标准缓冲液pH值与温度对照表
PH计校准及缓冲液配置
标准缓冲溶液(均用pH标准缓冲物质配制)1.1 苯二甲酸氢钾标准缓冲溶液:c(KHC8H4O4)=0.05 mol/L(25℃时,pH=4.003)。
苯二甲酸氢钾的pH标准缓冲物质,有小塑料袋和瓶装两种,配制方法如下:a)袋装配制法:在250 mL(或500 mL)量瓶中(根据袋中标准缓冲物质量,选择量瓶大小),按袋上的说明配制成所需的浓度。
保存于聚乙烯瓶中。
b)瓶装配制法:称取5.10 g苯二甲酸氢钾(KHC8H4O4预先在115℃±5℃,烘2~3 h,于干燥器中冷却),溶于水并稀释至500 mL,混匀。
保存于聚乙烯瓶中。
1.2 0.025 mol/L磷酸二氢钾(KH2PO4)和0.025 mol/L磷酸氢二钠(Na2HPO4)混合标准缓冲溶液(25℃时,pH=6.864):磷酸二氢钾和磷酸氢二钠的pH标准缓冲物质,有小塑料袋装(混合磷酸盐)和瓶装(两种pH 标准缓冲物质分别包装)两种。
配制方法如下:a)袋装配制法:在量瓶(根据袋上说明确定量瓶大小)中按袋上说明配制成所需浓度后,保存于聚乙烯瓶中。
b)瓶装配制法:迅速称取3.40 g磷酸二氢钾(KH2PO4)和3.55 g磷酸氢二钠(Na2HPO4)(均预先在115±5℃烘2~3 h,于干燥器中冷却)溶于蒸馏水,转入1 000 mL量瓶中,加水至标线,混匀。
1.3 0.008 695 mol/L磷酸二氢钾(KH2PO4)和0.030 43 mol/L磷酸氢二钠(Na2HPO4)标准混合缓冲溶液(25℃时,pH=7.413):磷酸二氢钾和磷酸氢二钠两种pH标准缓冲物质分别用瓶包装,配制方法如下:迅速称取1.18 g磷酸二氢钾和4.31 g磷酸氢二钠(均预先在115℃±5℃烘2~3 h,于干燥器中冷却),溶于水,全量移入1 000 mL量瓶中,加水至标线,混匀。
保存于聚乙烯瓶中。
1.4 硼砂标准缓中溶液:c(Na2B4O7·10H2O)=0.010 mol/L(25℃时,pHs=9.182)。
生物实验中常见buffer的配制
常用缓冲溶液配置方法常用缓冲溶液得配制方法1.甘氨酸–盐酸缓冲液(0、05mol/L)X甘氨酸分子量= 75、07,0、2 mol/L甘氨酸溶液含15、01克/升。
2.邻苯二甲酸–盐酸缓冲液(0、05 mol/L)X邻苯二甲酸氢钾分子量= 204、23,0、2 mol/L邻苯二甲酸氢溶液含40、85克/升Na2HPO4分子量= 14、98,0、2 mol/L溶液为28、40克/升。
Na2HPO4-2H2O分子量= 178、05,0、2 mol/L溶液含35、01克/升。
C4H2O7·H2O分子量= 210、14,0、1 mol/L溶液为21、01克/升。
4①使用时可以每升中加入1克克酚,若最后pH值有变化,再用少量50% 氢氧化钠溶液或浓盐酸调节,冰箱保存。
②5柠檬酸C6H8O7·H2O:分子量210、14,0、1 mol/L溶液为21、01克/升。
柠檬酸钠Na3 C6H5O7·2H2O:分子量294、12,0、1 mol/L溶液为29、41克/毫升。
6.乙酸–乙酸钠缓冲液(0、2 mol/L)Na2Ac·3H2O分子量= 136、09,0、2 mol/L溶液为27、22克/升。
7.磷酸盐缓冲液(1)磷酸氢二钠–磷酸二氢钠缓冲液(0、2)Na2HPO4·2H2O分子量= 178、05,0、2 mol/L溶液为85、61克/升。
Na2HPO4·2H2O分子量= 358、22,0、2 mol/L溶液为71、64克/升。
Na2HPO4·2H2O分子量= 156、03,0、2 mol/L溶液为31、21克/升。
(2)磷酸氢二钠–磷酸二氢钾缓冲液(1/15 mol/L)Na2HPO4·2H2O分子量= 178、05,1/15M溶液为11、876克/升。
KH2PO4分子量= 136、09,1/15M溶液为9、078克/升。
8.磷酸二氢钾–氢氧化钠缓冲液(0、05M)X巴比妥钠盐分子量=206、18;0、04M溶液为8、25克/升10.Tris–盐酸缓冲液(0、05M,25℃)50毫升0、1M三羟甲基氨基甲烷(Tris)溶液与X毫升0、1N盐酸混匀后,加水稀释至100毫升。
十三、标准缓冲液pH值对照参考表
