款冬花多糖提取工艺研究_吕培霖
甘肃款冬花资源调查报告
【药资 瀛 ｌ 】
甘 肃 款 ，郑 明霞 （ ．解放军第 ２ １ ５医院 ，甘肃 酒泉 ７ ５０ ３ ００；２ ．甘肃 中医学院，甘肃 兰州 ７ ０ ０ ； ３ ０ ０
３ ．深 圳 市 第 六 人 民 医 院 ，广 东 深 圳 ５ ８０ ） １ １０
此次 调 查 了 解 到 ，在 甘 肃 省 ，天 水 市 、陇 南 、 甘南 等地 自然 环 境 好 ，植 被 保护 好 ，破 坏 少 ，款 冬
［ 讯作者 ］ 通
・
各 产 区种 植 面 积 也 大 幅 度 下 降 。甘 肃 省 款 冬 花 资 源 概 况 见 表 １ 。
到 款冬 花 ，如 榆 中 的兴 隆 山 、永 登 的武 胜驿 等 。野
生款冬花的收购量 ，与当地 的经济发展水平 、信息 多少 、药 材收 购 点 的数 量 有 关 ，大量 农 民工 进城 打
工 ，很少 有年 青 人 瞧 得起 采挖 药 材 。如 果 药 材 收购
点分 布较 多 ，卖 药 材 方便 ，才 有 少数 无 一 技 之 长 的
款冬 花极 易 生 长 的环 境 里 ，个 别 特 殊 地 区 ，可 以找
物 的生存条 件 ，使 野 生 款 冬花 蕴 藏 量 急 剧 下 降 ，甘
肃省 的野生 款冬 花 资 源在 减少 。为此 ，２ ０ ０ ６年 ９月
至 ２０ ０ ７年 １ １月 ，本 课 题 组 通 过参 考 文 献 资料 、查
维普资讯
２ ０ 年 ４月 第 １ ０８ ０卷
第 ４期
毫
中国现代中药 Ｍ ｄｍ ｈ ｅｅＭ ｄｃ ｅ ｏ ｅ Ｃ ｉ ｓ ｅｉｉ ｎ ｎ
Ａ ｒ２０ Ｖ １１ Ｎ ． ｐ．０ ８ ｏ ０ ｏ４ ．
Ｔ ｉ ｅｓ ｈｅ Ｃｈ ｎ ｅ ｍｅｄｉｉ ｅ嘉 － ｃｎｅ
微波法提取款冬花总黄酮的研究
李 月 等 ： 波 法提 取 款 冬 花 总黄 酮 的研 究 ／ ００年囊 １ 微 ２１ ｌ啊
就微波 提 取 法 与 两 种 常 规 提 取 法 进 行 了 对 比实
用广泛 。与传统 提 取方 法相 比 ， 波提 取 法具 有快 速 、 微 高效 、 择 性高 、 选 溶剂 消耗 少 、 活性 成分 提 取率 高 、 于 适
热不稳 定物 质等 特点 ［ 。 ３ ］
作 者采 用微 波技 术 提 取 款 冬 花 总 黄 酮 ， 过 单 因 通 素实验 和正 交实 验 确定 最 佳 提 取 工 艺 条 件 ， 为 款 冬 拟 花 黄酮类 成 分 的开发 研究 和工 业化 生 产提 供依 据 。
表 １ 。
表 １
Ｔａ ｂ．１
筛 ，０ 烘干 。 ８℃
芦丁 对照 品 （ 号 ： ０ ０９ ０ ） 中 国药 品生 物 制 批 ０ ８ ２７ ５ ， 品检 定所 ； 乙醇 、 硝 酸钠 、 亚 硝酸 铝 、 氧 化钠 等均 为分 氢
析纯 。
正 交 实 验 因 素 和 水 平
Ｆａｃｏ ｓａ ｅ ｌ ｆｏ ｔ ｇ ｎａ ｘ ｒ ｍｅ ｔ ｒ ｎｄ ｌｖｅｓｏ ｒ ｈｏ ｏ ｌｅ ｐｅ ｉ ｎｔ
分有关 引。 近年来 ， 波技 术 在 提 取 中 药 材有 效 成 分 方 面 应 微
称 取经 过 预处 理 的款冬 花粉 末 ２ ０ｇ 置 于微 波炉 ． ，
专 用杯 中 ， 提 取 溶 剂 浸 泡 １ ｎ 微 波 处 理 ， 滤 。 用 ０ ｍｉ ， 过 用旋 转蒸 发 仪 回收 溶 剂 ， ６ 乙醇 溶 解 ， 滤 并 定 用 Ｏ 过
进 行 实 验 ， 结 果 进 行 直 观 及 方 差 分 析 ， 定 微 波 提 取 对 确
不同产地款冬花药材质量比较研究
不同产地款冬花药材质量比较研究贺润丽;张哲;裴香萍;平莉莉;王兵【摘要】Objective To compare the quality of Flos Farfarae from different habitats, and provide basis for the utilization and development of Tussilago farfara. Methods The contents of rutin and tussilagone were determinated by HPLC, the 100-bud dry weight and bud color were weighed and observed. And the data of different samples were compared and statistical analysed. Results The content of rutin, tussilagone and 100-bud dry weight in Flos Farfarae from different place has a significant difference, and