6-O-α-Maltosyl-β-cyclodextrin_LCMS_13071_MedChemExpress
平衡磷酸烯醇式丙酮酸节点通量强化筑波链霉菌合成他克莫司
2018年第37卷第6期 CHEMICAL INDUSTRY AND ENGINEERING PROGRESS·2347·化 工 进展平衡磷酸烯醇式丙酮酸节点通量强化筑波链霉菌合成他克莫司吕蒙蒙1，2，刘蛟1，2，刘欢欢1，2，陈红1，2，王成1，2，闻建平1，2（1天津大学化工学院系统生物工程教育部重点实验室，天津 300072；2天津大学天津化学化工协同创新中心，天津 300072）摘要：他克莫司（FK506）是最重要的免疫抑制剂之一，然而前体代谢供应不足制约着工业化生产。
通过优化平衡磷酸烯醇式丙酮酸（PEP ）节点支路通量可提高FK506产量。
本文首先在S. tsukubaensis D852中过表达基因fkb O （编码分支酸水合还原酶）和 fkb L （编码赖氨酸环化酶）得到S. tsukubaensis -OL1，FK506的产量仅从158.7mg/L 提高到163.9mg/L 。
随后调节PEP 节点支路回补途径和莽草酸途径通量强化FK506的合成：先分别将不同菌株中编码磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PPC ）和3-脱氧-D-阿拉伯糖基-heptulosonate-7-磷酸合酶（DAHPS ）的基因在S. tsukubaensis -OL1中过表达，FK506的产量分别提高40%（ppc ，S. tsukubaensis ）和47%（dah P ，S. roseosporus ）；然后采用4个不同强度的组成型启动子（P ermE *，P sco 4503，P sco 3410 and P sco 5768）平衡ppc 和dah P 的表达水平获得9株工程菌，最终使FK506的产量由163.9mg/L 显著提高到350.3mg/L 。
这个结果说明优化平衡PEP 节点竞争支路通量是提高FK506产量的有效策略。
关键词：他克莫司；回补途径；莽草酸途径；组成型启动子；筑波链霉菌中图分类号：Q591 文献标志码：A 文章编号：1000–6613（2018）06–2347–07 DOI ：10.16085/j.issn.1000-6613.2017-1482Balancing carbon flux rebalancing around phosphoenolpyruvate node forenhancement of FK506 production in Streptomyces tsukubaensisLÜ Mengmeng 1，2，LIU Jiao 1，2，LIU Huanhuan 1，2，CHEN Hong 1，2，WANG Cheng 1，2，WEN Jianping 1，2（1Key Laboratory of System Bioengineering （Tianjin University ），Ministry of Education ，Tianjin 300072，China ；2SynBio Research Platform ，Collaborative Innovation Center of Chemical Science and Engineering (Tianjin)，School ofChemical Engineering and Technology ，Tianjin University ，Tianjin 300072，China ）Abstract ：Tacrolimus （FK506），as one of the widely used immunosuppressants produced by Streptomyces species ，has drawn much attention on clinic application. However ，the low FK506 fermentation titer restricts its industrial production ，which is mainly due to the insufficient precursor metabolism of the producing strain. In this work ，balancing carbon flux rebalancing around phosphoenolpyruvate （PEP ）node for enhancement of FK506 production were carried on. Firstly ，the genes fkb O and fkb L were overexpressed in S. tsukubaensis D852，achieving S. tsukubaensis -OL1，of which FK506 production changed only slightly from 158.7mg/L to 163.9mg/L. Then ，two precursor metabolic pathways ，the anaplerotic and shikimate pathways emanating from PEP node ，were fine-tuned for eliminating the inefficient supply of precursors of DHCHC and pipecolate. The genes encoding PPC and DAHPS were cloned from various species and expressed in S. tsukubaensis -OL1，自然科学基金项目（21376171）。
胞嘧啶脱氨基酶APOBEC1研究进展
胞嘧啶脱氨基酶APOBEC1研究进展作者：周冰涵严小璇蓝文贤王春喜曹春阳来源：《上海师范大学学报·自然科学版》2020年第03期摘要：為全面理解载脂蛋白B mRNA（ApoB mRNA）编辑酶催化多肽-1（APOBEC1）的作用机制，介绍了APOBEC1和ApoB mRNA的蛋白及核酸序列，总结并绘制了APOBEC1与不同的辅助蛋白的结合模型，阐述了APOBEC1催化ApoB mRNA第6 666位的胞嘧啶（C6666）脱氨基化分子机制.列举了啮齿动物APOBEC1抑制多种逆转录病毒的研究报道，介绍了兔源APOBEC1结合人类免疫缺陷病毒1（HIV-1）的病毒粒子并编辑病毒基因组的机理.同时介绍了APOBEC1通过编辑胞嘧啶或与AU富集元件（ARE）结合来调控癌症等疾病相关的细胞因子表达.关键词：载脂蛋白B mRNA（ApoB mRNA）; 载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽-1（APOBEC1）; 胞嘧啶脱氨基化中图分类号： Q-71 文献标志码： A 文章编号： 1000-5137（2020）02-0234-11Research advances on cytosine deaminase APOBEC1ZHOU Binghan1，2， YAN Xiaoxuan2， LAN Wenxian2， WANG Chunxi2， CAO Chunyang2*（1.College of Chemistry and Materials Science，Shanghai Normal University，Shanghai 200234，China; 2.State Key Lab of Bio-organic and Natural Products Chemistry，Shanghai Institute of Organic Chemistry，Chinese Academy of Sciences，Shanghai 200032，China）Abstract： In order to fully understand the mechanisms of Apolipoprotein B mRNA（ApoB mRNA） editing enzyme catalytic polypeptide-1（APOBEC1），this review