白腐真菌降解玉米秸秆的研究
白腐菌对玉米秸秆木质素降解的效果
白腐菌对玉米秸秆木质素降解的效果摘要摘要: 添加不同品种和比例的白腐菌，研究其对玉米秸秆中木质素的降解情况。
结果表明，在尿素与白腐菌的共同作用下，玉米秸秆的粗蛋白含量平均提高180% ; 在白腐菌的单独作用下摘要: 添加不同品种和比例的白腐菌，研究其对玉米秸秆中木质素的降解情况。
结果表明，在尿素与白腐菌的共同作用下，玉米秸秆的粗蛋白含量平均提高180% ; 在白腐菌的单独作用下，平均降解木质素33. 4% 。
2 株白腐菌对玉米秸秆中木质素的降解速率不同，白腐菌2 ( 编号GIM3. 393) 对木质素的降解能力优于白腐菌1 ( 编号GIM3. 383) 。
关键词: 白腐菌; 木质素; 粗蛋白; 玉米秸秆玉米秸秆是丽水最常见农作物的废弃资源，使玉米秸秆资源化利用既可美化农村环境，保护水资源环境，营造农旅结合的优美环境，又为畜牧养殖业提供可食性的资源，丰富饲料的品种，达到资源循环利用的目的。
但玉米秸秆用作草食性动物的饲料还存在几个缺点，主要是粗蛋白含量低、木质素含量偏高、食口性差[1]。
本试验通过在玉米秸秆中加入不同比例、不同品种的白腐菌，作用不同时间后，测定白腐菌对玉米秸秆中的木质素降解及粗蛋白的含量变化的影响[2-3]，了解白腐菌对玉米秸秆的木质素降解情况，为玉米秸秆的进一步利用提供理论依据。
1 材料与方法1. 1 供试菌株白腐菌来源于上海名劲生物科技有限公司，编号GIM3. 383 ( 标记为A) 、GIM3. 393 ( 标记为B) ，黄孢原毛平革菌。
1. 2 材料来源于丽水市莲都区收集而来的成熟后的玉米秸秆，将其截成3 ～5 cm 的长度，加入10% 的尿素，处理4 ～5 h。
此时玉米秸秆湿度为60% 左右。
1. 3 方法白腐菌的培养[4]。
购买回白腐菌后，用无菌吸管吸取0. 1 ～0. 2 mL 无菌水或适宜的液体培养基滴入安培管内，待安培管内的牛奶菌粉溶解呈悬浮状后，再用无菌吸管吸取全部菌悬液接种到2 支试管内，试管内的培养基采用PDA 配方制作( 综合PDA 培养基: 200 g 马铃薯煮出液，20 g 葡萄糖，15 g 琼脂粉，KH2PO4 3 g，VB1 8 mg，水1 000 mL，pH 自然) 。
白腐真菌资源化处理实验
白腐真菌资源化处理实验
白腐真菌是一类能够降解木质素的微生物，被广泛应用于木材和纤维素等生物质资源的利用中。
白腐真菌资源化处理实验是指利用这种微生物进行生物质资源的分解和利用的实验。
在实验中，通常需要选择适合生长和降解能力较强的白腐真菌，通过培养和筛选等方法进行处理。
处理的生物质可以是木材、秸秆、芦苇、稻草等各种植物纤维素材料。
处理过程中需要控制温度、pH值、水分等因素，以保证真菌的生长和分解效果。
在实验过程中，可以通过测量生物质的质量损失、化学成分的变化以及基因表达等方法来评估白腐真菌的资源化处理效果。
同时，还可以对处理后的产物进行利用和加工，如制备生物质燃料、生物质化学品等。
白腐真菌资源化处理实验在生物质资源利用领域有着广泛的应用前景，并已经成为了一种有效的生物质转化技术。
白腐真菌在环境保护中研究与应用
１ 白腐真菌在工业废水处理 中的研 究与应用
１１ 造纸废 水 处理 ．
吴涓等研究了不同白腐真菌对灰法造纸黑液废
水的处理效果 ，考察了黑液废水浓度和碳氮源添加
量对黑液脱色及 Ｃ Ｄ Ｏ 去除率 的影响。研究结果表
明，变色栓菌 （ｒｍ ｔ ｅ ｃｌ ）对黑液废水 的 Ｔａ ｅ ｓ ｒ ｏ ｒ ｅ ｖ８ ｏ Ｃ Ｄ 和色度的去除率分别达到 ６． ％和 ４ － ％， Ｏ ４５ ２ ７１ ３ 在添加 ０ ％纤维二 糖和 ０ ２ ． ２ ． ％天冬 酰胺 的情况下 ０ 应用 自 行分离 、 筛选的 白腐真菌（ Ｈ ２ — ） Ａ ８ ２ 处理黑
Ｔ Ｔ大分子在经 Ｐ Ｎ ｃ菌作用后 ，生成 了易被重铬酸 钾氧化的其他有机物质 。 王庆生等采用实验正交法 ， 利用 Ｐ ｃ菌降解硝基苯类化工废水 。 结果表明， 在常 温ｆ ２ ５℃１ Ｈ值为 ７ 进水 Ｃ Ｄ。 ２００ｍ ／、 、 ｐ 、 Ｏ 为 ０ ｇ 硝 Ｌ 基苯类化合物进水浓度为 １０ｍ ／ 、 留时间为 ６ ０ ｇ 停 Ｌ ０ 于煤炭脱硫 。通过正交实验确定 了该 Ｐ ｃ菌脱硫的 最佳实验条件 ，在此基础上探讨 了其脱硫 的降解规 律。 研究表明，Ｃ菌煤炭脱硫是完全可行的， Ｐ 而且脱 硫速度较快 ， ｄ内可脱除煤中 ５ ． ％的无机硫和 ２ ５０ ３
再进行处理时的脱色率高达 ９％， ０ 而原废水直接处 理时脱 色率仅 为 ６％。荚荣 等 １ 将裂褶 菌 Ｆ ７ ５ １ ５ １ １ （ ｈ ｏｈ１ ｉ ｓ． １） Ｓ ｉ ｐ ｖｕ ｐ Ｆ７￣定在聚酯纤维 Ｅ ｃｚ １ｎ 构建 白腐 真菌生物接触氧化装置用来处理染料废水 。研究发
２ 白腐真 菌在 堆肥 处理 和垃 圾渗滤 液 处理 中的研 究与应 用
白腐真菌对秸秆的降解效果及影响因素
饲料研究FEED RESEARCH NO .5,201115综述白腐真菌对秸秆的降解效果及影响因素张爱武1 董 斌2 康 伟11.吉林农业大学中药材学院2.沈阳鑫育隆饲料有限公司收稿日期：2010 - 12 - 21基金项目：吉林省长春市科技计划项目（09YJ21）通信作者：张爱武农作物秸秆是世界上数量最多的农业生产副产品之一。
据联合国环境规划署报道，世界上种植的农作物每年可提供各类秸秆约20亿t。
我国是农业大国，也是秸秆资源最丰富的国家之一，主要的秸秆约20种，而且数量巨大。
目前秸秆的利用仍以原始利用为主，且利用方式单一，其中玉米秸秆分布广且数量多，利用潜力最大。
由于目前用作饲料的数量还不到秸秆总量的10 ％，秸秆还田和副业加工利用等不到5 ％，大部分被浪费掉。
麦秸和稻草等用作饲料的就更少。
农作物秸秆由于营养品质低下，适口性差等原因，在饲料方面的利用率很低。
饲喂反刍动物时，需对秸秆进行预处理，以提高其营养价值和适口性。
基于我国国情，虽然物理和化学处理方法对秸秆品质均有较大改善，但是由于实际生产中成本、操作和环境污染等方面原因，推广使用范围较小。
一系列的实验室研究和饲养试验表明：利用微生物降解方法处理秸秆具有广阔的前景。
利用微生物可转化秸秆，因为微生物能利用和分解多种畜禽不能利用的复杂有机化合物，合成含有丰富蛋白质和脂肪的菌体细胞，这些分解产物和菌体可用于饲料。
微生物在秸秆转化中有用途多、营养价值高、周期短和可再生等优点，越来越受到国内外研究者重视。
国内研究使用较多的是以乳酸菌-纤维分解菌-丙酸菌为主的微生物活菌制剂。
自70年代以来，国外许多学者和研究人员致力于白腐真菌的研究。
