞；细胞生长曲线及MTT 法测定细胞增殖能力；流式细胞仪测定细胞生长周期及细胞增殖指数；倒置显微镜下观察成纤维细胞生长状态；HE 染色观察细胞爬片下的形态及着色；免疫组织化学染色观察成纤维细胞中间丝波形蛋白；电子显微镜下观察成纤维细胞超微结构。

结果体外用胰蛋白酶消化法建立了人皮肤成纤维细胞；传5代内细胞及传5代内冻存复苏后人皮肤成纤维细胞增殖能力均很强；倒置镜下观察、HE 染色、波形蛋白免疫组化染色及电镜下观察鉴定培养细胞的形态及生物学特性符合成纤维细胞。

结论本研究确立了体外人皮肤成纤维细胞原代培养。

关键词：人；皮肤；原代培养；成纤维细胞；细胞增殖指数；细胞形态学中图分类号：R318.08文献标志码：A文章编号：0258-4646（2010）12-1041-04Primary Culture and Biological Characteristics of Human Skin Fibroblasts 随着年龄的增长，皮肤会出现松弛、干燥粗糙、弹性下降、皱纹增多等老化现象，这些现象都与成纤维细胞数量减少以及分泌合成功能下降或异常有关［1］。

人皮肤成纤维细胞是皮肤真皮网织层中最重要的细胞，是皮肤衰老和细胞受损后的主要修复细胞之一［2］。

它不但能够促进表皮细胞的迁移、增殖和分化，还能分泌大量的胶原蛋白、弹性纤维蛋白及多种细胞修复因子，具有强大的自我更新能力［3］，从而修复老化的皮肤。

成纤维细胞是维持皮肤弹性和韧性的重要细胞［4］，因其特有的生物学特性，在抗皮肤衰老中起着重要的作用。

本研究拟通过皮肤成纤维细胞的分离和体外培养，观察、总结体外培养的成纤维细胞生物学特性，在细胞水平上对皮肤成纤维细胞的形态及生物学特性进行研究，以获得在体外稳定生长的皮肤成纤维细胞，为成纤维细胞在医学美容除皱术中的应用提供可靠的科学依据［5］。