十三、标准缓冲液pH 值对照参考表pH 值标准溶液配制说明:剪开塑料袋,将粉末倒入250mL 容量瓶中,以少量无CO2蒸馏水冲洗塑料袋内壁,并在20℃稀释到刻度摇匀备用。
溶 液 的 pH 值(准确度为±0.02pH)温 度℃ 0.05M 邻苯二甲 酸氢钾pH 值 0.025M 混合 磷酸盐pH 值 0.01M 硼砂pH 值 0 4.01 6.98 9.46 5 4.00 6.959.39 10 4.00 6.92 9.33 15 4.00 6.90 9.28 20 4.00 6.88 9.23 25 4.00 6.86 9.18 30 4.01 6.85 9.14 35 4.02 6.84 9.10 40 4.03 6.84 9.07 45 4.04 6.83 9.04 50 4.06 6.83 9.02 55 4.07 6.83 8.99 60 4.09 6.84 8.97 70 4.12 6.85 8.93 80 4.16 6.86 8.89 90 4.20 6.88 8.86 954.226.898.84仪器实际读值与标准有时会有±1个字的误差序 言本说明书详细说明了广州汇谷环保技术有限公司2200型pH/ORP 在线分析仪的使用方法,涵盖了2200型在线pH/ORP 控制器和传感器的应用模式,如果在使用中有任何疑问,请立即与最近的授权经销商联系。
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标准缓冲液的配制方法
13.硼砂-氢氧化钠缓冲液(0.05M 硼酸根)
o X 毫升 0.05M 硼砂+Y 毫升 0.2NNaOH 加水稀释至 200 毫升
-专 io pH
X
9.3
50
9.4
50
b 9.6
50
Y
pH
X
6.0
9.8
50
11.0
10.0
0.2V 盐酸 pH
pH(20℃) 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0
X (毫升) 5 5 5 5 5 5
Y(毫升) 2.963 3.500 3.950 4.280 4.520 4.680
0.04M 巴比妥钠溶液(毫升)
0.2N 盐酸(毫升)
o 6.8
100
18.4
8.4 100
5.21
0.3 mol/L HAc(毫升)
9.25 8.80 8.20 7.35 6.30 5.10
0.2 mol/L
pH(18℃) NaAc(毫升)
4.8
5.90
5.0
7.00
5.2
7.90
5.4
8.60
5.6
9.10
5.8
9.40
Na2Ac·3H2O 分子量 = 136.09,0.2 mol/L 溶液为 27.22 克/升。
Na2HPO4 分子量 = 14.98,0.2 mol/L 溶液为 28.40 克/升。 Na2HPO4-2H2O 分子量 = 178.05,0.2 mol/L 溶液含 35.01 克/升。
Y 11.4 8.2 6.4 5.0
Y 1.470 0.990 0.597 0.263
0.1mol/L 柠檬酸 (毫升) 9.28 8.85 8.40 7.91 7.37 6.78 6.15 5.45 4.55 3.53 2.61 1.83 1.27 0.85 0.55
生物实验中常见buffer的配制
常用缓冲溶液配置方法常用缓冲溶液得配制方法1.甘氨酸–盐酸缓冲液(0、05mol/L)X甘氨酸分子量= 75、07,0、2 mol/L甘氨酸溶液含15、01克/升。
2.邻苯二甲酸–盐酸缓冲液(0、05 mol/L)X邻苯二甲酸氢钾分子量= 204、23,0、2 mol/L邻苯二甲酸氢溶液含40、85克/升Na2HPO4分子量= 14、98,0、2 mol/L溶液为28、40克/升。
Na2HPO4-2H2O分子量= 178、05,0、2 mol/L溶液含35、01克/升。
C4H2O7·H2O分子量= 210、14,0、1 mol/L溶液为21、01克/升。
4①使用时可以每升中加入1克克酚,若最后pH值有变化,再用少量50% 氢氧化钠溶液或浓盐酸调节,冰箱保存。
②5柠檬酸C6H8O7·H2O:分子量210、14,0、1 mol/L溶液为21、01克/升。
柠檬酸钠Na3 C6H5O7·2H2O:分子量294、12,0、1 mol/L溶液为29、41克/毫升。
6.乙酸–乙酸钠缓冲液(0、2 mol/L)Na2Ac·3H2O分子量= 136、09,0、2 mol/L溶液为27、22克/升。
