820份蛋白印迹试验HIV-1抗体阳性结果分析

DOI: 10.13419/ki.aids.2021.03.12•工作研究•
820份蛋白印迹试验HIV-1抗体阳性结果分析
唐宇，周良君，杨红，李川
(绵阳市疾病预防控制中心，四川绵阳621000)
摘要：目的通过研究分析绵阳市1型艾滋病病毒（HIV-1 )受试者条带检出情况，提高实验室条带判读能力。

方法对2019年绵阳辖区820份蛋白印迹试验H1V-1抗体检测阳性结果使用描述性分析、卡方检验、Fisher确切概 率法和进行分析结果阳性结果中出现全条带的有87.3%(716/820) ;p51和p66的条带检出情况一致性好
(fclppa=0.827, P<0.001);>56岁人群中，各条带间检出一致率大多高于<55岁人群；820份样本中，来自男性613份，女 性207份,不同性别中同-带型的检出率差异无统计学意义;感染者最小2岁，最大92岁，中位数53岁，56~74岁组中阳 性人数最多，占34.5%(283/820);pl7在不同年龄组间的检出率差异有统计学意义；来自医院的阳性人数最多，不同 送检单位的gp41检出率、gpl20检出率差异有统计学意义D结论绵阳地区H1V-1抗体阳性者在蛋白印迹试验中大多 出现全条带结果;p5l和p66检出一致性好956岁和《55岁人群免疫状况可能存在很大的区别，需要进一步分析原因。

关键词：确证阳性；蛋内印迹试验；艾滋病病毒；带型
中图分类号：R373.9 文献标志码：A文章编号：1672-5662(2021 )03-0268-03
Analysis of 820 positive results of HIV-1 antibody tested by Western blot TANG Y u, ZHOU Liangjun, YANG Hong, LI Chuan. (Mianyang Center f or Disease Control and Prevention, Mianyang 621000, China)
Supported by the Study on Subtype Distribution and Primary Drug Resistance of Newly HIV-1 Infected MSM in Mianyang (18PJ590)
Abstract: Objective To analyze the results of HIV-1antibody detected by Western blot test (WB) in Mianyang, and provide scientific basis for AIDS prevention and treatment. Methods Descriptive analysis, chi-square test, Fisher's exact probability method, and Kappa were used to analyze the results of 820 HIV infection detected by WB method. Results
87.3% (716/820) had full bands of the positive results with the good consistency (Kappa=0.827, p<0.001) of the bands of
p51 and p66. In the group^56 years old, the coincidence rate of each band was higher than that of the group^55 years old.
Among the 820 samples, 613 were male and 207 female,with no statistical difference in the detection rate of the same band pattern among different genders. The minimum age of the infected patients was 2 years old,and the maximum age was 92 years old, with the median of 53 years old. 34.5% (283/820) of the patients was between 56-74 years old, the largest group.
The difference in the detection rate of p i7 among different age groups was statistically different. The number of HIV+ patients from hospitals was the largest, and the detection rate of gp41 and gpl20 in different institutes was statistically significant. Conclusion Most of the HIV-1 antibody-positive patients in Mianyang show full bands in Western blot test.
The detection consistency of p51 and p66 has been found relatively high. The immune status of people^56 years old is different from that of those^55 years old and further analysis is needed.
Keywords: HIV-1 antibody positive; Western blot; human immunodeficiency virus; band patterns
截至2018年9月30日，全国报告现存活艾滋病 病毒(HIV)感染者/艾滋病(AIDS)患者849 602例111，A I D S已经成为严重威胁我国公众健康的重要公共 卫生问题2。

及时发现H I V感染者可以早治疗，有 利于改善感染者生活质量，同时还能改变其行为，从
收稿日期：2020-04-03;修回日期：2020-12-25
基金项目：绵阳市男男性行为人群H IV-1新发感染者亚型分布 及原发耐药研究（18Pj590>
第一作者简介：唐宇（1993 —）.女，技师，理学学士，主要从事 艾滋病检测相关工作e Email:****************.om 而减少HIV传播1V。

HIV抗体确证试验包括蛋白印 迹试验（WB)和条带/线性免疫试验（RIB A/LIA)等。

目前，WB依然是最主要的确证方法。

本文对2019 年我中心检测的820份HIV-1抗体阳性标本WB结 果进行分析，目的是研究受试者条带检出情况，提高 实验室条带判读能力，了解艾滋病防治工作效果，为 绵阳市艾滋病防治提供数据支持。