白腐真菌是一类丝状真菌，因腐生在树木或木材上，引起木质白色腐烂而得此名。
它依靠降解木质纤维材料的能力穿入木质，侵入木质细胞腔内，释放降解木质素和其他木质组分的酶，导致木质腐烂成为淡色的海绵状团块——白腐。
分类学上，白腐真菌属于真菌门，绝大多数为担子菌纲，少数为子囊菌纲。
4种平菇处理玉米秸秆营养成分及体外消化率的比较研究
ｄ ｕ ｃ ｉ ｎ ｇ ｄ ａ ｉ ｒ ｙ ｃ ｏ ｗ ｓ ［ Ｍ］ ． Ｃ ｏ ｒ ｎ ｅ ｌ ｌ Ｕ ｎ ｉ ｖ ， １ ９ ６ ５ ． 龙瑞 军， 董世 魁， 胡 自治 ． 同 一 日粮 下 泌 乳 牦 牛 与 干 奶 牦 牛
消化 代谢 能力 的 比较研究 ［ Ｊ １ ． 草业学 报， １ ９ ９ ８ ， （ ０ ３ ） ： ５ ２ — ５ ６ ． Ｔ ｙ ｒ ｒ ｅ ｌ ｌ Ｈ，Ｍｏ ｅ Ｐ ． Ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｏ ｆ ｉ ｎ ｔ ａ ｋ ｅ ｏ ｎ ｄ ｉ ｇ ｅ ｓ ｔ ｉ ｖ ｅ ｅ ｉｃ ｆ ｉ ｅ ｎ ｃ ｙ［ Ｊ １ ． Ｊ
文献标 识码 ： Ｂ
文章 编号 ： ０ ２ ５ ８ — ７ ０ ３ ３ （ ２ ０ １ ３ ） 叭一 ０ ０ ４ ０ — ０ ４
秸秆 细 胞壁 木质 素 和半纤 维 素相互 交 联 ，并 将
纤维 素镶 嵌 于 内 ， 形成 坚 固的酯 键或 醚键 ， 一般 微生
３ ３ ． ６ ２ ％。Ｆ ａ ｚ ａ ｅ ｌ ｉ 等 利 用平 菇处 理 小麦 秸 ５ ０ ｄ ， 干 物 质 消化 提高 到 ５ ８ ． ８ ％。但 白腐 真 菌处 理 秸 秆效 果 表 现 出较大 的种 间差异 ，筛 选优 秀菌种 对 开２ ０ ０ ３ （ 编号 Ｄ） 由东 北
农业 大学 微生 物教研 室 提供 。
王 吉 峰 ．日 粮 精 粗 比 对 奶 牛 消 化 代 谢 及 乳 脂 肪 酸 成 分 影 响 的研 究［ Ｄ］ ． 北京 ： 中 国农 业 科 学 院 ， ２ ０ ０ ４ ．
ｕ ｅ ｒ ｒ ｅ Ｍ ，Ｗ ａ ｔ ｔ ｉ ａ ｕ ｘ Ｍ ，Ｐ ｏ ｗｅ ｌ ｌ Ｊ ，ｅ ｔ 以．Ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｏ ｆ ｆ ｏ ｒ ａ ｇ ｅ—ｔ ｏ— ［ １ Ｏ ］ Ａｇ
应用白腐真菌发酵曲种发酵玉米秸秆的研究
白腐 真菌 是一类 能 引起木 材腐 良好『 但 无疑 会 加 大处 理 秸秆 ３ １ ． 的成 本 ， 而且 整粒 的玉 米 或小麦 不 易被动 物 消化 。白腐 真 菌在 培养 基 的选 择上 比较广 泛 ． 作 物 的各种 秸 秆 ， 农 农业 生 产 的各 种 副 产 品均 可作 为 菌种 的培 养 基 成分 但是 不 同组 合 培养 基成 分 生产 出的 菌种 栽 培效 果 是不 同 的 利 用秸 秆 生产 白腐 真菌 曲种 不仅 能大 幅度 降低 生产 成本 ． 而且 秸秆 培 养基 成 分更 接 近发 酵底 物 ． 而 从 成为 白腐 真菌 发 酵秸秆 的 良好 过渡
主 料 为 ７ ％的 粉 碎 玉 米 秸 秆 与 ｌ ４ ％石 灰 ，加 入 不 同配 比 的 玉 米 粉 和 麦麸 （ 比例 分 别 为 处 理 Ｉ ０ ５ ， 处 理 Ⅱ１％ 、 ％、％ ２ ５
１ ％， ０ 处理 １ ％、５ １１ Ｉ ０ １％和 处理 Ⅳ５ ２ ％） 用 生产好 的 白腐 真 菌 曲种 进 行发 酵 玉 米秸秆 试 验 试验 结 果表 明 ： ％、０ ， 处理 ３ ｄ 各 处理组 曲种 均能发 酵 玉米秸秆 ， 高粗蛋 白（ Ｐ 含 量 ， ０． 提 Ｃ ） 降低 中性 洗涤纤 维（ Ｄ ） 量 白腐真 菌曲种对发 酵玉 Ｎ Ｆ含 米秸秆 Ｃ Ｐ含 量有极 显著影 响 （＜ ．１ ， Ｎ Ｆ含 量影 响显著 （ ＜ ． ）７ ％的粉碎 玉 米秸 秆和 １ Ｐ ０Ｏ ）对 Ｄ Ｐ ０ ５ ４ ０ ％的石灰添加 ５ ％的 玉米粉 、０ ２ ％的麦麸配合 生产 的 白腐真 菌 曲种 对玉 米秸秆 的发 酵效果 最好 ， 更适 宜作 为生产 白腐 真菌 菌种 的配方 关 键词 ： 白腐真菌 ： 种 ： 酵 ： Ｐ： 菌 发 Ｃ ＮＤＦ
高效木质素降解菌的复合诱变选育
高效木质素降解菌的复合诱变选育摘要:从实验室保存的9株白腐真菌中筛选出1株降解玉米秸秆木质素性能优良的菌株YJ-9-1,在第14天时,其木质素降解率为41.74%｡经ITS-5.8S rDNA序列同源性及系统发育树分析,初步鉴定该菌为变色栓菌(Trametes versicolor)｡对YJ-9-1进行紫外微波复合诱变,获得1株高效木质素降解菌株3-8,并利用其对玉米秸秆中的木质素进行降解｡结果表明,在第14天时,菌株3-8对玉米秸秆木质素的降解率为48.43%,比出发菌株提高了16.03%｡关键词:白腐真菌;木质素降解;复合诱变Screening of High Efficient Lignin-Degrading Strains by Complex Mutagenesis Abstract: One white-rot fungus YJ-9-1 with strong ability of degrading ligin was obtained from 9 strains through solid state fermentation (SSF). After 14 days of SSF, the degrading rate of this strain on lignin was 41.74%. Based on its sequence alignment and phylogenetic analysis, YJ-9-1 was identified as a strain of Trametes versicolor. Using YJ-9-1 as starting strain, a strain 3-8 with high efficient lignin degrading ability was obtained through UV and microwave mutagenesis. Then strain 3-8 was used to degrade lignin in corn straw through SSF. The results showed that its degrading rate on lignin reached 48.43% on the 14th day, higher than 16.03% of YJ-9-1.Key words: white-rot fungus; lignin-degrading; complex mutagenesis生物质是一种可再生并能转化为乙醇､生物柴油等燃料的能源物质,其中木质纤维素作为全球储存量最大的生物质,是最具前景的能源物质之一[1]｡