大肠杆菌检测医学PPT
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大肠菌群测定演示文稿
中国采用的进出口食品大肠菌群检测方法主要有国家标准和原国家商检局制定的行业标准。两个 标准方法在检测程序上略有不同。
国家标准
国家标准采用三步法，即乳糖发酵试验、分离培养和证实试验。 乳糖发酵试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发 酵管。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。 分离培养：将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上，36±1℃培养18-24h，
菌量、其他方法不能检测的食品，如水、乳制品及其其他食品中大 肠菌群的计数。
当前8页，总共14页。
材料
• 3.1食品样品：乳、肉、果汁、糕点、发酵调味品及其他食品。 • 3.2 菌种 阳性对照菌
– 大肠杆菌 3.3除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：
– 恒温培养箱、恒温水浴箱、 均质器、振荡器、无菌吸管或微量移液器及吸头、无 菌锥形瓶、无菌培养皿、菌落计数器等。
当前11页，总共14页。
当前12页，总共14页。
当前13页，总共14页。
第二法大肠菌群平板计数
8、 操作步骤 8.1、 样品的稀释 按6.1 进行。 8.2、 平板计数 、 选取2 个～3 个适宜的连续稀释度，每个稀释度接种两个无菌平皿，每皿1ml。同时分别取1ml生 理盐水加人两个无菌平皿作空白对照。 、 及时将15 mL-20ml冷至46℃ 的结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA ）约倾注于每个平皿中。小心旋 转平皿，将培养基与样液充分混匀，待琼脂凝固后，再加3 mL-4mlVRBA 覆盖平板表层。翻转平板 ，置于36℃±l℃ 培养18h-24h 。
、 固体和半固体样品：称取25g 样品，放人盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8
00or/min-10 000r/min 均质1 min-2 min ，或放人盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋中， 用拍击式均质器拍打1 min-2 min ，制成1:10 的样品匀液。 、 液体样品：以无菌吸管吸取25ml样品，置盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内 预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分棍匀，制成1:10 的样品匀液。
国家标准
国家标准采用三步法，即乳糖发酵试验、分离培养和证实试验。 乳糖发酵试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发 酵管。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。 分离培养：将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上，36±1℃培养18-24h，
菌量、其他方法不能检测的食品，如水、乳制品及其其他食品中大 肠菌群的计数。
当前8页，总共14页。
材料
• 3.1食品样品：乳、肉、果汁、糕点、发酵调味品及其他食品。 • 3.2 菌种 阳性对照菌
– 大肠杆菌 3.3除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：
– 恒温培养箱、恒温水浴箱、 均质器、振荡器、无菌吸管或微量移液器及吸头、无 菌锥形瓶、无菌培养皿、菌落计数器等。
当前11页，总共14页。
当前12页，总共14页。
当前13页，总共14页。
第二法大肠菌群平板计数
8、 操作步骤 8.1、 样品的稀释 按6.1 进行。 8.2、 平板计数 、 选取2 个～3 个适宜的连续稀释度，每个稀释度接种两个无菌平皿，每皿1ml。同时分别取1ml生 理盐水加人两个无菌平皿作空白对照。 、 及时将15 mL-20ml冷至46℃ 的结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA ）约倾注于每个平皿中。小心旋 转平皿，将培养基与样液充分混匀，待琼脂凝固后，再加3 mL-4mlVRBA 覆盖平板表层。翻转平板 ，置于36℃±l℃ 培养18h-24h 。
、 固体和半固体样品：称取25g 样品，放人盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8
