一种DNA染料结合聚合酶链反应检测鉴别植物病原细菌死活细胞

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《微生物学》考研2021年考研全真模拟试卷

《微生物学》考研2021年考研全真模拟试卷微生物学考研全真模拟试卷及详解（一）（满分150分）一、名词解释（每题2分，共20分）1流产转导答：流产转导是指转导的DNA不整合到受体细胞的染色体上，虽然不能继续复制，但仍能表达基因的功能的转导。

最终将随细胞分裂而丢失，也可能出现单线遗传。

2鉴别培养基答：鉴别培养基是指一类在成分中添加能与目的菌的无色代谢产物发生显色反应的指示剂，从而达到只须用肉眼辨别颜色就能方便地从近似菌落中找出目的菌菌落的培养基，如伊红美蓝乳糖培养基可用于鉴别大肠杆菌。

3化能异养型微生物答：化能异养型微生物是指以有机化合物为碳源，利用有机化合物氧化过程中产生的化学能为能源，以有机物作为供氢体进行营养代谢的微生物。

它包括自然界绝大多数的细菌，全部的放线菌、真菌和原生动物。

根据生态习性，化能异养型微生物可分为腐生型和寄生型两类。

4卫星病毒答：卫星病毒是一类基因组缺损、需要依赖辅助病毒，基因才能复制和表达，并完成增殖的亚病毒，不单独存在，常伴随着其他病毒一起出现。

常见的卫星病毒有腺联病毒（AAV）、卫星烟草花叶病毒（STMV）、卫星玉米白线花叶病毒（SMWLMV）等。

5基因组答：基因组是指决定已表达的和可表达的与一定生物的所有特征相关的全部基因。

基因组并不代表它的组成基因的等位性。

一种生物或细胞，不管是杂合体还是纯合体，也不管是单倍体、二倍体或多倍体，都仅有一个基因组。

基因组也可用于指实际上的（细菌中的）一条染色体或单倍体的成套染色体。

6extremphile答：extremphile的中文名称是嗜极微生物，是指最适合在极端环境中生存的微生物的总称。

包括嗜热、嗜冷、嗜酸、嗜碱、嗜压、嗜金、抗辐射、耐干燥和极端厌氧等多种类型。

针对极端微生物的研究，对于揭示生物圈起源的奥秘，阐明生物多样性形成的机制，认识生命的极限及其与环境的相互作用的规律等，都具有极为重要的科学意义。

7TD抗原答：TD抗原即胸腺依赖型抗原。

2023-2024学年山东省烟台市高一上学期期中学业水平诊断生物试题

2023-2024学年山东省烟台市高一上学期期中学业水平诊断生物试题1.下列事实或证据不支持“细胞是基本的生命系统”这一观点的是（）A．离体的线粒体在一定条件下会释放CO 2B．动植物体的生长、发育以细胞增殖、分化为基础C．病毒的生命活动离不开活细胞D．缩手反射的完成需要一系列不同细胞的协调配合2.嗜盐细菌能从环境中获取特定的可溶性物质并在体内积累，以缓解高钠胁迫，同时具有吸收、浓缩和向胞外排放N的能力。

某些嗜盐细菌还能产生降解塑料的脂质，可用于白色污染的生态恢复。

下列叙述错误的是（）A．嗜盐细菌细胞内含2种核酸、8种核苷酸、5种碱基B．嗜盐细菌通过体内积累的可溶性物质和高浓度来平衡细胞内外渗透压C．嗜盐细菌吸收和排出N 的方式相同D．嗜盐细菌降解塑料的特殊脂质在其内质网上合成3.下列关于生物学实验或研究方法的叙述，正确的是（）A．由部分植物细胞有叶绿体得出植物细胞都有叶绿体的结论，运用了完全归纳法B．在细胞膜结构模型的探索过程中，运用了提出假说的方法C．甜菜块根含有较多蔗糖，因此可用于还原糖的鉴定D．用高倍光学显微镜可观察到黑藻线粒体的双层膜结构4.花生种子萌发时(真叶长出之前，此时不能进行光合作用)，脂肪水解成脂肪酸和甘油，脂肪酸和甘油分别在多种酶的催化下，形成葡萄糖，最后转变成蔗糖，并转运至胚轴，供给胚的生长和发育。

下列说法正确的是（）A．脂肪的含氧量比糖类多，与同质量糖类比，其氧化分解产生水和释放的能量更多B．花生种子中储存的脂肪大多含有饱和脂肪酸C．花生种子萌发初期干重会增加，导致干重增加的主要元素是氧D．相对于玉米种子，花生的播种深度应该深一点5.龙虾的血蓝蛋白由6条相同肽链组成，每条肽链都含有3个结构区域。

区域I为前175个氨基酸，区域Ⅱ是由第176~400位氨基酸组成的活性中心，两个铜离子分别与活性部的三个组氨酸侧链结合，是结合分子所必需的，第401~658位氨基酸以折叠的形式构成区域Ⅲ。

植物基因组DNA的提取与检测

生命科学学院专业生物技术 2016级生技班666组姓名余梓棋同实验者黄剑宇黄少凯 2018年 5 月 8日题目：植物基因组DNA的提取与检测一．实验目的:1.了解真核生物基因组DNA提取的一般原理；2.掌握基因组DNA提取的方法和步骤。

二．实验原理1.液氮研磨：液氮能迅速将植物组织温度降到零度以下，使组织细胞变得脆而易碎，此时对植物组织进行研磨，能大大提高研磨的效率，植物组织迅速变为粉末状，增大表面积，提高提取植物DNA的效率。

2.SDS等离子型表面活性剂处理：SDS等离子型表面活性剂能溶解膜蛋白而破坏细胞膜，使核蛋白解聚，从而使DNA游离出来，且使DNA保持溶解溶液状态，易于分离3.苯酚和氯仿处理：苯酚和氯仿等有机溶剂能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质；4.异丙醇处理：上清液中加入异丙醇使DNA沉淀，离心后DNA沉淀于离心管底部，便于移去提取液。

