植物检疫学植物检疫性病毒病害PPT课件

症状：
植株：-------帚顶、奥古巴花叶和褪绿V型纹 帚顶症状：节间缩短，叶片簇生，植株矮化，束生 奥古巴花叶：不规则黄色斑，环纹和线状纹 褪绿V型纹：褪绿V型纹症状
薯块上的症状
初生症状（Primary Symptom）当年受侵 薯块所表现出的症状。薯表轻微隆起，产 生坏死或部分坏死，直径为1－5厘米的同 心环纹，这种环纹并不局限于某一部分， 常互聚在一起或分开。将薯块切开，内部 表现为坏死弧纹或条纹，它们向薯块内部 延伸，但这种延伸并不一定来自薯表的环 纹，其延伸程度似乎与薯表的症状严重程 度有关。
核酸：可能为单链RNA
发病规律：可汁液传染，50％的病块茎可
将病毒传给下一代。田间主要通过马铃薯 粉痂病菌（Spongospora subterrance）传 播，病毒在休眠孢子囊中，至少存活1年， 孢子囊萌发产生的游动孢子侵入寄主时， 将病毒粒体带入马铃薯根部。病害在多雨 年份发生较重。
远距离通过带病或带菌的种薯调运而传播。
葡萄黄脉株系：自然发生在葡萄上，在草本寄主上引起的症
状与上述两个株系类似，但可在豇豆上引起顶枯，血清学上 也与上述两个株系不同，主要分布在美国西部
其他株系：李属植物上不同分离物 （李褐线分离物 Prune
brown line，李茎环孔分离物Prunus stem pitting和樱桃叶斑 驳分离物Cherry leaf mottle）存在血清学差异，但差异不明 显。樱桃叶斑驳分离物不能由Xiphinema californicum传播
植物病毒分子探针具专一性强、灵敏度高、
准确快速等优点
分子探针的长度一般在500～1500核苷酸
碱基对（bp）
常用广谱分子探针，即包括多个不同专化
性基因的核苷酸片断。
PCR技术检测
PCR （Polymerase chain reaction）聚合酶联反应：
将极微量的靶DNA片断，在4h左右特异性扩增上百 万倍。
第七章 检疫性植物病毒
2006.10.2
了解检疫性植物病毒的种类、分布及重要性， 掌握植物检疫性病毒的检验方法，掌握番茄环 斑病毒、马铃薯帚顶病毒引起病害的症状、病 原特性、寄主范围、病害的发生发展规律以及 检验措施。
检疫性植物病毒的检验方法 番茄环斑病毒 马铃薯帚顶病毒 *其他检疫性植物病毒
检疫性植物病毒的检验方法 番茄环斑病毒 马铃薯帚顶病毒 *其他检疫性植物病毒
南方菜豆花叶病毒、可可枝肿病毒、香石竹环 斑病毒
番茄环斑病毒 Tomato ring spot virus
分布：
1936年，美国东部新泽西发生ToRSV 至今已有30多个国家和地区发现有该病毒， 主要集中在北美温带地区，即美国和加拿 大。
例1，TMV和CMV在田间烟草植株上都呈花叶症， 为了确定是否有TMV，或是将两者区分开，便可
通过下列三种植物的接种来确定。
3.电子显微镜技术
原理： 以电磁波为光源，利用短波电子流，分辨率达
到0.99Å，比光学镜要高1000倍以上
主要方法： 超薄切片、负染技术、免疫电镜技术
4.分子生物学检测方法
植物病毒主要是RNA病毒，进行PCR检测时，需要 将RNA逆转录成互补DNA（cDNA)，再进行PCR， 即RT－PCR技术。
了解检疫性植物病毒病害的种类、分布及重要 性，掌握植物检疫性病原病毒的检验方法，掌 握番茄环斑病、马铃薯帚顶病的症状、病原特 性、寄主范围、病害的发生发展规律以及这两 种病害的检验措施。
经卵幼虫和成虫雌虫死亡后形成胞囊经卵幼虫和成虫雌虫死亡后形成胞囊11龄幼虫在卵壳内蜕皮后龄幼虫在卵壳内蜕皮后22龄幼虫破卵壳逸出龄幼虫破卵壳逸出胞囊外进入土壤中遇到寄主时从近根尖端处入侵胞囊外进入土壤中遇到寄主时从近根尖端处入侵33龄幼虫在根内度过龄幼虫在根内度过44龄雌幼虫体后部露出根表面龄雌幼虫体后部露出根表面44龄雄幼虫仍在根龄雄幼虫仍在根第第44次蜕皮雄成虫从根内逸出进入土壤不再次蜕皮雄成虫从根内逸出进入土壤不再取食寻找雌虫交配取食寻找雌虫交配雌虫大部分露于根表面可以释放引诱雄虫的物雌虫大部分露于根表面可以释放引诱雄虫的物雌虫老熟后体内充满卵最多有雌虫老熟后体内充满卵最多有500500粒变成粒变成胞囊后壁粗糙且厚比较坚硬保护内部的卵成熟胞囊后壁粗糙且厚比较坚硬保护内部的卵成熟胞囊落于土壤中度过冬天