00or/min-10 000r/min 均质1 min-2 min ，或放人盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋中， 用拍击式均质器拍打1 min-2 min ，制成1:10 的样品匀液。 、 液体样品：以无菌吸管吸取25ml样品，置盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内 预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分棍匀，制成1:10 的样品匀液。
肠杆菌科细菌的鉴定PPT课件
#43;
20
实验结果
表 肠杆菌科部分细菌重要生物学特征
细
糖发酵试验
吲哚 甲基 VP
菌
红
编 号
葡 萄 糖
乳 糖
麦 芽 糖
甘 露 醇
蔗 糖
B3 ⊕ ⊕ ⊕ ⊕ - + +
-
B4 ⊕ - - ⊕ - - -
-
B5 ⊕ ⊕ ⊕ ⊕ - + +
-
枸 动 志贺 沙门
橼 力 菌属 菌属
酸
多价 多价
17
实验结果
❖萄发酵管——甘露醇 三支葡萄糖发酵管依次分别接种培
养了可疑大肠杆菌、可疑沙门杆菌、可 疑志贺杆菌。
✓试管均从原来蓝色变为黄色， ✓并且小试管均有小气泡， ✓所以三种可疑菌均有产气产酸。 ✓其中沙门菌颜色较浅，产酸较少。
18
实验结果
❖萄发酵管——乳糖 三支葡萄糖发酵管依次分别接种培
养了可疑大肠杆菌、可疑沙门杆菌、可 疑志贺杆菌。
料
单糖发酵管
硫酸亚铁半固体培养基
普通肉汤培养基
西蒙枸櫞酸盐培养基
4
实验方法
配置 培养基
分离菌 株
纯化培 养
血清学 鉴定
生化反 应鉴别
❖紫黑色的单个菌落，可初步定为可疑大肠埃希菌
菌不号落发。，酵编 乳❖清❖取待号糖放洁环；的在净冷光，玻载却滑可片玻后无疑上片用❖麦水色志，，环每透贺然，2支平❖以在明菌后株甘，取灭菌板的属烧可，西菌种肠单 或环分疑蔗接斜蒙个沙。杆离菌）种面菌门枸菌法落各环菌落菌櫞混分接1取苔可属支酸合离种上1初菌，盐~溶菌以蘸2步落环琼蛋液株取下定，志脂白涂：少为编培贺斜胨布量养菌面水细于基属菌一1E：多支M与支B价糖，平血，诊发硫板清葡断酵酸混培萄血管亚养糖（铁基蛋葡琼白，脂胨乳半， ❖编❖录取 观号。双察的（糖可可 用合❖观铁疑轻疑酸，察高细轻菌碱先凝层 菌摇落指在集琼在动，示血现脂双载送剂清象斜糖玻固❖养检3边。7面铁片接测℃缘体24上❖待培琼，双恒处种培-4挑养脂一，用糖温将完8养小基斜边选铁箱细3。毕基7，面摇时琼培菌菌℃后1无的动脂养研支候落恒，菌生，斜2磨，观形温4试操长一面-开普察态4箱管作现边和8，通记小、倒置接象将琼然时肉录颜置种并载于脂后。汤于色培已记玻高再试琼表不片养混管脂格稍一匀2架4微半中。致h上倾固。的后，斜体菌。送对培落3光7养保℃基存恒1温支箱。培
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实验结果
表 肠杆菌科部分细菌重要生物学特征
细
糖发酵试验
吲哚 甲基 VP
菌
红
编 号
葡 萄 糖
乳 糖
麦 芽 糖
甘 露 醇
蔗 糖
B3 ⊕ ⊕ ⊕ ⊕ - + +
-
B4 ⊕ - - ⊕ - - -
-
B5 ⊕ ⊕ ⊕ ⊕ - + +
-
枸 动 志贺 沙门
橼 力 菌属 菌属
酸
多价 多价
17
实验结果
❖萄发酵管——甘露醇 三支葡萄糖发酵管依次分别接种培
养了可疑大肠杆菌、可疑沙门杆菌、可 疑志贺杆菌。
✓试管均从原来蓝色变为黄色， ✓并且小试管均有小气泡， ✓所以三种可疑菌均有产气产酸。 ✓其中沙门菌颜色较浅，产酸较少。
18
实验结果
❖萄发酵管——乳糖 三支葡萄糖发酵管依次分别接种培
养了可疑大肠杆菌、可疑沙门杆菌、可 疑志贺杆菌。
料
单糖发酵管
硫酸亚铁半固体培养基
普通肉汤培养基
西蒙枸櫞酸盐培养基
4
实验方法
配置 培养基
分离菌 株
纯化培 养
血清学 鉴定
生化反 应鉴别
❖紫黑色的单个菌落，可初步定为可疑大肠埃希菌
菌不号落发。，酵编 乳❖清❖取待号糖放洁环；的在净冷光，玻载却滑可片玻后无疑上片用❖麦水色志，，环每透贺然，2支平❖以在明菌后株甘，取灭菌板的属烧可，西菌种肠单 或环分疑蔗接斜蒙个沙。杆离菌）种面菌门枸菌法落各环菌落菌櫞混分接1取苔可属支酸合离种上1初菌，盐~溶菌以蘸2步落环琼蛋液株取下定，志脂白涂：少为编培贺斜胨布量养菌面水细于基属菌一1E：多支M与支B价糖，平血，诊发硫板清葡断酵酸混培萄血管亚养糖（铁基蛋葡琼白，脂胨乳半， ❖编❖录取 观号。双察的（糖可可 用合❖观铁疑轻疑酸，察高细轻菌碱先凝层 菌摇落指在集琼在动，示血现脂双载送剂清象斜糖玻固❖养检3边。7面铁片接测℃缘体24上❖待培琼，双恒处种培-4挑养脂一，用糖温将完8养小基斜边选铁箱细3。毕基7，面摇时琼培菌菌℃后1无的动脂养研支候落恒，菌生，斜2磨，观形温4试操长一面-开普察态4箱管作现边和8，通记小、倒置接象将琼然时肉录颜置种并载于脂后。汤于色培已记玻高再试琼表不片养混管脂格稍一匀2架4微半中。致h上倾固。的后，斜体菌。送对培落3光7养保℃基存恒1温支箱。培