秸秆作为一种农业废弃物,是木质纤维素的重要来源,在世界各地都有着丰富的储量,仅在中国每年就有大约2亿t的秸秆产出,但大部分都被直接焚烧或者丢弃,这不仅浪费资源而且造成环境污染[2]｡木质纤维素主要组分包括纤维素(30%~50%),半纤维素(15%~35%)和木质素(10%~30%)[3]｡由于这些大分子物质的相互缠绕,木质纤维素在自然条件下很难被降解,将它转化为生物质能源则需要经过多步的处理｡首先是前处理,主要去除木质素和半纤维素,目前的处理方法有物理､化学､生物以及综合处理法,其中,生物法由于环境友好､反应温和､成本低廉等优点而备受关注｡生物法中白腐真菌是目前已知的降解木质素性能最好的微生物[4]｡国内外学者已在这方面进行了大量的研究,但筛选出的菌株普遍存在木质素降解率低､降解周期长等问题｡如张杰等[5]筛选出1株秸秆降解白腐真菌P5,15 d后木质素降解率为11.47%;Zhang等[6]筛选出1株竹基质选择性降解菌Perenniporia sp.,木质素降解率只有8.66%,而且发酵时间为4周;杜海萍[7]分离出1株糙皮侧耳菌,木质素降解率仅有16.41%｡从实验室已有的木质素降解菌出发,通过紫外微波复合诱变筛选得到1株木质素降解率较高的白腐真菌“3-8”,在发酵14 d时木质素降解率提高到48.43%,该研究可为生物制浆和饲料等行业提供参考｡1 材料与方法1.1 材料1.1.1 菌种来源实验室保存的9株白腐真菌｡1.1.2 玉米秸秆取自成都市双流县,经粉碎过40目筛,备用｡1.1.3 培养基PDA固体培养基:去皮土豆200.0 g,葡萄糖20.0 g,KH2PO4 3.0 g,MgSO4·7H2O 1.5 g,去离子水1 000 mL,琼脂18.0 g｡初筛培养基:PDA固体培养基+0.01%愈创木酚､PDA固体培养基+0.01%苯胺蓝､氯化锰筛选平板(MnCl2·4H2O 0.115 g, 琼脂18.0 g, 去离子水1 000 mL)｡复筛培养基:准确称取玉米秸秆粉5.0 g,装入250 mL的三角瓶,再加入9 mL去离子水｡1.2 研究方法1.2.1 实验室木质素降解菌的筛选不同菌株经PDA固体培养基活化后,用无菌打孔器制成直径为1 cm菌块,接入固态发酵培养基,每瓶接入两个菌块,30 ℃恒温培养14 d后,剥去基质上菌皮,抽滤烘干后测定失重率和木质素含量,计算不同菌株对玉米秸秆木质素的降解率｡1.2.2 紫外微波复合诱变1)诱变程序｡出发菌株→单孢子悬浮液的制备→紫外诱变→初筛→微波诱变→初筛→复筛→稳定性检验｡2)诱变｡单孢子悬浮液的制备:用无菌水洗下斜面培养的孢子于三角瓶中,用玻璃珠充分振荡至孢子均匀分散,制成1×106个/mL的单孢子悬浮液｡紫外诱变致死率曲线的制作:取10 mL浓度为1×106个/mL的单孢子悬浮液于直径为9 cm的平皿内,置于紫外灯下(30 W,距离30 cm)分别照射2､4､6､8 min｡照射结束后,取不同照射时间处理的菌液各0.1 mL, 适当稀释后分别涂布于初筛培养基上,30 ℃培养7 d,计数活菌,然后以照射时间为横坐标, 致死率为纵坐标绘制致死率曲线｡微波诱变致死率曲线的制作:取经紫外诱变筛选出的正突变菌株重新培养长出的孢子,制成1×106个/mL单孢子悬浮液,置于20 mL厌氧管中,每管5 mL,用600 W微波辐射1､2､3 min｡辐射结束后,取不同辐射时间处理的菌液各0.1 mL,适当稀释后分别涂布于初筛培养基上,30 ℃培养7 d,计数活菌,然后以辐射时间为横坐标,致死率为纵坐标绘制致死率曲线｡1.2.3 诱变菌株筛选经过诱变后,从初筛培养基上挑取变色圈直径与菌落直径的比值大及显色圈色泽深的菌落,然后于复筛培养基中进行固态发酵,测定木质素降解率｡1.3 测定方法1.3.1 DNA提取及测序DNA提取方法参考《分子生物学实验指南》[8]｡DNA 提取成功后,以ITS-1(5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′)和ITS-4(5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′)为引物进行PCR扩增(反应条件:预变性94 ℃､5.0 min;变性94 ℃､1.0 min,复性55 ℃､1.0 min,延伸72 ℃､1.5 min,35个循环;最终72 ℃延伸10.0 min),回收纯化后的PCR产物并连接到PMD19-T载体上,然后转化入大肠杆菌感受态细胞内培养,经细胞裂解确定目标片段已连接在载体上后,交由华大基因研究中心进行测序｡1.3.2 系统发育树的构建将测序结果提交到美国国立生物技术信息中心(NCBI)GenBank数据库中进行Nucleotide blast比对,选取同源性较高的14株菌株ITS-5.8S rDNA序列用Bioedit软件进行Clustalw比对,用MEGA软件采取邻位相邻法构建系统发育树｡1.3.3 秸秆失重率､木质素降解率的计算及木质素含量的测定木质素降解率=失重率=木质素含量的测定参考文献[9]采用Van Soest方法测定｡2 结果与分析2.1 菌种筛选结果经过14 d的固态发酵,各菌株对玉米秸秆木质素的降解情况见表1｡其中YJ-9-1和YJ-68B-1的木质素降解率超过40.00%,分别为41.74%和40.33%,YJ-9-1最高,且其于秸秆上生长时,长势较好｡因此,综合来看,YJ-9-1是9株菌株中降解木质素性能最优良的菌株,故选取其为目标菌株进行下一步的诱变选育｡2.2 YJ-9-1菌株的ITS-5.8S rDNA序列分析经测序,YJ-9-1的ITS-5.8S rDNA序列片段长度为652 bp,序列提交GenBank进行核酸序列Blast比对｡选取14株同源性较高的菌株进行系统发育树的构建,结果如图1所示｡由图1可知,YJ-9-1与Trametes versicolor T3遗传距离最近,由此初步判定YJ-9-1为变色栓菌(Trametes versicolor)｡2.3 紫外诱变时间的确定结果按照试验方法建立的紫外诱变致死率曲线如图2所示｡一般诱变时间长正突变率较高,同时负突变率也较高｡因此,选择存活率为20%左右的时间即8 min作为后续紫外诱变时间｡将8 min诱变处理的菌液涂布于含愈创木酚的初筛培养基上,表现好的菌株接入含苯胺蓝的初筛培养基以及氯化锰筛选平板中再筛选,于3种初筛平板中都表现好的菌株,最终进入下一步的微波诱变｡