而后将沉淀DNA溶于TE缓冲液中，即得植物基因组DNA溶液；5.DNA的琼脂糖凝胶电泳鉴定：带电荷的物质，在电场中的趋向运动称为电泳。

DNA的琼脂糖凝胶电泳可以分离长度为200bp至近50kb的DNA分子。

DNA的迁移率（U）的对数与凝胶浓度（T）之间存在反平行线性关系。

因此，要有效地分离不同大小的DNA片生命科学学院专业生物技术 2016级生技班666组姓名余梓棋同实验者黄剑宇黄少凯 2018年 5 月 8日段，选用适当的琼脂糖凝胶浓度是非常重要的。

三．实验材料及设备1.实验材料：新鲜的植物幼嫩叶片2.实验仪器：（1）研磨皿，10、100、1000μL取液器各一支，台式高速离心机，漩涡器；（2）电泳仪，电泳槽，样品槽模板（梳子），有机玻璃内槽，水平仪，取液器，微波炉，凝胶成像系统。

3.实验试剂：（1）植物DNA提取a.细胞提取液：100mmol/L Tris-HCl, pH8.0, 5mmol/L EDTA,500mmol/L NaCl, 1.25% SDS，1%β-巯基乙醇（去除酚类）；b.氯仿:异戊醇（24:1）；c.其它试剂：液氮、无水乙醇、 TE缓冲液、异丙醇、洗涤缓冲液；作用：氯仿可使蛋白质变性，有助于液相与有机相的分离。