there was a significant positive correlation between rutin and tussilagone. Principal component and factor analysis showed that the quality of Flos Farfarae from Yushe, Ningwu, Guangling was better than other areas. Conclusion The quality of Flos Farfarae from different areas is difference, and wild T. farfara in Yushe, Ningwu, Guangling could be used as high quality germplasm.%目的：比较不同产地款冬花药材的质量，为款冬花的利用和开发提供依据。
款冬花的加工技术分析
二 、 方 法 与结 果
ｌ 、款冬花提取工艺 正交设计通过预实验 得知影响提取 的主 要因素 为时间 （ 、 Ａ） 加水倍量 （ Ｂ）和提取次数 （ ，为进一 步优选各 因素最佳 工艺 Ｃ） 水平，设计正交实验，以芦丁提 取率和 出膏率 为指标 ，采用 Ｌ ９ （４ ３ ）正交表优 选水提款 冬花 的最佳提 取工 艺条件 。 从上述 结果分析 可 以看 出，则 ３ 因素 的影响大 小依次 为 Ｃ＞ Ａ， Ｂ＞ Ｃ具有显著性 。从省 时降耗及生产 实际出发 ，在保证提 取 充分的前提下 ，综合 分析各个因素对芦丁 的提 取率和 出膏率 的影响，拟 定最佳工艺 为 １ Ｏ倍水量 ，煎 ３次，１ ／ ． ｔ次。 ５ｌ
确 定 最佳 工 艺 ， 更 为合 理 。
配方颗粒作为饮片剂 型的发展和补充 ，大多以水作为其提
取溶 剂，款冬花 中的芦丁成 分易溶于热水 ，故将 其制成配方颗 粒 ，既保证 了传统 中药 的特 点，又提高 了质量保证 ，值 得临床
中中 医药
墨 耋
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杨 阳
款冬花 的加 工技术 分析
【 中图分类号】Ｒ ３【 ９ 文献标识码 】Ａ 【 文章编号 】１ ７－ ７ ３ （０ ０ ９ ０ ７ － １ ６２ ３ ８ ２ １ ）０ － １３ ０
紫外检测器，威 玛龙色谱 数据 工作站 ，甲醇 、磷酸为分析纯等。 超声仪 （ ｕｏｉｎｅ仪器有限公司 ） Ａ ｔｓ ｃ ｅ 。款冬花药材购于天津饮 片 厂 ，经天津药物 研究院中药现代研 究部张铁军研究员鉴 定为菊 科植物款冬花 Ｔ ｓｉ ｇ ｒａａＬ ｕ ｓａｏｆ ｆｒ ．的干 燥花 蕾。芦丁标准 品 （ ｌ ａ 天 津市药 品检验所 ） ，试 剂均为分 析纯 （ 天津 康科德 科技有 限公
响应面优化酶法提取款冬花多糖工艺研究
响应面优化酶法提取款冬花多糖工艺研究宋逍，赵鹏，张丽华，王昌利(陕西中医药大学药学院，陕西咸阳712046)摘要：目的优化款冬花多糖酶法辅助提取工艺条件。
方法通过响应面法，评价指标为多糖提取率;考察提取时间、酶药质量比和温度等因素对款冬花多糖提取的影响。
结果提取多糖的最优工艺为用20倍量的水，在55丈温度下,选择酶药质量 比1.30%,提取123.2!^，阳=7,水料比为201^8'在该工艺条件下，款冬花多糖的得率为3.25%。
结论酶法提取款冬花多糖具有提取温度低，提取率高的优点。
关键词:款冬花;多糖;酶;响应面d o i ：10. 3969/j. issn. 1009 -6469. 2016.12.007Optimization of enzyme-assisted extraction of polysaccharides fromTussilago farfara by response surface methodologyS O N G Xiao,ZHAO Peng,Z H A N G Lihua,et a l(School of Pharmacy y Shaanxi University of Chinese Medicine y X ianyang y Shaanxi 112046, China )Abstract ： Objective T o select the o p t i m u m extracting with the assistance of e n z y m e m e t h o d of polysaccharide from Tussilago farfara. Methods R e s p o n s e surface methodology ( R S M ) w a s applied to optimize enzyme-assisted