初筛培养基中愈创木酚的变色(变红棕色)与漆酶的产生有关,漆酶产生越多颜色越深｡苯胺蓝的脱色与木质素过氧化物酶及锰过氧化物酶的产生有关,木质素过氧化物酶和锰过氧化物酶越多脱色越快,脱色圈也就越大｡氯化锰的变色(变红棕色)与锰过氧化物酶的产生有关,锰过氧化物酶产生越多颜色越深｡漆酶､木质素过氧化物酶及锰过氧化物酶被公认为是木质素降解的关键酶,白腐真菌就是靠分泌这些酶来降解木质纤维素从而获得生存所需的碳源和能源[10]｡诱变菌在初筛培养基上的表现好坏是通过测定变色圈直径与菌落直径的比值大小及观察变色圈的深浅来判定的｡2批紫外诱变后,在初筛菌株中发现3株菌株的变色圈直径与菌落直径的比值和变色圈色泽均优于出发菌株｡因此,这3株菌进入接下来的微波诱变｡2.4 微波诱变时间的确定结果按照试验方法建立的微波诱变致死率曲线见图2｡选择致死率为80%左右的时间即1 min作为后续微波诱变时间｡紫外诱变选出的3株菌株经过3批微波诱变后初筛,发现其中6株菌株的变色圈直径与菌落直径的比值和变色圈色泽均优于出发菌株(表2);并且,变色圈初筛结果还表明,该6株菌株的变色圈直径/菌落直径的比值明显大于经单一诱变的菌株,且变色圈颜色也比其他突变株更深,因此选择它们进入固态发酵的复筛试验｡复合诱变常常具有明显的协同诱变效果,虽然伴随着致死率的增加(与单一诱变相比),但从中获得某一方面遗传特性大幅度提高的诱变菌株的可能性也大大增加｡从表2中还可看出,3种初筛培养基中几乎所有菌株在氯化锰筛选平板上的生长状况都很差,菌株不仅长得慢,而且产生的变色圈也很小,但是,不同的菌株在氯化锰筛选平板上的表现还是有较为明显的不同,如菌株3-1可以长满整个氯化锰筛选平板,而其他菌株的菌丝圈直径大多不超过5.0 cm｡但是菌株3-1在氯化锰筛选平板上的变色圈却小于菌株3-8｡同类研究中,一般较少使用氯化锰筛选平板,但从此次的试验结果可看出氯化锰筛选平板可以作为木质素降解菌诱变的初筛培养基｡2.5 玉米秸秆固态发酵进行复筛的结果将分离出的6株白腐真菌菌株以玉米秸秆为基质进行复筛｡在30 ℃下培养14 d,复筛结果见表3｡由表3可知,6株菌株中,菌株3-8的木质素降解率最高,14 d达到48.43%,比出发菌株提高了16.03%｡并且在接下来的稳定性试验中(3次重复的固态发酵),其木质素降解率都保持在48.00%左右｡固态发酵全过程中,菌株3-8的菌丝生长均较出发菌株快,这为其高的木质素降解率提供了前提条件,同时也表明,快的菌丝生长速度与高的木质素降解率密切相关｡其他5株菌株虽然在初筛培养基中表现较好,但在复筛时,木质素降解率却没有提高,这从某种程度上说明初筛只是很粗略的筛选,不能正确体现诱变菌的潜力,只有当初筛与复筛结合,才能既避免初筛的不确定性,又免去直接进入复筛的费时费力｡3 结论从实验室保存的白腐真菌中筛选出1株木质素降解率较高的菌株YJ-9-1,在培养14 d时,其木质素降解率为41.74%｡经ITS-5.8S rDNA序列分析,初步鉴定为变色栓菌(Trametes versicolor)｡对YJ-9-1进行紫外-微波复合诱变,根据致死率曲线,紫外诱变选取致死率80%左右的时间8 min,微波诱变选取致死率80%左右的时间1 min,2批紫外诱变后初筛得到3株突变菌株,再将其进行微波诱变,初筛后得到6株突变菌株,然后对它们进行玉米秸秆固态发酵的复筛,得到1株木质素降解率提高16.03%的菌株3-8,14 d的固态发酵后,其木质素降解率达到48.43%;在3次重复的固态发酵试验中,稳定性较好,木质素降解率保持在48.00%左右｡试验结果表明,复合诱变能将单独诱变的效果协同起来,达到更优的诱变效果｡参考文献:[1] SANCHEZ C. 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白腐真菌处理秸秆的研究
白腐真菌处理秸秆的研究闵晓梅 孟庆翔中国农业大学动物科技学院摘要 某些白腐真菌能选择性的降解秸秆木质素,提高秸秆瘤胃干物质降解率和改善秸秆营养价值,因此,白腐真菌日益受到国内外学者的重视。
本文主要阐述白腐真菌降解秸秆木质素的机理、处理前后秸秆化学成分和瘤胃干物质消失率的变化、影响处理效果的因素以及生产实践中需要解决的问题。
关键词 白腐真菌 木质素 降解 消失率 农作物秸秆由于营养品质低下,适口性差等原因,在饲料方面的利用率很低,一般不超过15%～20%,从而造成大量氮素和有效能的损失。
大量的研究表明,在动物可食入情况下,4kg秸秆的有效能值相当于1kg玉米的有效能值。
目前我国每年生产秸秆517亿t左右,若将秸秆利用率从20%提高到50%左右,仅此一项即可节约饲用粮51714×(50—20)%=4275万t,从而能有效地缓解日益严峻的人畜争粮的矛盾。
在秸秆饲喂反刍动物时,需对秸秆进行预处理,以提高其营养价值、适口性等。
预处理包括物理、化学、生物等方法。
基于我国国情,虽物理、化学处理方法对秸秆品质均有较大改善,但是由于实际生产中成本、操作和环境污染等方面原因,推广使用范围较小。
一系列的实验室研究和饲养试验表明,微生物处理秸秆具有广阔的前景。
近年来,国内研究使用较多的是以乳酸菌—纤维分解菌—丙酸菌为主的微生物活菌制剂。
虽然经处理秸秆的瘤胃干物质消失率没有显著提高,甚至反有下降,但由于秸秆的适口性明显改善,牛羊秸秆的采食量大幅增加,日增重效果明显优于未经处理的秸秆,加上其操作简单易行、成本低,受到牛羊养殖户的极大欢迎。
自70年代以来,国外许多学者和研究人员致力于白腐真菌的研究。
Z adrazil等(1982)研究了200多种白腐真菌后发现,有几十种白腐真菌能显著的改善秸秆的适口性,提高木质素的降解率,大幅度(40%～60%)提高秸秆的瘤胃干物质消失率,从而使秸秆成为反刍动物的一种含较高营养价值的廉价能量饲料。
白腐真菌菌株共培养降解玉米秸秆的研究
ｃｅ ｅ ｙ２ ．％ ．｛ ｏｃ ｓ ｎ｝ ｏｓ ｅｉ ｒｍ ｅｇｎｒｌ ｌｋ ｇｆｅｃ－ｕｔｅｏ ２ ｒ ｄｂ １３ ｓ ａ Ｃ ｎｌ ｉ Ｃ ｎｉ ｒ ｇｆ ｔ ｅｅａ ｆｈ ｉ ，ｌ ｏｃｌ ｒ ｆ ｕｏ ｄ ｎ ｏ ｈ ｒｎ ｉ ｌ ｕ
Ｋｅ ｒ ｓ Ｗ ｈｔ ｏ ｕ ｇ ； ｃｌ ｒｄ： ｍ ｍｌ ｙｗｏｄ ｉ ｒｔｆｎ ｉ（ ｕｔ ｅ Ｃ ｅ ｕ ｏ ｓ ｋ
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安 徽农 业 科学 ，ｏｒａ ｏ？ ｈ ．ｄ． ０ ， （）１２ Ｊｕ ｌｆ ｍ ａ Ａ Ｓ ２ ８３ ４ ：３７—１２ ｎ ｉ ０ ６ ３９
