晚期糖基化交联产物裂解剂酶联免疫吸附测定筛选方法的建立
糖尿病患者白内障房水晚期糖基化终末产物及转化生长因子的变化
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【 ｂ ｔ ｃ】 ０ｂｅｔ ｅ ｏｉｖｓｇｔ ｔｅｌ ｅ ｆ ｌ ｏｅａｖｎ ｅ ｌｃｔ ｎｅｄｐｏｕｔ Ａ Ｅ ）ａｄｔ ｎ— Ａ ｓｒ ｔ ａ ｊｃｉ Ｔ ｅｔ ａ ｖｌ ｏ ｕ ｓ ｄａｃｄｇ ａｏ ｎ —ｒｄｃ ｖ ｎ ｉ ｅｈ ｅ ｓ ｇｃ ｙ ｉ ｓ（ Ｇ ｓ ｎ ａｓ ｒ
患者 白内障的内在联 系。方法 收集糖尿病患者 白内障、 老年性 白内障 的前 房液 ， 采用生化方 法 、 酶联免疫 吸 附测定 （ｎｙ ｅｌ ｋｄｉｍｕｏｏｂｎ ｓａ Ｅ ＩＡ 法对 ４ ｅｚｍ ｎ ｅ ｉ ｍ ｎｓｒｅ ｔ ｓｙ， ＬＳ ） ａ ８例糖尿病患者 白内障和 ５ ４例老 年性 白内障 的房水 中葡萄糖 、 Ｇ ｓＴ Ｆ１ Ａ Ｅ 、Ｇ 一２的含量进行检测。结果 糖尿 病合并 白 内障患 者房水 中葡萄糖水 平和 Ａ Ｅ 含 量分 ３ Ｇｓ 别 为（ ．３±１４ ）ｍ ｏ Ｌ （ ５ ．９±１５ ６ ）ｐ／ ， ６８ ．０ ｍ ｌ 、３ ５ ７ ／ ９ ．４ ｇｍＬ 显著高 于老年性 白内障患 者 ［ ４ ７ （ ．４±１ ３ ）ｍ ｏ Ｌ ．０ ｍ ｌ 、 ／
ｄ ａ ｅｉ ａａａ ｔ Ｍ ｅ ｈ ｄ Ｔ ｅ ａ ｕ ｏ ｓｈ ｍｏ ｆ ８ ｃ ｓ ｓｏ 山ｅ ｄ ａ ｅｉ ａａ ａ ｔ ａ ｉｎ ｓａ ｄ ５ ａ ｅ ｆａ ｅ ｒ ｌｔｄ ｉｂ ｔ ｃ ｔ ｒｃ ． ｔ ｏ ｓ ｃ ｈ ｑ ｅ ｕ ｕ ｒｏ ａ ｅ ｆ ｉｂ ｔ ｃ ｔｒ ｃ ｐ ｔ ｔ ｎ ４ ｃ ｓ ｓｏ ｇ —ｅａｅ ４ ｃ ｅ ｃ ｔｒｃ ａｉｎｓｗｅｅ ｅ ｔａ ｔｄ ａ ｈ ｘ ｅ ｉ ｎ ａ ｒｕ ｎ ｅ ｃ ｎｒ ｌ ｅ ｐ ｃｉｅｙ ｈ ｏ ｔｎ ｆ ｈ ｌ ｃ ｓ ａ ｅ ａａ ａ ｔ ｔ ｔ ｐ ｅ ｒ ｘｒ ｃｅ ｓｔ ｅ ｅ ｐ ｒ ｍｅ ｔ ｌ ｏ ｐ ａ ｄ ｔ ｏ ｔ ｓ ｅ ｔ ｌ ．Ｔ ｅ ｃ ｎ ｅ ｔ ｅ ｇｕ ｏ ｅｗ ｓｄ — ｇ ｈ ｏｒ ｖ ｏｔ
晚期糖基化终末产物荧光光谱检测方法与技术的研究的开题报告
晚期糖基化终末产物荧光光谱检测方法与技术的研究的开题报告标题：晚期糖基化终末产物荧光光谱检测方法与技术的研究题目背景：糖基化是糖与蛋白质、核酸等生物大分子结合的过程，代表了一种非酶催化的共价修饰。
糖基化具有一定的生物学功能，但是，如果糖基化反应进行到一定程度，就会形成晚期糖基化终末产物（AGEs），它们的水平与机体的老化、代谢疾病、炎症反应等密切相关。
因此，AGEs的测定可以作为疾病诊断、治疗及预后的重要指标。
荧光光谱检测是一种快速、简单、灵敏且非破坏性的分析技术，能够在分子水平上探测样品中各种结构特征。
由于AGEs具有荧光性，可以应用荧光光谱检测技术检测AGEs。
研究目的：本文旨在建立一种基于荧光光谱技术的AGEs检测方法，该方法具有高灵敏度、高选择性和稳定性，并能够在糖尿病、阿尔茨海默病等疾病的早期诊断中发挥重要作用。
研究内容：1. 收集AGEs检测的相关文献，了解AGEs的荧光特性；2. 确定AGEs荧光光谱检测的最佳条件（如激发波长、荧光发射波长、荧光强度阈值等）；3. 建立AGEs荧光光谱检测方法，评价其特异性、灵敏度和稳定性；4. 应用已建立的方法检测降糖药物对AGEs生成的影响；5. 与当前常用的AGEs检测方法进行对比，评估其实用性和优越性。
研究意义：AGEs在临床疾病中的水平与糖尿病、阿尔茨海默病、心血管疾病、癌症等疾病的发生和发展密切相关。
本研究通过建立一种基于荧光光谱技术的AGEs检测方法，可为疾病的早期诊断提供一种新的手段，具有重要的临床意义。
研究预期成果：1. 建立一种简便、快速、高灵敏度、高选择性和稳定性的AGEs荧光光谱检测方法；2. 发现新的针对AGEs的降糖药物，为防治糖尿病等疾病提供新的方案；3. 提高对AGEs的认识和理解，推动AGEs相关疾病的研究和诊疗的进展。
研究工作计划：1. 第1-2个月：查阅AGEs检测的相关文献，了解AGEs的荧光特性，并确定其检测条件；2. 第3-4个月：确定样品的制备方法和存储条件，实验建立AGEs荧光光谱检测方法，探究合适的标准曲线；3. 第5-6个月：评估已建立的AGEs荧光光谱检测方法的特异性、灵敏度和稳定性，并进行优化；4. 第7-8个月：应用方法检测降糖药物对AGEs生成的影响，寻找新的针对AGEs的降糖药物；5. 第9-10个月：与当前常用的AGEs检测方法进行对比，评估其实用性和优越性；6. 第11-12个月：撰写和提交论文。
晚期糖基化终末产物检测方法的研究
晚期糖基化终末产物检测方法的研究2008年第27卷第10期传感器与微系统(T ransduce r and M icrosystem Technol ogies)晚期糖基化终末产物检测方法的研究许良元1,2,刘勇1,张弓3,孔晓玲2,吴路生1(1.中国科学院安徽光学精密机械研究所,安徽合肥230031;2.安徽农业大学工学院,安徽合肥230036;3.加拿大温泥伯大学,马尼托巴R3T6A5)摘要:分析了检测晚期糖基化终末产物(AGEs)的必要性及其主要结构,对目前检测AGEs的主要方法和各自的优缺点做了介绍,重点讨论了荧光光谱检测方法的研究方案和技术路线,设计了适合于该方案的荧光光纤探头。
关键词:晚期糖基化终末产物;荧光光谱;光纤探头中图分类号:R318.51文献标识码:A文章编号:1000-9787(2008)10-0027-03 Research on advanced glycation endproductsdetecting m ethodsXU L iang2yuan1,2,LI U Yong1,Z HANG Gong3,KONG X iao2ling2,WU Lu2sheng1(1.Anhu i Institu te of Op tics and F i ne M echan ics,C h i n ese Academ y of Sc iences,H efei230031,C h i na;2.E ngi n eer i ng C ollege,Anhu i Agr icu ltu ra lUn iver sity,H efei230036,C h i na;3.Un i ver sity ofW i nn i p eg,M an itoba R3T6A5,C anada)Abstr a ct:The necess it y to detect advanced glycati on endproducts(AGEs)and its m a i n struc t ure are ana l yzed,the m a i n m etho ds to de tect AGEs at present and t he ir advantages and d i sadvantages are also intro duced.A t the sam e ti m e,i t co ncentrates o n the schem e and technol ogy route of fluorescence spectru m detecti ng m et hod.The fl uorescence fi ber opti ca l detec t or is desi gned for that sche m e.K ey word s:advanced glycati on endpro duc ts(AGE s);fl uorescence spectru m;optical fiber probe0引言晚期糖基化终末产物(advanced glycati on endproducts, AGE s)是M aillard反应的产物。