extraction process of polysaccharides from Tussilago farfara. Extraction rate of polysaccharides as evaluation i n d e x , the influence of t i m e , ratio of liquid to solid, a n d temperature w ere studied. Results T h e o p t i m u m conditions wer e 20 times quantity of wat e r ，extraction temperature at 55*^，ratio of e n z y m e to m a terial 1.30%，the time of extraction 123. 2 m i n ，p H 7 a n d 20 L • g 1 as ratio of water to material. U n d e r the optimized conditions，the extraction yield of polysaccharide w a s 3.25%.ConclusionsT h e e n z y m e extraction a n d determination of polysaccharide fromTussilagofarfara were suitable b y this method. C o m p a r e d with the traditional m e t h o d s , e n z y m e extraction m e t h o d is better with lower temperaturea n d higher yield.Key words ： Tussilago farfara ； Polysaccharides ； E n z y m e extraction ； R e s p o n s e surface methodology是一种温和的方法，对多糖的结构影响较小，可较 容易放大到工业化生产中去。
碱法提取款冬花渣多糖工艺的响应面法优化
碱法提取款冬花渣多糖工艺的响应面法优化目的优化款冬花渣多糖碱法提取工艺条件。
方法通过响应面法，以多糖提取率为评价指标，分别以pH、温度、时间为考察条件，探讨其对款冬花渣多糖提取的影响。
结果pH值为9.5，温度为61℃，时间85 min，加入20倍量的水（mL/g），为最最优工艺条件，在此工艺条件下，款冬花渣多糖的提取率为4.211%，多糖含量为6.93%。
结论碱法提取款冬花渣多糖具有提取率高的优点。
[Abstract] Objective To study the optimum extraction of polysaccharide from Tussilagofarfara waste. Methods Response surface methodology was used to optimize the extraction process for Tussilagofarfara waste. The effect of time，pH and temperature were addressed using response surface methodology. Results The optimal extraction conditions were determined as follows：pH of 9.5，temperature of 61℃，time of 85 min，and material-to-liquid ratio of 20 （mL/g）. Under these conditions，the extraction yield of polysaccharide was 4.211%，the content of 6.93%. Conclusion This method is suitable for the base extraction of polysaccharide from Tussilagofarfara waste.[Key words] Tussilagofarfara waste；Polysaccharides；Basic extraction；Response surface methodology款冬花是我国常用中药，具有润肺止咳、化痰平喘之功效，常用來治疗慢性支气管炎（气管炎）、咳嗽气喘等疾病，分布于陕西、宁夏、河北、甘肃等地[1]。
款冬花配方颗粒制备工艺优化及质量控制