大肠杆菌检测课件
感性高，特异性强。 PPT学习交流
Your text Yo14ur text
讨论与展望
近年来，世界各国针对水环境和食品中大肠杆菌的 快速检测技术展开了大量研究，在已知的检测方法中均 有自己的优势与不足。随着科学和生物生化技术的发展， 食品中大肠杆菌的检测计数也将趋于提高精度与速度， 不断改进与完善才能切实解决食品安全问题，为人品生 活提供保障。
将冷却至45℃±0.5℃的结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）
倾注于平皿内，混匀并凝固后加入3~4mL的VRBA-MUG
覆盖平板表层，36±1℃下培养18~24h，之后在紫外灯下
计数。该方法是将样本做一定比例的稀释，其中的微生物
被稀释后分散成单个细胞，然后在一定的条件下进行培养
一直到生长成能用肉眼观察的菌落，最后通过样本数量和
Your text
PPT学习交流
Your text Yo9ur text
检测原理
PCR检测技术是在1971年首先被Kleppe等提出， 1985年才作为一种检测方法获得认可。PCR检测技术是 一种聚合酶链反应，其采用变性—退火—延伸三个步骤 使DNA基因能够在体外实现解旋解链，类似于一种体外 增加、复制形式。史云等建立了用于肉及肉制品中大肠 杆菌的两重PCR检测方法，但该方法需要较长的时间的 样品纯化处理，且对操作人员的专业知识的要求也较高。
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Your text Your text
Your text Yo11ur text
检测原理
免疫磁珠技术是一种大肠杆菌的分离技术。其原理是 以磁珠为抗体载体，磁珠和大肠杆菌结合，通过磁力来实 现力学移动进而将大肠杆菌进行分离。与其他的细菌分离 方法相比，免疫磁珠技术在很大程度上提高了样本中病原 性副溶血性弧菌的检测效率。免疫磁珠技术可以快速地在 不同菌种的样本中处理不同的微生物，该方法可以大幅度 地提升检测效率。
大肠杆菌检测ppt课件
培养？
完整最新版课件
15
实验准备（2个样品/组）
培养皿：10套/组 无菌水：10支（9毫升/支） 乳糖胆盐发酵培养基： 100ml 18支试管、5ml/支 伊红美蓝琼脂培养基（EMB）:
200ml 8-10个平板
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16
下周实验
实验八 化学药剂对微生物生长的影响
完整最新版课件
17
2
完整最新1版100课0 件
3
≥24000
10 30
30 70
40 100
40 70 150
70 140 300
150 300 350
360 710 1500
360 370
440 890
470 1500
1200 1300 3800
2100 2300 3800
3800 4400 4700
13000
24000
样品中大肠菌群系以100mL（g）检样内大 肠菌群最大可能数（MPN)表示。
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3
细菌学检验程序
细菌总数
水样稀释或不稀释
倾注平板培养 37 ℃ 24小时
样品
大肠菌群
水样稀释或不稀释
第一步------ 初步发酵试验 （乳糖发酵）
37℃ 24小时
菌落计数 （取平均数报告）
第二步------ 平板分离培养 （转种鉴别培养基） 37℃ 24小时 革兰染色镜检
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8
3.分离培养
将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置 36℃±1℃温箱内，培养18h—24h，然后取出，观察菌 落形态并做革兰氏染色和证实试验。
4.证实试验
在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1—2个进行革兰 氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36℃±1℃的温箱内 培养24h±2h，观察产气情况。
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15
实验准备（2个样品/组）
培养皿：10套/组 无菌水：10支（9毫升/支） 乳糖胆盐发酵培养基： 100ml 18支试管、5ml/支 伊红美蓝琼脂培养基（EMB）:
200ml 8-10个平板
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下周实验
实验八 化学药剂对微生物生长的影响
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≥24000
10 30