南方菜豆花叶病毒、可可枝肿病毒、香石竹环 斑病毒
检疫性植物病毒的检验方法
生物学检测技术 血清学检测技术 电子显微镜技术 分子生物学检测技术
1.生物学检测技术
原理： 植物病毒对鉴别寄主或指示植物的特异反应。
鉴别寄主谱： 对一种病毒有特殊反应的一组寄主，一般包括
3～5种不同反应类型的寄主植物。一般包括： 系统侵染的寄主 局部侵染的寄主 不受侵染的寄主
大纲要求
了解检疫性线虫病害的概况，掌握马 铃薯胞囊线虫、香蕉穿孔线虫、松材线虫 等病害在国内外的分布状况，症状特点， 病害的发生发展规律，检疫方法和检疫处 理的措施。
马铃薯孢囊线虫
马铃薯金线虫 马铃薯白线虫
香蕉穿孔线虫 松材线虫
马铃薯金线虫
Potato golden nematode
分布：
1881年首先在德国发现，现主要分布 在美洲、欧洲大部分国家和亚洲少数国家， 是我国外检对象。
病毒特性：
等轴对称球形，直径28nm，在烟草汁液中， 58 ℃下10min、20 ℃下2d、4 ℃下21d、－20 ℃ 下几个月以后失去侵染力。接种的烟叶和黄瓜子 叶汁液，稀释限点为10－3，而系统侵染的烟草汁 液，稀释限点低于10－1。
生物学特性：
稳定性差，难纯化，纯化的病毒制剂 中有两类粒体：无RNA的蛋白外壳的T粒体 和侵染性核蛋白的B粒体，B粒体具侵染性， 二者血清学性质有差异。T粒体分子量 3.2×106，沉降系数53S，B粒体分子量 5.5×106，沉降系数126～128S。B粒体 RNA分子量2.3×106 ，占粒体重量的40％
苹果上的症状（apple union necrosis and decline）
砧木和接穗接合部肿胀，裂开，剥开树皮，树 皮内侧变厚，多孔，愈合斑连接处有不明显的线， 在这条线相对方向的形成层表面也有一类似的线， 沿着这条线有一小的深沟或一条光滑的细缝，坏死 的树皮覆盖在沟或缝上。
叶变少，变小，黄化，嫩枝呈束状丛生，果实 较小，果皮颜色加深。树皮颜色淡红
检验方法：隔离试种，观察系统症状。用
病叶汁液接种鉴别寄主。
苋色藜：产生局部坏死坏斑或细环纹，可 扩大到全叶。
普通烟：在20℃以下时，接种叶上产生局 部坏死或褪绿环斑。
检疫和防治：（1）实施检疫，禁止疫区马 铃薯种薯进境。（2）病区需实行轮作，倒 茬，播种无病种薯，防治粉痂病。
复习思考题
1.解释概念：鉴别寄主、鉴别寄主谱、枯斑寄 主、初生症状、次生症状、 PMTV、 ToRSV
次生症状：由病的母薯长成的植株所结的 薯块的症状。畸形、大的龟裂，网络状小 龟裂，横切面上，表面的坏死环纹环绕薯 块，内部的坏死和这些效相连接，髓部的 坏死斑常延伸至薯块端部的生殖根上。
病原：马铃薯帚顶病毒
学名 Potato mop-top virus 异名 Chlorogenus solani,
Potato virus 11,
Solanum virus 15
potato witches’ broom agent 分类地位 小麦土传花叶病毒组(Furovirunm×16～
20nm，沉降系数为126S、171S和236S。 外壳蛋白亚基呈螺旋状排列，螺距2.4～ 2.5nm，单链RNA，病毒的致死温度为 75～80℃，稀释限点为10－3～10－4，体外 存活期10周以上（20℃）。
传播：
田间传播介体是剑线虫属，其中Xiphinema americanum优势种群。成虫和三龄幼虫都能传毒， 在病根部饲毒1h可获得病毒，而后在1h内又能将 病毒传给接种植物。
由繁缕、千日红、悬钩子、大豆、弗吉尼亚 草莓、烟草、番茄和红三叶草等植物的种子传播。
杂草是重要的田间毒源。
远距离传播依靠植物的种子和苗木调运进行
复盆子上的症状：侵染当季不表现症状，第 二年叶片表现黄色斑驳，条纹或脉褪绿，叶 片生长推迟，病株表现不结果或形成易碎果
悬钩子上的症状：植株矮化，小果并减产， 幼龄植株叶片出现褪绿环斑。第二年，叶片 症状不明显，但新叶出现偏上性，早落。第 三年有10％～80％的果枝死亡。
病原：
番茄环斑病毒
学名 Tomato ring sopt virus （ToRSV）
马铃薯帚顶病毒 Potato mop－top virus
分布： 1965年首先在英国发现，现已传入欧
美多个国家。日本（1981）、美国（2002）报 道。中国未见报道。 寄主：马铃薯是唯一的自然寄主。人工接 种可侵染多种寄主植物。