款冬花配方颗粒制备工艺优化及质量控制摘要本文通过设计一系列实验优化了款冬花配方颗粒的制备工艺，并采用物化指标对其质量进行了控制。
实验结果表明，制备工艺对颗粒大小分布、颗粒混合度和颗粒吸湿性等质量指标的影响极大，通过优化不同工艺参数，可以有效提高颗粒品质。
引言款冬花是一种天然植物药材，具有清热解毒、祛风止痛等功效。
为了更方便使用和储存，需要将款冬花制成颗粒。
然而，颗粒制备过程中存在颗粒大小不均匀、颗粒混合度低、颗粒易吸湿等问题，严重影响了颗粒品质。
因此，本文将从制备工艺优化和质量控制两个方面入手，探讨如何提高款冬花配方颗粒的制备质量。
实验材料和方法1. 实验材料•款冬花•水解淀粉•乳糖•硬脂酸镁•聚乙烯吡咯烷酮（PVP）•羧甲基纤维素钠（CMC-Na）2. 实验方法2.1 制备工艺优化实验设计采取单因素试验和正交试验相结合的方法，分别考虑颗粒大小分布、颗粒混合度和颗粒吸湿性等因素对颗粒制备质量的影响。
调整以下工艺参数：•水解淀粉浓度•乳糖浓度•硬脂酸镁含量•PVP浓度•CMC-Na浓度2.2 实验步骤1.将款冬花开水煎煮后，放至60 ℃时加入水解淀粉、乳糖、硬脂酸镁、PVP、CMC-Na，混合均匀后加入足量的葡萄糖浆、甘油溶液使其成膏。
2.将膏料过筛，以60目筛分选后放至风干箱中进行干燥，至水分含量小于8%。
3.得到干燥的颗粒后，进行粉碎、筛分和混合，最终得到颗粒成品。
2.3 质量控制指标•颗粒大小分布•颗粒混合度•颗粒吸湿性结果与分析1. 制备工艺优化结果采用正交试验，得到不同工艺参数对颗粒大小分布、颗粒混合度和颗粒吸湿性的影响如下表所示。
工艺参数颗粒大小分布颗粒混合度颗粒吸湿性A（水解淀粉）ooo xxx xxB（乳糖）o ooo xxxC（硬脂酸镁）oooo ooo oD（PVP）xx o xxE（CMC-Na）ooo xx ooo其中o代表对颗粒质量有显著改善，x代表对颗粒质量有明显恶化。
不同产地款冬花多糖含量测定
不同产地款冬花多糖含量测定
吕培霖;晋玲;郑明霞
【期刊名称】《现代中西医结合杂志》
【年(卷),期】2009(18)15
【摘要】目的建立测定款冬花中多糖含量的方法;比较甘肃不同产地款冬花的质量.方法按照<中国药典>法和硫酸-苯酚法.结果硫酸-苯酚法操作简便、易行、快速,结果灵敏度高、重现性好;不同产地款冬花中多糖含量分别为0.975%～2.50%.结论硫酸-苯酚法适用于款冬花多糖的含量测定.各地款冬花样品质量差异较大.
【总页数】2页(P1758-1759)
【作者】吕培霖;晋玲;郑明霞
【作者单位】解放军第25医院,甘肃,酒泉,735000;甘肃中医学院,甘肃,兰
州,730000;广东省深圳市第六人民医院,广东,深圳,518100
【正文语种】中文
【中图分类】R92
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微波辅助提取款冬花多糖的工艺及抗氧化活性研究
微波辅助提取款冬花多糖的工艺及抗氧化活性研究宋逍;段玺;唐志书;王昌利;赵鹏【期刊名称】《中国医学创新》【年(卷),期】2016(013)023【摘要】目的：研究款冬花多糖微波辅助提取工艺及其抗氧化活性。
方法：通过单因素实验，对影响款冬花多糖提取率的料液比、微波功率、微波时间进行考察，最后，选用正交实验对提取工艺参数进行优化，并研究款冬花多糖对羟基自由基、超氧阴离子的清除作用。
结果：实验结果表明，款冬花多糖微波辅助提取最佳实验条件为料液比为1∶30（g/mL），微波功率为600 W，微波时间为7 min，在此条件下，多糖得率为14.806%。
随着款冬花多糖浓度的增大，其清除羟基自由基、超氧阴离子的能力也随之增加。
结论：款冬花多糖具有一定的抗氧化性，并对羟自由基、超氧自由基有较强的清除能力。
%Objective:The microwave extraction process of polysaccharide from Tussilagofar-fara and its antioxidant activity were investigated.Method:Orthogonal test was carried out on the basis of single-factor n<br> experiments to determine the optimum process parameters.Additional,the reducing power of Tussilagofar-fara polysaccharide and the clearance effect of hydroxyl radicals,superoxide anion were investigated.Result:The experimental results showed that the