转基因植物的检测与鉴定

转基因植物的检测与鉴定宫雪超于丽杰高金秋哈尔滨师范大学环境与生命科学院黑龙江哈尔滨摘要对植物转基因过程中报告基因的种类和应用范围转基因植物的检测和鉴定方法转基因植物检测和鉴定方法的评价进行了综述关键词转基因植物检测鉴定评价中图分类法文献标识码文章编号植物转基因实验因受体系统的限制外源基因的转化频率较低为了达到转化目的必然要获得大量的转化材料如何在数以千万计的转化植株或细胞中快速有效地检测出转基因阳性植株或细胞外源基因是否整合到植物染色体上整合的方式如何整合到染色体上的外源基因是否正确表达等问题就成为重要的研究课题根据外源基因表达的不同水平对外源基因的检测和鉴定可以分为三个水平进行整合水平转录水平和翻译水平本文从外源基因表达的不同水平阐述转基因植物的检测与鉴定外源基因整合水平的鉴定检测外源基因是否转化成功首先是对报告基因进行检测必要时再进行目的基因的检测检测目的基因需要采用分子杂交方法报告基因报告基因必须具有两大特点一是表达产物和产物的类似功能在未转化的植物细胞内并不存在二是便于检测目前植物基因工程中使用的报告基因一般是编码酶的基因大致分为两类抗性基因和编码催化人工底物产生颜色变化的酶基因现在常用的报告基因主要有基因基因冠瘿碱合成酶基因H基因基因基因荧光素酶基因二氢叶酸还原酶基因等近年来绿色荧光蛋白基因作为一种新型的报告基因在植物基因转化及基因表达调控中得到应用并显示出较其他几个报告基因更大的优越性基因的检测基因具有以下优点①适用于各种生物的基因转化②检测方法简便无需底物酶辅因子等物质只要有紫外光或蓝光照射其表达产物就可以发出绿色荧光这对转化细胞的检测极为有利③便于活体检测十分有利于活体内基因表达调控的研究④检测时可获得直观信息有利于转基因植物安全性问题的研究及防范若此报告基因通过自然杂交扩散到其他栽培植物或杂草中时很容易通过光照获得直观信息基因的检测基因也是广泛用作转基因植物细菌和真菌的报告基因尤其是在研究外源基因瞬时表达的转化试验中基因应用的最多基因端与其他结构形成的融合基因能正常表达所产生的融合蛋白仍具有活性这为研究外源基因表达的具体细胞部位及组织部位提供了条件这是它的一大优点但是需要注意的是有一些植物在胚胎状态时能产生内源活性在转基因和代的子叶花粉和胚珠中检测到活性随着组织的成熟衰老表达逐渐停止在实验过程中要设定严格的阴性对照活性的检测方法有很多包括组织化学法色谱法荧光法等其中植物切片组织化学定位分析是分辨组织中不同细胞个体和不同的细胞类型基因表达差异的一种有效方法转基因植株的检测聚合酶链式反应是首选的转基因产品检测方法技术能够有效地扩增低拷贝的靶片段可以检测到每克样品含有～的转化基因成分对转基因产品大分子量检测的灵敏度可以达到样品含量的因为的高度特异性及检测所需的模板量仅为以内所以为外源基因整合的检测提供了便利条件尤其是在转化材料少又需及早检测的时候现在已经利用该技术对欧美杨番茄辣椒葡萄豆瓣菜小麦等转基因植物进行鉴定是转基因植物鉴定中最简单最常用的方法检测具有用量少操作简单成本低耗时少不需要同位素等优点但检测也存在缺点由于扩增十分灵敏有时会出现假阳性扩增因此检测只能作为初步结果杂交证明外源基因在植物染色体上整合情况的最可靠方法是杂交只有经过分子杂交鉴定为阳性的植株才可以称为转基因植物年第期牡丹江师范学院学报自然科学版总第期收稿日期利用杂交~可以确定外源基因在植物中的组织结构和整合位置~拷贝数以及转基因植株世代外源基因的稳定性]分子杂交是进行核酸序列分析~重组子鉴定及检测外源基因整合表达的强有力手段~它具有灵敏性高~特异性强的特点~是当前鉴定外源基因整合及表达的权威方法杂交可以清除操作过程中的污染以及转化愈伤组织中质粒残留所引起的假阳性信号~准确度高~但杂交程序复杂~成本高~且对实验技术条件要求较高根据杂交时所用的方法~核酸分子杂交又可分为印迹杂交<>~斑点<>杂交或狭缝<>杂交和细胞原位<>杂交等现在已在水稻]~玉米~大白菜]~豆瓣菜]~马铃薯~杏~烟草等植物中得到广泛应用外源基因转录水平的鉴定转录水平上的检测方法主要就是杂交~它以和探针杂交的技术检测基因在转录水平上的表达杂交杂交和杂交相比~更接近性状表现~更具有现实意义~被广泛用于转基因植物的检测~]~现已用于杨树~豆瓣菜~马铃薯~草莓~烟草等转基因植物的检测中但提取条件严格~在材料内含量不如高~不适于大批量样品的检测检测<>也是检测外源在植物体内转录表达的一种方法如果从细胞总提取物中得到特异的扩增条带~则表明外源基因实现了转录此法简单~快速~但对外源基因转录的最后决定~还需与杂交的实验结果结合外源基因表达蛋白的检测外源基因编码的蛋白在转基因植物中能够正常表达并表现出应有的功能是植物基因工程的最终目的杂交杂交是集蛋白质电泳~印迹和免疫测定为一体的检测方法它具有很高的灵敏性~可以从植物细胞总蛋白中检出的特异蛋白质~若是提纯的蛋白质~可检出～杂交检测目的基因在翻译水平的表达结果~可得知被检植物细胞内目的蛋白是否表达~表达的浓度大小及大致的分子量能直接显示目的基因在转化体中是否经过转录~翻译最终合成蛋白而影响植株的性状表现一般来讲~杂交的结果与性状表现有直接关系~]检测<酶联免疫吸附法>是一种利用免疫学原理检测抗原~抗体的技术由于酶的放大作用~使测定的灵敏度极高~可检测出的目的物~同时酶反应还具有很强的特异性除了可溶性抗原<抗体>之外~还可以检测含表面抗原的细胞该方法已用于辣椒~水稻~烟草~番茄~]等转化植株的鉴定工作中的检测虽然很灵敏~但容易出现本底过高的问题~应予以充分的注意蛋白检测试纸蛋白检测试纸是一种基于的改进方法或者~用于转基因植物表达量的检测]先将特异性抗体吸附在膜上~将膜蘸入样品溶液~蛋白质随着液相扩散~遇到抗体~发生抗原抗体反应~通过阴性对照筛选阳性结果~给出转基因成分含量的大致范围此方法操作简单~费用低~耗时少<～>原位杂交检测原位杂交技术目前在植物基因工程研究中已成为外源基因在染色体上整合定位及在组织细胞内表达定位的主要方法原位杂交技术主要有同位素原位杂交和荧光原位杂交<>~使用放射性同位素标记~放射自显影检出该方法灵敏性强~对于单拷贝的序列检出非常有效原位杂交可以分为三个层次:①染色体原位杂交~可以确定外源基因在染色体上的整合位置及整合方式~还可以研究外源基因的整合方式对外源基因遗传稳定性~外源基因表达的影响~以及不同的转化方式与外源基因整合方式的关系等重大机理问题;②组织细胞原位杂交~对特定的基因表达的进行组织细胞分布的空间定位~获得外源基因在植物组织细胞内表达情况<是否表达~表达位置~表达量等>;③外源基因表达蛋白的组织细胞免疫定位~指利用外源基因表达蛋白的抗体~通过免疫反应确定表达蛋白在转基因植物组织及细胞中的分布该方法也是研究转基因植物中外源基因功能~外源蛋白稳定性及功能蛋白含量的重要手段检测方法的评估用提取方法对目的基因进行检测方法简便~适合大批量样品的分析~又能检测目的基因的完整性~是早期检测的较好方法]~~杂交分别从整合~转录~翻译水平检测外源基因~是检测外源基因最经典~最可靠的方法虽然现在出现了一些像~等功能类似~方便快捷的检测技术~然而由于其技术本身的原因~还不能取代以上技术在转基因植物检测和鉴年第期牡丹江师范学院学报!自然科学版"# !总第期"定上的权威地位随着科学技术的发展各种新的检测方法也在不断涌现例如生物传感器筛选法远红外线光谱法定量实时基因芯片等每种检测方法都有其自身的优点和不足应该根据不同的检测目的和要求选择合适的方法在实际工作中把几种方法结合运用可获得外源基因不同表达水平的信息是准确检测转基因植物产品的合理策略参考文献王学聘卞祖娴张晋华等欧美杨转基因植物的检测林业科学朱新产导入外源对小麦基因表达的影响西北植物学报刘建强孙仲序赵春芝转基因植物鉴定方法的研究概况山东林业科技李乃坚袁四清卡那霉素胁迫对转基因烟草种子发芽的影响广东农业学报毛慧珠唐惕曹湘玲等抗虫转基因甘蓝及其后代的研究中国科学辑编辑琳莉收稿日期基金项目黑龙江发展高新技术产业专项资金无基质喷雾栽培法生产脱毒小薯的研究于洪涛黑龙江省农业科学院绥化研究所黑龙江绥化摘要研究了无基质喷雾栽培法生产马铃薯脱毒小薯过程中不同品种不同苗来源及不同收获方式对块茎产量的影响结果表明无基质喷雾栽培法生产马铃薯小薯以扦插苗分期收获效果最佳无基质喷雾栽培比较适合栽培早熟品种以早大白最佳关键词无基质马铃薯脱毒小薯中图分类法文献标识码文章编号在马铃薯良种繁育体系中原种的生产是关键环节其质量的高低和数量的多少直接影响马铃薯的生产无基质喷雾栽培法是一种极有前途的核心种薯生产方法其主要技术是将适于马铃薯不同发育时期的营养液适时适量地喷于保持在黑暗状态下的马铃薯植株根际使马铃薯根际获得充分的养分促进马铃薯块茎的生长马铃薯喷雾栽培技术在我国尚属起步阶段提高其生产效率是生产实践中亟待解决的问题为此本试验对无基质喷雾栽培法生产马铃薯脱毒小薯过程中不年第期牡丹江师范学院学报自然科学版总第期转基因植物的检测与鉴定作者：宫雪超，于丽杰，高金秋， GONG Xuechao， YU Lijie， GAO Jinqiu作者单位：哈尔滨师范大学环境与生命科学院,黑龙江,哈尔滨,150025刊名：牡丹江师范学院学报（自然科学版）英文刊名：JOURNAL OF MUDANJING TEACHERS' COLLEGE(NATURAL SCIENCES EDITION)年，卷(期)：2007(1)被引用次数：3次1.Datta S K;A Petew hans;K Datta Herbicide-resistance rice plants from IRRI breeding line 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Xing-bo转基因植物检测技术研究[期刊论文]-河北农业科学2008,12(7)3.贾月梅转基因植物检测技术的发展[期刊论文]-世界农业2007(6)4.贺熙勇.陈善春.彭爱红.HE Xi-yong.CHEN Shan-chun.PENG Ai-hong转基因植物的分子检测与鉴定方法及进展[期刊论文]-热带农业科技2008,31(1)5.张莹.张永军.吴孔明.赵奎军.彭于发.郭予元.Zhang Ying.Zhang Yongjun.Wu Kongming.Zhao Kuijun.Peng Yufa.Guo Yuyuan转基因植物的检测策略和检测技术[期刊论文]-植物保护2007,33(1)6.马强.徐勤青.李栋转基因植物检测方法的研究与进展[期刊论文]-种子科技2009,27(4)7.刘信.宋贵文.沈平.厉建萌.Liu Xin.Song Guiwen.Shen Ping.Li Jianmeng国外转基因植物检测技术及其标准化研究综述[期刊论文]-农业科技管理2007,26(4)8.刘建强.孙仲序.赵春芝转基因植物鉴定方法的研究概况[期刊论文]-山东林业科技2002(5)9.芦春斌.Lu Chunbin转基因植物(农产品)中转基因成分的PCR检测[期刊论文]-种子2006,25(1)10.黄亚东.赵文.李校堃.苏志坚.吴春利.何健凡.房师松.HUANG Ya-dong.ZHAO Wen.LI Xiao-Kun.SU Zhi-jian .WU Chun-li.HE Jian-Fan.FANG Shi-Song利用放射免疫技术快速检测转基因植物[期刊论文]-农业生物技术学报2005,13(3)1.王莹.任大明盐芥T-DNA插入突变体库的建立及初步分析[期刊论文]-湖北农业科学 2011(4)2.刘松瑜.谢深喜.陶爱群.周亚洲.周力.沈程清农杆菌介导的果树转基因研究进展[期刊论文]-中国农学通报2009(9)3.王文文.孟艳玲.宗晓娟.王甲威.魏海蓉.崔海金.刘庆忠核果类果树遗传转化及检测技术研究进展[期刊论文] -山东农业科学 2013(4)引用本文格式：宫雪超.于丽杰.高金秋.GONG Xuechao.YU Lijie.GAO Jinqiu转基因植物的检测与鉴定[期刊论文]-牡丹江师范学院学报（自然科学版） 2007(1)。