人成纤维细胞提取方法

人成纤维细胞提取方法
人成纤维细胞的提取通常涉及以下几个步骤：
1. 组织取材：从健康的人体皮肤（通常是真皮层）中获取组织样本。

临床标本需要经过彻底清洗以避免污染，并且将真皮层尽可能剪碎，这有利于成纤维细胞的迁出。

2. 组织消化：使用适当的消化酶（如胶原酶）处理剪碎的组织，以帮助释放成纤维细胞。

新生儿真皮组织包含更多细胞和更少的细胞外基质，因此可以从新生儿组织中分离出细胞。

如果从成人皮肤中分离，可能需要使用更大量的起始组织并提高胶原酶浓度。

3. 细胞培养：将消化后释放出的细胞接种到培养皿中，并在适宜的培养条件下进行培养。

培养条件通常包括非动物源性或含血清的培养基，以及恒温恒湿的培养环境。

4. 细胞传代：当细胞达到一定的密度时，需要进行传代培养，以确保细胞的持续生长和扩增。

5. 细胞鉴定：通过形态学观察和特定的免疫化学标记来鉴定所提取的细胞是否为成纤维细胞。

成纤维细胞在形态上通常呈梭型或不规则三角形，中央有卵圆形核，胞质突起，生长时呈放射状。

总的来说，在进行人成纤维细胞的提取和培养时，需要在无菌条件下操作，使用二级生物安全柜，并采取适当的个人防护措施，如佩戴双层手套、护目镜和实验服。

同时，处理人体组织时应采取通用预防措施，并妥善处置受污染的材料。

成纤维细胞与血液系统恶性肿瘤

成纤维细胞与血液系统恶性肿瘤摘要肿瘤微环境在肿瘤的发生、发展中起重要作用。

参与这个微环境成分的细胞中，相较于造血系统肿瘤与实体肿瘤癌，癌症相关成纤维（CAFS）却很少受到关注。

在这篇综述中，我们主要探讨CAFs参与血液系统恶性肿瘤进展和潜在的靶向癌相关纤维细胞的新的治疗角度。

关键词：肿瘤相关成纤维细胞，间充质干细胞，血液系统恶性肿瘤，肿瘤微环境一主要血液系统恶性肿瘤急性白血病急性白血病是血液系统恶性肿瘤，起源于早期造血祖细胞和髓细胞（急性髓细胞样白血病AML）和淋巴机型淋巴性细胞白血病ALL的血统。

急性白血病，可以根据细胞遗传学、形态学、免疫表型的标准和骨髓的初步发展来进一步细分。

急性白血病易侵入循环系统并且发生扩散。

慢性淋巴细胞白血病（Chronic Lymphocytic Leukemia）CLL是CD19[1]单克隆扩展、CD5+B细胞携带突变和未突变的免疫球蛋白的可变区基因（IGV）。

突变的病例相比未突变的病例预后较好，也包括表达的CD38和ZAP-70的标记。

CLL，经常表现为无症状的血淋巴细胞，在淋巴结和骨髓微环境的发展。

滤泡性淋巴瘤（Follicular Lymphoma）滤泡性淋巴瘤是一种B细胞性恶性肿瘤，发展次级淋巴滤泡和含有不同比例的中心母细胞和中心细胞。

肿瘤细胞侵犯骨髓，在外周血中循环。

FL是一种惰性淋巴瘤由淋巴滤泡组成的抗凋亡蛋白Bcl-2表达的肿瘤细胞的逐步渗透[2]。

侵入淋巴结可能会较长时间的残余在他们的生理体系结构中。

霍奇金淋巴瘤（Hodgkin Lymphoma）HL是一种特殊的，来源于B细胞性的恶性肿瘤，[3] 且不表达B 细胞标记物。

其特点就是缺乏肿瘤细胞称为多核分叶状巨细胞。

霍奇金淋巴瘤在淋巴结微环境中，分在两种临床病理实体，即经典霍奇金淋巴瘤（95%例）和结节性淋巴细胞为主型（5%例）[4]。

HL淋巴结是含各种活性细胞，如嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、浆细胞和T细胞。

VEGFR1-positiveh...

VEGRR1 阳性的骨髓造血祖细胞形成转移前壁龛（微生态）摘要：肿瘤细胞向某一确定的目标位置转移的细胞及分子机制很不清楚。

本课题证明，在肿瘤细胞转移之前，骨髓来源的、表达VEGFR1（血管内皮生长因子受体1，亦被称为Flt1）的造血祖细胞已经来到肿瘤特定的转移前位置，并形成细胞集群。

通过抗体或者将VEGFR1+细胞从野生小鼠骨髓中去除而抑制VEFR1功能，可以防止转移前细胞集群的形成及肿瘤的转移；反之，在Id3（分化抑制剂3）敲除的小鼠体内重建具有Id3功能的VEGFR+细胞，可以建立细胞集群并形成肿瘤转移。

我们也发现，VEDFR+细胞表达VLA-4（一种整合蛋白a4b1），而转移处的纤维母细胞中则有VLA-4的配基----一种上调肿瘤特异生长因子的纤连蛋白；它们共同提供了允许肿瘤细胞到来的环境。