Tussilagofar-fara polysaccharide microwave assisted extraction optimum experiment conditions for the material liquid ratio was 1∶30(g/mL),microwave power 600 W,extracting time was 7 min,and the crude polysaccharide yield was up 14.806%.With the increased of Tussilagofar-fara polysaccharide concentration,its ability to scavenge hydroxyl radicals,superoxide anion also increased. Conclusion:Furthermore,the Tussilagofar-fara polysaccharide had better reducing power to scavenge hydroxyl radicals,superoxide anion and natural antioxidant.【总页数】4页(P27-30)【作者】宋逍;段玺;唐志书;王昌利;赵鹏【作者单位】陕西中医药大学药学院陕西咸阳 712046;陕西中医药大学附属医院;陕西中医药大学药学院陕西咸阳 712046;陕西中医药大学药学院陕西咸阳712046;陕西中医药大学药学院陕西咸阳 712046【正文语种】中文【相关文献】1.响应曲面法优化撕裂蜡孔菌多糖的微波辅助提取工艺及抗氧化活性研究 [J], 姚婷;孙雪;许瑞程;褚衍亮;王娜;;;;;2.木瓜滤渣微波辅助提取木瓜多糖的响应面法工艺优化及其抗氧化活性研究 [J], 张彦慧;李彦霏;胡仲秋3.木瓜滤渣微波辅助提取木瓜多糖的响应面法工艺优化及其抗氧化活性研究 [J], 张彦慧[1];李彦霏[2];胡仲秋[1]4.人参叶多糖微波辅助提取工艺及抗氧化活性研究 [J], 孙萌肖;陈瑞战;骆淑君;杨汝平;任兴;吴静;高铭5.人参叶多糖微波辅助提取工艺及抗氧化活性研究 [J], 孙萌肖;陈瑞战;骆淑君;杨汝平;任兴;吴静;高铭因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
款冬花质量标准及检测研究论文
款冬花质量标准及检测研究论文款冬花质量标准及检测研究论文质量标准外观形状：干燥花蕾呈不整齐棍棒状，常2～3个花序连生在一起，长 1～2.5 cm，直径6～10 mm。
上端较粗，中部稍丰满，下端渐细或带有短梗。
花头外面被有多数鱼鳞状苞片，外表面呈紫红色或淡红色。
苞片内表面布满白色絮状毛茸。
气清香，味微苦而李，嚼之显棉絮状。
以朵大、色紫红、无花梗者为佳。
大多为统装。
质量监测由于《中国药典》上没有规定对款冬花的.成分检测，课题组通过高效液相色谱法测定［2］，暂规定款冬花芦丁含量不得低于0.16%；参照《中国药典》2005版附录的相关规定检测［3］，要求：水分不得超过10%；灰分不得超过20%；酸不溶性灰分不得超过15%；浸出物不得低于11%。
依据GB/T5009.19-2003检测标准，暂定农药残留：六六六、DDT不得检出；重金属及砷盐重金属铅、镉、汞及砷分别按GB／T5009的12、15、17、11检测。
铅不得过5.0 mg·kg-1，镉不得过0.3 mg·kg-1，汞不得过0.2 mg·kg-1，砷不得过2.0 mg·kg-1。
微生物限度检查依据《中国药典》2005版一部附录XIII C 微生物限度检查法［3］，细菌总数1 g不得超过30 000个，霉菌总数1g不得超过100个。
采收与加工采收季节立冬后土未封冻前采收。
过早，因花蕾还未完成生长，其苞片未呈紫色（为白色），影响产量和品质；过迟，土已封冻，不便采收。
到第二年土壤解冻后采挖（2月中下旬），已有少量开放，因此，应控制好采挖时间。
收获方法收获工具主要有锄头、撮箕、背篓等。
采收要精挖细收，土里尽量不留冬花花蕾。
用锄头将植株连根挖出后，从茎干上摘下花蕾，放入竹筐内，不能重压，不要水洗，否则花蕾干后变黑，容易腐烂。
采挖时应选择晴天，晴天泥沙易抖落。
加工加工设备：干燥炕或烘箱，笆箦，晒席等。
花蕾采后立即薄摊于通风干燥处晾干。
款冬花有效成分的提取和止咳化痰作用的研究(修改)
山西中医学院中药学专业毕业论文款冬花化学成分的提取和止咳化痰作用的研究毕业生：武伟伟专业：中药学班级：2011级中药1班指导教师：韩毅丽二〇一五年六月款冬花不同化学成分的提取和止咳化痰作用的研究学生:武伟伟指导教师:韩毅丽［摘要］目的:研究款冬花中不同化学成分对小鼠止咳、化痰的作用。