重组酶聚合酶扩增技术在植物病原快速检测中的应用

重组酶聚合酶扩增技术在植物病原快速检测中的应用作者：马文娣田逸英焦志远周涛范在丰来源：《植物保护》2021年第03期摘要：植物病原的快速检测对于植物病害防控具有重要意义。

重组酶聚合酶扩增（recombinase polymerase amplification，RPA）是近年建立的等温核酸扩增技术，具有灵敏度高、特异性强、适用于现场快速检测等特点，已在多个领域广泛应用。

本文对重组酶聚合酶扩增技术的原理、特性、检测方法及其在植物病原体检测领域的应用进展加以综述。

关键词：重组酶聚合酶扩增; 植物病原; 检测中图分类号：S 474文献标识码： ADOI： 10.16688/j.zwbh.2020038Recombinase polymerase amplification and its applications inquick detection of plant pathogensMA Wendi， TIAN Yiying， JIAO Zhiyuan， ZHOU Tao， FAN Zaifeng*（Department of Plant Pathology， China Agricultural University， Beijing 100193， China）AbstractThe rapid diagnosis of plant pathogens is essential for efficient prevention and control of plant diseases. Recombinase polymerase amplification （RPA） is an isothermal nucleic acid amplification technology developed in recent years， which has been widely applied in many fields. It is suitable for on-site rapid detection with high sensitivity and strong specificity. In this paper， we review the principles， characteristics， detection methods of RPA and its applications in the detection of plant pathogens.Key wordsrecombinase polymerase amplification; plant pathogen; detection病原物的準确检测和鉴定是植物病害防控策略中的关键环节。

植物检验检疫技术

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第五章植物检验检疫技术
• 第一节常规检验检疫技术 • 二、实验室检验检疫技术 • 4、洗涤检验法
洗涤检验的操作程序如下：
(3)镜检计数：弃去离心管内的上清液，加入一定量蒸馏水或其它浮载液，重新悬浮沉集在离心管底部孢子，取悬浮液，滴加在血球计数板上，用高倍显微镜检查孢子种类并计数，据此可计算出种子的带菌量。
琼脂平皿法用琼脂培养基代替了吸水纸
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第五章植物检验检疫技术
• 第一节常规检验检疫技术
• 二、实验室检验检疫技术
• 9、保湿萌芽检验
萌芽法检验沙土萌发检验土内萌发检验试管幼苗症状测定
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第五章植物检验检疫技术
• 第一节常规检验检疫技术 • 二、实验室检验检疫技术 • 10、诱捕器诱集检验
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第五章植物检验检疫技术
• 第一节常规检验检疫技术
• 二、实验室检验检疫技术
• 12、植物病原线虫的各种分离方法
浅盘分离法：原理同漏斗法
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第五章植物检验检疫技术
• 第一节常规检验检疫技术 • 二、实验室检验检疫技术
• 12、植物病原线虫的各种分离方法
简易漂浮分离法：本法利用干燥的线虫胞囊能漂浮在水面的特性分离土壤中的马铃薯金线虫 (Globoderarostochiensis) 和各种胞囊线虫(Heterodera)。
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第五章植物检验检疫技术
• 第一节常规检验检疫技术
• 二、实验室检验检疫技术 • 2、染色检验法对植物病原细菌检验可以用革兰氏染色法和
鞭毛染色法，对于植物病原线虫则用透明染色法
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第五章植物检验检疫技术