1对象与方法
1.1对象2019年绵阳市初筛实验室以及本实验 室初筛阳性且复检双阳或者一阴一阳的HIV 感染待
确定标本，经本实验室W B检测结果为HIV-1抗体 阳性的标本。

标本类型为血清或者血浆，采样、处理、运输和保存均严格按照《全国艾滋病检测技术规 范(2015年版)》进行。

1.2实验室检测和结果判断W B试剂为上海英旻泰生物技术有限公司生产的人类免疫缺陷病毒(H丨V1+2型）抗体检测试剂盒，均在效期内使用，操 作严格按照试剂盒说明书执行。

仪器为Beehlot48 全自动蛋白印迹仪。

结果判读方式:三人肉眼判读。

HIV-1抗体阳性（简称阳性）标准：P24,g P41 ,gP120/ gpl60中任何两个或更多的条带显著存在。

1.3统计分析一般资料采用描述性分析；采用独 立资料的;^检验对同一条带不同性别、不同年龄组、不同送检单位分别进行组内比对，Fishw•确切概率法 作为补充；采用对总体，不同性别，医院和疾 病预防控制（简称疾控）中心送检样本，幻5岁人群和 >56岁人群进行组内不同条带检出一致性比较。

检 验水准t x=0.05，，认为一致性较差；0.4< AVw>fl<0.75，认为一致性较好;心/^a>0.75,认为一致 性好。

数据整理在Excel软件中完成，用SPSS 2
2.0 软件进行统计分析。

2结果
2.1阳性确证结果的总体分布情况820份抗体确 证实验阳性样本中出现HIV-1型特异性指示带8条带（全条带）的占87.3%(7丨6/820);7条带占5.4% (44/ 820) ;6 条带占 2.3% (19/820) ;5 条带占 1.8% (15/ 820) ;4 条带占 0_2%(2/820) ; 3 条带占 1.8% (15/ 820);2条带占1.1%(9/820)。

gP160的条带检出率最 高，为 100.0% (820/820 )，p24 检出率次之 99.4% (815/ 820)4丨7检出率最低92.6%(759/820)。

丨)51和丨)66的条带检出情况一致性好。

p24和P17、p24和p31检 出一致性较差。

2.2不同性别阳性确证结果的分布情况男女性别比为2.96:1。

男性中P17检出率最
低，女性中P31检出率最低。

不同性
别间同一带型的检出率差异无统计学
意义。

女性中pl7和P51、pl7和p66、
p 17和gp 120、p66和gp 120检出一致性
均高于男性。

erw编码的外膜蛋白
gP41和印丨20检出一致性较好。

pol
编码的反转录蛋白P55和P66在不同
性别中检出一致性均好，p31和p51、
p31和P66检出一致性较好。

详
见表1。

表I不同性别的条带检出情况[检出数（率/%)]带型男（"=613)女 U=207)r’值P值
P17563(91.8)196(94.7) 1.8160.178
p24608(99.2)207 ( 100.0)-0.3388
1)31571(93.1)190(91.8)0.4290.512
gp41568(92.7)194(93.7)0.2650.607
p51587(95.8)199(96.1)0.0550.814
p66595(97.1)199(96.1)0.4340.510
gpl20598(97.6)201(97.1)0.1260.722
gp!60613( 100.0)207(100.0)--
注：a:FiS h tM•确切概率法概率;P:卡//检验概率
2.3不同年龄组阳性确证结果的分布情况感染
者最小2岁，最大92岁，中位数53岁。

56~74岁组中 阳性人数最多，占34.5%(283/820)。

<18、丨9~37和 38~55岁组中gp41检出率最低，56-74和>75岁组中 p 17检出率最低。

p 17条带在不同年龄段间的检出 率差异有统计学意义。

gP160、gP120在所有年龄组 中检出率都最高。

pl7和p31、pl7和p5l、pl7和P66、P31 和 p66、gP41 和 P66、P51 和 P66 的检出一致 性《55岁人群低于>56岁人群:详见表2。