7.磷酸盐缓冲液(1)磷酸氢二钠–磷酸二氢钠缓冲液(0、2)Na2HPO4·2H2O分子量= 178、05,0、2 mol/L溶液为85、61克/升。
Na2HPO4·2H2O分子量= 358、22,0、2 mol/L溶液为71、64克/升。
Na2HPO4·2H2O分子量= 156、03,0、2 mol/L溶液为31、21克/升。
(2)磷酸氢二钠–磷酸二氢钾缓冲液(1/15 mol/L)Na2HPO4·2H2O分子量= 178、05,1/15M溶液为11、876克/升。
KH2PO4分子量= 136、09,1/15M溶液为9、078克/升。
8.磷酸二氢钾–氢氧化钠缓冲液(0、05M)X巴比妥钠盐分子量=206、18;0、04M溶液为8、25克/升10.Tris–盐酸缓冲液(0、05M,25℃)50毫升0、1M三羟甲基氨基甲烷(Tris)溶液与X毫升0、1N盐酸混匀后,加水稀释至100毫升。
PH计校准及缓冲液配置
标准缓冲溶液(均用pH标准缓冲物质配制)1.1 苯二甲酸氢钾标准缓冲溶液:c(KHC8H4O4)=0.05 mol/L(25℃时,pH=4.003)。
苯二甲酸氢钾的pH标准缓冲物质,有小塑料袋和瓶装两种,配制方法如下:a)袋装配制法:在250 mL(或500 mL)量瓶中(根据袋中标准缓冲物质量,选择量瓶大小),按袋上的说明配制成所需的浓度。
保存于聚乙烯瓶中。
b)瓶装配制法:称取5.10 g苯二甲酸氢钾(KHC8H4O4预先在115℃±5℃,烘2~3 h,于干燥器中冷却),溶于水并稀释至500 mL,混匀。
保存于聚乙烯瓶中。
1.2 0.025 mol/L磷酸二氢钾(KH2PO4)和0.025 mol/L磷酸氢二钠(Na2HPO4)混合标准缓冲溶液(25℃时,pH=6.864):磷酸二氢钾和磷酸氢二钠的pH标准缓冲物质,有小塑料袋装(混合磷酸盐)和瓶装(两种pH 标准缓冲物质分别包装)两种。
配制方法如下:a)袋装配制法:在量瓶(根据袋上说明确定量瓶大小)中按袋上说明配制成所需浓度后,保存于聚乙烯瓶中。
b)瓶装配制法:迅速称取3.40 g磷酸二氢钾(KH2PO4)和3.55 g磷酸氢二钠(Na2HPO4)(均预先在115±5℃烘2~3 h,于干燥器中冷却)溶于蒸馏水,转入1 000 mL量瓶中,加水至标线,混匀。
1.3 0.008 695 mol/L磷酸二氢钾(KH2PO4)和0.030 43 mol/L磷酸氢二钠(Na2HPO4)标准混合缓冲溶液(25℃时,pH=7.413):磷酸二氢钾和磷酸氢二钠两种pH标准缓冲物质分别用瓶包装,配制方法如下:迅速称取1.18 g磷酸二氢钾和4.31 g磷酸氢二钠(均预先在115℃±5℃烘2~3 h,于干燥器中冷却),溶于水,全量移入1 000 mL量瓶中,加水至标线,混匀。
保存于聚乙烯瓶中。
1.4 硼砂标准缓中溶液:c(Na2B4O7·10H2O)=0.010 mol/L(25℃时,pHs=9.182)。
标准缓冲液的配制方法和PH计校正液(带目录)
标准缓冲液的配制⽅法和PH计校正液(带⽬录)标准缓冲液的配制及常⽤数据⼀、标准缓冲液pH值与温度对照表 (2)⼆、常⽤缓冲溶液的配制⽅法 (2)1.⽢氨酸–盐酸缓冲液(0.05mol/L) (2)2.邻苯⼆甲酸–盐酸缓冲液(0.05 mol/L) (2)3.磷酸氢⼆钠–柠檬酸缓冲液 (2)4.柠檬酸–氢氧化钠-盐酸缓冲液 (3)5.柠檬酸–柠檬酸钠缓冲液(0.1 mol/L) (3)6.⼄酸–⼄酸钠缓冲液(0.2 mol/L) (3)7.磷酸盐缓冲液 (3)8.磷酸⼆氢钾–氢氧化钠缓冲液(0.05M) (4)9.巴⽐妥钠-盐酸缓冲液(18℃) (4)10.Tris–盐酸缓冲液(0.05M,25℃) (4)1×TE Buffer (5)50×TAE Buffer 配制⽅法: (5)马来酸 M=116 (5)11.硼酸–硼砂缓冲液(0.2M硼酸根) (5)11.硼酸-硼砂缓冲液(0.2M硼酸根) (6)12.⽢氨酸–氢氧化钠缓冲液(0.05M) (6)13.硼砂-氢氧化钠缓冲液(0.05M硼酸根) (6)14.碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液(0.1M) (6)15.“PBS”缓冲液 (6)三、实验室中常⽤酸碱的⽐重和浓度 (7)四、硫酸铵饱和度的常⽤表 (8)常见蛋⽩质分⼦量参考值(单位:dalton) (8)常见蛋⽩质等电点参考值(单位:pH) (9)元素的原⼦量表 (10)PH计校正溶液配置的标准⽅法 (13)⼀、标准缓冲液pH值与温度对照表⼆、常⽤缓冲溶液的配制⽅法1.⽢氨酸–盐酸缓冲液(0.05mol/L)⽢氨酸分⼦量= 75.07,0.2 mol/L⽢氨酸溶液含15.01克/升。