introduced the amino acid and nucleic acid sequences of APOBEC1 and ApoB mRNA，summarized and mapped the binding models of APOBEC1 with different cofactors to explain the molecular mechanism of APOBEC1 catalyzing the deamination of the 6666 C of ApoB mRNA （C6666）.The researches of rodent APOBEC1 inhibiting multiple retroviruses were exemplified here，and the related mechanisms of rabbit APOBEC1 binding to human immunodeficiency virus type 1（HIV-1）and editing the viral genome were discussed.This review also introduced APOBEC1 regulating the expression of cytokines related to cancers and other diseases by deamination editing or combining with AU-rich element（ARE） of RNAs.Key words： apolipoprotein B mRNA（ApoB mRNA）; ApoB mRNA editing enzyme catalytic polypeptide-1（APOBEC1）; cytidine deamination0 引言载脂蛋白B mRNA（ApoB mRNA）编辑酶催化多肽（APOBEC家族）是一类胞嘧啶脱氨基酶，能催化单链RNA或单链DNA中的胞嘧啶脱氨基转化为尿嘧啶.APOBEC家族由活化诱导胞嘧啶脱氨基酶（AID），ApoB mRNA编辑酶催化多肽-1（APOBEC1），APOBEC2，APOBEC3亚家族（APOBEC3A，APOBEC3B，APOBEC3C，APOBEC3D，APOBEC3E，APOBEC3F，APOBEC3G，APOBEC3H），以及APOBEC4组成.其中APOBEC1与AID串联排列于第12号染色体，APOBEC2位于第6号染色体，APOBEC3亚家族以串联重复的方式排列于第22号染色体[1]，APOBEC4则位于第1号染色体[2]，如图1（a）所示.APOBEC家族成员脱氨基催化活性由1个或2个锌指结构域提供，位于锌指结构域的氨基酸序列在APOBEC家族中相当保守：His-X-Glu-X23–28-Pro-Cys-X2-4-Cys（其中X表示任何氨基酸）;AID，APOBEC1，APOBEC3A，APOBEC3C，APOBEC3H为单锌指催化结构域;APOBEC3B，APOBEC3D，APOBEC3F，APOBEC3G则含有2个锌指催化结构域，如图1（b）所示，而APOBEC2与APOBEC4暂无结构相关报道[2].APOBEC家族中研究最深入的是AID与APOBEC3亚家族，两者都有以DNA为底物的高效脱氨基催化活性，最广为人知的功能是在外源性病毒逆转录过程中对DNA进行编辑，使病毒DNA发生降解以抑制病毒逆转录过程，如人源APOBEC3G编辑人类免疫缺陷病毒1（HIV-1）DNA以抑制HIV-1在人体中的复制.APOBEC1是一种RNA胞嘧啶脱氨基酶，可特异性编辑ApoB mRNA，编辑DNA不是其主要功能[1].其功能特征具体体现在如下几个方面：1）与AID/APOBEC3相似的是，啮齿动物，尤其兔源APOBEC1蛋白通过RNA/DNA胞嘧啶脱氨基化的机制，抑制某些逆转录病毒的复制;2）随着更多的APOBEC1编辑靶标的鉴定，发现APOBEC1在包括癌症等疾病发生方面具有一定作用;3）APOBEC1也是APOBEC家族中唯一需要与特定的辅助蛋白形成复合物才能进行ApoB mRNA编辑的蛋白[3-4].近年来关于APOBEC1的研究范围越来越广，不再局限于ApoB mRNA的脫氨基化研究.APOBEC1在体内有大量RNA靶标，催化脱氨基化也不是其参与生理过程的唯一机制.为全面了解APOBEC1功能，促进APOBEC1在相关领域的研究，本文作者总结了近年来APOBEC1在生物功能方面的研究进展，介绍了基于同源建模预测的APOBEC1编辑胞嘧啶脱氨基化的分子机制，APOBEC1与辅助蛋白如何形成复合物识别并编辑ApoB mRNA的机制，和APOBEC1在逆转录病毒以及疾病方面的研究成果.1 APOBEC1研究进展1.1 APOBEC1功能域及结构研究APOBEC1最初在ApoB mRNA编辑事件中被发现.人源APOBEC1与兔源APOBEC1包含236个氨基酸（aa），大鼠APOBEC1与小鼠APOBEC1包含229aa，人源APOBEC1与大鼠APOBEC1具有69%的序列相似性[5]，构成锌指结构域的脱氨基活性位点H-X-E-X23-28-C-P-X2--C在APOBEC1同源蛋白中也十分保守[4];N端的碱性氨基酸R15，R16，R17，R33和K34被4认为是核定位信号的一部分[6-7]，它们对编辑反应很重要[8].MEHTA等[9]发现，APOBEC1的N 端区域可能参与辅助蛋白的结合.APOBEC1蛋白均在C端173～210 aa处具有一段保守的亮氨酸富集区域180～196 aa.L180，L182，I185和L189的单突变体，以及P190A/P191A双突变体均导致APOBEC1部分或几乎完全失去编辑活性[8].同位素标记以及高效液相色谱分析显示：APOBEC1可能以同源二聚体的方式存在[10]，而APOBEC1的C端残基196～210 aa和221～229 aa对二聚体的形成有很重要的影响[8]，如图2所示.其次C端缺失的APOBEC1突变体（APOBEC1截短体1～172 aa和截短体1～196 aa）无法二聚并且无法编辑ApoB mRNA[8，11]，IKEDA等[5]发现APOBEC1的二聚结构需要RNA分子的介导.APOBEC1还能对单链DNA的胞嘧啶进行脱氨基催化[12]，基于酵母脱氨酶晶体结构模拟的APOBEC1结构模型支持这一结论[13].IKEDA等[5]发现兔源APOBEC1的C端亮氨酸富集区以及2个二聚体结构域均参与了其包装到HIV-1病毒粒子中的过程，C端结构域同时也是APOBEC1对病毒cDNA和基因组RNA发挥脱氨基活性必不可少的部分.1.2 APOBEC1催化胞嘧啶脱氨基化的可能机制APOBEC1能够特异性催化ApoB mRNA第6666位的胞嘧啶C6666脱氨基化转变为尿嘧啶（U6666），即ApoB mRNA C-to-U编辑，该处密码子则由C6666AA（Q2153）突变为终止密码子U6666AA，经过编辑的ApoB mRNA翻译后得到ApoB蛋白的截短体ApoB48（相对分子质量为241 000），未经编辑的ApoB mRNA则翻译为全长的ApoB100（相对分子质量为512 000）[14]，如图3（a）所示.ApoB100在血液中运输内源性胆固醇和甘油三酸酯，而截短体ApoB48可代谢膳食脂类[15]，但ApoB100结合胆固醇并在血液中运输时有可能增加动脉粥样硬化的风险[16]，所以APOBEC1对ApoB mRNA的脱氨基催化产物ApoB48可能降低动脉粥样硬化的风险.APOBEC1催化活性中心是一个锌指结构域，如图1（b）所示，脱氨基化活性位点为His-X-Glu-X23-28-Cys-Pro-X2-4-Cys[4]，主要识别底物是RNA，也有研究报道APOBEC1能对DNA胞嘧啶催化脱氨基化[12，17].HARRIS等[1]根据细菌以及酵母胞嘧啶脱氨酶的结构研究预测了APOBEC蛋白对单链DNA脱氨基催化的分子机制，如图3（b）所示.