30 70
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40 70 150
70 140 300
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360 710 1500
360 370
440 890
470 1500
1200 1300 3800
2100 2300 3800
3800 4400 4700
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24000
样品中大肠菌群系以100mL（g）检样内大 肠菌群最大可能数（MPN)表示。
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细菌学检验程序
细菌总数
水样稀释或不稀释
倾注平板培养 37 ℃ 24小时
样品
大肠菌群
水样稀释或不稀释
第一步------ 初步发酵试验 （乳糖发酵）
37℃ 24小时
菌落计数 （取平均数报告）
第二步------ 平板分离培养 （转种鉴别培养基） 37℃ 24小时 革兰染色镜检
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8
3.分离培养
将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置 36℃±1℃温箱内，培养18h—24h，然后取出，观察菌 落形态并做革兰氏染色和证实试验。
4.证实试验
在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1—2个进行革兰 氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36℃±1℃的温箱内 培养24h±2h，观察产气情况。
《大肠菌群测定》PPT课件
GB4789.3-2010 大肠菌群测定
GB4789.3-2010 大肠菌群测 定
• 定义：大肠菌群：一群在36℃培养48h可发酵 乳糖、产酸产气的需氧和 兼性厌氧革兰氏染色阴性 无芽孢杆菌。该菌主要来 源自人畜粪便，作为粪便 污染指标评价食品的卫生 状况，推断 食品中肠道致 病菌污染的可能。
2
大肠菌群的食品卫生学意义
标准MPN表有64个组合，而现标准MPN表只有40个 组合。 3 报告单位不同。现报告单位为g/ml，而原报告单 位是100g/ml。
10
关于新国标大肠菌群MPN表的理解问题
新国标的MPN表的基准问题。
1、新国标的MPN表采用了3个稀释度，分别是十 倍－百倍－千倍，加样量是3管，每管1毫升，意 味着加入样品的量为0.333克。
大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语， 它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的 一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方 面并非完全一致。一般认为可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸
杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。
大肠杆菌是人和温血动物肠道 内普遍存在的细菌，是粪便中 的主要菌种产。气一克般雷生白活氏在菌人大 肠中并不致病，但它侵入人体 一些部位时，可引起感染 。
4
第一法 大肠菌群MPN计数法
• 初发酵：月桂基硫酸盐蛋白胨肉汤（LST）替代 了乳糖胆盐发酵培基
• 确证实验：煌绿乳糖胆盐肉汤 （BGLB）替代了乳糖复发酵培 养基，取消了革兰氏染色实验
• 培养时间：由24h延长至48h • 单位：由MPN/100g变为
MPN/g
5
第一法 大肠菌群MPN计数法
12
关于新国标大肠菌群MPN表的理解问题
改变加样量的问题。 这样查表得到的数值，应该降低10倍。
GB4789.3-2010 大肠菌群测 定
• 定义：大肠菌群：一群在36℃培养48h可发酵 乳糖、产酸产气的需氧和 兼性厌氧革兰氏染色阴性 无芽孢杆菌。该菌主要来 源自人畜粪便，作为粪便 污染指标评价食品的卫生 状况，推断 食品中肠道致 病菌污染的可能。
2
大肠菌群的食品卫生学意义
标准MPN表有64个组合，而现标准MPN表只有40个 组合。 3 报告单位不同。现报告单位为g/ml，而原报告单 位是100g/ml。
10
关于新国标大肠菌群MPN表的理解问题
新国标的MPN表的基准问题。
1、新国标的MPN表采用了3个稀释度，分别是十 倍－百倍－千倍，加样量是3管，每管1毫升，意 味着加入样品的量为0.333克。
