DNA连接酶与DNA聚合酶的比较

基因工程的概念 基因工程的别名 操作环境 操作对象 操作水平 基本过程
结果
DNA重组技术 生物体外 基因
DNA分子水平 剪切→拼接→导入→表达 人类需要的新的生物类型 和生物产品
目的基因导入受体细胞
生物种类 植物细胞
动物细胞
常用方法
农杆菌转化法、 基因枪法、花 显微注射法
粉管通道法
受体细胞 体细胞或受精卵 受精卵
场所 细胞内（主要在细胞核内） 细胞外（主要在PCR扩增仪内）
区 别酶
DNA解旋酶、普通的DNA 聚合酶等
温度 条件
细胞内温和条件
耐热的DNA聚合酶（Taq酶） 需控制温度，在较高温度下进行
合成的 对象
DNA分子
DNA片段或基因
联系
①模板：均需要脱氧核苷酸链作为模板进行物质合成 ②原料：均为四种脱氧核苷酸 ③酶：均需要DNA聚合酶进行催化 ④引物：均需要引物，使DNA聚合酶从引物的3′端开始连接脱氧 核苷酸
目的基因的检测与鉴定
方法
分子 水平 检测
导入DNA 分子 转录
翻译
检测转基因生物染色体DNA分子上是否插入了 目的基因,采用DNA分子杂交技术
检测目的基因是否转录出了mRNA，采用分子杂 交技术 检测目的基因是否翻译成蛋白质，采用抗 原—抗体杂交技术
个体水平鉴定
除了分子检测外，还需要进行个体生物学水平 的鉴定，如做抗虫或抗病接种实验等
以农杆菌转化 法为例： 将目的基因插 入Ti质粒的 转化过程 T-DNA上→农杆 菌→导入植物 细胞→整合到 受体细胞的DNA 上→表达
将含有目的基 因的表达载体 提纯→取受精 卵→显微注射 →受精卵发育 →获得具有新 性状的动物
微生物细胞
Ca2+处理法
原核细胞Fra Baidu bibliotek
Ca2+处理细胞→感受态细胞 →重组表达载体与感受态细 胞混合→感受态细胞吸收 DNA分子
DNADNA聚合酶的比较
DNA
DNA聚合酶
催化两个脱氧核苷酸之间形成磷酸二酯键
模板 不需要模板
需要DNA的一条链为模板
作用 不 对象
DNA片段
单个的脱氧核苷酸
同 作用 点 结果 形成完整的DNA分子
形成DNA的一条链
用途
基因工程
DNA复制
PCR技术与DNA复制的比较
DNA复制
解旋 方式
解旋酶催化
PCR技术 DNA在高温作用下变性解旋