首先，活性位点的组氨酸（His）和半胱氨酸（Cys）与锌离子（Zn2+）配位，此时一个水分子靠近活性位点;随后水分子在Zn2+作用下与谷氨酸（Glu）反应后生成一个氢氧根离子（OH-），激活了锌指结构域;激活后的Glu将胞嘧啶环的N3质子化，导致N3与C4双键不稳定，此时C4易于OH-的进攻;OH-进攻C4后其质子氢被Glu螯合，形成四面体的过渡态;最终，胞嘧啶的氨基侧基（-NH2）接受了被Glu螯合的质子氢，使碳氮键断裂，C4重新与氧原子（O）形成双键并从活性位点处释放尿嘧啶和氨（NH3），如图3（b）所示.APOBEC1催化DNA或RNA胞嘧啶脱氨基化可能也符合这一机制.APOBEC1是一种RNA胞嘧啶脱氨基酶，可特异性编辑ApoB mRNA，編辑DNA不是其主要功能[1].其功能特征具体体现在如下几个方面：1）与AID/APOBEC3相似的是，啮齿动物，尤其兔源APOBEC1蛋白通过RNA/DNA胞嘧啶脱氨基化的机制，抑制某些逆转录病毒的复制;2）随着更多的APOBEC1编辑靶标的鉴定，发现APOBEC1在包括癌症等疾病发生方面具有一定作用;3）APOBEC1也是APOBEC家族中唯一需要与特定的辅助蛋白形成复合物才能进行ApoB mRNA编辑的蛋白[3-4].近年来关于APOBEC1的研究范围越来越广，不再局限于ApoB mRNA的脱氨基化研究.APOBEC1在体内有大量RNA靶标，催化脱氨基化也不是其参与生理过程的唯一机制.为全面了解APOBEC1功能，促进APOBEC1在相关领域的研究，本文作者总结了近年来APOBEC1在生物功能方面的研究进展，介绍了基于同源建模预测的APOBEC1编辑胞嘧啶脱氨基化的分子机制，APOBEC1与辅助蛋白如何形成复合物识别并编辑ApoB mRNA的机制，和APOBEC1在逆转录病毒以及疾病方面的研究成果.1 APOBEC1研究进展1.1 APOBEC1功能域及结构研究APOBEC1最初在ApoB mRNA编辑事件中被发现.人源APOBEC1与兔源APOBEC1包含236个氨基酸（aa），大鼠APOBEC1与小鼠APOBEC1包含229aa，人源APOBEC1与大鼠APOBEC1具有69%的序列相似性[5]，构成锌指结构域的脱氨基活性位点H-X-E-X23-28-C-P-X2--C在APOBEC1同源蛋白中也十分保守[4];N端的碱性氨基酸R15，R16，R17，R33和K34被4认为是核定位信号的一部分[6-7]，它们对编辑反应很重要[8].MEHTA等[9]发现，APOBEC1的N 端区域可能参与辅助蛋白的结合.APOBEC1蛋白均在C端173～210 aa处具有一段保守的亮氨酸富集区域180～196 aa.L180，L182，I185和L189的单突变体，以及P190A/P191A双突变体均导致APOBEC1部分或几乎完全失去编辑活性[8].同位素标记以及高效液相色谱分析显示：APOBEC1可能以同源二聚体的方式存在[10]，而APOBEC1的C端残基196～210 aa和221～229 aa对二聚体的形成有很重要的影响[8]，如图2所示.其次C端缺失的APOBEC1突变体（APOBEC1截短体1～172 aa和截短体1～196 aa）无法二聚并且无法编辑ApoB mRNA[8，11]，IKEDA等[5]发现APOBEC1的二聚结构需要RNA分子的介导.APOBEC1还能对单链DNA 的胞嘧啶进行脱氨基催化[12]，基于酵母脱氨酶晶体结构模拟的APOBEC1结构模型支持这一结论[13].IKEDA等[5]发现兔源APOBEC1的C端亮氨酸富集区以及2个二聚体结构域均参与了其包装到HIV-1病毒粒子中的过程，C端结构域同时也是APOBEC1对病毒cDNA和基因组RNA发挥脱氨基活性必不可少的部分.1.2 APOBEC1催化胞嘧啶脱氨基化的可能机制APOBEC1能够特异性催化ApoB mRNA第6666位的胞嘧啶C6666脱氨基化转变为尿嘧啶（U6666），即ApoB mRNA C-to-U编辑，该处密码子则由C6666AA（Q2153）突变为终止密码子U6666AA，经过编辑的ApoB mRNA翻译后得到ApoB蛋白的截短体ApoB48（相对分子质量为241 000），未经编辑的ApoB mRNA则翻译为全长的ApoB100（相对分子质量为512 000）[14]，如图3（a）所示.ApoB100在血液中运输内源性胆固醇和甘油三酸酯，而截短体ApoB48可代谢膳食脂类[15]，但ApoB100结合胆固醇并在血液中运输时有可能增加动脉粥样硬化的风险[16]，所以APOBEC1对ApoB mRNA的脱氨基催化产物ApoB48可能降低动脉粥样硬化的风险.APOBEC1催化活性中心是一个锌指结构域，如图1（b）所示，脱氨基化活性位点为His-X-Glu-X23-28-Cys-Pro-X2-4-Cys[4]，主要识别底物是RNA，也有研究报道APOBEC1能对DNA胞嘧啶催化脱氨基化[12，17].HARRIS等[1]根据细菌以及酵母胞嘧啶脱氨酶的结构研究预测了APOBEC蛋白对单链DNA脱氨基催化的分子机制，如图3（b）所示.首先，活性位点的组氨酸（His）和半胱氨酸（Cys）与锌离子（Zn2+）配位，此时一个水分子靠近活性位点;随后水分子在Zn2+作用下与谷氨酸（Glu）反应后生成一个氢氧根离子（OH-），激活了锌指结构域;激活后的Glu将胞嘧啶环的N3质子化，导致N3与C4双键不稳定，此时C4易于OH-的进攻;OH-进攻C4后其质子氢被Glu螯合，形成四面体的过渡态;最终，胞嘧啶的氨基侧基（-NH2）接受了被Glu螯合的质子氢，使碳氮键断裂，C4重新与氧原子（O）形成双键并从活性位点处释放尿嘧啶和氨（NH3），如图3（b）所示.APOBEC1催化DNA或RNA胞嘧啶脱氨基化可能也符合这一机制.APOBEC1是一种RNA胞嘧啶脱氨基酶，可特异性编辑ApoB mRNA，编辑DNA不是其主要功能[1].其功能特征具体体现在如下几个方面：1）与AID/APOBEC3相似的是，啮齿动物，尤其兔源APOBEC1蛋白通过RNA/DNA胞嘧啶脱氨基化的机制，抑制某些逆转录病毒的复制;2）随着更多的APOBEC1编辑靶标的鉴定，发现APOBEC1在包括癌症等疾病发生方面具有一定作用;3）APOBEC1也是APOBEC家族中唯一需要与特定的辅助蛋白形成复合物才能进行ApoB mRNA编辑的蛋白[3-4].近年来关于APOBEC1的研究范围越来越广，不再局限于ApoB mRNA的脱氨基化研究.APOBEC1在体内有大量RNA靶标，催化脱氨基化也不是其参与生理过程的唯一机制.为全面了解APOBEC1功能，促进APOBEC1在相关领域的研究，本文作者总结了近年来APOBEC1在生物功能方面的研究进展，介绍了基于同源建模预测的APOBEC1编辑胞嘧啶脱氨基化的分子机制，APOBEC1与辅助蛋白如何形成复合物识别并编辑ApoB mRNA的机制，和APOBEC1在逆转录病毒以及疾病方面的研究成果.1 APOBEC1研究进展1.1 APOBEC1功能域及结构研究APOBEC1最初在ApoB mRNA编辑事件中被发现.人源APOBEC1与兔源APOBEC1包含236个氨基酸（aa），大鼠APOBEC1与小鼠APOBEC1包含229aa，人源APOBEC1与大鼠APOBEC1具有69%的序列相似性[5]，構成锌指结构域的脱氨基活性位点H-X-E-X23-28-C-P-X2--C在APOBEC1同源蛋白中也十分保守[4];N端的碱性氨基酸R15，R16，R17，R33和K34被4认为是核定位信号的一部分[6-7]，它们对编辑反应很重要[8].MEHTA等[9]发现，APOBEC1的N 端区域可能参与辅助蛋白的结合.APOBEC1蛋白均在C端173～210 aa处具有一段保守的亮氨酸富集区域180～196 aa.L180，L182，I185和L189的单突变体，以及P190A/P191A双突变体均导致APOBEC1部分或几乎完全失去编辑活性[8].同位素标记以及高效液相色谱分析显示：APOBEC1可能以同源二聚体的方式存在[10]，而APOBEC1的C端残基196～210 aa和221～229 aa对二聚体的形成有很重要的影响[8]，如图2所示.