方法：止咳实验：昆明种小鼠，雌雄各半，随机分成空白、阳性枸橼酸喷托维林对照组( 0. 01 g/kg)、款冬花水煎液组、萜溶液组、皂苷溶液组、黄酮溶液组、生物碱溶液组。
给药剂量为6g/kg，连续给药5 d，然后观察25%浓氨水定量喷雾后出现咳嗽的潜伏期及2 min内的咳嗽次数［1］。
化痰实验：昆明种小鼠，雌雄各半，随机分成空白、阳性枸橼酸喷托维林对照组( 0. 01 g/kg)、款冬花水煎液组、萜溶液组、皂苷溶液组、黄酮溶液组、生物碱溶液组。
给药剂量为0.2 mL/10g ，连续给药3d，末次给药45mn后，气管段酚红法测定对小鼠的化痰作用。
结果: 与空白对照组相比，款冬花水煎液及其有效成分咳效果显著，咳嗽潜伏期明显延长，咳嗽次数明显减少。
与空白对照组相比，除黄酮外，款冬花水煎液及其有效成分明显减少小鼠的痰液分泌量。
结论:款冬花中黄铜、萜、生物碱、皂苷均对小鼠有止咳作用；［关键词］款冬花；化学成分；止咳：化痰Study on the effect of extraction and relieving cough and phlegm and effective components of Flos farfaraeWu Weiwei(Shanxi University of Traditional Chinese medicine, Jinzhong Shanxi) [Abstract] Objective: the effect of different ingredients on mice cough, phlegm of tussilago. Methods: cough experiment: Kunming mice, half male and half female were randomly divided into blank, positive citric acid spray Tovey forest in the control group (0. 01 g kg - 1), Flos farfarae Decoction group, terpene solution group, saponin solution group, solution group of the total flavonoids, alkaloids solution group. The drug volume was 20 kg - mL - 1, and the number of cough was 5 days after the quantitative spray and the number of cough in 25% min was observed.. Phlegm experiment: Kunming mice, half male and half female were randomly divided into blank,positive citric acid spray Tovey forest in the control group (0. 01 g kg - 1), Flos farfarae Decoction group, terpene solution group, saponin solution group, solution group of the total flavonoids, alkaloids solution group. Dosing volume of 20 ml, kg - 1, continuous administration for 3 days, the last administration 45 minutes, Tracheal phenol red method determination of phlegm effects in mice. Results: compared with the control group, coltsfoot flower Decoction and its active ingredient cough effect significantly, cough latency was significantly prolonged, cough frequency decreased significantly. In addition to flavonoids, compared with the control group, coltsfoot Decoction and its effective constituents significantly reduced the quantity of sputum secretion in mice.[keyword] Tussilago; effective components; cough and phlegm:款冬花为菊科植物款冬( Tussilago farfara L． )的干燥花蕾。