责 任 编辑
陈 玉敏
责 任 校对
马君 叶
白腐 真 菌 菌 株 共 培 养 降 解 玉 米 秸 秆 的研 究
刘坤， 会宣， 敬 （北 贸 学 物 学 工 学 ，北 家 ０６ 李 李 河 经 大 生 科 与 程 院 河 石 庄５ １ ０） ０
摘要 ［ 的 ］ 究白腐真菌 菌株共培 养对 降解 玉米秸秆的影响 。［ 目 探 方法 ］ 白腐真 菌（ 和 ，９为供试 菌株 ， 以 Ｆ６ ， ） 采用分光光度 法、 Ｎ 法 、 ＤＳ 凯民定 氯法、 索民提 取法等 ， 别测定两菌共 同降解玉米秸秆 时纤维素 酶和木 质素酶 的酶 活力 、 纤维素 的降解 率 、 分 全 粗蛋 白和 粗脂 肪的 增加率 ， 并与 两菌分别培养进行 综合比较 。［ 结果 ］ 两菌共培养 的最佳条件 为 ｐ Ｈ值 ５５含水量 ６ ％、 ．、 ０ 菌量 （－ Ｐ６ ｌ 、 氮量２５ ； Ｌ９ －）： 合 ／ ３ ． 共 ％ 培养后粗蛋 白含 量和粗纤 维含量 分别提 高了 ３ 、 ％和 ３６ ， 纤维含量 降低 了２ ．％。［ ５６ ．％ 粗 １ ３ 结论］ 从总体 思路 考虑 ， 茵共培 养优 于单独 两 培养 ：该试验 同时获得 了 １ 高蛋 白、 种 多营养的饲料栽体 ， 为研 究玉米秸秆饲 料奠定 了 基础 。
降解腐熟农业废弃物（秸秆类）的主要微生物
降解腐熟农业废弃物（秸秆类）的主要微生物农业废弃物（秸秆类）的腐熟降解是由微生物作用发生的，有资料表明可高效降解农业废弃物的菌种高达上百种，主要包括纤维素降解菌、半纤维素降解菌和木质素降解菌。
决定腐熟农业废弃物高效降解的关键在于纤维素降解菌、半纤维素降解菌和木质素降解菌的配比。
一、降解木质素的主要微生物木质素是农业废弃物中最难降解的部分，堆肥想要达到高效的腐熟效果，就只有先将木质素降解。
目前在降解木质素中研究较多的是放线菌，主要包括链霉菌、节杆菌、小单孢菌等。
降解木质素的真菌分成软腐真菌、褐腐真菌和白腐真菌三大类，主要是根据分解部位的不同。
软腐真菌主要是由子囊菌和半知菌组成，在潮湿条件下对废弃物表面进行分解。
褐腐真菌优先攻击软木，是一组担子菌。
白腐真菌中担子菌占多数，子囊菌和半知菌占少量。
白腐真菌在适宜的条件下，菌丝通过溶解表面的蜡质，再进入废弃物内部，产生纤维素酶、半纤维素酶、内切聚糖酶、外切聚糖酶，将废弃物中木质素和纤维素转化成CO2和H2O。
黄孢原毛平革菌是白腐真菌的一种，因具有较强的降解能力而深受重视。
二、降解纤维素的主要微生物纤维素降解菌是指能产生纤维素酶的微生物。
真菌是自然界中分解纤维素的主要力量，常见的有绿霉属中的里氏木霉和哈茨木霉、曲霉属中的烟曲霉和米曲霉、青霉属中的部分菌株，以及大型真菌中日常食用的草菇、香菇等。
细菌中具有分解纤维素功能的主要有纤维单胞菌属、纤维弧菌属、解纤维梭菌、食纤维梭菌、枯草芽孢杆菌中的某些菌株。
刘东波等分离出的纤维素诺卡氏菌，它是以纤维素作为碳源生长的固氮菌，在农业应用上具有很大的潜力。
三、降解半纤维素的主要微生物半纤维素是纤维素与木质素结合的必要粘合剂，只有通过降解半纤维素才能降解木质素，真菌中降解半纤维素的菌种主要有木素木霉、拟康氏木霉、黑曲霉、亮白曲霉、扩张青霉、特异青霉等，它们不仅能分解纤维素，同时能有效的降解半纤维素。
细菌中降解半纤维菌的典型代表有粪碱纤维单胞菌、凝结纤维弧菌、解糖热纤菌，它们产生的木聚糖酶具有更高的耐热稳定性。
降解秸秆的白腐真菌的筛选、优化及混菌发酵研究
降解秸秆的白腐真菌的筛选、优化及混菌发酵研究降解秸秆的白腐真菌的筛选、优化及混菌发酵研究秸秆是农作物的残杂部分，具有丰富的碳和能量资源。
但由于其难以降解和利用，导致大量秸秆被直接焚烧或堆填，产生了严重的环境污染和浪费资源的问题。
因此，开发一种高效降解秸秆的方法，具有重要的意义。
白腐真菌是一类能够快速降解植物纤维素的微生物，具有较强的生物降解能力。
本研究旨在筛选一株具有高降解能力的白腐真菌，并通过优化培养条件，提高其降解效率，最终实现秸秆的高效利用。
首先，我们从土壤样品中分离得到多株白腐真菌，并使用秸秆作为唯一碳源进行筛选。
经过连续的分离培养，从中筛选出一株降解能力较强的白腐真菌。
接下来，我们对筛选出的白腐真菌进行了鉴定，并确定其为曲霉属（Aspergillus）。
为了提高降解效率，我们优化了其培养条件。
通过对培养基中碳源浓度、初始pH值和培养温度的调节，确定最适宜的培养条件。
实验结果表明，当琼脂含有3%的秸秆颗粒、初始pH值为5.5、培养温度为30℃时，白腐真菌的降解效率最高。
随后，我们进行了混菌发酵研究，希望通过混合不同种类的白腐真菌，进一步提高秸秆的降解效率。
选取了经过筛选并具有较高降解能力的两株白腐真菌进行实验。
结果显示，两株白腐真菌的混合能够显著提高秸秆的降解效率。
通过调节不同菌株比例，确定了最佳的混菌比例为1:1。
为了进一步了解白腐真菌降解秸秆的机制，我们对降解产物进行了分析。
利用纤维素酶和木聚糖酶等酶活性测定方法，确定了白腐真菌降解秸秆的主要酶类。
同时，通过液相色谱分析和气相色谱质谱联用技术，对降解产物进行了结构鉴定。
结果发现，白腐真菌能够将秸秆中的纤维素和木质素等复杂物质降解为较简单的可利用物质。
综上所述，本研究成功筛选出了一株高降解能力的白腐真菌，并通过优化培养条件和混菌发酵，提高了其降解效率。
这为秸秆的高效利用提供了一种新的途径。
进一步研究白腐真菌降解机制，有助于深入了解其降解秸秆的分子基础，并为进一步开发降解秸秆的微生物酶提供了理论基础。
白腐真菌在农作物秸秆中的研究与应用
能量值低 及适 口性差 等 因素 ． 导致 动物 对秸秆 饲料 的
采 食量 和营 养物质 的消化 率受 到影 响 虽然 青贮 、 氨 菌处 理秸 秆 的技术 途 径 ．对 我 国生 态农 业 的健 康发 化 秸秆 可在一 定程度 上弥补 以上 缺陷 ． 就现 阶段 而 展 、 但 生存 环境 的保 护与净 化 以及 粗饲料 紧缺 问题 的解
被反 刍动物 的瘤 胃微 生物 降解利 用， 而提 高秸 秆的利 用率和 营养价值 。 从 关键词 白腐 真菌 ； 秸秆 ； 降解利 用
中图分类号 ￥ １． ８ ６３
农作物 秸秆 作为 全球最 丰富 的可再 生资源 ， 是地
源． 是每一 个农 业生 产大 国拥 有 的可利 用 的巨大潜在 饲 料资 源 秸 秆作 为粮食作 物 的支撑 物 ， 注定 其结构 是坚 固的 ． 有很 强 的抗 倒伏 性 ， 般 的微生 物 和 自 具 一
价能量 饲料 另有试 验报 道 ． 白腐 真菌—— 糙皮侧 用
耳发 酵切 碎 的麦 秸 ．～ ５ ６周 后 ，不 仅粗 蛋 白含量 有所