大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语， 它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的 一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方 面并非完全一致。一般认为可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸
杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。
大肠杆菌是人和温血动物肠道 内普遍存在的细菌，是粪便中 的主要菌种产。气一克般雷生白活氏在菌人大 肠中并不致病，但它侵入人体 一些部位时，可引起感染 。
4
第一法 大肠菌群MPN计数法
• 初发酵：月桂基硫酸盐蛋白胨肉汤（LST）替代 了乳糖胆盐发酵培基
• 确证实验：煌绿乳糖胆盐肉汤 （BGLB）替代了乳糖复发酵培 养基，取消了革兰氏染色实验
• 培养时间：由24h延长至48h • 单位：由MPN/100g变为
MPN/g
5
第一法 大肠菌群MPN计数法
12
关于新国标大肠菌群MPN表的理解问题
改变加样量的问题。 这样查表得到的数值，应该降低10倍。
《大肠杆菌》PPT课件
1）粘附性菌毛：在1990年Bertsching等首次报道，从 致猪水肿病的大肠杆菌分离出F18，是猪水肿病的 SLTEC菌株的一个重要的毒力因子，它有助于细菌 在猪肠黏膜上皮细胞定居和繁殖。
2）致水肿病2型类志贺毒素 (SLT-2e或SLT-2v)：系引 起猪水肿病的SLTEC所产生的一种蛋白质性细胞毒 素。
兽医生物制品学-分论
大肠杆菌
小组成员：余兆鸿 罗洪瑶 胡国帅 黄荣浩
精选ppt课件
1
第一章 大肠杆菌
大肠杆菌是革兰氏阴性杆菌。
多数是肠道的正常菌群，少数为病原菌。
精选ppt课件
2
埃希菌属 （Escherichia)
埃希菌属有5个种，其中最重要的 是大肠埃希菌俗称大肠杆菌（E.coli)， 是最常见的临床分离菌。
高达数万种。
精选ppt课件
11
鞭毛抗原（H） K或Vi抗原 菌体抗原（O）
精选ppt课件
12
血清型的表示：
根据对大肠杆菌抗原的鉴定，可用O:K:H排列 表示其血清型（抗原结构式）。
如O8:K23（L）:Hl9，即表示该菌具有O抗原8， L型K抗原23，H抗原为19。对含有蛋白质性黏附 素抗原的菌株，其黏附素抗原应并列K抗原之后。 如O8:K87，K88:Hl9中K88即为黏附素抗原F4。
于断奶后仔猪，生长快，体况健壮的仔猪常见。
精选ppt课件
23
羔羊大肠杆菌病
流行特点
主要是通过消化道感染， 其次是通过脐部感染，也有 部分是通过呼吸道感染。
发病特点及临床症状
羔羊发生一种以口鼻流沫、呼吸困难和胸膜肺炎为 主要特征的疾病。发病的羔羊据统计有121只，病羊多为 4～20日龄的羔羊，死亡54只，死亡率约44.6%，病程短， 如不及时治疗，约30min到数小时便死亡。发病的羔羊在 刚开始时体温升高，达41～42℃，精神委顿，食欲不振， 腹部胀气，继之出现呼吸困难，脉搏快而弱，口流白沫， 鼻流黏液，运动失调，卧地磨牙，头弯向一侧，最后在 昏迷中死亡，很少见有腹泻病羔。
2）致水肿病2型类志贺毒素 (SLT-2e或SLT-2v)：系引 起猪水肿病的SLTEC所产生的一种蛋白质性细胞毒 素。
兽医生物制品学-分论
大肠杆菌
小组成员：余兆鸿 罗洪瑶 胡国帅 黄荣浩
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1
第一章 大肠杆菌
大肠杆菌是革兰氏阴性杆菌。
多数是肠道的正常菌群，少数为病原菌。
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2
埃希菌属 （Escherichia)
埃希菌属有5个种，其中最重要的 是大肠埃希菌俗称大肠杆菌（E.coli)， 是最常见的临床分离菌。
高达数万种。
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11
鞭毛抗原（H） K或Vi抗原 菌体抗原（O）
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12
血清型的表示：
根据对大肠杆菌抗原的鉴定，可用O:K:H排列 表示其血清型（抗原结构式）。
如O8:K23（L）:Hl9，即表示该菌具有O抗原8， L型K抗原23，H抗原为19。对含有蛋白质性黏附 素抗原的菌株，其黏附素抗原应并列K抗原之后。 如O8:K87，K88:Hl9中K88即为黏附素抗原F4。
于断奶后仔猪，生长快，体况健壮的仔猪常见。
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23
羔羊大肠杆菌病
流行特点
主要是通过消化道感染， 其次是通过脐部感染，也有 部分是通过呼吸道感染。
发病特点及临床症状