PMA—PCR技术在植物病原细菌检疫中的应用前景

和力的光敏染料，其不能透过完整的细胞膜，但
可以穿过受损的细胞膜进入细胞内，与暴露来的ＤＮＡ产生共价交联反应。在可见光（最大吸收
峰为４６０ｎｍ）的作用下，ＰＭＡ所带的光敏性叠氮基Ｌ才Ｊ转化为高活性的自由基，并与结合位点附近的任意碳氢化合物反应形成稳定的共价氮碳键，
ＪＯＵＲＮＡ１ＯＦＩＮＳＰＥＣＴＩＯＮＡＮＤＱＵＡＲＡＮＴＩＮＥ检验检疫学刊
ＰＭＡ — ＰＣＲ技术在植物病原细菌检疫中的应用前景
刘鹏牛春敬胡佳续冯洁王金成黄国明
（天津出入境检验检疫局天津３００４６１）
ｃｅｌｌｍｅｍｂｒａｎｅａｎｄｈａｓｈｉｇｈａｉｎｆｉｔｙｗｉｔｈＤＮＡｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．Ｔｈｅｃｒｏｓｓ — ｌｉｎｋｉｎｇｏｆＰＭＡａｎｄＤＮＡｃａｎｉｎｈｉｂｉｔＰＣＲａｍｐｌｉｉｃｆａｔｉｏｎｒｅａｃｔｉｏｎｓ．ＴｈｅｐａｐｅｒｄｅｓｃｒｉｂｅｓｔｈｅｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆＰＭＡ— ＰＣＲｍｅｔｈｏｄｗｈｉｃｈｄｅｔｅｃｔｓｖｉａｂｌｅｃｅｌｌｓａｎｄｄｉｓｃｕｓｓｅｓｔｈｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｐｒｏｓｐｅｃｔｓｏｆｔｈｅｍｅｔｈｏｄｉｎｐｌａｎｔｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｂａｃｔｅｒｉａｑｕａｒａｎｔｉｎｅ．

氮溴化丙锭与聚合酶链反应结合的细菌活细胞检测方法

（５ＣＧＣＣＡＧＧＧＴＴＴＴＣＣＣＡＧＴＣＡＣＧＡＣ３）和２７Ｆ
聚合酶，４ｌ脱氧核糖核苷酸，用超纯水补足体积。ＰＣＲ反应的程序：第一步，预变性：温度是９４￣Ｃ，时间为５ｍｉｎ；第二步
１资料与方法
１．１一般资料：菌种为大肠杆菌ＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉＡＴＣＣ８７３９，运用ＬＢ液体培养在１６０ｒ／ｍｉｎ、３０ ℃下进行２４ｈ的培养。试剂为ＰＭＡ（美国Ｂｉｏｔｉｕｍ公司）；细菌通用引物１４９２Ｒ
４参考文献
［１１】夏恩兰．官腔镜临床应用进展［Ｊ］．实用妇产科杂志，２００５，２１（７）：４０５
氮溴化丙锭与聚合酶链反应结合的细菌活细胞检测方法
史菊（江苏省泗洪县人民医院，江苏泗洪２２３９００）
吉林医学２０１３年２Ｙ］第３４卷第６期
１１４１
高，直视病灶，定位准确及镜下去除，是我们临床上对于异常子宫出血排除子宫内膜病变的一项安全准确的诊疗技术。
［２】徐成康，龚江红，余利云，等．宫内节育器导致月经期延长的子宫内
液未经ＰＭＡ处理的为对照组。３ｍｉｎ光照后进行ＰＭＡ曝光交联，
对ＰＭＡ光照交联受浊度的影响进行考察；④不同条件制备死细胞

应用聚合酶链式反应鉴定实验细胞的来源种属

应用聚合酶链式反应鉴定实验细胞的来源种属卞晓翠;刘玉琴;王春景;苏小玲;赵晓梅;顾蓓;张宏【期刊名称】《基础医学与临床》【年(卷),期】2009(029)004【摘要】目的应用聚合酶链式反应(PCR)鉴定常见细胞的种属来源,以判断培养细胞是否存在种间的交叉污染.方法根据文献报道和NCBI数据库我们得到了32对种属特异性引物,并分别针对10种常见的细胞种属,对这些引物进行特异性和敏感性的筛选;以待检测细胞的基因组DNA为模板进行PCR及后续的琼脂糖凝胶电泳;以不同种属来源细胞的DNA混合物作为阳性对照模板,以水作为阴性对照模板.结果针对上述10种常见细胞来源的种属分别得到了1对特异性和敏感性均较好的引物,经PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳后可以准确鉴定待检测细胞的种属来源,并判断该细胞是否存在种间污染.结论应用聚合酶链式反应可以简便、快速地鉴定实验细胞的种属,并判断该细胞是否存在种间的交叉污染.【总页数】8页(P423-430)【作者】卞晓翠;刘玉琴;王春景;苏小玲;赵晓梅;顾蓓;张宏【作者单位】中国医学科学院,北京协和医学院,基础医学研究所,细胞中心,北京,100005;中国医学科学院,北京协和医学院,基础医学研究所,细胞中心,北京,100005;中国医学科学院,北京协和医学院,基础医学研究所,细胞中心,北京,100005;中国医学科学院,北京协和医学院,基础医学研究所,细胞中心,北京,100005;中国医学科学院,北京协和医学院,基础医学研究所,细胞中心,北京,100005;中国医学科学院,北京协和医学院,基础医学研究所,细胞中心,北京,100005;中国医学科学院,北京协和医学院,基础医学研究所,细胞中心,北京,100005【正文语种】中文【中图分类】R331【相关文献】1.细胞色素b基因序列测定进行种属鉴定应用研究 [J], 刘超;刘宏;李红霞;王穗保2.酯酶同工酶鉴定细粒棘球蚴细胞系(13G-5)种属来源 [J], 陆家海;许键;郭中敏;李德昌;郭固3.肝素样品前处理方法比较及荧光定量PCR法鉴定肝素原料种属来源 [J], 周朝东;白海娇;黄哲甦4.荧光定量PCR鉴定胃酶种属来源质控方法研究 [J], 潘莎莎;汪庆燕;周翔;郭睿;杨健;宋博;黄涛;李幸;朱栋;徐燕妮;戎春燕5.荧光定量PCR鉴定胃酶种属来源质控方法研究 [J], 潘莎莎;郭睿;杨健;宋博;黄涛;李幸;朱栋;徐燕妮;戎春燕;汪庆燕;周翔因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