而且秸 秆消 化率也 提高 了 ２ ３倍 。利 用 白腐 真 ～ 然因素 不能将其 破坏 秸秆 直接作 为饲料其 营养价值 提高 ． 很低 ． 动物对 其 的采 食量 仅有 优质 牧草 的 ５ ％～ ０ 菌处 理秸 秆 不但 可 以大 幅度 提 高秸 秆 的适 口性 和 营 ０ ６ ％， 消化率仅 为 ３ ％～ ０ 此外 ． 秆在反 刍动物瘤 胃内 ０ ４％ 秸
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《 饲料工业》２０ ・０８年第 垫 童簟 墅
囊 瓣 羹 蘩 蠢 纛 纛 赣 穗 謦 秘 秘 囊 薯 瘴 用
闰鑫 鹏 李 杰
摘
要 秸秆是 反 刍动物粗 饲料 的重要 来 源 ， 但秸秆 本 身特 有 的细胞壁 结 构使 其 不 能被 反 刍动
白腐菌降解木质素原理
白腐菌降解木质素原理
白腐菌降解木质素的原理主要涉及分泌的胞外酶和木质素降解酶系。
以下是详细介绍：
1、白腐菌首先分泌超纤维氧化酶来溶解秸秆表面的蜡质层，并吸附在木质纤维素的端部，随后，菌丝由端部向内生长，分泌纤维素酶、半纤维素酶、内切聚糖酶和外切聚糖酶，这些酶将秸秆降解为小分子碳源和半纤维素，为菌丝的生长和木质素的降解提供必要的碳源和能量。
2、白腐菌的木质素降解酶系统主要包括细胞外过氧化物酶（如锰过氧化物酶-MnP、木质素过氧化物酶-LiP）和细胞外酚氧化酶-漆酶（如漆酶），这些酶能够氧化木质素，木质素是由内部单元C-C键和醚键构成的三维结构，因此，白腐菌的木质素降解酶系统在很大程度上必须是非专一性的酶系统，能够非特异性地分解木质素结构。
木质素在氧化后产生不稳定的自由基，进而引发一系列非酶催化的自发裂解反应，导致木质素聚合体的氧化与断裂。
在木质纤维素体系下，MnP通过形成三价锰来降解酚型木质素，而DyP则用于降解非酚型木质素。
这些过程共同作用，使得白腐菌能够有效地降解木质素。
白腐真菌处理玉米秸秆饲料的研究进展
４１ 提 高秸秆 适 口性 ，增加 采食 量 ．
纤维素 、木质素和果胶多糖 ，其 中粗纤维 占据 了干
物 质 的 ７ ．％，也 有少 量 的粗 蛋 白质 （％～ ％） ５４ ６ ７ 和粗 脂 肪 （％ ％） １ ２ ，但 品质 较 差 。 相 关研 究 表 明 ，玉 米 秸秆 中的纤维 素 、半 纤维 素被 木质 素包 裹 ，其 中 部 分 纤 维 素 、半 纤 维 素 与木 质 素 以共 价 形式 结 合 ， 形 成 紧密 的结 构 ，微生 物大 多 不能裂 解 木质 素 的化
白腐 真 菌处 理玉米 秸秆 饲料 的研 究进展
王晓翠 ，王 浩 ，李 杰
（东 北 农 业 大 学 动 物 科 学 技 术 学 院 ， 哈尔 滨 １０ ３ ） ５ ０ ０
摘
要；目 前我 国的玉米秸秆饲料加 －处理方 法 已讶 １ － ＂ 趋成 熟 其在缓解饲粮压 力 净 化养 殖环境 促进农 业 、
我 国对 白腐真 菌 的研究 相对滞 后 ，但 目前 已取 得 较 大 进 展 。侯 进 等 研 究 了 ４种 配方 （ 料 为 玉 主 米 秸 秆 粉 ７ ％与 石 灰 １ ４ ％，加入 不 同配 比的玉 米 面
菌属及和栓菌属和烟管菌属等 。 ３ 白腐 真 菌处理 玉 米秸 秆饲 料 的原理 白腐真菌能够分泌胞外氧化酶来 降解木质素 ， 因 此被认 为是 最 主要 的木 质 素降 解微 生 物 。主要 通过 木 质素 过 氧化 物 酶 、锰 过 氧化 物 酶 、漆 酶 ３ 种 酶对 木 质素 进 行 降解 。在适 宜 的条 件 下 ，白腐 真
ｖｒｕｏ ｓｃｒ ｌ ． ｅ ｔ ｎ ｆｃ ｒ ｔ ｌ ｎ ｔ ｅ ｃ ｉ ｅ ｂ ｃ ｕ ｅ ｏ ｔ ｏ ｕｎ ｉ ａ ｅ ｅ ｔｖ ｌ ｅ ｒ ｄｅｌｇ ｉ ｔａ ｉｔ ｕ ｉｃ ｅ Ｔｒ ａ ｍｅ ｔｏ ｏ ｎ ｓａ ｋ ｉ ｈ ｈｏｃ ， ｅ ａ ｓ ｆｗｈｉｅｒ ｔｆ ｇ ｎ ｓ ｌｃ ｉ ｅｙ ｄ ｇ ａ ｉ ｎ ｎ ｓｒｗ， ｃ ｄ ｇ ａ ａ ｉｎ ｒ ｔ ｆｄ ｙ ｍａ ｔｒｏ ｔａ ｗａ ｎ ｒ ａ ｅ ｎ ｔ １ ｎ ａ ｄ ｔ ｅ ｎ ｔｉｉｎａ ａ ｕ ｆｓｒ ｗ ｓ ｉ ｒ ｖ ｄ ｅ ｒ ｄ ｔｏ ａ ｅ ｏ ｒ ｔｅ ｆｓｒ ｗ ｓ ｉ ｃ ｅ ｓ ｄ ｉ ｈｅ１ ｍｅ ｎ ｈ ｕ ｒｔｏ ｌｖ ｌ ｅ ｏ ｔａ ｗａ ｍｐ ｏ ｅ ， ３ ｔ ｕ ｔｗａ ｎ— ｐｔ ｔ ｄｙｂｙ ｓ ｈｏａ ｓａ ｍｅ ａ ｄ ａ ｒ ａ ａ ｈ ｎ ｍａ ｅ ｓ ｍｅ ｔ ｅ ｒ ｓ ｌｓ Ｔｈ ｓｐ ｐｅ ｕｍｍａ ｉ ｄ ｈ ｓｉ ｓｉ ｄｅ ｈ ｓｕ ｃ ｌ ｒ ｔｈｏ ｎ ｂ ｏ ｄ， ｎｄ ｔ ｅ ｄ ｏ ｈ ｅ ｕ ｔ ． ｉ ａ ｒｓ ｒｅ ｃ ａ ａ ｔ ｒｓｉｓ ｏ ｏ ｎ ｓａ ｋ ｓｌｇ ，ｏ ｅ ｖ ｅ ｏ ｉｅ ｒ ｔｆ ｇ ｎ ｉｅ ｒ ｔｆ ｎ ｉｔｅ ｔ ｎｔｐ ｎ ｉ ｅ ｏ ｏ ｎ ｓｒ ｗ ｈ ｒ ｃ ｅ ｉｔｃ ｆｃ ｒ ｔ ｌ ｉａ ｅ ｖ ｒ ｉ ｗ ｆｗｈ ｔ ｏ ｕｎ ｉａ ｄ ｗｈ ｔ ｏ ｕ ｇ ｒ ａｍｅ ｒ ｃｐｌ ｆｃ ｒ ｔａ ｉ
白腐真菌木质素降解酶系研究进展
两 种 ，如 Ｌ ｎｉｕａｅ ｏ ｅ 只 产 生 Ｍｎ ｅｔ ｌ ｄ ｄｓ ｎ ｐ和 Ｌ ｃ ａ ，黄
孢 原 毛 平 革 菌 则 分 泌 Ｌｐ和 Ｍｎ 。有 文 献 报 道 ， ｉ ｐ 黄孢 原 毛 平 革 菌也 能产 生 Ｌｃ ａ ，但 是 在 以葡 萄糖 为碳 源 生 长时产 生 的量 很少 。 因此 ，说 明这 ３ 种 酶 在分 解木质 素过 程 中并不都 是 必需 的 。
子 的血 红 蛋 白。Ｌｐ 一 系列 含 有 一 个 Ｆ Ｓ）一 ｉ是 ｅ（
白腐 真 菌是 一 类 丝状 真菌 ，分 类学 上 属 于真 菌 门 ，绝 大 多数 为担 子 菌 纲 ，少 数 为 子 囊 菌纲 。 目前 ，研 究最 多 的是 黄孢 原 毛平 革菌 、彩 绒 草盖 菌 、变色 栓 菌 、射脉 菌 、凤尾 菇 等 。其 中 ，黄孢 原 毛平 革 菌是 典 型菌 种 ，是研 究 木质 素 降解 的模 式 菌 ，普遍 分布 于北美 ，我 国尚未 发现 。
一
．圈散 ｝ ｒ
的试验证 明，用单一木质素作惟一碳源 ，黄孢原 毛平革菌不能生长 ，往往要在培养基 中加入易被 利用的碳源才能生长。李翠珍等筛选出 ｌ 株白腐 真菌Ｆ ，并对其产木质素降解酶的特性进行了研 ２ 究 ，结果表明，限碳有利 于Ｆ 产 Ｌ ，但对 Ｆ 产 ２ ｉ ｐ ２