2.邻苯⼆甲酸–盐酸缓冲液(0.05 mol/L)X3.磷酸氢⼆钠–柠檬酸缓冲液Na 24Na 2HPO 4-2H 2O 分⼦量 = 178.05,0.2 mol/L 溶液含35.01克/升。
C 4H 2O 7·H 2O 分⼦量 = 210.14,0.1 mol/L 溶液为21.01克/升。
标准缓冲液pH值与温度对照表
标准缓冲液pH 值与温度对照表温度四草酸氢钾邻苯二甲酸氢钾混合磷酸盐硼砂℃0.05M0.05M0.025M0.01M5 1.67 4.00 6.959.3910 1.67 4.00 6.029.3315 1.67 4.00 6.909.2820 1.68 4.00 6.889.2325 1.68 4.00 6.869.1830 1.68 4.01 6.859.1435 1.69 4.02 6.849.11常用缓冲溶液的配制方法1.甘氨酸–盐酸缓冲液( 0.05mol/L )X 毫升 0.2 mol/L甘氨酸 +Y毫升 0.2 mol/L HCI,再加水稀释至200 毫升pH X Y pH X Y2.05044.03.05011.42.45032.43.2508.22.65024.23.450 6.42.85016.83.650 5.0甘氨酸分子量 = 75.07 ,0.2 mol/L甘氨酸溶液含15.01 克/ 升。
2.邻苯二甲酸–盐酸缓冲液( 0.05 mol/L )X 毫升 0.2 mol/L邻苯二甲酸氢钾 + 0.2 mol/L HCl,再加水稀释到20 毫升pH(20℃)X Y pH(20℃)X Y2.25 4.0703.25 1.4702.453.9603.450.9902.653.2953.650.5972.85 2.6423.850.2633.05 2.022邻苯二甲酸氢钾分子量 = 204.23,0.2 mol/L邻苯二甲酸氢溶液含40.85 克/ 升3.磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液0.2mol/L0.1mol/L0.2mol/L0.1mol/LpH Na2HPO4柠檬酸pH Na2HPO4柠檬酸(ml)(ml)(ml)(ml)2.20.4010.60 5.210.729.282.4 1.2418.76 5.411.158.852.6 2.1817.82 5.611.608.402.83.1716.83 5.812.097.913.04.1115.896.012.637.373.24.9415.066.213.22 6.783.4 5.7014.30 6.413.85 6.153.6 6.4413.56 6.614.555.453.87.1012.90 6.815.454.554.07.7112.297.016.47 3.534.28.2811.727.217.39 2.614.48.8211.187.418.17 1.834.69.3510.657.618.73 1.274.89.8610.147.819.150.855.010.309.708.019.450.55 Na2HPO4分子量 = 142.98,0.2 mol/L溶液为 28.40克/ 升。
磷酸缓冲液ph值与浓度对照表
磷酸缓冲液ph值与浓度对照表
磷酸缓冲液是一种常用的实验室缓冲液,它可以在不同的pH 值下提供稳定的酸碱环境。
以下是磷酸缓冲液在不同浓度下的pH 值对照表。
请注意,这里给出的数值仅供参考,实际制备时可能会有一些差异,具体的数值可能取决于实验室中使用的具体磷酸盐和实验条件。
这个表格中的数值是一些常见浓度下的典型pH值。
如果你需要在特定pH范围内使用磷酸缓冲液,可以根据这个表格选择合适的浓度,或者根据需要调整浓度。
制备磷酸缓冲液时,最好使用精确的实验室仪器来测量pH值,以确保得到所需的缓冲效果。