该环境根据具有独特转移传播模式的不同肿瘤类型而重新调整纤连蛋白的表达以及细胞集群的形成，从而改变转移的表现。

这些发现证明，VEGFR1+造血祖细胞对转移调节过程是必不可少的；同时提示，纤连蛋白及VEGFR1+、VLA-4+集群的类型决定肿瘤扩散的器官特异性。

骨髓来源细胞（BMDCs）对恶性变、肿瘤血管生成以及瘤性细胞迁移均有促进作用。

之前我们在骨髓特定的某种壁龛中鉴定出表达VEGFR1的造血祖细胞（HPCs）。

在血管生成过程中，这些细胞增殖并与表达VEGFR2（也称Flk1）的骨髓来源上皮细胞祖细胞一起移动至血流中，对原位肿瘤的血管生成及生长有促进作用。

这些骨髓单核的VEGFR1+的细胞定位于血管周围的位置，从而增强稳定肿瘤血管。

这些细胞及其他肿瘤相关细胞增强了原发肿瘤的血管生成及生长，但它们对于转移的促进作用很不清楚。

该研究即着眼于明确VEGFR1+de HPCs 在转移形成过程的即时功能。

BMDCs在肿瘤细胞之前克隆形成转移前位点原位肿瘤皮下接种至小鼠体内以后，观察分析β-乳糖阳性（β-gal+）和绿色荧光蛋白阳性（GFP+）的BMDCs的变化。

成纤维细胞原代分离

成纤维细胞原代分离
成纤维细胞原代分离是指从组织中分离出成纤维细胞并进行初次培养的过程。

成纤维细胞广泛存在于各种组织中，如皮肤、肌肉、内脏器官等，它们在生理和病理过程中具有重要作用。

原代分离成纤维细胞有助于研究其生物学特性、功能及在疾病发生发展中的作用。

成纤维细胞原代分离的具体步骤如下：
1.选择实验动物或组织来源：根据研究需要，选择合适的实验动物或组织来源。

例如，研究心脏成纤维细胞，可以选择新生小鼠心脏作为组织来源。

2.取材：从实验动物或组织中获取成纤维细胞所在的部分，如心脏、皮肤等。

3.酶消化：使用适当的酶（如胶原酶、胰蛋白酶等）分解组织，以暴露成纤维细胞。

酶消化过程中，需要控制温度、时间和酶的浓度，以保证细胞充分分离。

4.分离细胞：将酶消化后的组织悬液通过离心、过滤等方法，分离出成纤维细胞。

此过程中，应注意保持细胞活力，避免过度剪切和机械损伤。

5.培养：将分离出的成纤维细胞接种到培养皿或培养瓶中，加入适当的培养基，置于适当的培养条件（如温度、湿度、气体环境等）下进行原代培养。

此时，成纤维细胞会开始生长、繁殖。

6.观察与检测：在培养过程中，通过倒置显微镜观察细胞形态、数量、生长速度等，以评估分离效果和细胞活力。

此外，还可以采用特定方法（如免疫细胞化学、细胞计数等）对细胞进行鉴定和功能研究。

成纤维细胞原代分离的成功与否取决于实验设计、操作技巧和细胞生物学知识。

为了获得高活力的成纤维细胞，需要在实验过程中严格控制条件，并熟练掌握相关技术。

成纤维细胞生长因子及其与受体作用机制的研究进展

成纤维细胞生长因子及其与受体作用机制的研究进展1姜媛媛，任桂萍，王文飞，郝建权，李德山东北农业大学生命科学学院生物制药教研室，哈尔滨（150030）E-mail：deshanli@摘要：成纤维细胞生长因子(FGF)是一类多肽类物质，其中大多数成员可与肝素结合发挥作用。

目前已知FGF至少包括23个因子，即FGF1～23。

部分FGF家族成员N末端有大约3O个氨基酸残基组成的典型信号肽序列，可以分泌到细胞外。

FGF家族成员是一类生理功能较广泛的生长因子，功能包括促进细胞有丝分裂、趋化与血管生成、促进中胚层和神经外胚层细胞的存活与生长等。

本文根据最近的研究成果对 FGF因子及其受体研究进展做一综述，并主要对FGF因子特征及其研究趋势进行了探讨。

关键词：FGF，FGF受体，肝素中图分类号:Q74引言：成纤维细胞生长因子最早是从脑和垂体的提取液中发现的，该物质是一种能促进成纤维细胞生长的多肽类活性物质，可以通过与细胞膜特异性受体结合对细胞生长进行调节。

