基因工程(生物技术)课程设计范例

生物技术课程设计
题目：不同启动子对RNA介导的病毒抗性的影响姓名：学号：
年级：专业：
指导教师：
生命科学学院
二○年月日
本研究以马铃薯Y病毒外壳蛋白基因3’端400bp 的序列为靶目标设计反向重复序列,插入含有三种不同启动子的表达载体PCAMBIA1300中，构建hpRNA结构的植物表达载体，转化烟草，进行抗病性鉴定，分析不同启动子对RNA介导的病毒抗性的影响，寻找能够引发RNA介导病毒抗性产生的最佳类型的启动子，同时探讨启动子对RNA介导病毒抗性的作用本质。

研究方法
1．不含内含子的反向重复序列的表达载体的构建
hpRNA的构建如图所示
转录
400bp
100bp 2．含有内含子的反向重复序列的表达载体的构建hpRNA的构建如图所示
载体的构建以双元载体pCAMBIA1300为基础。

设计引物（两端加上适宜的限制性内切酶位点），PCR分别扩增花椰菜花叶病毒35S（CaMV35S）启动子、水稻肌动蛋白基因Act1启动子、玉米乙醇脱氢酶基因Ubi启动子和PNZIP基因启动子和胭脂碱合成酶基因3’端Nos终止子。

将扩增的启动子和终止子连接于双元载体pCAMBIA1300中，获得含有不同启动子的重组的表达载体。

以已克隆的PVY的CP基因3’段400bp的cDNA区段为目的基因，分别反向重复插入含有不同启
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