羔羊发生一种以口鼻流沫、呼吸困难和胸膜肺炎为 主要特征的疾病。发病的羔羊据统计有121只，病羊多为 4～20日龄的羔羊，死亡54只，死亡率约44.6%，病程短， 如不及时治疗，约30min到数小时便死亡。发病的羔羊在 刚开始时体温升高，达41～42℃，精神委顿，食欲不振， 腹部胀气，继之出现呼吸困难，脉搏快而弱，口流白沫， 鼻流黏液，运动失调，卧地磨牙，头弯向一侧，最后在 昏迷中死亡，很少见有腹泻病羔。
《大肠杆菌》课件
THANKS
感谢观看
。
食物中毒通常发生在食用被污染 的肉类、奶制品、蔬菜等食品后 ，因此食品生产和加工过程中的
卫生控制至关重要。
抗生素抗性与超级细菌
抗生素是治疗细菌感染的重要药物，但长期使用抗生素会导致细菌产生抗药性。
大肠杆菌等细菌在长期接触抗生素的过程中，会逐渐适应并抵抗抗生素的作用，形 成超级细菌。
超级细菌对多种抗生素具有抗药性，给治疗带来了极大的困难，也对全球公共卫生 安全构成了严重威胁。
致病性或提高其生物合成能力，为工业生产和医疗应入探究大肠杆菌的致病机制，为开发更有效的抗 菌药物和治疗方法提供理论支持。
加强跨学科合作
加强生物学、化学、物理学等领域的跨学科合作，利用新 技术和新方法，推动大肠杆菌研究的创新发展。
提高应用价值
将大肠杆菌的研究成果应用于实际生产和医疗实践中，提 高其应用价值和社会效益。同时，需要关注伦理和安全问 题，确保研究工作的合规性和可持续性。
致病性大肠杆菌的传播途径多样，包 括动物-人传播、人-人传播和食物-人 传播。
这些致病性大肠杆菌通过食物、水或 接触污染表面进入人体，导致腹泻、 呕吐、腹痛等症状，严重时甚至会导 致休克和死亡。
食物中毒与感染
食物中毒是指食用了被致病性大 肠杆菌污染的食物而引起的急性
中毒性疾病。
感染后可能出现恶心、呕吐、腹 痛、腹泻、发热等症状，严重时 可导致脱水、电解质紊乱和休克
05
大肠杆菌的研究进展
新技术与新方法
基因组学技术
利用新一代测序技术，对大肠杆 菌基因组进行全面解析，发现新 的基因和基因变异，为研究其生 物学特性和致病机制提供基础。
蛋白质组学技术
通过蛋白质组学方法，研究大肠杆 菌的蛋白质表达和功能，揭示其在 不同环境下的适应机制和调控机制 。
大肠杆菌PPT医学课件
5、大肠杆菌的致病物质
2.黏附素：能使细菌紧密黏着在泌尿道和肠道的细胞上， 避免因排尿时尿液的冲刷和肠道的蠕动作用而被排除。 大肠杆菌粘附素的特点是具有高特异性。 3.外毒素：大肠杆菌能产多种的外毒素，包括：志贺毒 素〡和〢；耐热肠毒素〡和〢；不耐热肠毒素〡和〢。 此外，溶血素A在尿路致病性大肠杆菌所致疾病中有重 要作用。
2、大肠杆菌的常见种类
根据菌体抗原的不同，可将大肠杆菌分为150多型，其 中有16个血清型为致病性大肠杆菌，常引起流行性婴儿 腹泻和成人肋膜炎。 大肠杆菌是研究微生物遗传的重要材料，如局限性转导 就是1954年在大肠杆菌K12菌株中发现的。莱德伯格采 用两株大肠杆菌的营养缺陷型进行实验，奠定了研究细 菌接合方法学上的基础，以及基因工程的研究。
5.其他：脂胞壁多糖的类脂A具有毒性，O特异多糖有抵抗 宿主防御屏障的作用。大肠杆菌的K抗原有吞噬作用。
5、大肠杆菌的致病物质
大肠杆菌O157:H7是大肠杆菌的其中一个类型，该种病 菌常见于牛只等温血动物的肠内。这一型的大肠杆菌 会释放一种强烈的毒素，并可能导致肠管出现严重症 状，如带血腹泻。 美国在1982、1984、1993年曾三次发生O157:H7的爆发 性流行；日本曾在1996年爆发过一次波及9000多人的 大流行。O157:H7感染后的主要症状正是出血性腹泻， 严重者可伴发溶血尿毒综合征（HUS），危及生命。由 于O157:H7危害较大，且可经食物和饮用水在人群中广 泛传播。此次在德国肆虐的O104也是一种EHEC，感染 症状类似O157:H7，且毒力更为猛烈。
该菌对热的抵抗力较其他肠道杆菌强，55℃经60分钟 或60℃加热15分钟仍有部分细菌存活。在自然界的水 中可存活数周至数月，在温度较低的粪便中存活更久。 胆盐、煌绿等对大肠杆菌有抑制作用。对磺胺类、链 霉素、氯霉素等敏感，但易耐药，是由带有R因子的质 粒转移而获得的。
大肠杆菌分析课件
常见药物对大肠杆菌的抑菌效果评价
01 02
青霉素类
青霉素类药物对大肠杆菌的抑菌效果较好，但由于大肠杆菌易产生β-内 酰胺酶，使其对青霉素类药物产生耐药性，因此临床上常使用酶抑制剂 复合制剂来提高治疗效果。
头孢菌素类
头孢菌素类药物对大肠杆菌的抑菌效果也较好，且较少出现耐药性，是 临床上治疗大肠杆菌感染的常用药物之一。
03
喹诺酮类
喹诺酮类药物对大肠杆菌的抑菌效果较强，且具有广谱抗菌作用，但由
于大肠杆菌对喹诺酮类药物的耐药性逐渐增加，因此在使用时需要注意
合理用药。
耐药机制研究进展及挑战
要点一
耐药机制研究进展
近年来，随着分子生物学技术的发展和应用，对大肠杆菌耐 药机制的研究取得了重要进展。研究发现，大肠杆菌可通过 产生β-内酰胺酶、外排泵、改变药物作用靶位等多种方式产 生耐药性。此外，基因水平转移也是大肠杆菌获得耐药性的 重要途径之一。
比较基因组学研究
物种间比较