标准缓冲液pH值与温度对照表【范本模板】
标准缓冲液pH值与温度对照表常用缓冲溶液的配制方法1.甘氨酸–盐酸缓冲液(0.05mol/L)2.邻苯二甲酸–盐酸缓冲液(0.05 mol/L)3.磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液Na2HPO4分子量 = 142.98,0.2 mol/L溶液为28。
40克/升。
Na2HPO4·2H2O分子量 = 178。
05,0。
2 mol/L溶液含35.61克/升。
C4H2O7·H2O分子量 = 210.14,0.1 mol/L溶液为21。
01克/升。
4.柠檬酸–氢氧化钠—盐酸缓冲液①使用时可以每升中加入1克克酚,若最后pH值有变化,再用少量50%氢氧化钠溶液或浓盐酸调节,冰箱保存。
②柠檬酸C6H8O7·H2O:分子量210.14,0.1 mol/L溶液为21。
01克/升。
6872柠檬酸钠Na 3 C 6H 5O 7·2H 2O:分子量294。
12,0.1 mol/L 溶液为29。
41克/毫升.227.磷酸盐缓冲液242NaH 2PO 4·2H 2O 分子量 = 156.03,0.2 mol/L 溶液为31.21克/升.242KH 2PO 4分子量 = 136.09,1/15M 溶液为9.078克/升。
8.磷酸二氢钾–氢氧化钠缓冲液(0.05M )10.Tris –盐酸缓冲液(0.05M ,25℃)50毫升0。
1M 三羟甲基氨基甲烷(Tris )溶液与X 毫升0.1N 盐酸混匀后,加水稀释至100毫升。
232升。
Tris 溶液可从空气中吸收二氧化碳,使用时注意将瓶盖严.2472硼酸H 2BO 3,分子量=61。
84,0.2M 溶液为12。
37克/升。
硼砂易失去结晶水,必须在带塞的瓶中保存.2472硼酸H 2BO 3,分子量=61.84, 0。
2M 溶液为12.37克/升。
硼砂易失去结晶水,必须在带塞的瓶中保存.12.甘氨酸–氢氧化钠缓冲液(0。
05M)13.硼砂—氢氧化钠缓冲液(0.05M 硼酸根)14.碳酸钠—碳酸氢钠缓冲液(0。
生物实验中常见buffer的配制
常用缓冲溶液配置方法常用缓冲溶液的配制方法1.甘氨酸–盐酸缓冲液(0.05mol/L)X甘氨酸分子量= 75.07,0.2 mol/L甘氨酸溶液含15.01克/升。
2.邻苯二甲酸–盐酸缓冲液(0.05 mol/L)X邻苯二甲酸氢钾分子量= 204.23,0.2 mol/L邻苯二甲酸氢溶液含40.85克/升Na2HPO4分子量= 14.98,0.2 mol/L溶液为28.40克/升。
Na2HPO4-2H2O分子量= 178.05,0.2 mol/L溶液含35.01克/升。
C4H2O7·H2O分子量= 210.14,0.1 mol/L溶液为21.01克/升。
4①使用时可以每升中加入1克克酚,若最后pH值有变化,再用少量50%氢氧化钠溶液或浓盐酸调节,冰箱保存。
②5柠檬酸C6H8O7·H2O:分子量210.14,0.1 mol/L溶液为21.01克/升。
柠檬酸钠Na3 C6H5O7·2H2O:分子量294.12,0.1 mol/L溶液为29.41克/毫升。
6.乙酸–乙酸钠缓冲液(0.2 mol/L)Na 2Ac ·3H 2O 分子量 = 136.09,0.2 mol/L 溶液为27.22克/升。
7.磷酸盐缓冲液Na 2HPO 4·2H 2O 分子量 = 178.05,0.2 mol/L 溶液为85.61克/升。
Na 2HPO 4·2H 2O 分子量 = 358.22,0.2 mol/L 溶液为71.64克/升。
Na 2HPO 4·2H 2O 分子量 = 156.03,0.2 mol/L 溶液为31.21克/升。
Na2HPO4·2H2O分子量= 178.05,1/15M溶液为11.876克/升。
KH2PO4分子量= 136.09,1/15M溶液为9.078克/升。
8.磷酸二氢钾–氢氧化钠缓冲液(0.05M)X巴比妥钠盐分子量=206.18;0.04M溶液为8.25克/升10.Tris–盐酸缓冲液(0.05M,25℃)50毫升0.1M三羟甲基氨基甲烷(Tris)溶液与X毫升0.1N盐酸混匀后,加水稀释至100毫三羟甲基氨基甲烷(Tris)HOCH2CH2OH HOCH2NH2 C分子量=121.14;0.1M溶液为12.114克/升。
