紫外可见分光光度计维生素B12含量测定

三、仪器组成
紫外 - 可见光度计仪器由光源、单色器、吸收池和检测器 四部分组成。
1、光源
对光源基本要求：足够光强、稳定、 连续辐射且强度随波长变化小。
（1） 钨及碘钨灯： 340～2500 nm ，多 用在可见光区；
（2） 氢灯和氘灯： 160～375nm ，多用 在紫外区。
2、单色器 (Mnochromator)
与原子吸收光度仪不同，在 紫外 可见分光光度计中，单色器通常置于 吸收池的前面！
(可防止强光照射引起吸收池中一 些物质的分解)
单色器： 是分光光度计的关键部件，主要任务是将光源发来的混
合光分解为单色光，并提供所需波长的光。
3、吸收池 (Cell ， Container) ：
用于盛放样品。可用石英或玻璃两 种材料制作，前者适于紫外区和可见光 区；后者只适于可见光区。有些透明有 机玻璃管 光电倍增管
四、实验仪器与试剂
1、仪器： UV-2501型紫外-可见分光光度计（Simazu
公司）；1cm 石英比色皿
2、试剂： 维生素B12注射液：100mg/ml
五、试剂配制与测定
1、 配制标准系列：取维生素B12标准溶液100mg/mL 0.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL分别置 于50.00mL 容量瓶中，用水稀释至刻度；
八、思考题：
为什么同浓度溶液，每次测量后读数会发生 细微变化？
紫外分光光度法与可见分光光度法有些什么 区别？
六、仪器安装环境
七、仪器使用注意事项：
仪器操作过程出现异常情况，不得私自关闭电源，需由教师指 导完成。
实验室内不准来回跑动。 不准随意搬动仪器。 在测量状态下，不得将手伸入测量室内，以防紫外线灼伤！ 不准私自调整实验室空调的设定温度及风速。 同学操作时请注意爱护仪器，如有人为损坏需照价赔偿。
实验一 工作曲线绘制 及维生素B12含量的测定
一、实 验 目 的
1、了解紫外吸收光谱在有机结构 分析的应用。
2、学习有机物的定量分析方法。
二、实验原理
比耳定律 当入射光的波长、液层厚度和溶液的温度
固定时, 溶液的吸光度与溶液的浓度成正比。
朗伯特定律 当入射光的波长、溶液的浓度及温度一
定时,溶液的吸光度与液层的厚度成正比。
2、 绘制标准曲线：用1cm 石英比色皿，以空白为参比，在 波长200～600nm 内测定标准溶液316nm处的吸光度 A，绘制标准曲线。
3、 测定未知液：取未知液5.00mL 置于50.00mL 容量瓶 中，用水稀释至刻度；用1cm 石英比色皿，测定 316nm处吸光度A，以空白为参比。
4、 计算未知液的含量（mg·mL-1）。