基于UPLC-QqQ-MSMS同步检测热加工食品中典型晚期糖基化终末产物
收稿日期：2020-05-27基金项目：广东省重点研究计划项目（2019B020212001）；国家自然科学基金青年科学基金项目（32001814）；“十三五”国家重点研发计划重点专项（2016YFD0400204）第一作者简介：程威威（1988—）（ORCID: 0000-0002-4907-7872），男，副研究员，博士，主要从事食品加工与安全调控研究。
E-mail:******************通信作者简介：郑家荣（1979—）（ORCID: 0000-0002-1201-312X ），男，教授，博士，主要从事天然产物与食品加工过程的作用机理及抗癌天然产物衍生物开发研究。
E-mail:***************.cn基于UPLC-QqQ-MS /MS 同步检测热加工食品中典型晚期糖基化终末产物程威威1，王 霞1，张忠飞1，刘国琴2，陈 峰1，郑家荣1,*（1.深圳大学高等研究院，深圳食品产业创新发展研究院，深圳市海洋微生物组工程重点实验室，广东 深圳518060；2.华南理工大学食品科学与工程学院，广东 广州510640）摘 要：建立超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法测定热加工食品中羧甲基赖氨酸（N ε-carboxymethyllysine ，CML ）和羧乙基赖氨酸（N ε-carboxyethyllysine ，CEL ）含量的同步检测方法。
首先脱脂样品经硼氢化钠还原8 h ，沉淀蛋白，酸水解后，经Oasis MCX 固相萃取小柱净化和富集，以乙腈和含0.1%甲酸的1 mmol /L 乙酸铵溶液为流动相梯度洗脱，采用ACQUITY UPLC HSS T3-C 18色谱柱分离，多反应监测模式进行定性定量分析。
CML 和CEL 在0.25～500 ng /mL 范围内线性良好，相关系数高于0.999，方法检出限分别为8 ng /g 和10 ng /g ，定量限分别为36 ng /g 和40 ng /g 。
人晚期糖基化终末产物 (AGEs)说明书
人晚期糖基化终末产物(AGEs)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中晚期糖基化终末产物(AGEs)的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人晚期糖基化终末产物(AGEs)水平。
用纯化的人晚期糖基化终末产物(AGEs)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入晚期糖基化终末产物(AGEs)，再与HRP标记的晚期糖基化终末产物(AGEs)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的晚期糖基化终末产物(AGEs)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人晚期糖基化终末产物(AGEs)浓度。
试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：720ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
一种检测晚期糖基化终末产物的方法和应用[发明专利]
![一种检测晚期糖基化终末产物的方法和应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/59ac3fc358fb770bf68a55cf.png)
专利名称：一种检测晚期糖基化终末产物的方法和应用专利类型：发明专利
发明人：赵波,王雅娟,邵科峰,赵虎
申请号：CN201810297208.2
申请日：20180330
公开号：CN108508203A
公开日：
20180907
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种检测晚期糖基化终末产物的方法和应用。
所述方法首先制备石墨烯‑壳聚糖/N(ε)羧甲基赖氨酸修饰的玻碳电极，然后基于戊糖素单克隆抗体能与多种晚期糖基化终末产物产生交叉免疫反应的原理，结合间接竞争法，可实现对包括N(ε)羧甲基赖氨酸、N(ε)羧乙基赖氨酸、戊糖素、丙酮醛咪唑啉酮和精氨嘧啶在内的五种晚期糖基化终末产物的多残留检测。
本发明提供的检测方法解决了目前晚期糖基化终末产物检测方法只能检测单一物质的问题，并具有较高的灵敏度(检测限在0.06～0.1ng/mL之间)和较宽的线性范围(0.1～1000ng/mL)，操作简便，成本较低，完全适用于临床上人体AGEs检测的需要，具有重要的实际应用价值。
申请人：南京师范大学
地址：210046 江苏省南京市栖霞区文苑路1号
国籍：CN
代理机构：南京经纬专利商标代理有限公司
代理人：楼高潮
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乳腺癌患者血清可溶性晚期糖基化终末产物受体水平及其临床意义
was 0. 849 ( P <0. 05 )，with a sensitivity of 91.85% and a specificity of
77. 41% . Conclusions sRAGE is lowly expressed in Wc serum of brecst concor patients，which might be associated
(Abstract) Objective To investigate the level and clinicol significonco of serum soluble receptor for
advanced glycation end-products( sRAGE) in patients witO
with the development and p'ooression of brecst(^皿^，and acts as a promising biomsker foe clinicot diaanosis of
beea=ioanoee.来自(Key words] Brecst(^皿^，Soluble receptor foe advenced glycotion end-products， Diaanostio eaicVncy,
【摘要】目的探讨乳腺癌患者血清可溶性晚期糖基化终末产物受体 (sRAGE)水平及其临床意义。 方法 选取80例乳腺癌患者和80例健康体检者为研究对象，应用酶联免疫吸附法测定两组血清sRAGE水 平。分析乳腺癌患者血清sRAGE水平与临床病理特征的关系，并采用受试者工作特征曲线评价血清sRAGE 对乳腺癌的诊断效能。结果 乳腺癌患者血清sRAGE水平低于健康体检者(!<0.05 )。TNM分期I ~ "期、 无淋巴转移的乳腺癌患者血清sRAGE水平分别高于TNM分期#期、淋巴转移的患者(P < 0. 05 )。血清 sRAGE诊断乳腺癌的受试者工作特征曲线下面积为0.849 (P<0.05)，敏感性为91.85%,特异性为77.41%。 结论sRAGE在乳腺癌患者血清中呈低表达，其或与乳腺癌的发生、发展有关，并有望成为临床诊断乳腺癌的 生物学标志物。
晚期糖基化终产物通过肾素-血管紧张素系统上调内皮细胞血管生成样蛋白-4的表达
关键词 ： 晚期糖基化终产物 ； 内皮细胞 ； 肾素一 血 管紧张素系统 ： 血管生成样蛋 白一 ４