通过比较不同大肠杆菌菌株或与其他相关物种的基因组序列，可 以揭示物种间的进化关系、基因水平转移等事件。
基因组重排
大肠杆菌基因组在进化过程中可能发生重排事件，如倒位、易位等， 这些事件可以通过比较基因组学方法进行检测和分析。
基因家族和同源基因分析
通过比较基因组学方法，可以鉴定大肠杆菌中的基因家族和同源基 因，进而研究其功能冗余和适应性进化等问题。
04
大肠杆菌蛋白质组学分析
蛋白质组学技术原理及应用
蛋白质组学技术原理
蛋白质组学是研究生物体内所有蛋白质组成、结构、功能及其相互作用的一门 科学。主要技术包括蛋白质分离、鉴定、定量和相互作用研究等。
蛋白质组学技术应用
应用于疾病诊断、药物研发、生物工程、环境科学等领域，如寻找疾病生物标 志物、研究药物作用机制、优化蛋白质生产等。
大肠杆菌PPT
18
大肠菌群及大肠杆菌3M Petrifilm 检测法
检样 25g(mL）样品+ 225mL稀释液
只检测大肠菌群
10倍系列稀释
大肠杆菌和大肠菌群 同时检测
接种1ml样品匀液到每张 PetrifilmTM大肠菌群测试片
36C1
24匀液到每张 PetrifilmTM大肠杆菌/大肠菌群测
◆包括：产肠毒素（ETEC）肠致病性（EPEC）肠侵袭性(EIEC) 肠出血性(EHEC)
主要菌型：O157:H7
3
大肠菌群类检测方法
• 3M Petrifilm 测试片
法 • GB
MPN Table
• SN
• 日本方法
• VRB固体平板法
• Deso固体平板法
• 显色培养基法
4
革兰氏染色
5
粪大肠菌群检测的GB法
大肠菌群类检测方法介绍
1
肠杆菌科四种指标菌的范围 （隶属关系）
肠杆菌科 (Enterobactericeae)
大肠菌群(Coliform) 粪大肠菌群 (Fecal Coliform) 大肠杆菌 (E.coli)
2
食品中大肠菌群类及其检验
● 大肠菌群（coliforms）： ◆指一群在36℃条件下培养48h能发酵乳糖、产酸产气的需氧和 兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。 ◆该菌群主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评 价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。
• 滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗。
• 滴加95%乙醇脱色约15~30s，直至颜色液被洗掉。不 要过分脱色，水洗。
• 滴加复染液，复染1min，水洗，待干，镜检。
• 结果： 革兰氏阳性菌呈紫色
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段分离。长链DNA所携带的磷酸基团比较多，因此会You有r t更ext
多 的 T E A A 与 之 相 融 合 ， 其 在 柱 内 停 留 的 时 间 增Yo加ur t。ext
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检测原理
ATP生物发光技术是近些年来发展较快的微生物快速
检测方法。ATP是活细胞中最普遍的能量代谢产物，为
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检测原理
平板计数法首先选取较适宜的连续稀释梯度样品匀液，
将冷却至45℃±0.5℃的结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）
倾注于平皿内，混匀并凝固后加入3~4mL的VRBA-MUG
覆盖平板表层，36±1℃下培养18~24h，之后在紫外灯下
计数。该方法是将样本做一定比例的稀释，其中的微生物
被稀释后分散成单个细胞，然后在一定的条件下进行培养
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大肠杆菌 检测方法讨论与展望
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2
概述
大肠杆菌是人和动物肠道中最著名的一种细菌，
主要寄生于大肠内，约占肠道菌中的1%，是一种两端
钝圆、能运动、无芽孢的革兰氏阴性短杆菌。大肠杆
菌能合成维生素B和K，正常栖居条件下不会致病；若
近出现的新的检测方法，为以后大肠杆菌检Y测ou提r t供ex一t
些参考。
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传统检测方法
多管发酵法 滤膜法 平板计数法
检测新技术
气相色谱与液相色谱法 ATP生物发光技术 生物传感器检测技术
PCR检测技. 术
基因芯片技术 自动化仪器 免疫磁珠技术IMS
检测原理
