Westernblot技术服务为了适应广大生物医学领域科研人员及学者对

Western blot技术服务

为了适应广大生物医学领域科研人员及学者对Western blot实验日益增长的需求，为从事生命科学研究的学者提供快捷方便的服务，本公司实验室将提供Western Blotting的对外技术服务和合作。

1. Western blot：每张膜可做8个样品；收费标准：998.00元/每膜。

2. 检测方法：ECL化学发光检测法；预计完成时间：一周左右。

3. 对实验提供的样品要求：应是新鲜的组织细胞样品，需低温保存提供到我公司，用户最好提供目标蛋白相关性质

4. 实验所用试剂；除第一抗体外，所有试剂免费，用户无须另行购买。

5. 因用户所提供的样品或试剂所导致的实验问题，由用户负责。

6. 最后提供检测结果：提供转膜后曝光X胶片和试验流程报告

您还在为蛋白免疫印迹Western blot烦恼吗？我来为您解答。

问1.在做Western Blot时，PVDF膜用甲醇浸泡的目的？

答：PVDF膜用甲醇泡的目的是为了活化PVDF膜上面的正电基团，使它更容易跟带负电的蛋白质结合，做小分子的蛋白转移时多加甲醇也是这个目的。

问2.加甲醇的目的是什么？

解答：加甲醇起着一定的固定作用，因为小分子蛋白质容易转出去.(特别是在硝酸纤维素膜上，因为NC膜结合蛋白质的能力较弱)。

问3.为什么浓缩胶和分离胶的电压不一致？同样的电压可以吗？

解答：浓缩胶用的电压一般是80V,分离胶电压一般是120V. 浓缩胶的目的是使得上样的样品能够在同一条水平线上进入分离胶，如果电压太大前端的蛋白容易在后面的蛋白赶上来前进入分离胶。

问4.膜、滤纸、胶大小有何讲究？

解答：如果是用的是半干转，顺序为：阴极－》滤纸－》胶－》膜－》滤纸。滤纸的长宽分别比胶小1－2mm，而膜的长宽分别比胶大1－2mm。绝对禁忌：上下两层滤纸因为过大而相互接触，这样会短路，电流不会通过胶和滤纸。

问5.转膜时何为湿法，何为半干法？

解答：半干法和湿法转移是两种不同的转移装置下的转移系统，将膜，胶，滤纸整个浸泡在buffer的Tank 里转移的，叫湿法，电流是恒定的，时间也是根据分子量而定；用滤纸吸buffer来做转移体系的叫半干法。电流是恒定的，时间也是根据分子量而定。

问6.封闭，一抗，二抗时的温度有没什么规定呢，比如在室温里做，或者要在4度下

答：均可在室温进行，如果时间不够，一抗孵育可以先在室温进行一个小时，然后4度过夜。

问7.洗脱的时候用PBST还是TBST，也有人用PBST和TBST，到底哪个合适？

答：都可以最好用加tween20的缓冲液，也就是PBST和TBST。

问8.发光液用DAB显色好还是ECL好

答：一般说ECL比DAB更灵敏，从实验的结果来看，个人认为ECL更好些。（选择进口发光液）

问9.加上ECL发光液能看到很亮的条带，而放入显影液和定影液后，却发现条带很模糊，这是为什么？

答：显影液使用的次数太多，已经失效，更换新的显影液。显影液在使用数次后会发黄，这时要及时更换，而定影液只要是清亮的就可以一直用，（注意避光保存）