2020届深圳市根洪学校高三生物第四次联考试题及参考答案

2020届深圳市根洪学校高三生物第四次联考试题及参考答案一、选择题：本题共15小题，每小题2分，共30分。

每小题只有一个选项符合题目要求。

1. 少数人注射青霉素后出现胸闷、气急和呼吸困难等过敏（超敏）反应症状，严重者发生休克。

以下有关叙述，正确的是A. 青霉素过敏反应的主要原因是机体免疫防御功能低下B. 青霉素引起的病理性免疫反应，具有特异性和记忆性C. 机体初次接触青霉素后，活化的浆细胞分泌淋巴因子D. 已免疫的机体再次接触青霉素后会发生自身免疫反应2. 如图表示某原核细胞中的一个DNA片段表达遗传信息的过程，其中①为RNA聚合酶结合位点，①①①为核糖体结合位点，AUG为起始密码。

下列相关叙述正确的是ADNA片段AB间仅包含一个基因B.mRNA片段ab间仅能结合三个核糖体C. 蛋白质产物e、f、g结构上的差异主要体现在肽键的数量上D. 过程甲未完成时过程乙即已开始3. 某小儿患佝偻病，发烧时就会抽搐，根据所学知识，建议他平时要补充（）A.新鲜水果和蔬菜B.钙片和维生素DC.谷物种皮和胡萝卜D.蛋白质和脂肪4. 在遗传学发展史上，许多科学家开展了相关的探究，下列有关叙述正确的是（）A.孟德尔利用假说演绎法发现了基因的遗传规律B.萨顿利用类比推理法证明了基因位于染色体上C.摩尔根首先提出基因位于染色体上并予以了验证D.艾弗里利用对照实验证明了DNA是主要的遗传物质5. 已知小麦抗病对感病为显性，无芒对有芒为显性，两对性状独立遗传。

用纯合的抗病无芒与感病有芒杂交，F1自交，播种所有的F2,假定所有的F2植珠都能成活，在F2植株开花前，拔掉所有的有芒植株，并对剩余植株套袋。

假定剩余的每株F2收获的种子数量相等，且F3的表现型符合遗传定律。

从理论上讲F3中表现感病植株的比例为A. 1/8B. 3/8C. 1/16D. 3/166. 斯他林等在发现促胰液素之后，继续进行研究：把一条狗的小肠黏膜刮下来，研磨过滤后注射给另一条狗，后者在胰液分泌明显增加的同时，血压还骤然下降。

常用中药的生物鉴定-PCR

2x106
优点:
need very small amount of sample
缺点:
amplified product may be contaminated with other samples not related to the one
Factors affect to PCR
Dist H2O 10X buffer dNTP Primer 1 Primer 2 Taq polymerase
117 ul 15 ul 12 ul 3 ul 3 ul 0.75 ul
200ul tube
M
Pipette 上下混合
取出15 ul
M
Tc
不加模板的对照组
剩下的加入3 ul Template DNA 用pipette 上下混合分装入tube 15ul/支标上1…….5 1
Annealing Temperature
Too high no PCR product
Too low
much nonspecific product
gradient Temp PCR machine find the suitable Temp Taq polymerase quality Template(模板) DNA quality
54°C
2
56
3
58
4
60
5
62
Tc
55 °C
Run PCR
不加引物但有模板的对照
Pc
加入 1 ul 模板DNA
15 ul M
T
template
1 ul
TC
3 ul template (T)
pc
Pipette mix

DNA聚合酶链反应鉴测梨树火疫病

DNA聚合酶链反应鉴测梨树火疫病武延安【期刊名称】《西北师范大学学报：自然科学版》【年(卷),期】1994(030)002【摘要】对细菌Ｅ．ａｍｙｌｏｖｏｒａ，Ｅ．ｈｅｒｂｉｃｏｌａ和Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｙｒｉｎｇａｅ的ＤＮＡ提纯，并通过聚合酶链反应，发现引物Ｂ＿５等可用以有效地鉴别Ｅ．ａｍｙｌｏｖｏｒａ．对Ｅ．ａｍｙｌｏｖｏｒａ细胞培养液直接稀释，加清洁剂处理后进行聚合酶链反应（ＰＣＲ）．据引物Ｂ＿５测定，得到清晰而强烈的相同的ＤＮＡ分子电泳光带，可有效反应测定５００个细菌细胞；用引物Ｂ＿５和Ｂ＿６进一步测定细菌Ｅ．ａｍｙｌｏｖｏｒａ。