其次C端缺失的APOBEC1突变体（APOBEC1截短体1～172 aa和截短体1～196 aa）无法二聚并且无法编辑ApoB mRNA[8，11]，IKEDA等[5]发现APOBEC1的二聚结构需要RNA分子的介导.APOBEC1还能对单链DNA 的胞嘧啶进行脱氨基催化[12]，基于酵母脱氨酶晶体结构模拟的APOBEC1结构模型支持这一结论[13].IKEDA等[5]发现兔源APOBEC1的C端亮氨酸富集区以及2个二聚体结构域均参与了其包装到HIV-1病毒粒子中的过程，C端结构域同时也是APOBEC1对病毒cDNA和基因组RNA发挥脱氨基活性必不可少的部分.1.2 APOBEC1催化胞嘧啶脱氨基化的可能机制APOBEC1能够特异性催化ApoB mRNA第6666位的胞嘧啶C6666脱氨基化转变为尿嘧啶（U6666），即ApoB mRNA C-to-U编辑，该处密码子则由C6666AA（Q2153）突变为终止密码子U6666AA，经过编辑的ApoB mRNA翻译后得到ApoB蛋白的截短体ApoB48（相对分子质量为241 000），未经编辑的ApoB mRNA则翻译为全长的ApoB100（相对分子质量为512 000）[14]，如图3（a）所示.ApoB100在血液中运输内源性胆固醇和甘油三酸酯，而截短体ApoB48可代谢膳食脂类[15]，但ApoB100结合胆固醇并在血液中运输时有可能增加动脉粥样硬化的风险[16]，所以APOBEC1对ApoB mRNA的脱氨基催化产物ApoB48可能降低动脉粥样硬化的风险.APOBEC1催化活性中心是一个锌指结构域，如图1（b）所示，脱氨基化活性位点为His-X-Glu-X23-28-Cys-Pro-X2-4-Cys[4]，主要识别底物是RNA，也有研究报道APOBEC1能对DNA胞嘧啶催化脱氨基化[12，17].HARRIS等[1]根据细菌以及酵母胞嘧啶脱氨酶的结构研究预测了APOBEC蛋白对单链DNA脱氨基催化的分子机制，如图3（b）所示.首先，活性位点的组氨酸（His）和半胱氨酸（Cys）与锌离子（Zn2+）配位，此时一个水分子靠近活性位点;随后水分子在Zn2+作用下与谷氨酸（Glu）反应后生成一个氢氧根离子（OH-），激活了锌指结构域;激活后的Glu将胞嘧啶环的N3质子化，导致N3与C4双键不稳定，此时C4易于OH-的进攻;OH-进攻C4后其质子氢被Glu螯合，形成四面体的过渡态;最终，胞嘧啶的氨基侧基（-NH2）接受了被Glu螯合的质子氢，使碳氮键断裂，C4重新与氧原子（O）形成双键并从活性位点处释放尿嘧啶和氨（NH3），如图3（b）所示.APOBEC1催化DNA或RNA胞嘧啶脱氨基化可能也符合这一机制.APOBEC1是一种RNA胞嘧啶脱氨基酶，可特异性编辑ApoB mRNA，编辑DNA不是其主要功能[1].其功能特征具体体现在如下几个方面：1）与AID/APOBEC3相似的是，啮齿动物，尤其兔源APOBEC1蛋白通过RNA/DNA胞嘧啶脱氨基化的机制，抑制某些逆转录病毒的复制;2）随着更多的APOBEC1编辑靶标的鉴定，发现APOBEC1在包括癌症等疾病发生方面具有一定作用;3）APOBEC1也是APOBEC家族中唯一需要与特定的辅助蛋白形成复合物才能进行ApoB mRNA编辑的蛋白[3-4].近年来关于APOBEC1的研究范围越来越广，不再局限于ApoB mRNA的脱氨基化研究.APOBEC1在体内有大量RNA靶标，催化脱氨基化也不是其参与生理过程的唯一机制.为全面了解APOBEC1功能，促进APOBEC1在相关领域的研究，本文作者总结了近年来APOBEC1在生物功能方面的研究进展，介绍了基于同源建模预测的APOBEC1编辑胞嘧啶脱氨基化的分子机制，APOBEC1与辅助蛋白如何形成复合物识别并编辑ApoB mRNA的机制，和APOBEC1在逆转录病毒以及疾病方面的研究成果.1 APOBEC1研究进展1.1 APOBEC1功能域及结构研究APOBEC1最初在ApoB mRNA编辑事件中被发现.人源APOBEC1与兔源APOBEC1包含236个氨基酸（aa），大鼠APOBEC1与小鼠APOBEC1包含229aa，人源APOBEC1与大鼠APOBEC1具有69%的序列相似性[5]，构成锌指结构域的脱氨基活性位点H-X-E-X23-28-C-P-X2--C在APOBEC1同源蛋白中也十分保守[4];N端的碱性氨基酸R15，R16，R17，R33和K34被4认为是核定位信号的一部分[6-7]，它们对编辑反应很重要[8].MEHTA等[9]发现，APOBEC1的N端区域可能参与辅助蛋白的结合.APOBEC1蛋白均在C端173～210 aa处具有一段保守的亮氨酸富集区域180～196 aa.L180，L182，I185和L189的单突变体，以及P190A/P191A双突变体均导致APOBEC1部分或几乎完全失去编辑活性[8].同位素标记以及高效液相色谱分析显示：APOBEC1可能以同源二聚体的方式存在[10]，而APOBEC1的C端残基196～210 aa和221～229 aa对二聚体的形成有很重要的影响[8]，如图2所示.其次C端缺失的APOBEC1突变体（APOBEC1截短体1～172 aa和截短体1～196 aa）无法二聚并且无法编辑ApoB mRNA[8，11]，IKEDA等[5]发现APOBEC1的二聚结构需要RNA分子的介导.APOBEC1还能对单链DNA 的胞嘧啶进行脱氨基催化[12]，基于酵母脱氨酶晶体结构模拟的APOBEC1结构模型支持这一结论[13].IKEDA等[5]发现兔源APOBEC1的C端亮氨酸富集区以及2个二聚体结构域均参与了其包装到HIV-1病毒粒子中的过程，C端结构域同时也是APOBEC1对病毒cDNA和基因组RNA发挥脱氨基活性必不可少的部分.1.2 APOBEC1催化胞嘧啶脱氨基化的可能机制APOBEC1能够特异性催化ApoB mRNA第6666位的胞嘧啶C6666脱氨基化转变为尿嘧啶（U6666），即ApoB mRNA C-to-U编辑，该处密码子则由C6666AA（Q2153）突变为终止密码子U6666AA，经过编辑的ApoB mRNA翻译后得到ApoB蛋白的截短体ApoB48（相对分子质量为241 000），未經编辑的ApoB mRNA则翻译为全长的ApoB100（相对分子质量为512000）[14]，如图3（a）所示.ApoB100在血液中运输内源性胆固醇和甘油三酸酯，而截短体ApoB48可代谢膳食脂类[15]，但ApoB100结合胆固醇并在血液中运输时有可能增加动脉粥样硬化的风险[16]，所以APOBEC1对ApoB mRNA的脱氨基催化产物ApoB48可能降低动脉粥样硬化的风险.APOBEC1催化活性中心是一个锌指结构域，如图1（b）所示，脱氨基化活性位点为His-X-Glu-X23-28-Cys-Pro-X2-4-Cys[4]，主要识别底物是RNA，也有研究报道APOBEC1能对DNA胞嘧啶催化脱氨基化[12，17].HARRIS等[1]根据细菌以及酵母胞嘧啶脱氨酶的结构研究预测了APOBEC蛋白对单链DNA脱氨基催化的分子机制，如图3（b）所示.首先，活性位点的组氨酸（His）和半胱氨酸（Cys）与锌离子（Zn2+）配位，此时一个水分子靠近活性位点;随后水分子在Zn2+作用下与谷氨酸（Glu）反应后生成一个氢氧根离子（OH-），激活了锌指结构域;激活后的Glu将胞嘧啶环的N3质子化，导致N3与C4双键不稳定，此时C4易于OH-的进攻;OH-进攻C4后其质子氢被Glu螯合，形成四面体的过渡态;最终，胞嘧啶的氨基侧基（-NH2）接受了被Glu螯合的质子氢，使碳氮键断裂，C4重新与氧原子（O）形成双键并从活性位点处释放尿嘧啶和氨（NH3），如图3（b）所示.APOBEC1催化DNA或RNA胞嘧啶脱氨基化可能也符合这一机制.APOBEC1是一种RNA胞嘧啶脱氨基酶，可特异性编辑ApoB mRNA，编辑DNA不是其主要功能[1].其功能特征具体体现在如下几个方面：1）与AID/APOBEC3相似的是，啮齿动物，尤其兔源APOBEC1蛋白通过RNA/DNA胞嘧啶脱氨基化的机制，抑制某些逆转录病毒的复制;2）随着更多的APOBEC1编辑靶标的鉴定，发现APOBEC1在包括癌症等疾病发生方面具有一定作用;3）APOBEC1也是APOBEC家族中唯一需要与特定的辅助蛋白形成复合物才能进行ApoB mRNA编辑的蛋白[3-4].近年来关于APOBEC1的研究范围越来越广，不再局限于ApoB mRNA的脱氨基化研究.APOBEC1在体内有大量RNA靶标，催化脱氨基化也不是其参与生理过程的唯一机制.