从70年代中期到目前已进行了大量广泛的研究，目前已知FGF至少包括23个因子，它们在一级氨基酸序列上有一定的同源性，并有类似的生物学功能，且广泛存在于体内多种组织中。

FGF对中胚层和神经外胚层来源的细胞具有十分明显的促细胞分裂增殖作用，并且在机体内的胚胎发育、细胞生长分化、创伤组织愈合及肿瘤发生发展中起着十分重要的作用。

1. 成纤维细胞生长因子（FGF）家族成纤维生长因子（Fibroblast growth factor, FGF）又被称为肝素亲和生长因子(Heparin binding growth factor, HBGF)，是一类通过与细胞膜特异性受体结合发挥作用的多肽分子。

现已知FGF家族至少包括23个成员，即FGF1～FGF23。

FGF家族成员之间的氨基酸序列同源性约为25%～50%，其每个成员都有140个氨基酸的中轴，该中轴在不同的成员中有高度的同源性。

原代细胞分离与培养，你都掌握了吗？

原代细胞分离与培养，你都掌握了吗？导语对于⼤部分科研⼈员来说，研究中⼀般⽤到均是现成的细胞系/株，我们只需要：进⾏细胞传代和保种。

然⽽，这些细胞系常常由于体外长期培养，⽽丢失原有⽣物学特性，对药物处理的反应差距越来越⼤。

因此，原代细胞的地位⽇渐凸显，Paper中若有了原代细胞的数据都会添⾊不少。

然⽽，就⼩编亲⽣经历，原代细胞分离着实是个技术活，今天我们就结合⾃⾝经验，为⼤家介绍：肿瘤组织和正常组织的原代细胞的分离与培养⽅法。

第⼀部分：原代细胞的基本知识1. 什么是原代细胞培养?原代细胞（Primary cells）：是指直接从机体取出的组织或细胞获得单个细胞并在体外进⾏培养的细胞。

这⾥的组织主要指：组织器官、外周⾎及胚胎等。

原代细胞培养：由于原代细胞⽣长缓慢，繁殖⼀定的代数停⽌⽣长（⼀般10代以内）。

所以⼀般认为：培养的原代的第1和传代到第10代以内的细胞统称为原代细胞培养。

2. 原代细胞与细胞系（cell lines）的区别原代细胞和细胞系的⽐较：Primary cells Cell lines增殖能⼒较弱强繁殖代数⼀般只能传10代以内⽆限增殖，50代左右遗传物质完整性遗传物质未改变遗传物质发⽣改变⽣物特性最接近临床样本偏离临床样本培养容易程度⽐较复杂简单，易操作原代细胞和细胞系的⽐较3. 原代细胞的应⽤由于原代细胞⽣物学特性未发⽣很⼤改变，最接近和反映体内⽣长特性，因此是：(1) 研究⽣物体细胞的⽣长、代谢、繁殖提供有⼒的⼯具；(2)更好实现精准医疗的肿瘤诊治模式，实现个体化精准⽤药的⽬的。

第⼆部分：原代细胞分离和培养技术原代培养的原理将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶(常⽤胰蛋⽩酶/胶原酶)、螯合剂(常⽤EDTA)或机械⽅法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以⽣存、⽣长和繁殖，这⼀过程称原代培养。

主要包括取材——分离——培养等3部分；在原代细胞应⽤较多的包括：组织器官（如实体瘤、⽪肤等）、悬浮细胞的取材等。

细胞培养考试重点整理

第一章绪论体外培养（IN VITRO CULTURE）：是将活体结构成分（如活体组织、活体细胞或活体器官等）甚或活的个体从体内或其寄生体内取出，模拟体内的生理环境，在无菌、适当温度和一定营养条件下使之存活和生长发育的方法。