多管发酵法是一种检测食品及水体中大肠 杆菌的传统方法。这种方法是将样品接种于 LST肉汤中在37℃±1℃的条件下培养24±2h， 之后对产气样品进行复发酵；复发酵是将初发 酵中产气样品接种于EC肉汤中，44.5±0.2℃ 条件下培养24±2h，若产气则进行平板分离 培低，，进养但而。是影多检响管测到发时测酵间定法较结对长果试，的验容精条易确件受度要。其求他不条高YY件，oouu干成rr tt扰本eexxtt
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检测原理
生物传感器主要是以生物化学传感技术为基础，用
抗体、酶、细胞等作为识别元件，并与信号转换器和电 子测量仪联合构成的一种分析工具。目前已经成熟的商 品化的传感器有免疫传感器、酶传感器、DNA杂交传感 器、微生物传感器、分子印迹传感器等。生物传感器具 有诸多优点，如高灵敏度、高选择性、较好的稳定性、 低成本、且能在复杂的体系中快速在线监测。
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检测原理
免疫磁珠技术是一种大肠杆菌的分离技术。其原理 是以磁珠为抗体载体，磁珠和大肠杆菌结合，通过磁力 来实现力学移动进而将大肠杆菌进行分离。与其他的细 菌分离方法相比，免疫磁珠技术在很大程度上提高了样 本中病原性副溶血性弧菌的检测效率。免疫磁珠技术可 以快速地在不同菌种的样本中处理不同的微生物，该方 法可以大幅度地提升检测效率。
细胞提供各种生理活动所需的能量，而且其在生物体内
含量维持在一定的范围内。ATP含量检测的一种方法是
荧光光度法，生物发光是活细胞在荧光素酶催化下发出
的荧光。与传统检测方法相比，不同之处在于几分钟内
便可获得检测结果，而且荧光光度计是便携式的，使用
非常方便，适用于现场检测，这种技术可以用于检测微
小的污染物水平以及食品加工设备及其表面的清洁You程r t度ext
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检测原理
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滤膜法适用于水质监测，是首先于滤器 内加入10mL无菌稀释水，接着将适量充分 混匀的待检食品的水溶液加入滤器中，进行 抽滤，快滤完前加少许无菌稀释水以冲洗滤 器内壁，使水溶液内的细菌全部集中于滤膜 上；用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分，移放在 M-FC培养基上,滤膜截留细菌面向上，滤膜 与培养基完全紧贴不能有气泡，将培养皿紧 密盖好后，置于能准确恒温于44.5±0.5℃ 的恒温培养箱中,经24±2h培养，粪大肠菌 群呈蓝色或蓝绿色,计数此类菌落数目。
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检测原理
自动免疫测定分析仪诞生于20世纪70年代。随着科 技的发展，自动免疫测定分析仪在各领域的应用也越来 越多，该仪器使用简单，无太多操作干扰，既省时省力， 又大大提高了检测的精确度和灵敏度。这种自动酶标免 疫测试系统目前在国内外是酶免疫自动化系统中应用最 为广泛的一种。但是由于与其配套的试剂昂贵，从而限 制了其在基层实验室的使用。
进入胆囊、膀胱等处可引起炎症。在水和食品中检出，
可认为是被粪便污染的指标。大肠菌群数常作为饮水、
食物或药物的卫生学标准。大肠杆菌是国际上公认的
卫生监测指示茵，因此大肠杆菌的检测技术显得十分
重要，相应出现了大量的大肠杆菌的各种检Y测ou方r t法ext。
我将介绍一些常用的大肠杆菌检测的传统方Y法ou以r t及ex最t
大肠杆菌的污染程度可以用顶空气相色谱法来分析，其原
理是利用食品密封系统顶部的微生物代谢产物CO2对微生 物进行分析。这种方法对食品质量安全检测有重大意义。
与上述传统技术相比，此种方法具有检测速度快、灵敏度
高的优点。高效液相色谱法（HPLC）主要是根据离子配
对反相层析的原理来分析核酸。HPLC主要是针对DNA片
的检测。
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检测原理
PCR检测技术是在1971年首先被Kleppe等提出， 1985年才作为一种检测方法获得认可。PCR检测技术是 一种聚合酶链反应，其采用变性—退火—延伸三个步骤 使DNA基因能够在体外实现解旋解链，类似于一种体外 增加、复制形式。史云等建立了用于肉及肉制品中大肠 杆菌的两重PCR检测方法，但该方法需要较长的时间的 样品纯化处理，且对操作人员的专业知识的要求也较高。
一直到生长成能用肉眼观察的菌落，最后通过样本数量和
稀释度来计算出单位样本中的菌数。本方法适用于除贝类
产品外的食品中大肠杆菌检测。
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检测原理
气相色谱法主要是将大肠杆菌经过一系列衍生化的前
处理后，为接下来的分析研究提供尽可能多的化学组分。