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2009年5月第16卷增刊 中国中医药信息杂志 ·35· 款冬花多糖提取工艺研究
吕培霖1,李成义2,郑明霞3
(1.中国人民解放军第25医院,甘肃 酒泉 735000；2.甘肃中医学院,甘肃 兰州 730000；
3.深圳市第六人民医院,广东 深圳 518100)
摘要：目的 探索超声法提取款冬花多糖的工艺条件,为款冬花多糖的提取工业化提供理论依据。
方法 采用正交试验法,对甘肃款冬花多糖的提取工艺进行研究。
结果 最佳工艺为10倍量水,水温40 ℃,超声时间50 min,频率为50 kHz。
结论 此方法是一种简单、快捷、高效的提取方法。
关键词：款冬花；款冬花多糖；含量测定；提取工艺
中图分类号：R283.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304(2009)S05-0035-02
款冬花来源于菊科植物款冬(Tussilago fafarae L.)的干燥花蕾,为临床常用中药。
主要用于治疗新久咳嗽、劳嗽咯血等症[1]。
多糖具有抗肿瘤、免疫、抗凝血、降血糖和抗病毒等多种活性[2]。
本试验采用单因素考察和正交试验方法探讨超声法,提取款冬花多糖的最佳工艺,为款冬花多糖工业化生产提供一定的理论参考。
1 仪器与试药
BS 2245型电子天平(北京赛多利斯仪器系列有限公司)；KQ2100型超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；UV-9100型紫外分光光度仪(北京瑞利分析仪器公司)；HHS112电热恒温水浴锅(江苏省医疗器械厂)；SHZD Ⅲ循环水式多用真空泵(巩义市英峪子华仪器厂)。
葡萄糖对照品(购于中国药品生物制品检定所,批号0833-9504)；款冬花药材(甘肃中医学院李成义教授鉴定)。
浓硫酸、苯酚、95%乙醇、乙醚、丙酮等试剂均为分析纯。
蒸馏水自制。
2 试验方法
2.1 标准曲线的制备
精密称取105 ℃干燥至恒重的葡萄糖标准品100 mg,置于100 mL容量瓶中,加蒸馏水溶解,稀释至刻度。
量取上述溶液10 mL于100 mL容量瓶中,稀释至刻度,得浓度为0.1 mg/mL 的葡萄糖标准溶液。
精密量取上述葡萄糖标准液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8 mL,分别置于10 mL刻度试管中,依次加蒸馏水至2.0 mL,摇匀。
分别加入5%苯酚溶液1.0 mL,再迅速加入5.0 mL 浓硫酸,振摇5 min,于沸水浴中静置加热15 min,冷却。
随行空白。
在490 nm处测定吸光度[3]。
以葡萄糖浓度(C)为横坐标,吸光度(A)为纵坐标,进行线性回归。
得回归方程：C＝15.67A－0.004 07(r＝0.999 5),浓度在1.22～9.727 mg/mL范围内呈良好的线性关系。
2.2 款冬花多糖的提取
称取1 g款冬花样品粉末(18目),置于100 mL锥形瓶中,加80%乙醇20 mL,在温度为30 ℃、频率为60 kHz条件下超声提取30 min,滤过。
同样条件,重提一次。
合并药渣。
对预处理后的药渣,分别以不同料液比、超声时间、温度和频率进行提取,合并提取液,参照“2.1”项下方法,在波长490 nm
基金项目：国家科技基础条件平台工作项目(2007BAI37B01)处测定吸光度,单因素考察,采用正交试验优选出多糖最佳提取工艺[3]。
3 结果与分析
3.1 不同料液比对款冬花多糖得率的影响
采用提取时间为40 min,温度为30 ℃,频率为50 kHz,考察不同料液比对款冬花多糖得率的影响。
结果如图1所示。
款冬花多糖得率随料液比的增大而提高,在料液比从1∶15到1∶20,提取多糖的量增长明显,从6.1%到最高值7.48%。
当料液比为1∶20时,款冬花中的多糖成分已基本溶出,再增加提取液,多糖的得率减少。
图1 不同料液比对款冬花多糖得率的影响
3.2 不同时间对多糖得率的影响
采用料液比为1∶20,提取温度为30 ℃,频率为50 kHz,考察不同提取时间对款冬花多糖得率的影响。
结果如图2所示。
结果表明,多糖的得率起初上升较快,提取至40 min时,达到最高点,而随着超声时间延长,多糖的得率反而减少。
由于超声处理时间过长,可能导致部分多糖结构发生变化,糖链断裂,使多糖含量下降。
·36· Chinese Journal of Information on TCM May 2009 Vol.16 Suppl.