中图分类号 ： Ｒ ５ ８ ７ 文献标志码 ： Ａ 文章 编 号 ： １ ６ ７ ２ — ３ ５ ５ ４ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ２ — ０ １ ８ ８ — ０ ５
Ａｄｖ ａ ｎ ｃ ｅ ｄ Ｇｌ ｙ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ Ｅｎｄ Ｐｒ ｏ ｄ ｕｃ ｔ ｓ Ｕｐ ｒ ｅ ｇ ｕｌ ａ ｔ ｅ ｔ ｈ ｅ Ｅｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ａｎ ｇ ｉ ｏ ｐｏ ｉ ｅ ｔ ｉ ｎ －ｌ ｉ ｋ ｅ Ｐｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ４ Ｖｉ ａ Ａｃ ｔ ｉ ｖ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｔ ｈ ｅ Ｒｅ ｎ ｉ ｎ－ ａ ｎｇ ｉ ｏ ｔ ｅ ｎｓ ｉ ｎ Ｓ ｙ ｓ ｔ ｅ ｍ ｉ ｎ Ｅｎ ｄｏ ｔ ｈ ｅ ｌ ｉ ａ ｌ ｓ
第 ３ ４卷
２ ０ １ ３ 年
第 ２ 期
３月
中山大学学报 （ 医学科学版 ）
Ｊ Ｏ Ｕ Ｒ Ｎ Ａ Ｌ Ｏ Ｆ Ｓ Ｕ Ｎ Ｙ Ａ Ｔ — Ｓ Ｅ Ｎ Ｕ Ｎ Ｉ Ｖ Ｅ Ｒ Ｓ Ｉ Ｔ Ｙ（ Ｍ Ｅ Ｄ Ｉ Ｃ Ａ Ｌ Ｓ Ｃ Ｉ Ｅ Ｎ Ｃ Ｅ Ｓ ）
Ｖｏ １ ． ３ ４ Ｎｏ ． ２
水产品中晚期糖基化终末产物（ages）含量分析
目录一前言 (1)1简介 (1)2晚期糖基化终末产物（AGEs）的结构与性质 (1)2.1AGEs的结构 (1)2.2AGEs的性质 (2)3食品中晚期糖基化终末产物（AGEs）的形成 (2)4晚期糖基化终末产物（AGEs）的危害 (3)5AGEs的分析方法 (4)6国内外相关研究概况 (4)7本研究的目的及意义 (5)二不同热加工方式对大菱鲆鱼糜中AGEs含量的影响 (6)1引言 (6)2材料、试剂与设备 (6)2.1材料 (6)2.2试剂 (6)2.3设备 (6)3试验方法 (7)3.1制作AGEs浓度-荧光强度标准曲线 (7)3.2样品处理 (8)3.3不同加工方式处理大菱鲆 (8)3.4AGEs检测液的制备 (8)3.5测定不同加工方式的大菱鲆AGEs含量 (9)4结果与分析 (9)4.1制作AGEs浓度-荧光强度标准曲线 (9)4.2样品中AGEs荧光强度的测量 (10)5本章小结 (11)三即食水产品中AGEs含量分析 (13)1引言 (13)2材料、试剂与设备 (13)2.1材料 (13)2.2试剂 (13)2.3设备 (13)3样品采集及前处理 (14)4测定AGEs (14)5结果与分析 (14)6本章小结 (16)四结论 (17)1结论 (17)2本次研究的不足之处 (17)3减少AGEs摄入的方法 (17)【附录】 (19)参考文献 (20)致谢 (21)一前言1简介美拉德反应（Maillard Reaction,MR），又称为“非酶褐变反应”，由法国化学家L.C.Maillard在1912年提出，是羰基化合物与氨基化合物间发生的复杂反应，最后生成深棕色的大分子物质称为类黑精，因而美拉德反应也叫羰氨反应。
美拉德反应的发生可以改善或破坏食品的色泽和香味，同时会降低食品的营养价值，甚至会生成有毒物质，对人体健康造成威胁。
美拉德反应分为早期中期晚期三个反应阶段，其中，晚期会发生蛋白质交联，进而生成晚期糖基化终末产物(Advanced glycation end products,AGEs)。
ELISA法检测人血清晚期糖基化终产物
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终 止 反 应 。 用 39/-(4BHHI 酶 标 仪 测 定 $ ,T &\M ， 光 度 值 。 以 标 准 液 浓 度 的 对 数 为 ] 轴 ， 吸 MKI1C 吸 光 度 值 为 ^ 轴 画 出 标 准 曲 线 ， 根 据 标 准 曲 线 用 直 线 回 归 法 求 出 待 测 血 清 中 !"# 的 浓 度 。 光 分 光 光 度 法 测 定 血 清 !"# 取 UII$ ! * " * " 荧 ? 血 清 用 双 缩 脲 法 先 进 行 蛋 白 定 量 ， 根 据 测 得 的 总 蛋 白 浓 度 用 生 理 盐 水 将 血 清 标 本 稀 释 至 UI$E N C?， 采 用 $&HI3 荧 光 分 光 光 度 计 在 激 发 波 长 DLI1C、 发 射 波 长 MDI1C、 狭 缝 宽 度 H1C 的 条 件 下 测 定 荧 光 强 度 单 位 ， 而 后 计 算 每 毫 克 蛋 白 所 含 !"# 单 位 （ 荧 光 强 度 单 位 ） 。 ! * " * # 临 床 应 用 情 况 维 持 性 血 液 透 析 病 人 !!$ 例 ， 年 龄 DR [ PT 岁 ， 平 均 HT 岁 。 透 析 时 间 U * H [ TU 年 ， 平 均 L * R 年 。 其 中 原 发 病 为 糖 尿 病 的 DK 例 （ & 型 P 例 ， 型 DT 例 ） ， 非 糖 尿 病 PR 例 。 正 常 志 愿 者 ’ ， 年 龄 UR [ LP 岁 ， 平 均 DH 岁 。 HD 例 计 学 方 法 本 组 数 据 采 用 &F&&P * H 统 计 ! * " * % 统 软 件 进 行 描 述 分 析 、 相 关 分 析 及 回 归 分 析 。 " 军 医 大 学 南 方 医 院 刘 志 强 侯 凡 凡
【word】晚期糖基化终末产物的特性及其研究现状分析
晚期糖基化终末产物的特性及其研究现状分析第7卷第6期2009年12月光学与光电技术OPTICS&OPTOELECTRONICTECHN()LOGYV o1.7,No.6December,2009文章编号:1672—3392(2009)06008104晚期糖基化终末产物的特性及其研究现状分析*许良元刘勇张弓.翟玉峰朱灵吴路生(1中国科学院安徽光学精密机械研究所,安徽合肥230031;2安徽农业大学工学院,安徽合肥230036;3加拿大温泥伯大学,马尼托巴R3T6A5)摘要分析了晚期糖基化终末产物的生化特性和主要结构形式,介绍了目前检测晚期糖基化终末产物的主要方法和各自的优缺点,讨论了荧光光谱检测方法.用检测系统测试了晚期糖基化终末产物的激发光谱,同时采用370nm的单色光作为激发光源,分别对正常人和糖尿病患者的皮肤进行了荧光光谱检测,通过获得的发射荧光光谱分析可以发现两者在450nm附近的荧光存在明显的差异.结果表明该荧光光谱测量系统快速,无创,简单,可应用于对糖尿病,人体衰老,氧化应激等病情进行早期预测和诊断.关键词晚期糖基化终末产物;无创检测;方法;荧光光谱中图分类号R3J8.51文献标识码A1引言晚期糖基化终末产物(AdvancedGlycationEndproducts,AGE)是在非酶条件下,蛋白质,氨基酸,脂类或核酸等大分子物质的游离氨基与还原糖的醛基经过缩合,重排,裂解,氧化修饰后产生一组稳定的终末产物_1].许多细胞表面均有其受体,AGE通过这些受体可以影响细胞的功能.大量研究证明,AGE在糖尿病及其并发症,尿毒症,Alzheimer(阿尔次海默)病,白内障,脊髓侧索硬化症等疾病和衰老的发生发展过程中具有重要作用_3.],起病隐匿,早期不易被诊断和发现,呈渐进性发展,当发展到一定阶段后治疗效果不佳,是造成患者致残致死的重要原因.因此检测血清和组织中AGE的浓度对多种疾病的预测,诊断及治疗具有重要的意义.由于AGE结构复杂多样,至今尚缺乏有效而方便快捷的检测方法以供临床应用].