药典三部(2015版)-通则-0631pH值测定法
0631 pH值测定法pH值是水溶液中氢离子活度的方便表示方法。
pH值定义为水溶液中氢离子活度(aH+)的负对数,即pH=-lg aH+,但氢离子活度却难以由实验准确测定。
为实用方便,溶液的pH值规定为由下式测定:pH=pHs—式中 E为含有待测溶液(pH)的原电池电动势,V;ES为含有标准缓冲液(pHS)的原电池电动势,V;k为与温度(t,℃)有关的常数。
k=0.05916+0.000198(t—25)由于待测物的电离常数、介质的介电常数和液接界电位等诸多因素均可影响pH值的准确测量,所以实验测得的数值只是溶液的表观pH值,它不能作为溶液氢离子活度的严格表征。
尽管如此,只要待测溶液与标准缓冲液的组成足够接近,由上式测得的pH值与溶液的真实pH还是颇为接近的。
溶液的pH值使用酸度计测定。
水溶液的pH值通常以玻璃电极为指示电极、饱和甘汞电极或银-氯化银电极为参比电极进行测定。
酸度计应定期进行计量检定,并符合国家有关规定。
测定前,应采用下列标准缓冲液校正仪器,也可用国家标准物质管理部门发放的标示pH值准确至0.01pH单位的各种标准缓冲液校正仪器。
1、仪器校正用的标准缓冲液(1)草酸盐标准缓冲液精密称取在54℃±3℃干燥4~5小时的草酸三氢钾12.71g,加水使溶解并稀释至1000ml。
(2)苯二甲酸盐标准缓冲液精密称取在115℃±5℃干燥2~3小时的邻苯二甲酸氢钾10.21g,加水使溶解并稀释至1000ml。
(3)磷酸盐标准缓冲液精密称取在115℃±5℃干燥2~3小时的无水磷酸氢二钠3.55g与磷酸二氢钾3.40g,加水使溶解并稀释至1000ml。
(4)硼砂标准缓冲液精密称取硼砂3.81g(注意避免风化),加水使溶解并稀释至1000ml,置聚乙烯塑料瓶中,密塞,避免空气中二氧化碳进入。
(5)氢氧化钙标准缓冲液于25℃,用无二氧化碳的水和过量氢氧化钙经充分振摇制成饱和溶液,取上清液使用。
标准缓冲液的配制
0℃
5℃
10℃
15℃
20℃
25℃
30℃
35℃
40℃
9.46
9。40
9.33
9。27
9.22
9.18
9.14
9。10
9.06
不同温度时的pH值(pH in different temperatures)
45℃
50℃
55℃
60℃
-
磷酸盐标准缓冲溶液
分别称取在(115.0±5.0)℃干燥2~3h的磷酸氢二钠(Na2HPO4)(3.53±0.01)g和磷酸二氢钾(KH2PO4) (3.39±0.01)g,溶于预先煮沸过15~30min并迅速冷却的蒸馏水中,并稀释至1000ml(注:可用于酸度计校准)
不同温度时的pH值(pH in different temperatures)
0℃
5℃
10℃
15℃
20℃
25℃
30℃
35℃
40℃
—
-
-
-
—
3。56
3。55
3。55
3.55
不同温度时的pH值(pH in different temperatures)
45℃
50℃
55℃
60℃
70℃
80℃
90℃
95℃
-
3.55
3.55
3.55
3.56
3.58
3.61
3。65
3.67
—
苯二甲酸氢盐标准缓冲溶液
25℃
30℃
35℃
40℃
草酸盐标准缓冲溶液
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常用蛋白质分子量标准参照物
高分子量标准参照 蛋白质 肌球蛋白 β-半乳糖苷酶 磷酸化酶B 牛血清清蛋白 过氧化氢酶 醛缩酶 中分子量标准参物 低分子量标准参照 Mr Mr 蛋白质 97 400 212 000 磷酸化酶B 66 200 116 000 牛血清清蛋白 55 000 97 400 谷氨酸脱氢酶 42 700 66 200 卵清蛋白 40 000 57 000 醛缩酶 31 000 40 000 碳酸酐酶 21 500 大豆胰蛋白酶抑制剂 14 400 溶菌酶 蛋白质 碳酸酐酶 大豆胰蛋白酶制剂 马心肌球蛋白 溶菌酶 肌球蛋白(F1) 肌球蛋白(F2) 肌球蛋白(F3) Mr 31 000 21 500 16 900 14 400 8 100 6 200 2 500
(四)凝胶过滤层析介质的技术数据