3.3 不同提取温度对多糖得率的影响
采用料液比为1∶20,提取时间为40 min,频率为50 kHz,考察不同温度对款冬花多糖得率的影响。
结果如图3所示。
结果表明,30 ℃和40 ℃提取,对多糖得率差异不大,当温度的上升50 ℃时,多糖得率从6.97%升高到11.21%。
随着温度的上升,多糖分子的运动速度加快,使其更容易从款冬花细胞中提取出来,且热作用对细胞有破坏作用,使多糖更容易溶出。
提取温度为60 ℃时,由于部分多糖水解,多糖得率略有下降。
图3 不同提取温度对多糖得率的影响
3.4 不同频率对多糖得率的影响
采用料液比为1∶20,温度为30 ℃,时间为40 min。
考察不同频率对款冬花多糖得率的影响,结果如图4所示。
不同频率对款冬花多糖得率的影响不明显,30～70 kHz条件下,多糖的得率在8.095%～11.44%之间,频率为50 kHz时,多糖的得率最高。
图4 不同提取频率对多糖得率的影响
3.5 最佳工艺条件的确定
根据单因素试验的结果,选择料液比(A)、提取时间(B)、提取频率(C)、提取温度(D),各个因素取3个水平,见表1。
按照L9(34)进行正交试验,以多糖得率为提取效果评价指标对水提工艺条件进行优化[4],对测定结果进行直观分析,可知各因素对多糖含量的影响大小为B＞C＞D＞A,且B3＞B1＞B2,C2＞C1＞C3,D2＞D1＞D3,A1＞A2＞A3,最佳水平组合为A1B3C2D2。
结果见表2。
将离差平方和较小的因素A和D列合并,作为误差估计,进行方差分析,见表3。
表1 因素水平表
水平 A(W∶V) B(min) C(kHz) D(℃)
1 1∶10 30 40 30
2 1∶15 40 50 40
3 1∶20 50 60 50
表2 水提法工艺L9(34)正交试验结果(n=3)
试验号 A B C D 多糖含量
1 1 1 1 1 7.41
2 1 2 2 2 6.37
3 1 3 3 3 7.30
4 2 1 2 3 7.75
5 2 2 3 1 4.79
6 2 3 1 2 7.82
7 3 1 3 2 6.63
8 3 2 1 3 4.10
9 3 3 2 1 8.52
K121.0821.7919.33 20.72
K220.3615.2622.64 20.82 CT=409.252 9
K319.2523.6418.72 19.15
R 1.83 8.38 3.92 1.67
S 0.5712.92 2.97 0.58
表3 方差分析表
变异来源S υ MS F P
B 12.92 2 6.46 76.83 ＜0.05
C 2.97 2 1.48 5.10 ＞0.05
合并误差 1.15 4 0.29
注：F0.05(2,2)=19.00,F0.01(2,2)=99.00
方差分析结果表明因素B对多糖含量有显著影响,因素A、C、D对多糖含量无显著影响。
由直观分析和方差分析结果,得到款冬花多糖超声提取的最佳工艺条件为A1B3C2D2,即加10倍量水,40 ℃,超声提取50 min,超声频率为50 kHz。
4 讨论
先用80%乙醇提取,去除单糖、低聚糖、苷类及生物碱等干扰性成分,然后用水提取多糖类成分。
超声法提取款冬花多糖不仅增加了多糖的得率,节省溶剂,而且简化了提取步骤,也避免了高温对多糖的破坏。
由表2可知,比较4个因素的极差值为B＞C＞A＞D,说明提取时间对款冬花粗多糖得率影响最大。
由正交试验结果分析表可得,较优的工艺条件为B3C2A1D2,即：提取时间50 min,提取频率50 kHz,料液比为1∶10,提取温度为40 ℃。
正交试验与采用单因素考察结果基本一致。
单因素考察时,料液比为1∶20时多糖得率最高。
而正交试验时,10倍量水的提取工艺最好。
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(收稿日期：2008-09-19,编辑：毕俊英)。