Ｍｎ 影 响不 是 很 明 显 。Ｐｃａｄ 究 了几 种 稻 ｐ的 ｉｋｒ研 谷 、麸 皮原 料 ，包 括 麸皮 、麦麸 、燕麦 麸 等 ，结 果证 明 ，以麸 皮 为碳 源产 生 的酶 活性 最 高 ，此 研 究对 于 目前降 解秸 秆资 源具 有重 要意 义 。 １ ． 氮 源 。 纯 培 养 的 研 究 表 明 ，氮 源 的 耗 尽 ．２ ３
白腐菌及黑曲霉对玉米秸秆生物降解的研究
9d 60.55±0.28Bb 40.63±0.21Bb 7.52±0.11Bb 25.02±0.27Bb 19.92±0.23Bb
10 d 59.78±0.13BCb 39.94±0.17BCc 7.22±0.14BCbc 24.62±0.16BCb 19.84±0.15Bb
11 d 58.65±0.22Cc 39.53±0.15Cc 7.03±0.06Ccd 23.95±0.19CDc 19.12±0.25BCbc
黑曲霉混合后对玉米秸秆的降解效果。 结果表明，接种比例、黑曲霉接入时间，接种比例与黑曲霉接入时间的交互作
用以及发酵时间对混菌发酵降解玉米秸秆都有显著影响（P ＜ 0.05）。 最佳方案为：白腐菌液体菌种和黑曲霉孢子悬
浮液的接种比例为 5∶1， 白腐菌接种 2 d 后再接入黑曲霉孢子悬浮液， 发酵 10 d， 所得产物中性洗涤纤维的含量为
中的木质素降解效果较好， 但每相邻的两个发酵
天数之间差异不显著（P ＞ 0.05）；而白腐菌对纤维 素的降解， 除发酵 9 d 和 10 d 差异不显著 （P ＞
2011 年第 3 期
中国饲料
37
表 2 白腐菌对玉米秸秆降解的试验结果
指标 NDF ADF 木质素 纤维素 半纤维素
CK 66.31±0.21Aa 44.78±0.24Aa 9.13±0.07Aa 27.46±0.19Aa 21.53±0.45Aa
12 d 55.67±0.43Dd 37.18±0.23Dd 6.81±0.09CDde 23.24±0.13DEd 18.49±0.26Ccd
注：同行数据肩标小写字母完全不同表示差异显著（P ＜ 0.05），大写字母完全不同表示差异极显著（P ＜ 0.01），含相同小写字母表示差异不显著（P ＞ 0.05）；下同。
白腐真菌研究与秸秆利用
江 西 饲 料
２０年第１ ０ ８ 期
● 一 ■ 唧 与 秸 旰 Ｉ
辽 宁 省辽 中县 动物 防疫监 督所 王洪春 王 凤娥
摘 要 ： 文对 白腐 真 菌木质 素 降解酶 系统 、 本 白腐 真 茵在秸 秆 养畜 中的应 用作 一综 述 。 用 白腐真 利
的 ， 白腐 真菌 与被 降解 底 物并 非 酶 与底物 的一 即 对 应关 系 ， 而是 与一 类乃 至多 类底物 的关 系 。 １ ． Ｈ ０ 产生酶 系 ． １ ２２ ２
指 能催 化 产 生 Ｈ０的 氧化 酶 ， 们 共 同 的作 它 用是 ： 以小 分 子 有 机 物 为 底 物 ． 分 子 氧 还 原 为 将 Ｈ２ ０ 。Ｈ０ 的主要作 用 是启 动一 系列 自由基链 反 应 。Ｈ０ 在 木质 素 降 解 中作 为 两 种 木 质 素 氧 化
一
同 的进 攻 能 力 并 造 成 木 质 发 生 相 同 的 结 构及 外 观 变 化— — 白腐 的丝 状 真菌 的总称 。 白腐 真 菌 的种 类很 多 ，绝 大 多数 为 担 子菌 ， 少 数 为子囊 菌 。主要 分 布在 革盖 菌 属 （ ｏｉ ｕ ） Ｃ ｒ ｌｓ 、 ｏ 卧 孔 菌 属 （ ｏｉ） 多 孑 菌 属 （ｏｙ ｏｕ ） 原 毛 平 Ｐｒ 、 Ｌ ａ Ｐ ｌｐ ｒｓ 、
ｒｃａｔ） ｏｈｅ 。黄孢 原 毛平 革菌 的无 性 世代 也 称 为多 ｅ 粉 侧孢 霉 （ｐｒｔｃｕ ｕｖｒｌ ｔｍ ｏｏｒｎ． Ｓｏｏｒ ｈｍ ｐ ｌ ｕｅ ｕ Ｎ ｖｂａｏ ｉ ｅ ｎ ｖ ） 孢原 毛平 革菌普 遍分 布在 北半 球 。 ａ。黄 １ 白腐真 菌木 质素 降解 酶 系统 ． ２
秸秆 是 一 种丰 富 的生 物质 能 资 源 ， 秆 在 养 秸 殖 业 中的 应用 不仅 可 以解 决 我 国饲 料 短 缺 的 问
白腐真菌降解秸秆条件的研究
稻 草 和小 麦 秸 秆 ：将 自然风 干 的 秸秆 粉 碎 、灭 菌 处理 ，过４ ０ 目筛 ，备用 。 １ ． ３ 培 养 基 １ ． ３ ． １ Ｐ Ｄ Ａ 培 养基 （ 用于 菌种保 藏 ） 称取 去皮新鲜土豆２ ０ ０ ｇ ，切 成 小 块 ，加 水 至 １ Ｌ ，煮 沸 ３ Ｏ ｍ ｉ ｎ 。用 纱布 过 滤后 ￣ Ｊ ａ ２ ０ ｇ 葡萄 糖 、２ ０ ｇ 琼 脂粉 ，在 电炉 上加 热 至 琼 脂溶 化 ，加 水补 足 １ Ｌ 。分 装 至 已空消 过 的试 管 中 ，置 灭 菌锅 中 １ ２ １ ℃灭 菌 ２ ０ ｍ ｉ ｎ 。倾 斜静 置 ，待 凝 固后 备用 。 １ ． ３ ． ２ 液体种 子培 养基 （ 用 于 白腐 真 菌增 富 ） 去 皮 马 铃薯 ２ ０ ０ ｇ ，煮 沸 ３ ０ ｍｉ ｎ ，纱 布 过 滤 ，加 入 ２ ０ ｇ 蔗糖 ， 融 化后 补水 至 １ ０ ０ ０ ｍ Ｌ ， 自然 ｐ Ｈ 值 ，加 入 １ ０ ｇ 秸 秆粉 ，１ ０ ０ ｍＬ 分 装 ２ ５ ０ ｍ Ｌ 三 角瓶 ，１ ２ １ ｏ Ｃ 间歇 灭菌 【 ３ 】 。 １ ． ３ ． ３ 固体培 养基 水 稻秸 秆 ：麸皮 ＝ ７： ３ ，（ Ｎ Ｈ ４ ）２ Ｓ Ｏ ４ １ ％，Ｋ Ｈ ２ Ｐ ｏ ４ Ｏ ． ２ ％，料 水 比＝ １： ４ ． ５ 。每 ５ ０ ０ ｍ Ｌ 三角 瓶含 １ ０ ｇ 培 养基 ，１ ２ １ ℃灭 菌６ ０ ｍ ｉ ｎ 。 用 于 白腐真 菌产 酶 【 ３ 】 。
２ ． ４ ． ３ 不同 菌种接 种量 对秸 秆 降解效 果 的影响 将 秸 秆基 础 固态 发 酵 培养 基 ，以总 接种 量 分别 为 ０ ． １ ２ ５ ｇ ／ ｋ ｇ 、 ０ ． ２ ５ ｇ ／ ｋ ｇ 、０ ． ５ ｇ ／ ｋ ｇ 接 种 红芝 和 黄孢 原 毛 平革 菌 ，在 ３ ０ ￣ Ｃ， 自然ｐ Ｈ 下 ，发 酵稻 草 和麦秸 ２ ０ 天 ，发 酵后 测定 纤维 素 、木质 素含 量 。 ２ ． ４ ． ４ 培 养基 不 同初始 ｐ Ｈ 值 对 降解效 果 的影响 调 节 基 础 固 态发 酵 培 养 基 的初 始 酸 碱 值 ，使 ｐ Ｈ 分 别 为４ ． ０ 、 ５ ． ０ 、６ ． ０ ，在３ ０ ℃下 ，发 酵稻 草 和麦 秸２ ０ ｄ ，发 酵 后测 定纤 维 素 、 木 质素 含量 。 ２ ． ５ 结 果 计 算 将 培 养 好 的 秸秆 培 养 基 置 于烘 箱 中 ，于 ８ ０℃烘 干 ４ ８ ｈ ，将 样 品 编 号 ，采用 范 氏 （ Ｖ ａ ｎ Ｓ ｏ ｅ ｓ ｔ ）纤维 测 定法 测 定 中性洗 涤纤 维 （ Ｎ Ｄ Ｆ）、酸性 洗 涤 纤维 （ Ａ Ｄ Ｆ）、酸 性洗 涤 木 质 素 （ Ａ Ｄ Ｌ） 含 量 】 ，并计 算 中性 洗涤 纤 维 、酸性 洗 涤 纤 维 、酸 性洗 涤 木 质 素 的