Ｅ．ｈｅｒｂｉｃｏｌａ和Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ，从Ｅ．ｈｅｒｂｉｃｏｄａ反应获得一个电泳光谱，从Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ获得３个泳谱；用引物Ｂ＿５和Ｂ＿７与细菌Ｅ．ａｍｙｌｏｖｏｒａ和Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ反应，从Ｅ．Ｅ．ａｍｙｌｏｖｏｒａ得到两条相同光带，从Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ反应获得了相似的带谱分布。

【总页数】7页(P64-70)【作者】武延安【作者单位】无【正文语种】中文【中图分类】S436.612.1【相关文献】1.在接种火疫病媒介物的梨树中苯并噻二唑引起的系统抗性 [J], 谢国禄2.荧光定量聚合酶链反应与分支链DNA信号扩增法检测血清HBV DNA的比较[J], 袁静;马为民;周伯平;徐六妹;王火生;John S Tam3.聚合酶链反应检测角膜内皮炎房水中单纯疱疹病毒Ⅰ型DNA及带状疱疹病毒DNA [J], 郭健华;孙洪臣;李敏4.含尿嘧啶DNA糖基化酶的聚合酶链反应检测血清HBV DNA [J], 刘文恩;谭德明5.cDNA文库基础上运用热启动聚合酶链反应末端延伸快速分离全长cDNA序列[J], 闾宏伟;杨向东;何淑雅;杨永宗因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

死细胞

功能性
管胞和导管分子厚壁组织
木栓层根被
在成熟的维管组织中，木质部中具有长管状死细胞——管胞和导管分子，它们都具有木质化次生壁，次生壁厚度不均匀，可形成环纹、螺纹、梯纹、孔纹、纹等不同纹式。管胞和导管分子的死亡是典型的编程性死亡，它是受一定程度控制的主动死亡过程。
起初，幼小的管状分子含有原生质体，可见细胞核，内质，高尔基体、液泡及微管等。尔后，随着细胞的增长，液泡膜破裂，释放水解酶，原生质体分解。导管分子纵连处的端壁膨胀后解体，形成穿孔。这样，导管分子便成死细胞。导管分子互相连接形成了畅通的管道，构成导管；而管胞彼此独立的，但上下管胞间的纹孔是相对连通的，水可通过纹孔而流通。导管分子直径大于管胞，且具有穿孔，所以导管运输水分和矿质元素的效率比管胞高。绝大多数蕨类植物和裸子植物只有管胞而无导管，而被子植物则主要为导管，但也有管胞。但应注意：在韧皮部中的筛管，虽是类似于导管和管胞的管状结构，但它们是活细胞，为一种特殊的无细胞核的活细胞。
某些植物体在长高的同时，也进行着加粗，其表层、皮层等会因根、茎加粗而被撑破，这时由内方薄壁组织恢复分生能力形成木栓形成层，它向内分裂产生少量有生命力的薄壁细胞栓内层，同时向外分裂产生多层排列紧密的细胞，这些细胞原生质逐渐解体，细胞壁木质化，木栓化增厚，形成具有抗压、隔热、耐腐蚀、质地轻的次生保护组织—— —木栓层。
死细胞
细胞种类
目录
01 简介
03 与活细胞的差异性
02 功能性 04 细胞产物
死细胞顾名思义就是死去的细胞，即为不能进行新陈代谢的细胞。包括皮肤角质层细胞、叶片角质层细胞、植物导管、植物木质层细胞。但在植物体中有着许许多多不同类型的死细胞，它们各自执行着特有的生理功能，以维持植物的生命活动。

聚合酶链反应检测日本血吸虫DNA的实验研究

聚合酶链反应检测日本血吸虫DNA的实验研究陆正贤;许静;龚唯;骆伟;张惠琴;荣荣;时长军;夏超明【期刊名称】《中国人兽共患病学报》【年(卷),期】2007(023)005【摘要】目的探索核酸检测在日本血吸虫病诊断中的应用.方法根据日本血吸虫基因设计特异性引物,采用PCR方法对日本血吸虫的成虫、虫卵、日本血吸虫感染家兔的肝组织、粪便、外周血清标本中的DNA进行扩增,并将虫卵和粪便的模板DNA倍比稀释后进行扩增,以测定PCR扩增法的敏感性.结果从日本血吸虫的成虫、虫卵、日本血吸虫感染家兔的肝组织、粪便和外周血清中均扩增到分子量为230 bp的阳性条带,扩增产物经测序并在基因库中匹配,证实为日本血吸虫基因中的一个片段,其同源性为98%.其PCR扩增敏感性检测结果表明,0.021个虫卵DNA模板即可扩增出该特异性阳性条带.结论聚合酶链反应检测日本血吸虫DNA有较高的敏感性,尤其是能从日本血吸虫感染宿主血清中检测出特异性DNA,具有潜在的诊断应用价值.【总页数】5页(P479-483)【作者】陆正贤;许静;龚唯;骆伟;张惠琴;荣荣;时长军;夏超明【作者单位】苏州大学医学院病原生物学教研室,苏州,215123;苏州大学医学院病原生物学教研室,苏州,215123;苏州大学医学院病原生物学教研室,苏州,215123;苏州大学医学院病原生物学教研室,苏州,215123;苏州大学医学院病原生物学教研室,苏州,215123;苏州新力生物技术研究所,苏州,215111;苏州新力生物技术研究所,苏州,215111;苏州大学医学院病原生物学教研室,苏州,215123【正文语种】中文【中图分类】R383.2【相关文献】1.聚合酶链反应技术检测旋毛虫DNA的实验研究 [J], 温艳;张月清2.聚合酶链反应检测结核杆菌DNA实验研究的近况 [J], 陈一平;翁心华3.聚合酶链反应检测HBV-DNA与HBsAg带现象的实验研究 [J], 张曲涛4.聚合酶链反应检测EBV—DNA在鼻咽癌诊断中的临床应用——附26例EBV—DNA检测结果分析 [J], 陈子孝;肖国忠5.聚合酶链反应检测日本血吸虫5D基因的实验研究 [J], 陈一平;翁心华;沈雪芳;岑屹因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