为全面了解APOBEC1功能，促进APOBEC1在相关领域的研究，本文作者总结了近年来APOBEC1在生物功能方面的研究进展，介绍了基于同源建模预测的APOBEC1编辑胞嘧啶脱氨基化的分子机制，APOBEC1与辅助蛋白如何形成复合物识别并编辑ApoB mRNA的机制，和APOBEC1在逆转录病毒以及疾病方面的研究成果.1 APOBEC1研究进展1.1 APOBEC1功能域及结构研究APOBEC1最初在ApoB mRNA编辑事件中被发现.人源APOBEC1与兔源APOBEC1包含236个氨基酸（aa），大鼠APOBEC1与小鼠APOBEC1包含229aa，人源APOBEC1与大鼠APOBEC1具有69%的序列相似性[5]，构成锌指结构域的脱氨基活性位点H-X-E-X23-28-C-P-X2--C在APOBEC1同源蛋白中也十分保守[4];N端的碱性氨基酸R15，R16，R17，R33和K34被4认为是核定位信号的一部分[6-7]，它们对编辑反应很重要[8].MEHTA等[9]发现，APOBEC1的N 端区域可能参与辅助蛋白的结合.APOBEC1蛋白均在C端173～210 aa处具有一段保守的亮氨酸富集区域180～196 aa.L180，L182，I185和L189的单突变体，以及P190A/P191A双突变体均导致APOBEC1部分或几乎完全失去编辑活性[8].同位素标记以及高效液相色谱分析显示：APOBEC1可能以同源二聚体的方式存在[10]，而APOBEC1的C端残基196～210 aa和221～229 aa对二聚体的形成有很重要的影响[8]，如图2所示.其次C端缺失的APOBEC1突变体（APOBEC1截短体1～172 aa和截短体1～196 aa）无法二聚并且无法编辑ApoB mRNA[8，11]，IKEDA等[5]发现APOBEC1的二聚结构需要RNA分子的介导.APOBEC1还能对单链DNA 的胞嘧啶进行脱氨基催化[12]，基于酵母脱氨酶晶体结构模拟的APOBEC1结构模型支持这一结论[13].IKEDA等[5]发现兔源APOBEC1的C端亮氨酸富集区以及2个二聚体结构域均参与了其包装到HIV-1病毒粒子中的过程，C端结构域同时也是APOBEC1对病毒cDNA和基因组RNA发挥脱氨基活性必不可少的部分.1.2 APOBEC1催化胞嘧啶脱氨基化的可能机制APOBEC1能够特异性催化ApoB mRNA第6666位的胞嘧啶C6666脱氨基化转变为尿嘧啶（U6666），即ApoB mRNA C-to-U编辑，该处密码子则由C6666AA（Q2153）突变为终止密码子U6666AA，经过编辑的ApoB mRNA翻译后得到ApoB蛋白的截短体ApoB48（相对分子质量为241 000），未经编辑的ApoB mRNA则翻译为全长的ApoB100（相对分子质量为512 000）[14]，如图3（a）所示.ApoB100在血液中运输内源性胆固醇和甘油三酸酯，而截短体ApoB48可代谢膳食脂类[15]，但ApoB100结合胆固醇并在血液中运输时有可能增加动脉粥样硬化的风险[16]，所以APOBEC1对ApoB mRNA的脱氨基催化产物ApoB48可能降低动脉粥样硬化的风险.APOBEC1催化活性中心是一个锌指结构域，如图1（b）所示，脱氨基化活性位点为His-X-Glu-X23-28-Cys-Pro-X2-4-Cys[4]，主要识别底物是RNA，也有研究报道APOBEC1能对DNA胞嘧啶催化脱氨基化[12，17].HARRIS等[1]根据细菌以及酵母胞嘧啶脱氨酶的结构研究预测了APOBEC蛋白对单链DNA脱氨基催化的分子机制，如图3（b）所示.首先，活性位点的组氨酸（His）和半胱氨酸（Cys）与锌离子（Zn2+）配位，此时一个水分子靠近活性位点;随后水分子在Zn2+作用下与谷氨酸（Glu）反应后生成一个氢氧根离子（OH-），激活了锌指结构域;激活后的Glu将胞嘧啶环的N3质子化，导致N3与C4双键不稳定，此时C4易于OH-的進攻;OH-进攻C4后其质子氢被Glu螯合，形成四面体的过渡态;最终，胞嘧啶的氨基侧基（-NH2）接受了被Glu螯合的质子氢，使碳氮键断裂，C4重新与氧原子（O）形成双键并从活性位点处释放尿嘧啶和氨（NH3），如图3（b）所示.APOBEC1催化DNA或RNA胞嘧啶脱氨基化可能也符合这一机制.APOBEC1是一种RNA胞嘧啶脱氨基酶，可特异性编辑ApoB mRNA，编辑DNA不是其主要功能[1].其功能特征具体体现在如下几个方面：1）与AID/APOBEC3相似的是，啮齿动物，尤其兔源APOBEC1蛋白通过RNA/DNA胞嘧啶脱氨基化的机制，抑制某些逆转录病毒的复制;2）随着更多的APOBEC1编辑靶标的鉴定，发现APOBEC1在包括癌症等疾病发生方面具有一定作用;3）APOBEC1也是APOBEC家族中唯一需要与特定的辅助蛋白形成复合物才能进行ApoB mRNA编辑的蛋白[3-4].近年来关于APOBEC1的研究范围越来越广，不再局限于ApoB mRNA的脱氨基化研究.APOBEC1在体内有大量RNA靶标，催化脱氨基化也不是其参与生理过程的唯一机制.为全面了解APOBEC1功能，促进APOBEC1在相关领域的研究，本文作者总结了近年来APOBEC1在生物功能方面的研究进展，介绍了基于同源建模预测的APOBEC1编辑胞嘧啶脱氨基化的分子机制，APOBEC1與辅助蛋白如何形成复合物识别并编辑ApoB mRNA的机制，和APOBEC1在逆转录病毒以及疾病方面的研究成果.1 APOBEC1研究进展1.1 APOBEC1功能域及结构研究APOBEC1最初在ApoB mRNA编辑事件中被发现.人源APOBEC1与兔源APOBEC1包含236个氨基酸（aa），大鼠APOBEC1与小鼠APOBEC1包含229aa，人源APOBEC1与大鼠APOBEC1具有69%的序列相似性[5]，构成锌指结构域的脱氨基活性位点H-X-E-X23-28-C-P-X2--C在APOBEC1同源蛋白中也十分保守[4];N端的碱性氨基酸R15，R16，R17，R33和K34被4认为是核定位信号的一部分[6-7]，它们对编辑反应很重要[8].MEHTA等[9]发现，APOBEC1的N端区域可能参与辅助蛋白的结合.APOBEC1蛋白均在C端173～210 aa处具有一段保守的亮氨酸富集区域180～196 aa.L180，L182，I185和L189的单突变体，以及P190A/P191A双突变体均导致APOBEC1部分或几乎完全失去编辑活性[8].同位素标记以及高效液相色谱分析显示：APOBEC1可能以同源二聚体的方式存在[10]，而APOBEC1的C端残基196～210 aa和221～229 aa对二聚体的形成有很重要的影响[8]，如图2所示.其次C端缺失的APOBEC1突变体（APOBEC1截短体1～172 aa和截短体1～196 aa）无法二聚并且无法编辑ApoB mRNA[8，11]，IKEDA等[5]发现APOBEC1的二聚结构需要RNA分子的介导.APOBEC1还能对单链DNA 的胞嘧啶进行脱氨基催化[12]，基于酵母脱氨酶晶体结构模拟的APOBEC1结构模型支持这一结论[13].IKEDA等[5]发现兔源APOBEC1的C端亮氨酸富集区以及2个二聚体结构域均参与了其包装到HIV-1病毒粒子中的过程，C端结构域同时也是APOBEC1对病毒cDNA和基因组RNA发挥脱氨基活性必不可少的部分.1.2 APOBEC1催化胞嘧啶脱氨基化的可能机制APOBEC1能够特异性催化ApoB mRNA第6666位的胞嘧啶C6666脱氨基化转变为尿嘧啶（U6666），即ApoB mRNA C-to-U编辑，该处密码子则由C6666AA（Q2153）突变为终止密码子U6666AA，经过编辑的ApoB mRNA翻译后得到ApoB蛋白的截短体ApoB48（相对分子质量为241 000），未经编辑的ApoB mRNA则翻译为全长的ApoB100（相对分子质量为512000）[14]，如图3（a）所示.ApoB100在血液中运输内源性胆固醇和甘油三酸酯，而截短体ApoB48可代谢膳食脂类[15]，但ApoB100结合胆固醇并在血液中运输时有可能增加动脉粥样硬化的风险[16]，所以APOBEC1对ApoB mRNA的脱氨基催化产物ApoB48可能降低动脉粥样硬化的风险.APOBEC1催化活性中心是一个锌指结构域，如图1（b）所示，脱氨基化活性位点为His-X-Glu-X23-28-Cys-Pro-X2-4-Cys[4]，主要识别底物是RNA，也有研究报道APOBEC1能对DNA胞嘧啶催化脱氨基化[12，17].HARRIS等[1]根据细菌以及酵母胞嘧啶脱氨酶的结构研究预测了APOBEC蛋白对单链DNA脱氨基催化的分子机制，如图3（b）所示.首先，活性位点的组氨酸（His）和半胱氨酸（Cys）与锌离子（Zn2+）配位，此时一个水分子靠近活性位点;随后水分子在Zn2+作用下与谷氨酸（Glu）反应后生成一个氢氧根离子（OH-），激活了锌指结构域;激活后的Glu将胞嘧啶环的N3质子化，导致N3与C4双键不稳定，此时C4易于OH-的进攻;OH-进攻C4后其质子氢被Glu螯合，形成四面体的过渡态;最终，胞嘧啶的氨基侧基（-NH2）接受了被Glu螯合的质子氢，使碳氮键断裂，C4重新与氧原子（O）形成双键并从活性位点处释放尿嘧啶和氨（NH3），如图3（b）所示.APOBEC1催化DNA或RNA胞嘧啶脱氨基化可能也符合这一机制.APOBEC1是一种RNA胞嘧啶脱氨基酶，可特异性编辑ApoB mRNA，编辑DNA不是其主要功能[1].其功能特征具体体现在如下几个方面：1）与AID/APOBEC3相似的是，啮齿动。