2.4不同送检单位阳性确证结果的分布情况不
同送检单位送检的标本中gp41检出率、gpl20检出 率不完全相同，差异有统计学意义。

详见表3。

2.5不同人群阳性确证结果的条带检出一致性情
况总体、男性、女性、疾控中心、医院）56岁人群中 p51和丨)66检出情况均有很尚的一致性（
0.827,P<0.001；K u p p a=0.?,12,P<0.001；A>/w=0.870,
P<0.001; K a p p a=0.906,P<0.001 ； ^aW)«=0.817, P<
0.001; X—，=0.941，fkO.OO 1);总体中 gp41 和 gp 120
(尺appa=0.461,/^〈O.OOl)、p31 和 p51 (尺a/>/>a=0.557，P<0.001)、p31 和 p66(A：appa=0.495，_P<0.001)、pl7 和 p24 (尺a w M=0.()5(),P=0.005)的检出一致性大多低于 p51和 P66( /^/)/)«=0.827,P<0.001);>56 岁人群中，各 条带间检出一致率大多高于<55岁人群。

不同年龄组的条带检出情况[检出数(率/%)]
表2
带型彡 18(n=12)I9~37(n=178)38-55(n=277)56~74(n=283)彡75(n=70)p值P1711(91.7)171(96.1)263(94.9)253(89.4)61(87.1)0.010 p2412( 100.0)178( 100.0)277 ( 100.0)278(98.2)70( 100.0)0.081 P3111(91.7)170(95.5)259(93.5)257(90.8)64(91.4)0.322 gp4110(83.3)170(95.5)258(93.1)261(92.2)63(90.0)0.241 P5112( 100.0)174(97.8)266(96.0)268(94.7)66(94.3)0.485 p6612( 100.0)176(98.9)270(97.5)270(95.4)66(94.3)0.151 gpl2012( 100.0)174(97.8)269(97.1)276(97.5)68(97.1)0.965 gpl6012(100.0)178(100.0)277 ( 100.0)283 (100.0)70( 100.0)-注：P值:Fisher 确切概率法概率
表3不同送检单位的条带检出情况[检出数(率/%)]
条带疾控中心
(n=317)
医院
(n=467)
妇幼保健
院U=24)
血浆站
U=12)
p值
P17296(93.4)430(92.1)22(91.7)11(91.7)0.779 p24316(99.7)463(99.1)24 ( 100.0)12( 100.0)0.723 P31296(93.4)434(92.9)22(91.7)9(75.0)0.133
gp41297(93.7)434(92.9)23(95.8)8(66.7)0.027 P51305(96.2)448(95.9)23(95.8)10(83.3)0.199 p66307(96.8)452(96.8)24( 100.0)11(91.7)0.587
gP120311(98.1)455(97.4)23(95.8)10(83.3)0.044 gpl60317( 100.0)467(100.0)24( 100.0)12(100.0)-注：P值:Fisher确切概率法概率。

3讨论
820份样本中，全条带结果出现较多，提示大多 数感染者体内免疫反应较活跃，和康晓丽等4研究 结果有差异，可能是因为本研究所用试剂不判读^9 和p55以及人工判读有主观性。

P24条带的高检出 率能是因为翻译p24蛋白的gag区域局保守，p24 产生比较稳定和其高特异性。

曾经有研究做过HIV 阳转和抗体的关系，发现P24和gp 120是最早出现的 抗体i，本文中p24和gp 120的尚检出率提示标本可 能在早期被检出。

有报道gp41、gP120和gP160是 em；基因编码的外膜蛋白；丨)31、p51和p66是po/基因 编码的反转录蛋白，HI V-1蛋白酶从66'RNase H结 构域第一 (3链N端的裂解位点，将P66/P66 ’同二聚体 前体切割生成成熟的p66/p55杂二聚体；p 17和p24 是基因编码的核心蛋白本研究发现绵阳
地区H丨V-丨抗体阳性人群中p51和P66检出情况有 很高的一致性，检出p51的人群大多同时检出P66, 未检出p51的人群大多未检出p66;gp41和gP120、P31和P51、P31和P66、P17和P24的检出一致性大多 低于p51和P66,可能是由于统计方法不同、病毒基 因存在突变、注射H1V疫苗、怀孕、自身免疫性疾病 和肿瘤9等原因，有待进一步研究。

在日常的工作 中应该以实际为准，正确判读条带。

男性中P17检出率最低，女性中P31检出率最 低。

不同性别中同一带型的检出率差异无统计学意 义，与有关研究结果4不同。

>56岁人群中，各条带 间检出一致率大多高于<55岁人群，提示>56岁人群 体内各HI V-1特异性抗体的关联性更高，两组人群 间免疫状况可能存在很大的区别，在一份对四川省 五个市州的病毒亚型报道中显示，50岁以上人群病 毒亚型和50岁及以下人群存在差异，50岁以上人群 以07_B C亚型为主，其次为CRFO 1_A E和CRF08_ B C，感染不同病毒亚型H I V可能是导致这一现象的原因[1刚。