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有效区分微生物的死细胞和活细胞的大多数方法因复杂程度、投入及效技术具有快捷、Ｃ灵敏和特异性强等特性，在分子生物学研究领域发挥巨大作用．Ｊ传统ＰＲ方法Ｃ可用于检测包含活细胞和死细胞Ｊ，即便微生物细胞失去活力，其ＤＡ仍存在于环境中．因此，Ｎ利
冯建军，志娟刘西莉Ｎｒ金，，ｏｍＷ．Ｓｈａ，ｃａｄ李健强
（．中国农业大学农学与生物技术学院，１北京１０９００４；
２．美国农业部农业研究中心外来生物与杂草研究所，马里兰２７２１０）
摘要建立了一种将ＤＡ染料（ＭＡ结合ＰＲ的新分析方法，ＮＥ）Ｃ用于有效检测区分植物病原细菌死活细胞、结果表明，当用２０ｍ／．ｇＬ或更高浓度的ＥＭＡ渗透处理含有１。ｃ／Ｌ的死细胞菌悬液后再曝光处理０ｆｍｕ
１ｉ，ＰＲ结果呈阴性，０ｍｎ其Ｃ而未经过ＥＡ渗透处理的对应样品ＰＲ结果呈阳性；ＭＭＣＥＡ渗透处理含有适当数量病菌活细胞的种子浸泡液后，更有助于特异性检测混合体系中靶标菌活细胞．分析认为，该方法避免了传统ＰＲ无法区分细菌死活细胞的弊端，是一种快速、敏且能有效鉴别病原细菌死活细胞的新方法．Ｃ灵
层面的真空．本研究将ＥＭＡ选择渗透性和ＰＲ特异性及灵敏性相结合，检测了西瓜细菌性果斑病菌Ｃ纯菌悬液和不同数量该病原细菌活细胞的种子浸泡液混合体系，讨是否能有效区分植物病原细菌死探
活细胞，而建立一种快速、敏且能检测鉴别植物病原细菌死活细胞的新方法．从灵
维普资讯
Ｖ０．９１２２００８年５月
高等学校化学学报
ＣＭＩＡＬＪＲＮＡＬＯＦＣＮＥＥＵＮＩＨＥＣＯＵＨＩＳＶＥＲＳＴＥＳＩＩ
Ｎｏ．５
９４—９８４４
一
种ＤＡ染料结合聚合酶链反应检测鉴别Ｎ植物病原细菌死活细胞
关键词Ｅｈｉｏｏｚｅ相互作用；瓜细菌性果斑病；合酶链反应；死活细胞ｔｉｕｍｎａｉ；ｄｍｄ西聚
中图分类号
０９￥３．６；４６５
文献标识码
Ａ
文章编号
０５－７０２０）５９４５２１０９（０８０－４－００
收稿日期：０７０－０２０－７１．
基金项目：教育部 “ 世纪优秀人才支持计划 ” 批准号：ＣＴ０－１８和国家留学基金委（准号：０６００８资助新（ＮＥ－４０２）批２０１１０）
联系人简介：李健强，男，教授，博士生导师，主要从事种子病理和杀菌剂药理研究．Ｅｍｉｉ２ａ．ｄ．ａ－ａｌｊ３＠ｃｕｅｕｃ：ｌｑ１
１实验部分
１１仪器、剂及材料．试
ＰＲ仪（ＥＨＧＮＵ；引物对ＷＦ１ＷＦ２５．ＡＡＣＡＧＡ．和５．ＴＣＴＣＥＥ，Ｋ）Ｂ／Ｂ（ＧＣＣＧＣＡＣＣＴＧＧＣ３ＣＧＣＧＴＣＴＣＡＣＧＴ３）ＣＡＣＧＡ－，上海申能博彩有限公司合成；Ｅｈｉｏｏｚｅ购于美国Ｓｇ公司；ｔｉｕｍｎａｉｄｍｄｉｍａＰＲ反应体系中有关试剂购于北京天根生化公司；Ｃ菌株Ｆ２７由美国农业部农业研究中心外来生物与Ｃ４杂草研究所馈赠；西瓜种子京欣一号（京大森林京欣种苗研究所研制）北．
用ＰＲ选择性扩增细菌活细胞ＤＡ面临着巨大挑战．近年来，ＤＡ和各种化学物质的相互结合作用ＣＮＮ直备受关注，并且将化学物质与分子生物学技术结合解决生命科学问题已成为热点１．Ｅｈｄ３ｔｉ．ｉ
一
ｉｍｍｏｏｚｅＥｕｎａｉ（ＭＡ）ｄ易光解形成氮宾化合物与ＤＡ或其它分子共价结合 ¨ Ｎ，是能够渗透到细胞壁（）完整的菌体内的一种ＤＡ结合染料，已在国外临床医学和海鲜食物安全检测中应用 ¨ ”．目膜不Ｎ前，尚未见ＥＭＡ在植物保护中的应用及其与ＰＲ结合检测植物病原细菌活细胞的研究报道．西瓜细Ｃ菌性果斑病（ｔｍｅｎＦｕｔｌｃ，Ｂ对西瓜制种业和种植业造成严重威胁该病在新疆、ＷａｒｌｒｉＢｏｈＷＦ）ｅｏｔ引；海南等省的西瓜、瓜制种基地和大田生产中危害日益严重盟．目前该病原菌的检测方法主要采用甜
生理生化实验方法¨ 、温室试种和包括免疫凝聚试纸检测、传统ＰＲ和实时荧光ＰＲ检测在内的ＣＣ血清学及分子生物学技术Ｊ基于ＤＡ的ＰＲ检测技术不能区分阳性结果来源于病原菌活细胞或．ＮＣ死细胞，使得检测结果在支持农作物进出口贸易过程中的病害风险评价及科学决策方面依旧存在技术