危害性：
在英格兰，北爱尔兰和苏格兰受侵薯块 的产量损失可达26％。此外该病为害后，病 斑常影响到薯块的外表，是商品价值降低。 马铃薯在储藏期间，若储藏不当，病斑在薯 块上扩展，进一步影响马铃薯的经济价值。 1966年和1967年PMTV在秘鲁曾引起产量损 失30－40％和75％。
检验方法： 生物学检测：
黄瓜：局部褪绿斑，而后产生系统褪绿和斑驳 苋色藜和昆诺阿藜：小局部褪绿斑，后系统侵染顶端枯死 菜豆：局部褪绿斑或坏死斑，系统症状为皱缩和顶叶坏死 烟草：局部坏死或环斑，幼叶系统褪绿环纹和斑纹，后隐症 矮天牛：局部坏死斑，幼叶坏死和枯萎 番茄：局部坏死斑，幼叶产生系统斑驳和坏死 豇豆：局部褪绿斑或坏死斑，引起系统侵染，植株顶端坏死
异名 烟草环斑病毒2号 Tomato ring spot virus No.2 烟病毒13号 Nicotiana virus 13 桃黄芽花叶病毒 Peach yellow bud mosaic virus 葡萄黄脉病毒 Grape yellow vein virus
分类地位 线虫传多面体病毒组
R/1:2.8/44+2.4/41:S/S:S/C,Ve/Ne Nepovirus
桃树和李属其它树种上的症状（桃树黄芽 花叶）：沿中脉产生扁椭圆形羽缘状病斑， 由灰绿色变为浅绿色，芽发育成为小而变 形的丛生叶，成浅黄色而死亡。
（桃树茎痘病）：树皮变厚，发软，海绵 状，剥开树皮，树干上出现凹陷的痘斑和 沟槽。叶片褪绿，叶芽发育推迟，落叶提 前，果实畸形，果味变异，提前成熟和脱 落。
寄主：
ToRSV寄主范围广，包括双子叶和单 子叶植物的35个科，自然界，ToRSV主要 侵染木本植物，草本及观赏植物。
危害情况：
1975年，ToRSV侵染加拿大安大略的 地区葡萄，产量损失76％～95％，甚至造 成绝产。同年，ToRSV 侵染后，纽约葡萄 严重减产，奥尔良悬钩子果实减产21％～ 50％。
生理分化：
烟草株系：以烟草环斑病毒2号为代表，是典型株系。自然
发生在温室的烟草幼苗，主要分布在美国东部。
❖ 桃黄芽花叶株系：自然发生在杏、扁桃、桃上，分布在美国
西部。此株系与Price 的烟草株系较难区分。因为两株系在 草本寄主上的症状相似，血清学上无区别，而且大多数分离 物在桃树上都产生黄芽花叶症状
分子杂交检测 PCR技术检测
分子杂交
在DNA和RNA之间进行，依据是 RNA与互补的DNA之间存在着碱基 的互补关系。
在一定的条件下，RNA--DNA形成 异质双链的过程称为杂交。其中预 先分离纯化或合成的已知核酸序列 片段叫做杂交探针(probe)，由于大 多数植物病毒的核酸是RNA，其探 针为互补cDNA也称为cDNA探针。
❖形态学检测：浸渍法制样，电镜观察病毒
粒体形态，测量粒体大小。
血清学和PCR检测：琼脂双扩散、免疫电
镜、酶联免疫吸附技术等。
检疫和防治：
禁止从病区引进大豆种子、烟草种子、唐 菖蒲球茎及桃、杏、樱桃、葡萄和草莓等 植物的无性材料。
❖病区应采用无毒种子和苗木，施用药剂消
灭介体线虫，清除杂草减少毒源。
寄主：
对茄属的90种植物致病 马铃薯是其重要的农作物寄主 其它农作物寄主有茄子和番茄 烟草、曼陀罗、丁茄和假烟叶树等
危害：
苗期受害: 减产25%-50% 英国曾因该病流行而改种其他作物
Brown(1961)报道，马铃薯种植前，如果 每克土壤中含有20粒卵，1公顷减产2.5吨
症状： 幼苗期至成株期均可受害。 植株生长不良，矮小，茎细弱 叶上生斑点或黄化，后萎蔫或死亡 扒开病根，可见金黄色的马铃薯胞
2.检疫性植物病毒的检验方法主要有那些？ 3.以番茄环斑病毒为例，说明危险性病原病毒
的主要传播途径及其与检疫的关系。
4.PMTV在马铃薯上引起的主要症状有那些？ 5.ToRSV引起的主要病害有那些？ 6. 试述PMTV 、ToRSV的传播途径 7. ToRSV已经明确的株系有那些？
检疫性植物寄生线虫
症状：
番茄症状（番茄环斑病） 枝条卷曲和坏死，嫩叶、叶柄生褐色
坏死环和波纹，果实受侵染，外表产生环 斑，灰色到褐色栓皮
❖葡萄上的症状（葡萄黄脉病）
叶黄脉、斑驳、环斑，节间缩短呈莲蓙 状丛生，植株严重矮化，果实败育变小，至 绝产，几年内植株渐渐坏死。植株剥皮后， 可见增厚的海绵状韧皮组织及坏死凹陷