研究表明，献血人群中的H I V基因亚型正日益
多元化，且和正常人群趋同|2]。

有报道显示P31、gp41可能是H I V早期感染的标识，来自血浆站的标
本P3】和gP41条带检出率低，和gP41、gp 160阳性率
均低于其他人群，可能是由于血浆站更加重视血液
质量，选择的筛查方法灵敏度高13 ,大多数感染者在
早期被检测出〜l5i，条带还没有完全进展。

但2019
年依然有12名阳性者在血浆站被检出，提示在献浆
人员中开展H I V抗体筛查工作不能松懈，合理选择
灵敏度高的试剂，加大献浆人群的宣传教育，让有高
危行为者尽量不要去献浆，才能保障用浆安全。

对
于血浆站送检检测结果为不确定和阴性的样本，应
该及时进行核酸检测或者积极跟进随访，避免漏检。

参考文献：
[1]中同疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心性病控制
中心.2018年第3季度全国艾滋病性病疫情[J].中国艾滋病性
^,2018,24(10:1075.
[2]中华医学会感染病学分会艾滋病丙型肝炎学组，中国疾病预
防控制中心.中同艾滋病诊疗指南（2018版）[J].新发传染病
电子杂志，2019,4(2):65-84.
[3]李莉，管文辉，朱银霞，等.2012 — 2017年江苏省疾病预防控制
中心V C T门诊检测人群特征及HIV梅毒感染情况分析[J].中
同艾滋病性病,2019,25( 11): 1129-1131,1156.
[4]康晓N I彳，刘乔磊，余天莉，等.1 872份HIV-1抗体蛋內印迹试验
阳性结果带型分析[J].中国艾滋病性病，ZOlQJSUOhlOC^-
iOOS.
[5] MATHEWS AA, MAMBATTA AK, APPALARAJU B, et al.
Implications of p24 antigen in HIV testing [Jj. Indian J Med
M icrobiol,2016,34(l)：119.
[6] SLUIS-CREMER N, ARION D, ABRAM ME, et al.
Proteolytic processing of an HIV-1 pol polyprotein precursor：
insights into the mechanism of reverse transcriptase p66/p51
heterodimer formation [ J]. Int J Biochem Cell Biol, 2004,36
(9)：1836-1847.
[7]裴晓方，于学杰.病毒学检验[M]. 2版.北京：人民卫生出版
社，2015:366-368
[8] SCHMIDT T, SCHWIETERS CD, CLORE GM. Spatial
domain organization in the HIV-1 reverse transcriptase p66
homodimer precursor probed by double electron-electron
resonance E P R[j]. Proc Natl Acad Sci USA, 2019, 116(36)：
17809-17816.
[9]殷方兰，钟培松，张永，等.HIV抗体不确定结果影响因素的分
析及对策[J].中国皮肤性病学杂志，2015,29(9) :978-980.
[10]苏玲，杨洪，胡莹，等.四川省2014年HIV-丨分子流行病学调查
[J].中闰艾滋病性病，20丨6,22(丨2):946-949.
[11 ]苏玲，叶黎，刘扬，等.四川洛>50岁HIV-1感染者的分子流行
病学调查[J].中国艾滋病性病，2018,24(8):788J92.
[12]段蕾静，张志敏，蒋岩，等.我_部分地区采供血机构发现H IV-
1感染者的毒株基因亚型分析[J].中国艾滋病性病，2020,26
(4)： 337-340.
[13]张亚兰，卫晓丽，郑海潮，等.使用四代HIV抗原抗体试剂筛查
联合蛋白印迹或核酸补充实验的检测策略临床评价[】].中_
艾滋病性病，2018，24( 3): 286-288，306.
[14] ZEN G P, L IU Y, H E M,et al. The infection staging and profile
of genotypic distribution and drug resistance mutation among the
human immunodeficiency virus-1infected blood donors from
five Chinese blood centers, 2012-2014[j]. PLoS One, 2017,12
(6)：e0179328.
[15]陈坚，廖建英，农慧桃.2013 — 2015年桂西地区吸毒人群HIV
新发感染及其影响因素分析[J].现代预防医学，2018,45(17):
3207-3211.。