本文在分析AGE的结构和目前常用的检测方法的基础上,重点讨论AGE无创荧光光谱检测法,并对该检测系统进行了实验验证.2晚期糖基化终末产物的生化特性及其致病机理AGE具有独特的生化特性:1)它呈棕色;2)一部分AGE具有特有的荧光特性;3)具有交联性,即使去除了糖,它们之间仍能通过侧链交联,形成分子量极大的物质;4)对酶稳定,不易被降解; 5)许多细胞,如:巨噬细胞,系膜细胞,内皮细胞表面均有其受体,AGE通过这些受体可以影响细胞的功能.AGE通过改变蛋白质的结构,影响脂质代谢,修饰核酸,通过AGE受体等途径使人致病.体内过量AGE引起的病理改变主要通过以下三个过程:1)AGE改变了细胞外基质蛋白的性质及细胞外诱发的信号传导途径;2)通过AGE与其特异的细胞受体相互作用,改变了可溶性信号分子如细胞因子,激素和自由基的水平;3)由葡萄糖,果糖等在细胞内形成的AGE和高活性的中间产物能直接改变靶组织蛋白能.通过以上三个过程,AGE改变了血管的结构和功能,导致疾病的发生.AGES具有高度异质性,在体内有多种不同的存在形式.AGE是一种结构多样性的化合物,分子量约在2200~6000ku,AGE肽分子量为1500～2000ku.尽管人们已经对其进行了广泛的研究,但对于体内AGE的确切化学结构仍未完全明了,目前,人们己知的结构形式主要有以下几收稿日期2009—01—13;收到修改稿日期200903—28作者简介许良元(1973一),男,副教授,主要从事数控技术,光纤,光电子等方面的研究工作.Email:****************中国科学院知识创新工程青年人才领域专项前沿项目资助82光学与光电技术第7卷种_9I1.:1)呋喃～糠酰一氢一咪唑(FFI:4-furanyl2一fu royl—IH—imidazole);2)戊糖苷素(Pentosidine)[11141;3)吡咯素(Pyrraline)[15,16];4)羧甲基赖氨酸(CML)[;5)交联(Crossline)[1921J.3晚期糖基化终末产物的检测现状及方法由于AGE化学结构尚不完全确定和呈多样性,而且无商品试剂盒可供临床使用,因此对其在体内蓄积程度的检测有较大困难而且目前尚无通用的测量单位,也没有能够被普遍接受和使用的检测方法,所以造成研究人员之间无法比较其实验结果,严重阻碍了对AGE及其相关疾病的研究进展.目前常用于检测AGE的主要方法有色谱分析技术,酶免疫吸附试验法,免疫组织化学法,放射免疫分析,放射受体分析,流动注射分析法,荧光光谱法等E19.4荧光光谱法用于晚期糖基化终末产物的检测组织荧光光谱诊断技术以其极高的灵敏度,精确度以及无损,安全,快速等优点而成为了目前光活检中的一个重要研究领域.AGE紫外荧光无创光谱检测技术也是今后人体健康诊断技术,预测的重要发展方向之一.我们经过大量的调研和实验,逐步开展了对AGE的无创荧光光谱检测研究.4.1测量原理当用一种波长的光(如紫外光)照射某种物质时,这种物质的基态分子吸收能量被激发至激发态后,再返回基态时会在极短的时间内发射出较激发光波长长的光(如可见光),这种光就称为荧光.入射到皮肤组织表面的光束,一部分进入皮肤,被皮肤组织散射与吸收,其散射,吸收的情况由皮肤组织内各种色基,如血红蛋白,胆红素和黑色素等决定,未被吸收的散射光最后会重新返回皮肤表面而进入空气中,这一部分散射光称为漫反射光,在皮肤表面可探测到各波长相应的漫射光强度,组成反射光谱.入射到皮肤组织内的一部分光,被荧光团吸收后激发出荧光.4.2实验装置测量系统的总体方案如图1所示.在进行AGE荧光光谱测量时,扫描激发单色仪,使不同波长的入射光激发皮肤组织里AGE的荧光物质,产生的荧光通过固定的发射单色仪照射到检测器上,检测相应的荧光强度,记录荧光强度与激发光波长的关系曲线,即为激发光谱.它反映了不同波长激发光引起物质发射某一波长荧光的相对效率,可用来鉴别荧光物质;保持激发光的波长和强度不变,AGE荧光物质所产生的荧光通过发射单色仪照射到探测器上,扫描发射单色仪并检测各波长下相应的荧光强度,记录荧光强度与荧光发射波长的关系曲线,即为荧光发射光谱.它表示荧光物质所发射的荧光在各种波长下的相对强度, 可用来鉴别荧光物质,并可作为荧光测定时选择测定波长或滤光片参数的根据.荧光信号经过去噪, 归一化处理后,放大了微弱光谱信号,突出了光谱的形状差异,减弱外界因素对采集荧光的影响,再通过计算机对采集的不同荧光信号进行归类分析, 建立正常人和糖尿病患者的AGE荧光光谱数据库.图1晚期糖基化终末产物测量系统Fig.1AGEdetectingsystem4.3测试结果与分析根据本文设计的荧光光谱检测系统,我们对AGE进行了激发波长扫描,得到的AGE激发光谱如图2所示.由图可以发现AGE最佳激发波长约为370nm.采用一370nm作为激发波长,以糖尿病检测为例,分别对没有患糖尿病的人体皮肤和患有糖尿病的患者皮肤取了几例测试对象进行了发射光谱测试,测试结果如图3所示.从图中可以看出患者皮肤AGE荧光强度明显高于正常人,发射波长约450nm左右;同时由于影响AGE测试结果的因素很多,例如性别,年龄,皮肤颜色等,所以从图中还百r以看出健康人群之间的测试结果也会有所差异,这些实验结果与本文引用的相关文献上介绍的结论几乎一致.第6期许良元等:晚期糖基化终末产物的特性及其研究现状分析83 0量8喜兽三Wavelength/nm图2激发光谱Fig.2Excitationspectrum5结论Wavelength/nm图3发射光谱Fig.3Emissionspectrum目前AGE的检测方法比较多,但是AGE荧光光谱检测方法采用的是一种无创光谱检测技术,利用人的皮肤中糖基化终末产物受激产生的荧光强度的不同,通过对接收到的荧光强度进行分析研究,得到被检测人的健康状况等信息.该检测方法不需要采集血样,避免抽血进行生化实验给患者可能带来的疼痛,感染等且重复性好,患者更容易接受此方法,被测者可以根据测试数据对自己的身体状况(包括是否可能患有糖尿病,身体衰老情况等) 进行早期预测和诊断,是今后快速和无创检测的重要研究方向之一.Eli1-2][3][4]参考文献蔡德鸿,韩钧凌.高级糖基化终末产物的检测及其临床意义[J].辽宁实用糖尿病杂志,2004,12(1):576O.孙缅恩,杜冠华.晚期糖基化终产物的病理意义及其机制_J].中国药理学通报,2002,18(3):246—249. BrownleeM.Glycosylationproductsastoxicmedia—torsofdiabeticcomplications[J].Annu.RevMed.,199l,42(3):15966.MiyataT,V anY perseledeStrihouC,KurokawaH,eta1.AlterationsinNonenzymaticbiochemistry inuraemia-anoriginandsignificanceof”carbonyl stress”inlong—termuremiccomplications[J].Kidney[5][6][7][8][9][1O][11][12][13][14][15][16][17][18]Int,l999,55(4):389399.Dukic-StefanovicS,SchinxelR,ReidererP,eta1.A(Esinbrainageing:AGE-inhibitorsasneuropro—tectiveandanti—dementiadrugs[J].Biogerontology, 2001,(2):19—34.LyonsU,SilvestriG,DunnJA,eta1.Roleofgly—cationinmodificationof1enscrystallinsindiabetic andnondiabeticsenilecataracts[J].Diabetes,1991,40(13):1010—1015.KikuchiS,ShinpoK,OgataA,eta1.DetectionofN epsilon(carboxymethy1)1ysine(CML)andnon-CMI advancedglycationend-rpducts:intheanteriorborn ofamyotrophiclateralsclerosisspinalcord[J]. AmyotrophLateralSclerOtherMotorNeuronDis—ord,2002,3(2):63—68.