Caspase-12介导的内质网通路凋亡相关蛋白在大鼠肾发育中的表达

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ｄｕｒｉｎｇｒａｔｋｉｄｎｅｙｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙｍｅｔｈｏｄａｎｄｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇｗｅｒｅｕｓｅｄｆｏｒｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅａｎｄ
ＮｉｕＷｅｉｗｅｉ，ＳｏｎｇＸｉａｏｆｅｎ
（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｉｓｔｏｌｏｇｙａｎｄＥｍｂｒｙｏｌｏｇｙ，ＪｉｎｚｈｏｕＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，Ｊｉｎｚｈｏｕ１２１００１，Ｃｈｉｎａ）
细胞凋亡是所有多细胞组织重要的基本功能，其
对于胚胎发育和维持正常细胞稳态具有重要的意义，
１２在内质网外膜被发现，可介导ＥＲＳ的发生，在线粒
体凋亡和死亡受体途径中不被活化［４］。目前，已有大
而凋亡过程的正确调控对机体具有极其重要的作
用［１，ｚ３。内质网是细胞内最大的细胞器，分布广泛，最近研究表明内质网也是细胞凋亡调节中的重要环节之
一
，
内质网应激（ｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃｒｅｔｉｃｕｌｕｍｓｔｒｅｓｓ，ＥＲＳ）
ＡｂｓｔｒａｃｔＯｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃａｓｐａｓｅ－１２一ｍｅｄｉａｔｅｄｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃｒｅｔｉｃｕｌｕｍａｐｏｐｔｏｓｉｓｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｓ
牛微微宋小峰△
（锦州医科大学组织学与胚胎学教研室，锦州１２１００１）
摘要目的：探讨ｃａｓｐａｓｅ－１２介导的内质网通路凋亡相关蛋白在大鼠肾发育中的表达规律。方法：应用免疫组织化学显色
与免疫印迹法，对大鼠肾发育中内质网通路凋亡相关蛋白ｃａｓｐａｓｅ－１２和ｃｌｅａｖｅｄ－ｃａｓｐａｓｅ－３的表达进行定性和定量观察。
ｃｌｅａｖｅｄ－ｃａｓｐａｓｅ－１２ｉｎｃｒｅａｓｅｄｄｕｒｉｎｇｅｍｂｒｙｏｎｉｃｓｔａｇｅａｎｄｒｅａｃｈｅｄｔｈｅｐｅａｋａｔｐｏｓｔｎａｔａｌ１ｄ，ａｎｄｔｈｅｎｇｒａｄｕａｌｌｙｄｅｃｌｉｎｅｄ．Ｔｈｅ
时间计为胚０天（ｅｍｂｒｙｏｎｉｃｄａｙｓ０，Ｅ０ｄ）。孕鼠分笼
饲养２周后，每日２次观察生产情况，以观察到仔鼠出
ｄｅｅｐｌａｙｅｒｏｆｒｅｎａｌｃｏｒｔｅｘｔｏｔｈｅｅｎｔｉｒｅｃｏｒｔｅｘａｎｄｗａｓｍａｉｎｌｙｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄｉｎｔｈｅｐｒｏｘｉｍａｌｔｕｂｕｌｅ．ＴｈｅｃｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇｍａｎｉｆｅｓｔｅｄｔｈａｔｃａｓｐａｓｅｑ２ｗａｓｂｒｏｋｅｎｄｏｗｎｉｎｔｏｃｌｅａｖｅｄ－ｃａｓｐａｓｅ－１２，ａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃａｓｐａｓｅ－１２ａｎｄ
ｃａｓｐａｓｅ－１２，ｃａｓｐａｓｅ－１２和ｃｌｅａｖｅｄ－ｃａｓｐａｓｅ－１２的蛋白表达在胚胎期较高，在生后（Ｐ）１ｄ达到高峰，随后其表达逐渐降低。而ｃｌｅａｖｅｄ－ｃａｓｐａｓｅ－３的蛋白表达在胚胎肾发育中较弱，在Ｐｌｄ其表达水平突然升高，随后维持在较高的水平。结论：Ｃａｓｐａｓｅ－