凝胶过滤介质 名称 分离范围 Superdex 30 Superdex 75 Superdex200 Superose 6 Superose 12 Sephacryl S-100 HR Sephacryl S-200 HR Sephacryl S-300 HR Sephacryl S-400 HR Sepharose 6 Fast Flow Sepharose 4 Fast Flow Sepharose 2B Sepharose 4B Sepharose 6B Sepharose CL-2B Sepharose CL-4B Sepharose CL-6B 45~165 60000~20×105 10000~4×106 45~165 颗粒 大小 (μm) 24~44 <10000 24~44 3000~70000 24~44 3 000 10000~600000 20~40 20~40 5000~5×106 25~75 1000~300000 1000~ 100000 25~75 5000~250000 10000~1.5×106 20000~8×106 10000~4×106 60000~20×106 70000~40×106 60000~20×106 10000~4×106 70000~40×106 45~165 45~165 60~200 25~75 25~75 平均90 平均90 60~200 特性/应用 肽类、寡糖、小蛋白等 重组蛋白、细胞色素 单抗、大蛋白 蛋白、肽类、多糖、核酸 蛋白、肽类、寡糖、多糖 肽类、小蛋白 蛋白,如清蛋白 蛋白、抗体 多糖、具延伸结构的大分 子如蛋白多糖、脂质体 巨大分子 巨大分子如重组乙型肝 炎表面抗原 pH稳定性工作 耐压(Mpa) 最 快 流速 (cm/h) 0.3 100 3~12 0.3 100 3~12 0.3 100 3~12 0.4 30 3~12 0.7 30 3~12 0.2 20~39 3~11 3~11 3~11 3~11 2~12 2~12 4~9 0.2 0.2 0.2 0.1 0.1 0.004 0.008 0.02 0.005 20~39 20~39 20~39 300 250 10 11.5 14 15
9~1162来自2~52~10
9~11
6
2
2~5
12~15 12~15
24 24
3 3
72 16
4000~1.5×105
2~10 2~10
15~20 15~20
48 48
5 5
47 11
20~30
72
5
21
干粉10~40
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标准缓冲液pH值与温度对照表
标准缓冲液pH值与温度对照表
温度 ℃ 5 10 15 20 25 30 35 四草酸氢钾 0.05M 1.67 1.67 1.67 1.68 1.68 1.68 1.69 邻苯二甲酸氢钾 0.05M 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 4.01 4.02 混合磷酸盐 0.025M 6.95 6.02 6.90 6.88 6.86 6.85 6.84 硼砂 0.01M 9.39 9.33 9.28 9.23 9.18 9.14 9.11
蛋白、大分子复合物、病毒、 4~9 不对称分子如核酸和多糖(蛋 4~9 白多糖) 蛋白、多糖 蛋白、多糖 3~13
0.012 0.02
26 30
蛋白、大分子复合物、病毒、 3~13 不对称分子如核酸和多糖(蛋 白多糖) 蛋白、多糖 蛋白、多糖
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标准缓冲液pH值与温度对照表
较大蛋白质分离 SephadexG-200 SephadexG-200 Superfine 5000~1.5×105 干粉40~120 干粉10~40 较大蛋白质分离
2~10
18~22
72
5
5.6
2~10 2~10
5000~6×105 5000~2.5×105
30~40 20~25
<700 <1500 1000~5000
干粉40~120 干粉40~120 干粉100~300 干粉50~150 脱盐及交换缓冲液用 脱盐及交换缓冲液用 脱盐及交换缓冲液用 干粉20~80 脱盐及交换缓冲液用 小分子蛋白质分离 干粉10~40
2~13 2~13 2~13