孙子林.糖基化终产物(AGEs)的结构及其检测研究进展[D].南京:南京铁道医学院,1999:87—99. BrownleeMLilly.Glycationanddiabeticcomplica—tionsEJ].Diabetes,1994,43(2):836841. KoenigRJ,BlobsteinSH,CeramiA.Structureof earbohydrateofhemoglobinale[J].J.Bioi.CherrL, 1977,252(5):29922997.Sel1DR,MonnierVM.Structureelucidationofa senescencecross——linkfromhumanextracellularma—trix.Implicationofpentosesintheagingprocess [J].J.Bioi.Chern.,1989,64(4):2159721602. OdettiP,FogartyJ,Sel1DR,eta1.Chromato—graphicquantitationofplasmaanderythrocytepen—tosidineindiabeticanduremicsubjects[J].Diabe tes,1992,41(3):153-159.MiyataT,UedaY,ShinzatoT,eta1.Accumula—tionofalbumin-linkedandfreeformpentosidinein thecirculationofuremicpatientswithend-stagere—nalfailure:Renalimplicationsinthepathophysiolo—gyofpentosidine[J].J.Am.Soc.Nephorol, 1996,(7):11981206.MiyataT,UedaY,Y oshidaA,eta1.Clearanceof pentosidine,3nadvancedglycationendproduct,by differentmodalitiesofrena1replacementtherapy [J].KidneyInt.,1997,51(3):880—887. HayaseF,NagarajRH,MiyataS.eta1.Immuno—logicalDetectionofaglucosederivedpyrroleformed duringMaillardreactioninvivo[J].J.Bioi. Chem.,1989,263(2):3758—3764.MiyataS,MonnierVM.ImmunohistochemicalDe—tectionofadvancedglycosylationendproductsindi—abetictissuesusingmonoclonalantibodytopyrraline 口].J.Clin.Invest.,1992,82(3):l102—1】12. 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Novelanalyticalapproachtomonitoringadvancedglycosylationendproductsinhumanserumwithon- linespectrophotometricandspectrofluorometricde—tectioninaflowsystem[J].Clin.Chern.,1997,43(9):1563—1569. PropertyofAdvancedGlycationEndproductsXULiang—yuan,LIUY ongZHANGGong.ZHAIY u—feng ZHULingWULu—sheng(1AnhuiInstituteofOpticsandFineMechanics,ChineseAcademyofScience s,Hefei230031,China;2EngineeringCollege,AnhuiAgriculturalUniversity,Hefei230036,China; 3UniversityofWinnipeg,ManitobaR3T6A5,Canada) AbstractThenecessitytOdetectadvancedglycationendproducts(AGE)andi tsbiochemicpropertyandmainstructurewereanalyzedinthepaper.ThemainmethodstodetecAGEatpresentandtheiradva ntagesanddisadvantageswereintroduced.Atthesametime,theemissionspectrumwasdetectedontheskinofnondiabeti cpeopleanddiabetesrespectively.Theresult oftheexperimentindicatesthattherearedifferencesdistinctlyabout450nmb etweenthem.Itprovesthefeasibilityofthesystem.Theprocessofthedetectionisveryrapidandconvenient.Thepatientc anbenefitfromittoforecastanddiagnose thestateofillnesssuchasdiabetes,decrepitude,oxidativestressetcconveniently.KeywordsAGE;noninvasive;method;fluorescencespectrum。
血红蛋白晚期糖基化终末产物的酶联免疫吸附分析法检测
血红蛋白晚期糖基化终末产物的酶联免疫吸附分析法检测戎健;陈文缘;邱鸿鑫
【期刊名称】《基础医学与临床》
【年(卷),期】2000(020)006
【摘要】无
【总页数】1页(P571)
【作者】戎健;陈文缘;邱鸿鑫
【作者单位】无
【正文语种】中文
【相关文献】
1.尿微量蛋白、胱抑素C、糖化血红蛋白及晚期糖基化终末产物对糖尿病早期肾损伤的应用评价 [J], 朱晓英;施笑娅;徐象威
2.血红蛋白晚期糖基化终末产物增龄性改变的多因素分析 [J], 戎健;杨沛;邱鸿鑫
3.血液透析患者血清可溶性晚期糖基化终末产物受体、内源性分泌型晚期糖基化终末产物受体水平与动静脉内瘘血栓形成的关系 [J], 王婷;李玉芳;尼加提•阿布都热合曼;张丽;韩媛媛;王顺
4.血清晚期糖基化终末产物和可溶性晚期糖基化终末产物受体与阿尔茨海默病及血管性痴呆关系的研究 [J], 马宗艳;蔡宏斌;裴丽娟;郭文婷;范祯祯;杨玉;葛朝明
5.妊娠期高血压患者血清可溶性内皮因子、晚期糖基化终末产物、半乳糖凝集素-1联合检测的临床意义 [J], 栾继红;王霞;安文茜
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晚期糖基化终末产物单克隆抗体制备与鉴定