筛选选择性降解玉米秸皮的菌株
ｔ ，Ｊ＇ａ ５ ３ ３ ．Ｓ ａｅ Ｋｅ ａ ｆ Ｍｉｒ ｂ ａ ｅ ｈ ｏｏ ｙ ｈ ｎ ｏ ｇ Ｕｎ ｖ ｒｉ ，Ｊ ａ ５ １ ０ ｒ ｙ ｉ ｎ ２ ０ ５ ；２ ｔｔ ｙ Ｌ ｂ ｏ ｃ ｏ ｉ ｌ Ｔ ｃ ｎ ｌ ｇ ，Ｓ ａ ｄ ｎ ｉ ｅ ｓ ｙ ｉ ｎ ２ ０ ０ ；Ｃｈ ｎ ｎ ｔ ｎ ｉａ
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王芳 芳 ， 杨桂 花 ， 陈嘉川 黄 峰 ，
１ ．山 东轻 工 业 学 院 制 浆 造 纸省 部 共 建 重 点 实验 室 ， 东 济 南 ２ ０ ５ ； 山 ５ ３ ３
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纤 维 素 含 量 略有 增 加 。至 ３ ０ｄ时 ，各 组 的纤 维 素
含 量非 常接 近 ，并 无显 著差 异 。
２３ 白腐 真 菌对 玉 米秸 秆半 纤 维素含 量 的影响 ．
比例 分 为 处理 Ｉ：２％ 、５ ０ ％，处 理 Ⅱ： １％ 、１％， 处理 ｌ ： １％ 、 １％ 和 处理 Ｉ ５ ０ ｌ ０ Ｉ ５ Ｖ：５ ％、２ ％ ） ０ 生产 的 白腐 真 菌 曲
种发酵奶牛常用粗饲料 玉米秸秆 的效果研 究，旨在筛选 出以玉米秸秆为主料生产白腐真菌菌种的最佳 配方。试验 结 果表明 ，处理 ３ ，各处理组 菌种均能发酵玉米秸秆 ，降低粗纤维含 量，提 高粗蛋 白（ Ｐ 含量 ０菌种培养基对发 ０ｄ ｃ ）
温后 接 入等 量 的原 种 菌种 ，２ 【 ４ｃ ＝培养 待各 处 理 满袋后 ，接 人经 堆肥 灭菌 的秸秆 中进行 发 酵试验 。
１４ 测 定 指 标 及 方 法 ．
供试 菌株 为糙皮侧 耳 （ 高抗 ） ，来源 于东 北农业
收稿 日期 ：２０ —１一 ８ ０ ９ ０ ｌ 作者简介 ：侯进（９ ４ ，男，￣ Ａ保定人，硕 ｌ １８ ～） ，ｔ ｑ ・ 研究乍 ，研究 方向为动物营养 卜饲料科学 一 了 通讯作者 ：研究 员，博 ｛ 生导师
理 秸秆做 好准 备。 １ 材料 与方法
１ ． 试验材料 １
ｌ３ － 试 验 方 法
４个处 理组 加入 各种 营养 成 分后 ，混匀 ，按 料 水 比 １２加入 自来 水 ，拌 匀 ，然 后 装入 １￣３ｃ ： ７ ３ ｍ 聚丙烯 袋 ，１１℃ 高压 蒸汽 灭菌 ，待温度 冷却 至室 ２
白腐 真 菌 对 玉 米 秸 秆 半 纤 维 素 含 量 的影 响见
表 ４ 。
表 ４ 白腐 真 菌 对 玉 米 秸 秆 半 纤维 素 含 量 的影 响 ％
白腐 真 菌对玉米 秸秆 木质 素含量 的影响见 表 ２ 。
白 腐 真 菌 降 解 玉 米 秸 秆 的 研 究
侯 进 ，李 婷 ，李 杰
东 北 农业 大 学 动 物科 学 技 术 学 院 ， 哈 尔 滨 １０ ３ ５ ０ ０）
摘
要 ：试 验 通 过 对 ４种 配 方 （ 料 为 ７ ％ 的 玉 米 秸 秆粉 和 １ 主 ４ ％Ｎ 灰 ，加 入 不 同 配 比的 玉 米 面 和 麦 麸 ，按 添加
木 质 素 、纤 维 素 和 半 纤 维 素 的测 定 采 用 ｖ ｎ ａ
Ｓ ｅｔ 析法 ，使用 Ａ Ｋ Ｍ ２ ｉｅ Ａ ａｙｅ 进 行 ｏｓ分 Ｎ Ｏ ２ ０Ｆｂ ｒ ｎ ｌ ｒ ｚ 测 定 ；Ｃ Ｐ采 用 Ｆ Ｓ Ｏ Ｓ伞 自动凯 氏定氮仪 测 定 。
４ 饲料博览。 技术版 ２ １ ００年第 １ 期
将 发酵 曲种培 养基 分成 ４组 ，每个处 理组 均 以 盘米秸 秆 为 主料 ，添 加 不 同 比例 的 玉米 面 和麦 麸 。
４个处理组 的组 成见 表 １
表 １ 各 处 理 组 的组 成 成 分 ％
个适 应过程 批 量发 酵农 作 物秸 秆需 要大 量 的菌 种 ，用 谷粒 生产 菌种 发酵 秸秆 效果 良好 …，但无 疑 会加大 处理秸 秆的 成本 ，而且整 粒 的玉米或 小 麦不 易被动物 消化 ？Ｆ腐 真菌 在培 养料 的选 择上 比较 广 ｊ 泛 ，农作 物 的各种秸 秆或 农业生 产 的各种 副产 品均 町作 为菌 种 的培养基 但 是不 同处理 的培 养基 成分 生产 出的菌 种栽 培效 果不 同 而利 用 玉米 秸秆 生 Ｉ 产菌种可 以大 幅度 降低生 产成本 ，从 而 为大 规模 处
ｆ腐 真菌 以其强 大的 降解能 力 闻名 ，经 自腐 真 Ｌ ｊ
菌发酵 的秸秆 ，不仅 粗纤 维含量 大 幅度下 降 ，而 日 ‘ Ｃ Ｐ水 平 也 大 幅 度 提 高… 、但 由于 处 理 成 本 较 高 ， 利用 向腐 真 菌处理秸 秆 的技 术一 直处 于试 验室研 究 一
大学 食 用 菌研 究 室 ； 米 秸 秆 来 源于 哈 尔滨 郊 区 ， 用 前 粉 碎 ，过 ２ ｎ 筛 网 ；麦 麸 、 长米 均来 源 于 ． Ｃｌ ５ 哈 尔滨香 坊粮 库
酵 玉 米 秸秆 Ｃ Ｐ含 量影 响 极 显 著 （ ＜ ．１ ， 对粗 纤维 含 量 影 响 不 显 著 （ ＞ ． ４ 的 玉 米秸 秆 和 １ 的 石 灰 添 加 Ｐ０ ） ０ Ｐ ００ ｏ７ ％ ５ ％ ５ 的玉 米粉 、２ ％ 的 麦麸 配 合 生 产 的 白腐 真 菌 曲种 对 玉 米秸 秆 的发 酵效 果 最 好 ，可 降低 生产 成 本 ，更适 宜作 为生 ％ ０ 产 白腐真 菌 菌种 的配 方 。 关键 词 ： 白腐 真 菌 ； 菌种 ；发 酵 ；玉 米秸 秆 中 图分 类 号 ：Ｔ ３ １ ７ ８ ５ 文 献标 识 码 ：Ａ 文 章编 号 ： １０ —０ ４２ １） １０ ０ － ３ Ｑ ５ ． ；０ １ ３ ０ １０ ８ （００ ０ — ０４ ０
１５ ．
数 据著 （＜ ． ） 和 Ｐ Ｏ０ ，而 ２ ～ ０ｄ ５ ０ ３ ．
试验数据采用 Ｓ Ｓ８ １软件 和 Ｅ ｃｌ ０３ Ａ ． ０ ｘｅ ２ ０ 进 行 统 计 分 析 ，Ｄ ｎａ 新 复极 差 法 进 行 多重 比较 。 ｕ ｃｎＳ
１２ 试 验 设 计 ．
阶段 ，未能进 行大 规模推 广 ： 菌种 对于 『腐真 菌发 Ｌ Ｉ 酵秸秆 至关重 要 ，要 获得 良好 的发酵 效果 必须 以优
良的菌 种 为 前 提 。 制作 菌 种 既 是 为 了扩 大 菌 种 数
量 ，也是让 菌 株 对接 近 生 产 （ 培 ） 的 原 料有 一 栽 用