按照体外培养的结构成分，可将体外培养人为分为：组织培养（tissue culture）指从生物体内取出活的组织（多指组织块）在体外进行培养的方法。

细胞培养（cell culture）指将活细胞（尤其是分散的细胞）在体外进行培养的方法。

器官培养（organ culture）指从生物体内取出活的器官（一般是胚胎器官）、器官的一部分或者器官原基在体外进行培养的方法。

单一化现象组织培养过程中，培养组织不能在体外长期维持其结构和功能，培养的时间长，经过反复传代，细胞出现单一化现象——趋向单一类型的细胞——最终成为细胞培养。

体内培养（IN VIVO CULTURE)：将活体结构成分（如活体组织、活体细胞、活体器官等）甚至活的个体从体内或其寄生体内取出，放在其他生物体内让其生长和发育的方法。

最常见的体内培养方式就是移植（trans-plantation）。

体外培养技术创立代表性的人或者实验H ARRISON的工作，较为完善地建立了体外培养活体组织的培养体系，第一次较为系统地观察了体外培养活体组织的结果。

被公认为是体外培养技术的的开始。

标志着体外培养技术的创立，标志着盖玻片悬滴培养法的建立，标志着神经组织体外培养的开始，也标志着神经突起是由神经细胞长出的这一重大理论的诞生。

C ARREL对体外培养的贡献：◆将无菌操作观念引入体外培养过程中。

◆将培养组织包埋技术、营养供应以及继续培养（也称传代或继代培养）等许多重要的培养条件和方法引入盖玻片悬滴培养系统，从而完善了Harrison的方法。

◆发现鸡胚浸液能明显地促进多种细胞的体外生长。

◆设计卡氏培养瓶减少了污染，扩大了细胞生存空间。

现在一般认为体外培养技术是从Harrison和Carrel真正开始的。

高中生物思维导图-选修一-细胞工程

植物材料（由具有分生能力的不定形薄壁细胞组成）外植体消毒接种到培养基＋适宜条件（恒温避光）脱分化变异材料诱变处理愈伤组织细胞产物细胞处于不断分生状态，易产生突变。

胚状体再分化接种到分化培养基人工薄膜包装幼苗人工种子体现细胞全能性体细胞花粉新个体单倍体①②③④⑤植物繁殖新途径作物新品种的培育细胞产物的工厂化生产单倍体育种突变体利用微型繁殖作物脱毒人工种子应用植物组织培育技术①②③④⑤④利用分生区（如茎尖）保持优良性状；缩短育种年限；不受季节、气候、地域的限制。

（也可包裹不定芽、腋芽、顶芽。

）胚状体无性生殖有性生殖植物体细胞杂交技术发酵罐培养纤维素酶果胶酶物理：离心、振动、电激化学：聚乙二醇（PEG ）诱导人工诱导原生质体A 原生质体B A 细胞B 细胞去壁正在融合的原生质体再生出细胞壁植物组织培养杂种植株××筛选动物细胞单个分散细胞细胞悬液贴壁生长分瓶培养10代细胞50代细胞不死细胞胰蛋白酶或胶原蛋白酶胃蛋白酶？加培养液蛋白酶处理原代培养传代培养少数少数无菌、无毒环境——加抗生素；定期更换培养液36.5±0.5℃、pH 为7.2-7.4；95%空气+5%CO 2糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素；血清、血浆。

CO 2维持pH 条件使用或冷冻保存10代以内：保持细胞正常的二倍体核型转入培养液＋接触抑制癌化应用生产生物制品，如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体用于基因工程受体细胞培养用于生理、病理、药理等研究动物细胞培养技术供体体细胞供体细胞卵巢卵母细胞MⅡ中期卵母细胞去核卵母细胞细胞培养（10代以内）去核注入细胞融合重组胚胎胚胎早期培养代孕母体与供体遗传物质基本相同的个体细胞培养使克隆动物的遗传物质全部来自有重要利用价值的动物 1.克隆动物绝大部分DNA 来自于供体细胞核，但其核外还有少量的DNA ，即线粒体中的DNA 是来自于受体卵母细胞。