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃｌｅａｖｅｄ－ｃａｓｐａｓｅ－３ｗａｓｗｅａｋｄｕｒｉｎｇｅｍｂｒｙｏｎｉｃｓｔａｇｅ，ｗｈｉｌｅａｐｐａｒｅｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄａｔｐｏｓｔｎａｔａｌ１ｄａｎｄｍａｉｎｔａｉｎｅｄａｔａｈｉｇｈｌｅｖｅ１．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｃａｓｐａｓｅ－１２一ｍｅｄｉａｔｅｄｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃｒｅｔｉｅｕｌｕｍａｐｏｐｔｏｓｉｓｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｓｍａｙｐｌａｙａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｔｈｅａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆｒｅｎａ１ｐｒｏｘｉｍａｌｔｕｂｕｌｅｓｄｕｒｉｎｇｒａｔｅｍｂｒｙｏｎｉｃｓｔａｇｅ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃｒｅｔｉｃｕｌｕｍ；ｃａｓｐａｓｅ－１２；ａｐｏｐｔｏｓｉｓ；ｋｉｄｎｅｙ；ｒａｔｓ
ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃａｓｐａｓｅ－１２ａｎｄｃｌｅａｖｅｄ－ｃａｓｐａｓｅ－３ｇｒａｄｕａｌｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄｆｒｏｍｔｈｅ
ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｏｆｃａｓｐａｓｅ－１２ａｎｄｃｌｅａｖｅｄ－ｃａｓｐａｓｅ－３ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｄｕｒｉｎｇｒａｔｋｉｄｎｅｙｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ
量的研究表明内质网既可以独立引发肾细胞凋亡，也可以与线粒体等细胞器相互交通共同调节肾细胞凋亡，在多种肾脏疾病中发挥重要的作用［５］，但对肾发
育中的细胞凋亡还未见系统研究。本研究对大鼠肾发育中ｃａｓｐａｓｅ一１２所介导的细胞凋亡进行了系统研究，
１２介导的内质网通路凋亡相关蛋白可能参与大鼠胚胎肾发育中近端小管的细胞凋亡。关键词内质网；ｃａｓｐａｓｅ－１２；凋亡；肾；大鼠Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｅａｓｐａｓｅ＿１２＿。ｍｅｄｉａｔｅｄｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｅｒｅｔｉｃｕｌｕｍａｐｏｐｔｏｓｉｓｒｅｌａｔｄｅｐｒｏｔｅｉｎｓｄｕｒｉｎｇｒａｔｒｅｎａｌｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ
ＣＨＩＮＥＳＥＪ０ＵＲＮＡＬ０ＦＡＮＡＴ０ＭＹＶｏ１．４ＯＮｏ．１２０１７
解剖学杂志
２０１７年第４Ｏ卷第１期
Ｃａｓｐａｓｅ一１２介导的内质网通路凋亡相关蛋白在大鼠肾发育中的表达
选用成年健康ＳＤ大白鼠，雌、雄（２：１）同窝饲养，每日３次观察受孕情况，以观察到阴道栓脱落的最早
第１作者Ｅ－ｍａｉｌ：５５０２６０３８０＠ｑｑ．ｃｏｎｒ △通讯作者，Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｏｎｇｘｆｍｍ＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ收稿日期：２０１６ — ０５ — ０４；修回日期：２０１６ — ０９ — ２２
结果：免疫组织化学显示在大鼠肾发育中，ｃａｓｐａｓｅ－１２和ｃｌｅａｖｅｄ－ｃａｓｐａｓｅ－３的阳性表达由肾皮质区深层逐渐扩展到整个肾皮质区，其表达主要位于近端小管，而远端小管表达较微弱；免疫印迹结果显示在肾发育中，ｃａｓｐａｓｅ－１２被分解为ｃｌｅａｖｅｄ —
启动的凋亡途径是近年发现的一种新的凋亡途径＿３］。
鼠类的研究结果显示，与其他的凋亡机制不同，内质网
发出的凋亡信号可特异性激活ｃａｓｐａｓｅ－１２，然后激活下游的ｃａｓｐａｓｅ－３进入细胞凋亡的最终通路。而ｃａｓｐａｓｅ－
ｄｏｉ：１０．３９６９ห้องสมุดไป่ตู้／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１ — １６３３．２０１７．０１．００１
为临床疾病的研究和治疗提供新的理论依据。
１材料和方法
１．１实验动物和抗体
国家自然科学基金（３１２００８７１）