晚期糖基化终末产物单克隆抗体制备与鉴定魏芹;陈龙;王碧蕾;刘乃丰;张寄南【期刊名称】《中国免疫学杂志》【年(卷),期】2007(023)007【摘要】目的:制备抗人晚期糖基化终末产物AGEs单克隆抗体(McAb).方法:孵育D-葡萄糖和人血清白蛋白(HSA)获得AGE-HSA,取凝胶层析纯化后的第1峰AGE-HSA作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗AGE-HSA的McAb,用间接ELISA和Western blot鉴定其亚类和特异性.结果:成功筛选出3株稳定分泌抗AGE-HSA的McAb杂交瘤细胞株,其分泌抗体亚类为IgM,经Western blot鉴定该McAb特异性高,亲和力强.结论:获得抗人AGE-HSA的McAb细胞株3株,为深入研究AGEs和应用提供了有力工具.【总页数】4页(P649-652)【作者】魏芹;陈龙;王碧蕾;刘乃丰;张寄南【作者单位】东南大学附属中大医院心脏科,南京,210009;东南大学附属中大医院心脏科,南京,210009;东南大学附属中大医院心脏科,南京,210009;南京医科大学第一附属医院心研所,南京,210029;东南大学附属中大医院心脏科,南京,210009【正文语种】中文【中图分类】R587.2;Q51【相关文献】1.抗苗勒管激素的单克隆抗体制备与鉴定 [J], 苏晓菱; 李丽蓥; 李苗苗; 何洁; 王瑞雪; 王勇; 罗树红2.抗血管紧张素Ⅱ单克隆抗体制备及初步鉴定 [J], 徐彬瑗;白云鹏;曾玲3.禽腺病毒血清4型Fiber2蛋白单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定 [J], 郭瑞珍;苏冰倩;王棋;王一;于朋伟;孟洁洁;齐艳丽;杨国宇;褚贝贝4.酿酒酵母钙通道膜蛋白单克隆抗体制备及鉴定 [J], 董晓宇5.一株针对猪繁殖与呼吸综合征病毒NADC30-like毒株GP5蛋白的单克隆抗体制备及鉴定 [J], 秦义娴;刘丹;邓永;高金源;苏佳;朱真;吴华伟因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
糖基化终末产物调控糖尿病合并动脉粥样硬化中FSTL1表达的机制研究
糖基化终末产物调控糖尿病合并动脉粥样硬化中FSTL1表达的机制研究CHEN Yuanyuan;CHEN Yafen;SUN Xueran;WANG Yanping;WU Liping;YANG Ke;LIU Yan【摘要】目的:探讨糖基化终末产物(AGEs)参与调控糖尿病动脉粥样硬化中卵泡抑素样蛋白1 (FSTL1)表达的分子机制. 方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测糖尿病合并动脉粥样硬化患者血清中FSTL1及AGEs的表达水平,分析外周血中AGEs 与FSTL1的相关性.构建糖基化终末产物受体(RAGE)基因敲除小鼠(以C57BL/6野生型小鼠为对照),体外培养小鼠原代巨噬细胞.采用Western blot法检测不同浓度的AGEs-BSA刺激巨噬细胞后FSTL1及其基因5'端启动子区域转录因子AP-1和c-Jun的表达情况,以及特异性抗体阻断RAGE后巨噬细胞FSTL1、AP-1和c-J un 的表达变化. 结果:糖尿病合并动脉粥样硬化患者外周血中FSTL1与AGEs水平呈正相关(r=0.148,P=0.021).AGEs-BSA促进巨噬细胞表达FSTL1和核转录因子AP-1及c-J un.特异性阻断RAGE信号通路后,AGEs-BSA诱导的FSTL1、AP-1及c-J un的表达水平明显降低. 结论:AGEs-RAGE信号通路可通过调控巨噬细胞中转录因子AP-1及c-Jun的表达来调节FSTL1活性,进而参与糖尿病动脉粥样硬化的发生与发展.【期刊名称】《国际心血管病杂志》【年(卷),期】2019(046)001【总页数】5页(P31-35)【关键词】糖尿病;动脉粥样硬化;糖基化终末产物;卵泡抑素样蛋白1;巨噬细胞【作者】CHEN Yuanyuan;CHEN Yafen;SUN Xueran;WANG Yanping;WU Liping;YANG Ke;LIU Yan【作者单位】;;;;;;【正文语种】中文目前，心血管疾病是全球人类头号死因，占死因构成的46%，且呈年轻化和持续增长的趋势[1- 2]。
晚期糖基化终产物单克隆抗体的特异性和抗原表位鉴定
晚期糖基化终产物单克隆抗体的特异性和抗原表位鉴定王碧蕾;魏芹;刘乃丰;杨笛;张寄南【期刊名称】《中国动脉硬化杂志》【年(卷),期】2006(14)5【摘要】目的探讨晚期糖基化终产物在糖尿病慢性并发症发生发展过程中的作用,对我们制备的5株抗糖基化终产物单克隆抗体进行特异性及抗原表位鉴定。
方法采用间接酶联免疫吸附法和蛋白印迹术分析所制备单克隆抗体与对照物(人血清白蛋白、孵育人血清白蛋白、牛血清白蛋白)的交叉反应性及其针对的抗原表位。
用所得单克隆抗体对正常对照、糖尿病及透析病人血清和糖尿病大鼠主动脉进行糖基化终产物的蛋白印迹分析。
结果所得抗体与糖基化终产物特异性结合,而与对照物结合较低,提示它们与糖基化终产物结合能力和特异性较强。
初步鉴别其抗原表位非羧甲基赖氨酸。
在正常对照、糖尿病及透析病人血清中检测到葡萄糖源性糖基化终产物。
用所得单克隆抗体行蛋白印迹分析,发现糖尿病高血压大鼠主动脉含糖基化终产物特异显色,而正常对照组不明显。
结论5株抗糖基化终产物单克隆抗体细胞株具较高抗原特异性,可定性发现血清和组织中的糖基化终产物。
【总页数】4页(P409-412)【关键词】分子生物学;晚期糖基化终末产物;人血清白蛋白;单克隆抗体;糖尿病;主动脉【作者】王碧蕾;魏芹;刘乃丰;杨笛;张寄南【作者单位】东南大学附属中大医院心内科;南京医科大学附属第一医院心血管研究所【正文语种】中文【中图分类】Q7【相关文献】1.晚期糖基化终产物/晚期糖基化终产物受体信号通路促糖尿病血管钙化机制的研究进展 [J], 马文琦;刘乃丰2.抗人晚期糖基化终产物受体胞外段不同表位单克隆抗体的制备 [J], 朱平;唐磊;赵善超;卢晓;候凡凡;富宁3.抗晚期糖基化终产物受体抗体对晚期糖基化终产物引起心肌细胞胞内游离钙瞬变的影响 [J], 邵亚辉;许顶立;赖文岩4.晚期糖基化终产物受体、可溶性晚期糖基化终产物受体与2型糖尿病心血管并发症的关系 [J], 李平静(综述);李雷;杨荣礼(审校)5.晚期糖基化终产物受体特异性小干扰RNA对MMP-1和TIMP-1表达的影响[J], 刘阳;夏金荣;蔡晓刚因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
ELISA法检测人血清晚期糖基化终产物及在血液透析病人的应用
ELISA法检测人血清晚期糖基化终产物及在血液透析病人的应用刘志强;侯凡凡;王力;舒友梅【期刊名称】《解放军医学杂志》【年(卷),期】2000(025)006【摘要】用牛血清AGE(BSA-AGE)作为包被抗原,采用对氧化糖基化产物--Nε羧甲基赖氨酸(CML)特异的抗体(抗KLH-AGE)作为检测抗体,建立竞争ELISA检测系统.将该法和荧光分光光度法所测AGE水平进行比较,并对117例长期血液透析(HD)病人的血清AGE水平进行定量观察.结果显示:ELISA法检测血清AGE的最低检测限为0.1μg/ml,平均批内变异系数(CV)为2.2%,批间CV为9.0%,回收率为97%～107%.用该法测定的117例血透病人血清AGE水平中位数为0.5μg/ml,而年龄匹配的正常人中仅有9.4% 的血清AGE含量>0.1μg/ml.同时用ELISA法和荧光分光光度法检测44例病人血清AGE,两种方法所得结果相关非常显著(P＜0.01).上述结果表明,竞争ELISA法测定人血清AGE水平,具有方法简便、准确、特异性高和成本低的优点,符合临床使用要求,可作为反映病人氧化糖基化损伤的一种检测方法.【总页数】3页(P391-393)【作者】刘志强;侯凡凡;王力;舒友梅【作者单位】510515,广州,第一军医大学南方医院;510515,广州,第一军医大学南方医院;510515,广州,第一军医大学南方医院;510515,广州,第一军医大学南方医院【正文语种】中文【中图分类】R446.61;R692.5【相关文献】1.间接ELISA法检测人血清抗HBcIgA及其应用 [J], 唐旭东;王开正2.ELISA法对不同人群血清丙型肝炎病毒抗体检测应用 [J], 朱德春3.ELISA法对不同人群血清丙型肝炎病毒抗体检测应用 [J], 朱德春;4.应用ELISA法检测人体血清中HFRS抗体的研究 [J], 朱晶;岳立广;王伟;胡敏;马军;张双庆;张龙梅;宋宗明5.应用抗人IgMμ链和抗人IgM血清检测抗-HBc IgM的ELISA法比较研究 [J], 汪义和;刘如星因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