2.生物的性状还受环境的影响。

成纤维细胞原代分离

成纤维细胞原代分离成纤维细胞（Fibroblasts）是一类广泛存在于动、植物体内的间质组织细胞，其具有多种功能。

成纤维细胞的主要生物学行为包括：孕育、修复与再生实体组织，并参与各种组织间质损伤的修复过程。

现有许多方法可以分离成纤维细胞，而细胞培养和原代培养是常用工具。

成纤维细胞原代分离通常通过培养肌肉、皮肤、肺、肝和腎等动物组织、器官或细胞，以获得原代成纤维细胞的无纯化晶亚群体。

以下是关于成纤维细胞原代分离的一种标准方法：1. 实验设计首先，确定实验的目标以及需要使用的活体组织类型。

比如，我们可以选择人体皮肤组织来原代分离成纤维细胞。

2. 组织采集准备好适当的工具和材料，如无菌外科器械、无菌离心管和培养皿等。

使用外科刀片或剪刀，从患者的皮肤组织中取得小块组织，确保采样器械和工作区域的无菌性。

3. 组织预处理将取得的组织块用生理盐水或适当的缓冲液洗涤，去除表面的血液、分泌物和其他污染。

然后，将组织切成小块，通常为2-3毫米的大小。

4. 组织消化将组织块转移到含有胶原酶或胰酶的消化液中。

消化液的配方取决于实验设计和细胞类型。

将组织块放入消化液中，以便细胞在适当的温度和时间内进行消化，并将成纤维细胞释放到溶液中。

5. 细胞离心将消化后的细胞悬液通过离心的方法分离成纤维细胞和其他细胞类型。

通常，离心液会使较重的细胞落入沉淀层中，而较轻的细胞则悬浮在上层液体中。

6. 细胞培养将上层液体中的细胞取出，移至预先准备好的培养皿中。

加入细胞培养基，通常为DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium）等。

培养基中还可加入适量的青霉素和链霉素等抗生素，以防止污染。

将培养皿放入恒温培养箱中，在适宜的温度、湿度和气体环境下进行培养。

7. 细胞传代当细胞培养至80%～90%的密度时，使用胰酶或胰蛋白酶等消化酶将细胞分离，并移至新的培养皿中。

根据需要，可以重复传代过程来扩大细胞培养的数量。

毒理学体外试验研究进展

毒理学体外试验研究进展摘要:随着医学、毒理学研究模式的转变，替代动物实验的体外模型研究成为毒理学发展的重要方向之一。

体外毒理学试验是指利用游离器官、培养的细胞或细胞器、生物模拟系统以优化、减少或代替传统的动物实验,进行健康毒理学评价、环境安全性评价和其它相关科学研究。

目前应用于毒理学替代的器官或组织主要是胚胎干细胞、肝脏组织、肾脏及皮肤等。

不少替代产品已实现商品化供应，一些替代方法已通过有关机构的验证并被欧盟、美国等推广应用。

它们都有着良好的发展前景及应用价值。

关键词:毒理学；体外实验；应用前景Abstract:Along with medicine, toxicology research pattern transformation, one of substitution animal experimentation in vitro model study into toxicology development important directions.In vitro toxicology experiment is refers using the dissociation organ, the raise cell or the cell organ, the biology analogous system optimizes, the reduction or replaces traditional the animal experimentation, carries on the healthy toxicology appraisal, the environment security appraisal and other correlation scientific research.At present applies in the toxicology substitution organ or the organization mainly is the embryo stem cell, the liver organization, the kidney and the skin and so on.Many substitution product has realized the commercialized supply, some substitution method already through related promoted applications and so on organization confirmation and by European Union, US.They all have the good prospects for development and the application value.Key word: Toxicology; In vitro experiment; Application prospect毒理学研究的传统方法是进行动物模型的体内试验，成本高、实验周期长，且较难从体液中分离出足量、高纯度的代谢产物进行生物化学和物理化学的研究。