环磷酰胺杂质结构式整理-杂质标准品
环磷酰胺杂质——孟成科技（上海）有限公司名称信息结构式环磷酰胺杂质Cyclophosphamide Impurity分子式/Molecular Formula ：C7H15N2O3P分子量/Molecular Weight ：206.18环磷酰胺杂质Cyclophosphamide Impurity 分子式/Molecular Formula ：C9H22ClN2O4P分子量/Molecular Weight ：288.71环磷酰胺杂质Cyclophosphamide Impurity 分子式/Molecular Formula ：C7H19N2O5P分子量/Molecular Weight ：242.21CAS#:45164-27-0环磷酰胺杂质Cyclophosphamide Impurity 分子式/Molecular Formula ：C9H21N2O4P分子量/Molecular Weight ：252.25环磷酰胺杂质Cyclophosphamide Impurity 分子式/Molecular Formula ：C7H17Cl2N2O3P分子量/Molecular Weight ：279.10CAS#:52336-54-6环磷酰胺杂质Cyclophosphamide Impurity 分子式/Molecular Formula ：C14H33ClN4O7P2分子量/Molecular Weight ：466.84环磷酰胺杂质Cyclophosphamide Impurity 分子式/Molecular Formula ：C14H32N4O7P2分子量/Molecular Weight ：430.38环磷酰胺杂质Cyclophosphamide Impurity 分子式/Molecular Formula ：C4H10ClNO.HCl分子量/Molecular Weight ：160.04CAS#:2576-29-6环磷酰胺杂质Cyclophosphamide Impurity 分子式/Molecular Formula ：C8H17Cl2N2O2P分子量/Molecular Weight ：275.11CAS#:78149-83-4环磷酰胺杂质Cyclophosphamide Impurity 分子式/Molecular Formula ：C13H30ClN2O9P分子量/Molecular Weight ：424.81环磷酰胺杂质Cyclophosphamide Impurity 分子式/Molecular Formula ：C13H29N2O9P分子量/Molecular Weight ：388.35环磷酰胺杂质Cyclophosphamide Impurity 分子式/Molecular Formula：C7H17N2O4P分子量/Molecular Weight：224.20环磷酰胺杂质Cyclophosphamide Impurity 分子式/Molecular Formula：C7H18ClN2O4P分子量/Molecular Weight：260.65环磷酰胺杂质Cyclophosphamide Impurity 分子式/Molecular Formula：C10H26ClN3O7P2分子量/Molecular Weight：397.73。
乙酰胆碱酯酶抑制剂
上海应用技术学院研究生课程《高等天然产物化学》试卷2014 / 2015 学年第1 学期课程代码：NX0702013论文题目：乙酰胆碱酯酶抑制剂的研究进展姓名：芮银146061414康满满146061409专业：制药工程学院：化工学院乙酰胆碱酯酶抑制剂的研究进展芮银，陈祎桐，康满满摘要：本文阐述了乙酰胆碱酯酶抑制剂(AChEI)的研究进展，介绍了用于药物治疗的乙酰胆碱酯酶抑制剂的各种来源如植物、微生物等，及其抑制乙酰胆碱的活性物质。
在此基础上，总结了几种现代分析技术，对AChEIs进行筛选，大大加快AD药物资源的开发利用进程。
这些方法主要有基于比色法的Ellman's法及相关的改进方法、薄层显色法、荧光显色法、电喷雾质谱法等。
但是，到目前为止，现代分析技术在AD药物资源中的应用还处在起步阶段。
关键词：乙酰胆碱酯酶抑制剂，筛选方法，薄层显色法，荧光显色法The progress of acetylcholinesteraseinhibitorsRui Yin, Chen Yitong, Kang ManmanAbstract：In this artical, the research elaborates progress of acetylcholinesterase inhibitors (AChEI), and introduces a variety of sources for drug treatment acetylcholinesterase inhibitors such as plants, microorganisms, and its active ingredients. On this basis, the review summarizes several modern analytic techniques such as Ellman's method which based on the colorimetric method, TLC chromogenic method, fluorescent color method, Electrospray ionization mass spectrometry and so on. However, at present, the application of modern analytic techniques in AD drug resources is still in infancy.Key word: Acetylcholinesterase inhibitors, Screening Methods, TLC chromogenic method, Fluorescent color method目录摘要.................................................................................................错误!未定义书签。
胶束增敏荧光光度法测定兔血样中阿霉素