妊娠期糖尿病患者血清晚期糖基化终末产物受体、核因子-κB的表达及其与胰岛素抵抗的关系
妊娠期糖尿病患者血清晚期糖基化终末产物受体、核因子-κB的表达及其与胰岛素抵抗的关系周娃娃;符爱贞;程虹;李雪娇;陈丽琼【期刊名称】《中国性科学》【年(卷),期】2022(31)6【摘要】目的探讨妊娠期糖尿病(GDM)患者血清晚期糖基化终末产物受体(RAGE)、核因子-κB(NF-κB)表达水平及其与胰岛素抵抗(IR)的关系。
方法选取2020年1月至2021年6月在海口市妇幼保健院建档产检、行口服葡萄糖耐量试验(OGTT)诊断为GDM的108例患者作为GDM组,并选取同期在同一医院建档产检、OGTT正常的120例孕妇作为对照组。
采用全自动生化分析仪检测所有研究对象的空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素水平(FINS),并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);根据HOMA-IR将GDM患者分为非IR组(n=37,HOMA-IR<1.66)和IR组(n=71,HOMA-IR≥1.66)。
采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测所有研究对象血清RAGE、NF-κB的表达水平;采用Pearson法分析GDM患者血清RAGE、NF-κB的相关性及二者与血清HOMA-IR、FPG、FINS的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清RAGE、NF-κB的表达水平预测GDM患者IR的价值;采用多元线性回归分析影响患者HOMA-IR的因素。
结果与对照组比较,GDM组血清FPG、FINS、HOMA-IR、RAGE、NF-κB表达水平均显著升高(P<0.05);与非IR组比较,IR组患者血清RAGE、NF-κB表达水平均显著升高(P<0.05)。
Pearson法表明,GDM患者血清RAGE、NF-κB的表达呈正相关(r=0.664,P<0.05);GDM患者血清RAGE、NF-κB的表达与HOMA-IR、FPG、FINS均呈正相关(P<0.05)。
血清RAGE联合NF-κB的表达水平预测GDM患者IR的曲线下面积明显高于其单独预测(P<0.05);血清RAGE、NF-κB水平是HOMA-IR的影响因素(P<0.05)。
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终产物（ ） 交联结构裂解剂的方法。方法 以牛 Ａ Ｇ Ｅ 血清白蛋白（ ） 与葡萄糖孵育形成 Ａ ， 并 Ｂ Ｓ Ａ Ｇ Ｅ Ｂ Ｓ Ａ 与包被于 ９ 孔酶标板上的大鼠尾胶原蛋白交联制 ６ 胶原交联结构， 药物作用一定时间后， 备Ａ Ｇ Ｅ Ｂ Ｓ Ａ 采用以抗 Ｂ Ｓ Ａ为抗体的 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ方法检测 Ｂ Ｓ Ａ残留 量， 以此评价裂解剂的裂解强度。并对 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ全程 Ｂ Ｓ Ａ与葡萄糖孵育 ３ ～４ 个月后， 在 Ｅ （ ） 下出现特异性荧光， ／ Ｅ ３ ９ ５ ／ ４ ６ ０ｎ ｍ ｘ ｍ 电泳显示 ６ 的Ｂ Ｓ Ｄ Ｓ ８ ． ０ｋ ｕ Ｓ Ａ已转化为分子量大于 蛋白质， 表明已形成 Ａ ； ６ ８ ． ０ｋ ｕ Ｇ Ｅ Ｂ Ｓ Ａ Ａ Ｇ Ｅ Ｂ Ｓ Ａ可 与鼠尾胶原蛋白形成特异性的交联结构， 最强特异 性结合的包被量为每孔 ０ 。最理想的封 ． ０ １ ～０ ． １ ｇ μ 闭液为 Ｐ 公司的 Ｓ 封闭缓冲液。用新 ｉ ｅ ｒ ｃ ｅ ｕ ｐ ｅ ｒ Ｂ ｌ ｏ ｃ ｋ ， 二甲基 建立的 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ方法对先导化合物苯基 ４ ５ 噻唑氯嗡盐（ ） 及新合成 １ 种裂解剂进行了 Ａ Ｌ Ｔ ７ １ １ ０ 体外裂解效应的评价， Ａ Ｌ Ｔ ７ １ １结果与文献报道基 本一致； 本方法筛选的结果与高效液相以小分子二 羰基化合物为底物的筛选方法结果趋势一致。结论 此方法可用于体外筛选 Ａ 并具 Ｇ Ｅ交联裂解化合物， 有高通量的特点。 关键词：晚期糖基化交联产物裂解剂；药物筛选； 酶联免疫吸附分析 中图分类号：Ｒ ９ ６ ５ ． ２ 文献标识码：Ａ 文 章 编 号：１ （ ） ０ ０ ０ ３ ０ ０ ２ ２ ０ ０ ４ ０ ３ ０ ２ ２ ８ ０ ５ 条件进行了优化。 结果
联系作者
１ 材料和方法
１ ． １ 试剂 （ 组分Ⅴ， 分子量 ６ ， 电泳纯） ， ， ， ， Ｂ Ｓ Ａ ８ｋ ｕ ３ ３ ′ ５ ５ ′
：ｗ ：（ ） Ｅ ｍ ａ ｉ ｌ ａ ｎ ｇ ｌ ｌ ＠ｎ ｉ ｃ ． ｂ ｍ ｉ ． ａ ｃ ． ｃ ｎ Ｔ ｅ ｌ ０ １ ０
６ ６ ８ ７ ４ ６ ０ ３
， ， ］ １ ２ ５ 平行性［ ； 而选择性打开 Ａ Ｇ Ｅ结构中反应性 α ２
羰基键， 裂解 Ａ Ｇ Ｅ交联结构能够降低糖尿病大鼠、 老龄狗和灵长类恒河猴的血管硬度， 改善血管的顺
］ ６ ～ ８ 。因此， 发展以 Ａ 羰基为靶点的 应性［ Ｇ Ｅ的 α ２ Ａ Ｇ Ｅ裂解剂极有可能为逆转老年血管硬化症提供 ］ ９ 有效的治疗药物［ 。基于 Ａ 设计合 Ｇ Ｅ的交联结构， 成Ａ Ｇ Ｅ交联裂解剂是一种新型的基于机制的药物
中国药理学与毒理学杂志
年６ 月；１ （ ） ２ ０ ０ ４ ８ ３
·２ · ２ ９
四甲 基 联 苯 胺 （ ， ） ，Ａ ｔ ｅ ｔ ｒ ａ ｍ ｅ ｔ ｈ ｙ ｌ ｂ ｅ ｎ ｚ ｉ ｄ ｉ ｎ ｅ Ｔ Ｍ Ｂ ｍ ｒ ｅ ｓ ｃ ｏ 公司产品； 封闭缓冲液， 公司产品； Ｓ ｕ ｐ ｅ ｒ Ｂ ｌ ｏ ｃ ｋ Ｐ ｉ ｅ ｒ ｃ ｅ 山羊抗兔 Ｉ （ 辣根过氧化物酶， ｇ Ｇ Ｈ Ｒ Ｐ ｈ ｏ ｒ ｓ ｅ ｒ ａ ｄ ｉ ｓ ｈｐ ｅ ｒ ） 华美生物工程公司产品； 其余化学试剂均为 ｏ ｘ ｉ ｄ ａ ｓ ｅ 国产分析纯试剂。 Ａ Ｇ Ｅ交联裂解先导化合物苯基 ， 二甲基噻唑氯嗡盐（ ， ５ ｐ ｈ ｅ ｎ ｙ ｌ ４ ５ ｄ ｉ ｍ ｅ ｔ ｈ ｙ ｌ ｔ ｈ ｉ ａ ｚ ｏ ｌ ｉ ｕ ｍ ４ ，Ａ ） 及１ ｃ ｈ ｌ ｏ ｒ ｉ ｄ ｅ Ｌ Ｔ ７ １ １ ０个新化合物由本室设计合 成， 并 经 质 谱 和 核 磁 确 证 其 结 构， 高效液相色谱 （ ） 分析纯度 ＞９ Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ ８ ％。 １ ０个新化合物的化学名 如下： 〔 （ 甲氧基 苯基） 氧 乙基〕 ， ， ， 四 ３ ２ ４ ２ ４ ５ ６ ７ 氢 苯并噻唑溴化物、 〔 （ 氟 苯基） 氧 乙基〕 ３ ２ ４ ２ ， ， ， 四 氢 苯 并 噻 唑 溴 化 物、 〔 （ 硝 基 苯 ４ ５ ６ ７ ３ ２ ４ 基） 氧 乙基〕 ， ， ， 四氢 苯并噻唑溴化物、 ２ ４ ５ ６ ７ ３ 〔 （ ， 二甲氧基 苯基） 氧 乙基〕 ， ， ， 四氢 ２ ３ ４ ２ ４ ５ ６ ７ 苯并噻唑溴化物、 〔 （ 溴 苯基） 氧 乙基〕 ， ， ３ ２ ４ ２ ４ ５ ， 四氢 苯并噻唑溴化物； 〔 （ 氯 苯基） 氧 ６ ７ ３ ２ ４ ２ 乙基〕 ， ， ， 四氢 苯并噻唑溴化物、 〔 （ 甲氧 ４ ５ ６ ７ ３ ２ ３ 基 苯基） 氧 乙基〕 ， ， ， 四氢 苯并噻唑溴 化 ２ ４ ５ ６ ７ 物、 〔 （ ， 二甲氧基 苯基） 氧 乙基〕 ， ， ， ３ ２ ２ ５ ２ ４ ５ ６ ７ 四氢 苯并噻唑溴化物、 〔 氧 对 甲苯基 乙基〕 ３ ２ ２ ， ， ， 四氢 苯并噻唑溴化物； 萘 基 氧 乙 ４ ５ ６ ７ ３ ２ ２ ２ ， ， ， 四氢 苯并噻唑溴化物。 基） ４ ５ ６ ７ １ ． ２ Ａ Ｇ Ｅ交联体外制备 ］ ９ １ ． ２ ． １ Ａ Ｇ Ｅ Ｂ Ｓ Ａ制备［