2~3 2.5~3.5 4~6
2~4 3.8 200~2 000 Bio-gel-P-2 1 600 2~4 5.8 500~4 000 3 600 Bio-gel-P-4 2~4 8.8 1 000~5 000 4 600 Bio-gel-P-6 2~4 12.4 5 000~17 000 10 000 Bio-gel-P-10 10~12 14.9 20 000~50 000 30 000 Bio-gel-P-30 10~12 19.0 30 000~70 000 60 000 Bio-gel-P-60 24 19.0 40 000~100 000 100 000 Bio-gel-P-100 24 24.0 50 000~150 000 150 000 Bio-gel-P-150 48 34.0 80 000~300 000 200 000 Bio-gel-P-200 48 40.0 100 000~400 000 300 000 Bio-gel-P-300 注:上述各种型号的凝胶都是亲水性的多孔颗粒,在水和缓冲溶液中很容易膨胀,生产厂为Bio-Rad Laboratories,Rich-mond, California, U. S. A. (三)琼脂糖凝胶的技术数据 (琼脂糖是琼脂内非离子型的组分,它在0 ~ 4℃,pH 4~9范围内是稳定的。) 名称、型号 凝胶内琼脂糖百分 排阻的下限(Mr) 分级分离的范围(Mr) 含量(W/W) Sagavac 10 10 1×104~2.5×105 2.5×105 Sagavac 8 8 7×105 2.5×104~7×105 Sagavac6 6 6 2×10 5×104~2×106 Sagavac4 4 15×106 2×105~15×106 Sagavac2 2 6 150×10 5×105~15×107
标准缓冲液pH值与温度对照表
凝胶过滤介质 名称
分离 范围
颗粒 大小 (μm)
特性/应用
pH 稳定性 工作
干凝胶 溶胀体积 (mL/g)
溶胀最少 平衡时间(h)
最快 流速 (cm/h)
室温
沸水
SephadexG-10 SephadexG-15 SephadexG-25 Coarse SephadexG25Medium SephadexG-25 Fine SephadexG-25 Superfine SephadexG-50 Coarse SephadexG-50 Medium SephadexG-50 Fine
层析法常用数据表及性质
(一) 离子交换纤维素 目前常用的离子交换纤维素列于下表
DEAE- 纤维素 形状 长度 (微米) 交换当量 (毫克当量/克) 蛋白吸附容量 (毫克/克) 胰岛素 牛血清清蛋白 (pH8.5) (pH8.5) 床体积(毫升/克) pH6.0 pH7.5
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2~13 小分子蛋白质分离 2~10 小分子蛋白质分离 2~10 小分子蛋白质分离 2~10 中等蛋白质分离 中等蛋白质分离 2~10 中等蛋白质分离 中等蛋白质分离 稍大蛋白质分离 稍大蛋白质分离 2~10 2~10
4~6
6
2
2~5
9~11
6
2
2~5
9~11
6
2
2~5
1500~30000 SephadexG-50 Superfine 1500~30000 SephadexG-75 SephadexG-75 Superfine SephadexG-100 SephadexG-100 Superfine SephadexG-150 SephadexG-150 Superfine 5000~3×105
750 750 850 850 溶菌酶 (pH5.0) 600 600 1,260 1,260
450 450 660 660 7S-γ球蛋白 (pH5.0) 150 150 400 400
7.7 8.3 6.0 6.0 pH5.0 7.7 9.1 6.8 6.8
7.7 9.1 6.3 6.3 pH7.5 7.7 9.1 6.7 6.7
标准缓冲液pH值与温度对照表
DE-22 DE-23 DE-32 DE-52 CM-纤维素 CM-22 CM-23 CM-32 CM-52
改良纤维性 * 同上(除细粒) 微粒性(干粉) 同上(溶胀)