胶束增敏荧光光度法测定兔血样中阿霉素钱帆;付玉丽;程秀梅;廖秀林;杨秀培【摘要】Doxorubicin is a kind of anthracycline antibiotics and the fluorescence of it can get enhanced in the presence of hexadecyl trimethyl ammonium bromide (CTAB) in ethanol-borate buffer solution. A new fluorescent spectrophotometry based on this principle has been developed to determine doxorubicin in rabbit serum. Method development included study of the effects of buffer pH, buffer concentration, organic solvent and CTAB concentration on the fluorescence intensity of DOX. The optimum conditions were pH 6.0 17 mmol/L borate buffer, 60% v/v ethanol and 1.9 mmol/L CTAB. The fluorescence intensity was linearly related to the concentration of doxorubicin in the range of 0.5 to 120 ng/mL with a correlation coefficient of 0.999 2 under the optimum conditions. The detection limit (3a) is 0.161 ng/mL. The proposed method was satisfactorily applied to the determination of doxorubicin in rabbit serum. The recovery was within the range of 93.7%-105.6% (RSD<1.5%). The results showed that this method had great accuracy and sensitivity, which is widely applied in chinical test.%基于阳离子表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)对蒽环类抗生素阿霉素的荧光强度有增敏作用,通过考察CTAB浓度、缓冲液pH及浓度、有机溶剂等对阿霉素荧光强度的影响,建立胶束增敏荧光光度法测定阿霉素的新方法.在体系为17 mmol/L的硼酸缓冲液(pH 6.0)且含60％(v/v)乙醇、1.9 mmol/LCTAB的条件下,阿霉素在0.5 ～ 120 ng/mL浓度范围内荧光强度呈良好的线性(r=0.9992),检出限(3σ)为0.161 ng/mL.该方法用于测定兔血样中阿霉素时,回收率在93.7％～105.6％之间,相对标准偏差小于1.5％.结果表明该方法具有较好的准确度与灵敏度,可用于临床监测.【期刊名称】《中国测试》【年(卷),期】2013(039)002【总页数】4页(P44-47)【关键词】阿霉素;十六烷基三甲基溴化铵;荧光光谱法;兔血【作者】钱帆;付玉丽;程秀梅;廖秀林;杨秀培【作者单位】西华师范大学化学化工学院,四川南充637000【正文语种】中文【中图分类】O657.31;R979.1;S829.1;R9610 引言阿霉素（DOX）是一种有效的抗癌药物，被广泛用于癌症的化疗，且已被美国药典收录[1]。
一种降解木质素的锰过氧化物酶基因及其获取方法[发明专利]
![一种降解木质素的锰过氧化物酶基因及其获取方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/e675a6013868011ca300a6c30c2259010202f329.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201710099160.X(22)申请日 2017.02.23(71)申请人 安庆师范大学地址 246133 安徽省安庆市宜秀区集贤北路1318号(72)发明人 尹立伟 杨春成 范志强 武琳 朱玉 李莉 穆丹 王传顺 闫洪波 池玉杰 (74)专利代理机构 合肥市浩智运专利代理事务所(普通合伙) 34124代理人 王志兴(51)Int.Cl.C12N 15/53(2006.01)C12N 15/10(2006.01)(54)发明名称一种降解木质素的锰过氧化物酶基因及其获取方法(57)摘要本发明公开了一种降解木质素的锰过氧化物酶基因，来源于白腐菌树舌菌株，基因序列如Seq ID No：1所示，蛋白质氨基酸序列如Seq IDNO：2所示。
本发明还公开了一种降解木质素的锰过氧化物酶基因的获取方法，包括以下步骤：白腐菌树舌菌株锰过氧化物酶酶活检测，通过简并PCR反应获得Ga-MnP基因片段，通过反转录合成cDNA第一链，利用RACE技术从cDNA中分离目的基因，利用逆转录RT-PCR技术对基因Ga-MnP进行扩增。
本发明的优点在于：提供了一种降解木质素的锰过氧化物酶基因及其获取方法，为进一步研制生物催化剂提供技术储备，以达到工业高效生产的需求。
权利要求书3页 说明书13页序列表2页 附图5页CN 106906225 A 2017.06.30C N 106906225A1.一种降解木质素的锰过氧化物酶基因，其特征在于，来源于白腐菌树舌菌株(Ganoderma applanatum)AQ1，所述白腐菌树舌菌株在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)的保藏编号为CCTCC M2017017；所述降解木质素的锰过氧化物酶基因的基因序列如Seq ID No：1所示，蛋白质氨基酸序列如Seq ID NO：2所示。
半叶马尾藻多糖对辐射损伤小鼠骨髓细胞集落生成的影响
半叶马尾藻多糖对辐射损伤小鼠骨髓细胞集落生成的影响孟庆勇;刘志辉;郑辉【期刊名称】《中国海洋大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2005(035)003【摘要】探讨半叶马尾藻多糖[Sargassum hemiphyllum (Turner) C.Ag. polysaccharides, SHP]对辐射损伤小鼠骨髓细胞集落生成的影响.检测辐射损伤小鼠脾集落生成单位、红细胞集落生成单位、爆裂型红细胞集落生成单位、粒细胞-巨噬细胞集落生成单位、巨核细胞集落生成单位、混合集落生成单位的变化.5Gy γ射线照射后小鼠CFU-S,CFU-E,BFU-E 和CFU-Mix明显减少,而SHP(20mg/kg～40mg/kg)可以抑制CFU-S,CFU-E,BFU-E 和CFU-Mix下降.辐射损伤也可以引起小鼠CFU-GM显著降低,但是,SHP(10mg/kg～40mg/kg)具有拮抗辐射损伤的作用,使CFU-GM增加.单纯照射组小鼠CFU-Meg显著低于正常对照组,SHP(40mg/kg)加照射组小鼠CFU-Meg却显著高于单纯照射组.SHP对辐射损伤小鼠多能干细胞和造血祖细胞具有保护作用.【总页数】4页(P503-506)【作者】孟庆勇;刘志辉;郑辉【作者单位】广东医学院分析中心,广东,湛江,524023;广东医学院分析中心,广东,湛江,524023;暨南大学医学院生理教研室,广东,广州,510632【正文语种】中文【中图分类】R818.74【相关文献】1.半叶马尾藻多糖对[60Co]γ射线损伤小鼠骨髓细胞的影响 [J], 孟庆勇;刘志辉;徐美奕;郑辉2.半叶马尾藻多糖对辐射损伤小鼠脾细胞的影响 [J], 孟庆勇;刘志辉;徐美奕3.半叶马尾藻多糖对辐射损伤小鼠骨髓CD_(34)^+细胞和SCF mRNA表达的影响[J], 孟庆勇;刘志辉;郑辉4.半叶马尾藻多糖对辐射损伤小鼠免疫功能的保护作用 [J], 宋云端;秦维超;吕涛;孟庆勇5.半叶马尾藻多糖对辐射损伤小鼠巨噬细胞功能和胸腺细胞周期进程的影响 [J], 孟庆勇;刘志辉;郑辉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
四环素类药物残留
色谱柱的选择