王莉莉 ，刘洪英，王汝欢，崔 浩，李 松 ） １ ０ ０ ８ ５ ０
（ 军事医学科学院毒物药物研究所，北京 摘要：目的 建立一种快速、 体外筛选晚期糖基化
葡萄糖或其他还原糖分子上的羰基与蛋白质分 子上游离氨基结合形成可逆的加合物， 这些加合物 经分子重排形成一类不可逆产物称晚期糖基化终产 物（ ，Ａ ） 。结合于大 ａ ｄ ｖ ａ ｎ ｃ ｅ ｄ ｇ ｌ ｙ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎｅ ｎ ｄ ｐ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｔ Ｇ Ｅ 最 蛋白分子上的 Ａ Ｇ Ｅ又可与邻近的氨基共价交联，
设计方法，Байду номын сангаас辅以理想的体外筛选模型是快速发展该 类药物的理想途径。目前， 对于体外形成 Ａ Ｇ Ｅ的检 测主要采用 Ａ Ｇ Ｅ或其组成蛋白的特异性抗体做探
］ １ ０ 针［ ， 而利用体外制备 Ａ Ｇ Ｅ交联结构筛选裂解剂 ］ １ １ 的方法描述少， 操作要求烦琐［ ， 并且有些实验材
料国 内 无 法 购 置。因 此， 本研究用牛血清白蛋白 ，Ｂ ） 与葡萄糖孵育制备糖基 （ ｂ ｏ ｖ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ ｒ ｕ ｍａ ｌ ｂ ｕ ｍ ｉ ｎ Ｓ Ａ 化Ｂ （ ） ， 并与鼠尾胶原蛋白在体外制备 Ｓ Ａ Ａ Ｇ Ｅ Ｂ Ｓ Ａ 胶原 交 联 结 构， 结合酶联免疫吸附测定 Ａ Ｇ Ｅ Ｂ Ｓ Ａ （ ，Ｅ ） 方法， 建 ｅ ｎ ｚ ｙ ｍ ｅ ｌ ａ ｂ ｅ ｌ ｅ ｄｉ ｍ ｍ ｕ ｎ ｏ ｓ ｏ ｒ ｂ ｅ ｎ ｔ ａ ｓ ｓ ａ ｙ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 立了体外筛选 Ａ 具有特 Ｇ Ｅ交联结构裂解剂的方法， 异、 快速及高通量的特点。
收稿日期：２ ０ ０ ３ ０ ５ ２ ８ 接受日期：２ ０ ０ ３ ０ ９ ２ ８ 基金项目：国家“ ” 计划资助项目（ ） ８ ６ ３ ２ ０ ０ １ Ａ Ａ ２ ３ ５ ０ ３ １ 作者简介：王莉莉（ ， 女， 安徽省舒城人， 副研究 １ ９ ６ ３ －） 员， 医学博士， 理学硕士， 主要从事新药筛选和分子药理学的 研究工作； 李松（ ） ， 男， 研究员， 药学博士， 主要从事药 １ ９ ６ ３ － 物分子设计研究。
内， 读板机 ４ ｍ ｉ ｎ Ｂ ｉ ｏ Ｒ ａ ｄ Ｍ ｏ ｄ ｅ ｌ ５ ５ ０ ５ ０ ｎ ｍ测定吸光度 （ ） 值。 Ａ ４ ５ ０ｎ ｍ １ ． ３ ． ４ 药物筛选及裂解率的计算 受试化合物每一浓度作 ４孔， 采用 ４孔 Ａ ４ ５ ０ｎ ｍ 平均值。校正 Ａ 孔 孔 ＝Ａ Ｇ Ｅ Ｂ Ｓ Ａ Ａ －Ｂ Ｓ Ａ ４ ５ ０ｎ ｍ ４ ５ ０ｎ ｍ 。药物裂解率以 Ａ 值降低的百分率表示： Ａ ４ ５ ０ｎ ｍ ４ ５ ０ｎ ｍ 孔Ａ 受试药物孔 Ａ ） 孔Ａ （ Ｐ Ｂ Ｓ ／ Ｐ Ｂ Ｓ ４ ５ ０ｎ ｍ－ ４ ５ ０ｎ ｍ ４ ５ ０ｎ ｍ× 。 １ ０ ０ ％
－ １ （ 室温， 避光 ２ ） ； ·Ｌ ０ｍ ｉ ｎ ２ｍ ｏ ｌ Ｈ Ｓ Ｏ １ ０ ２ ４终止反应；
个月，使其形成 Ａ 。同时， 不加入葡萄 ３ ～ ４ Ｇ Ｅ Ｂ Ｓ Ａ 糖， 平行条件制备无糖基化 Ｂ （ ） 。以 ０ Ｓ Ａ ０ Ｂ Ｓ Ａ ． ０ １
－ １ · （ ） 透析， 除去未反应的葡萄糖。 ｍ ｏ ｌＬ Ｐ Ｂ Ｓ ｐ Ｈ７ ． ４ 荧光扫描及十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳
于血管基质与血管老化及心血管系统组织硬化密切 相关， 是引发心、 脑卒中及心、 脑、 肾等重要生命器官
， ］ ３ ４ 功能衰竭的重要原因［ 。尽管至今对 Ａ Ｇ Ｅ交联结
构尚不十分清楚， 但是新近研究证实， 几种由糖蛋白 形成的 Ａ Ｇ Ｅ均具有蛋白质连接的羰基中间体的特 征， Ａ Ｇ Ｅ特殊的光谱和荧光特性与羰基的形成具有
－ １ － １ · 及０ · 葡萄糖在 ０ · Ｂ Ｓ Ａ５ ０ｇ Ｌ ． ５ｍ ｏ ｌ Ｌ ． ２ｍ ｏ ｌ － １ 磷酸盐缓冲液（ ， ） 中， Ｌ Ｐ Ｂ Ｓ ｐ Ｈ７ ． ４ ３ ７ ℃ 避光孵育
满孔封闭 １ｈ ；Ｐ （ 中和。加封闭液 ３ ７ ℃， Ｂ Ｓ Ｔ Ｐ Ｂ Ｓ ＋ 洗板后加入 Ａ ， ， Ｇ Ｅ Ｂ Ｓ Ａ ３ ７ ℃ 孵育 ４ｈ ０ ． ０ ５ ％吐温） 洗板除去未交联的 Ａ 。 Ｐ Ｂ Ｓ Ｔ Ｇ Ｅ Ｂ Ｓ Ａ １ ． ３ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ实验条件的优化 １ ． ３ ． １ Ａ Ｇ Ｅ Ｂ Ｓ Ａ适宜量的选择 以不同浓度（ 每孔 ０ ） ． ０ ０ １ ～０ ． ３ ｇ Ａ Ｇ Ｅ Ｂ Ｓ Ａ加 μ 于包被有鼠尾胶原的 ９ 孔板孔中， 进行交联； 同时， ６ 以不同浓度 Ｂ Ｓ Ａ或 ０ Ｂ Ｓ Ａ进行上述过程， Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ法 测定其饱和曲线， 选择 Ａ 最特异的交 Ｇ Ｅ Ｂ Ｓ Ａ最大、 联量作为实验用交联量。 １ ． ３ ． ２ 封闭液优化 由于本实验一抗为抗 Ｂ 易与常 Ｓ Ａ多克隆抗体， 规封闭液中牛血清发生交叉反应。因此， 比较了马 血清、 酪蛋白及商品化 Ｓ ｕ ｐ ｅ ｒ Ｂ ｌ ｏ ｃ ｋ封闭缓冲液的封 闭效果。 １ ． ３ ． ３ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ方法流程 经大量预实验， 确定了以下 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ筛选流程。 首先用鼠尾胶原包被 ９ 每孔 ７ ） ， ６孔板（ ５ ｇ ４ ℃２ ４ μ ； 用Ｓ ； ｈ ｕ ｐ ｅ ｒ Ｂ ｌ ｏ ｃ ｋ封闭缓冲液 ３ ７ ℃封闭 １ｈ Ｐ Ｂ Ｓ Ｔ洗 板 ３次； 加入 Ｂ ， ； Ｓ Ａ Ａ Ｇ Ｅ ３ ７ ℃孵育 ４ｈ Ｐ Ｂ Ｓ Ｔ洗板 ４ 次； 加入受试化合物（ 每孔 １ ， 溶解） ０ ０ Ｌ Ｐ Ｂ Ｓ ３ ７ ℃孵 μ 育１ ； 次； 加兔抗 Ｂ ） ， ６ｈ Ｐ Ｂ Ｓ Ｔ洗板 ４ Ｓ Ａ抗体（ １ ∶ ５ ０ ０ ； 次； 山羊抗兔 Ｉ （ ３ ７ ℃， ５ ０ｍ ｉ ｎ Ｐ Ｂ Ｓ Ｔ洗板 ４ ｇ Ｇ Ｈ Ｒ Ｐ １ ∶ ） ； 加底 物 液 Ｔ ３ ７ ℃， ５ ０ｍ ｉ ｎ Ｐ Ｂ Ｓ Ｔ洗板 ３次； Ｍ Ｂ １ ０ ０ ０