用于分离四环素类化合物的色谱柱种类较多，包括 C18 柱、C8 柱、ODS 柱、苯基柱等，考虑到四环素类 物质在水中溶解度很小，且分子量很小，正相键合相 和反相键合相均可使用，但由于其分子中含酚羟基和烯 酸型羟基，具有一定极性，若选用正相键合相色谱柱， 可能会由于正相键合相的极性很大，二者的作用力很 强，造成洗脱困难，保留时间过长的情况，所以，选 择反相键合相更为适宜。加之，四环素类药物分子中 含酚羟基和烯酸型羟基显弱酸性，同时含有二甲胺基显 碱性，为两性化合物，在一定 pH 值下可以解离，在 反相键合相的条件下，调节pH 值至合适范围，可获得 适宜保留值，达到满意分离。 本实验中选择了反相键合相色谱柱，并对C8 和C18 键 合相的分离能力进行了对比分析，结果表明C18 色谱柱 分离效果较好。这可能是由于C 1 8 色谱柱填料粒径小， 表面积大，柱效高，从而增强了溶质分子的分离度。加 之其有较高的 C 含量和更好的疏水性，对于各种类型的 样品分子具有更强的适应能力，所以在测定和分析禽产 品中四环素类药物多残留时可以优先考虑使用C18 作为 实验用柱。
• 式中，x为样品中抗生素含量，mg/kg,A为样品溶液测得的抗生素 质量，mg；m为样品质量，g。
这是在GB/T20764-2006中截取的标 准物质色谱图，用的是液相色谱-紫外检 测法。与书本所述方法有所区别，在这 列出作为参考，出峰顺序依次为土霉素、 四环素、金霉素。
参照GB/T60764-2006,GB/T21317-2007中 测定四环素类兽药残留的相关方法，为使 方法更为准确可靠，在原实验的基础上， 可以再做回收率及精密度试验
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
=====================================================================Acq. Operator : Li Shan(LCMS-02) Seq. Line : 36
Acq. Instrument : HY-LCMS-02 Location : Vial 25Injection Date : 8/20/2014 12:00:56 PM Inj : 1
Inj Volume : 3.000 µl
Acq. Method : D:\AGLIENT 1260\DATA\20140820\20140820 2014-08-20 08-46-42\100-2000-MS+3MIN .M
Last changed : 8/20/2014 11:15:06 AM by Li Shan(LCMS-02)
Analysis Method : D:\AGLIENT 1260\DATA\20140719\20140719 2014-07-19 11-01-35\HM-297A_3-H01P( RP-HPLC).M (Sequence Method)
Last changed : 8/20/2014 12:08:26 PM by Li Shan(LCMS-02) (modified after loading)Method Info : HM-297A_3-H01RS(RP-LCMS)
A-RP-102
Additional Info : Peak(s) manually integrated
min
0.5
1
1.52
2.53mAU 0
50100150
200250300350 DAD1 B, Sig=214,4 Ref=off (D:\AGLIENT...\DATA\20140820\20140820 2014-08-20 08-46-42\BIZ2014-820-ZLQ2-1.D)
A r e a : 9.28706 1.267 A r e a : 16.2169
1.403 A r e a : 1877.2
1.793
===================================================================== Area Percent Report =====================================================================
Sorted By : Signal Multiplier : 1.0000Dilution : 1.0000
Do not use Multiplier & Dilution Factor with ISTDs
Signal 1: DAD1 B, Sig=214,4 Ref=off
Peak RetTime Type Width Area Height Area # [min] [min] [mAU*s] [mAU] %
----|-------|----|-------|----------|----------|--------| 1 1.267 MM 0.0821 9.28706 1.88422 0.4881 2 1.403 MM 0.0770 16.21687 3.51226 0.8523 3 1.793 MM 0.0854 1877.20349 366.15698 98.6596
Totals : 1902.70742 371.55346
===================================================================== *** End of Report ***
Catalog No : HY-18593 Batch#13071
=====================================================================Acq. Operator : Li Shan(LCMS-02) Seq. Line : 36
Acq. Instrument : HY-LCMS-02 Location : Vial 25Injection Date : 8/20/2014 12:00:56 PM Inj : 1
Inj Volume : 3.000 µl
Acq. Method : D:\AGLIENT 1260\DATA\20140820\20140820 2014-08-20 08-46-42\100-2000-MS+3MIN .M
Last changed : 8/20/2014 11:15:06 AM by Li Shan(LCMS-02)
Analysis Method : D:\AGLIENT 1260\DATA\20140719\20140719 2014-07-19 11-01-35\HM-297A_3-H01P( RP-HPLC).M (Sequence Method)
Last changed : 8/20/2014 12:11:23 PM by Li Shan(LCMS-02) (modified after loading)Method Info : HM-297A_3-H01RS(RP-LCMS)
A-RP-102
Additional Info : Peak(s) manually integrated
min
0.5
1
1.5
2
2.5
3
100000
200000300000400000500000600000700000800000 MSD1 TIC, MS File (D:\AGLIENT 1260\DATA\20140820\20140820 2014-08-20 08-46-42\BIZ2014-820-ZLQ2-1.D) ES-API, Pos, Sc
A r e a : 5.16163e +006
1.793
Catalog No : HY-18593 Batch#13071
MS Signal: MSD1 TIC, MS File, ES-API, Pos, Scan, Frag: 50 Spectra averaged over upper half of peaks. Noise Cutoff: 1000 counts.
Reportable Ion Abundance: > 10%.
Retention Mol. Weight Time (MS) MS Area or Ion
1.793 5161632 455.90 I 454.90 I 454.00 I 45
2.90 I
m/z
200
400
600
800
1000
1200
1400
1600
20406080100*MSD1 SPC, time=1.758:1.835 of D:\AGLIENT 1260\DATA\20140820\20140820 2014-08-20 08-46-42\BIZ2014-820-ZLQ2-1.D ES-AP Max: 240474
455.9
454.9
*** End of Report ***。