宫颈癌组织lncRNA FOXD2-AS1、miR-506-5p表达变化及其临床意义

宫颈癌组织lncRNA F0XD2-AS1、miR-506-5p
表达变化及其临床
李敏，赵妍丽,杜国波
川北医学院附属医院，四川南充637000
摘要：目的探讨宫颈癌组织长链非编码RNA(lncRNA)FOXD2-AS1、微小RNA-506-5p(miR-506-5p)表达变化 及其临床意义。

方法选择宫颈癌患者91例，取手术切除的宫颈癌组织及其配对的癌旁正常组织，采用RT-qPCR 法检测lncRNA FOXD2-AS1、miR-506-5p表达。

比较宫颈癌组织与癌旁正常组织lncRNA FOXD2-AS1、miR-506-5p 表达变化，分析宫颈癌组织lncRNA FOXD2-AS1、miR-506-5p表达的关系以及二者表达与患者临床病理特征和预后的关系。

结果宫颈癌组织lncRNA FOXD2-AS1相对表达量明显高于癌旁正常组织,miR-506-5p相对表达量明显低于癌旁正常组织(P均<0.05)。

宫颈癌组织lncRNA FOXD2-AS1相对表达量与miR-506-5p相对表达量呈负相关关系(=-0.621,P<0.01)o FIGO分期皿期、组织分化程度低分化的宫颈癌患者肿瘤组织lncRNA FOXD2-AS1、miR-506-5p表达均高于FIGO分期I、I期和组织分化程度高中分化的宫颈癌患者(P均<0.05)。

以宫颈癌组织lncRNA FOXD2-AS1、miR-506-5p相对表达量的平均数为截断值，将患者分为lncRNA FOXD2-AS1高表达者46例与lncRNA FOXD2-AS1低表达者45例、miR-506-5p表达者47例与miR-506-5p低表达者44例。

lncRNA FOXD2-AS1高表达者3年总生存率低于lncRNA FOXD2-AS1低表达者=22.864,P<0.05)；miR-506-5p高表达者3年总生存率高于miR-506-5p低表达者=18.485,P<0.05)。

结论宫颈癌组织lncRNA FOXD2-AS1高表达、miR-506-5p低表达，二者表达呈负相关关系；早期检测宫颈癌组织lncRNA FOXD2-AS1、miR-506-5p表达可能有助于判断患者预后。

关键词：宫颈癌;长链非编码RNA FOXD2-AS1；微小RNA-506-5p
doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2020.34.017
中图分类号:R737.33文献标志码:A文章编号：1002-266X(2020)34-007144
宫颈癌是女性第四大常见恶性，夕垂年新发病例约52.8万例，死亡达26.6万例⑷。

随着宫颈癌筛查和技术不断提高，部分患者能够得早断和，但在中低收入宫颈癌的发病率和病死率仍然较高［］。

目前，宫颈癌发病的分子不明确。

因此，深入探索与宫颈癌发病相关的分子，寻找潜在的诊断标志物和靶点具有o近发现,细胞内无蛋白功能
的非编码RNA分子有可能通过调控基因的表达，进而参与人类多的发生、发展，有望成为的诊断标志物和治疗靶点［］。

长链非编码RNA (lncRNA)FOXD2-AS1基因定位于人体1p33,与性相关的lncRNA。

lncRNA FOXD2-AS1与其他非RNA分子结合，从而对基因的表达精细调控，继而参与细胞的生
基金项目：四症医学(宜昌人福)专项科研课题［2016ZZ009(YCRF)］。

通信作者:/(E-mail:*****************)
、发育、分化及物程⑷。

近年有
报道,lncRNA FOXD2-AS1癌、食管癌中均异常表达现象;lncRNA FOXD2-AS1能:影响p-钙、Akt、E2F转录因子1等下游癌基因表达，促进肿瘤细胞恶性增殖和迁移［5-6］。

miR-506-5p基位于人体Xq27.3,其能与下游基使RNA的3'非区结合，夕变使RNA的性而调控基因的表达，继而影响细胞增殖、凋亡等生物学过程［］。

LI等［8］研究发现, miR-506-5p具抑癌基因作用，其癌、肺癌组中低表达,通过上调细胞增殖相关基因的表达，如细胞4、Ras,性展。

lncRNA FOXD2-AS1、miR-506-5p表达与宫颈癌的关系尚不清楚o2015年4月一20164月，本分
析了宫颈癌组织lncRNA FOXD2-AS1、miR-506-5p表达变化并探讨其o现报告如下。

1资料与方法
1.1料属
的91例宫颈癌患者为 对象。

纳入标准:①经组
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织病理学检查明确诊断为宫颈癌;②接受根治性子宫切除术或改良根治性子宫切除术;③入院前未行放化疗、免疫或生物治疗。

排除标准:①合并其他宫颈疾病者;②既往有其他器官或系统肿瘤史者;③伴心、肺、肾等脏器功能衰竭者。

患者年龄30-72 (45.2±7.1)岁，其中M45岁42例、<45岁49例；
病理类型:腺癌13例，鳞癌78例；FIGO分期⑼：I、n期50例，皿期41例；组织分化程度：低分化31例，高中分化60例;浸润深度:深肌层52例,浅肌层39例;淋巴结转移:有53例，无38例。

本研究符合《赫尔辛基宣言》，经川北医学院附属医院伦理委员会审核，患者或其家属知情同意并签属知情同意书。

1.2lncRNA FOXD2-AS1、miR-506-5p表达检测
取宫颈癌组织与癌旁组织(距肿瘤组织边缘>2cm 且经组织病理检查明确为正常宫颈组织),-80C 冰箱保存。

待组织成批后,分别取50mg,TRIzol法提取总RNA,经NanoDrop2000超微量分光光度计鉴定，提取的总RNA浓度、纯度和完整性符合后续实验要求。

然后将总RNA反转录为cDNA,-20C 保存。

反转录条件：37C1h,5C5s o以cDNA 为模板进行PCR扩增。

引物序列由北京睿博科技有限公司设计合成。

lncRNA FOXD2-AS1上游引物5'-AATGGACAGAAGCTATCCAGGC-3'、下游弓|物5'-AGTTGAAGGTGCACACACTG-3',miR-506-5p上游引物5'-CCTTGGCACCCTTCTGTAGA-3'、游引物5'-TGATGGGTTGTAGAGGCATCC-3',内参U6上游引物5'-GCGAGATCGCACTCATCATCT-3'、下游引物3'-TCAGTGGTGGACCTGACC-5'o lncRNA FOXD2-AS1PCR扩增体系20pL：SYBR Green preMix 10pL,上下游引物各0.5pL,cDNA模板1pL, ddH2O8pL；反应条件：95C5min,95C30s, 60C20s、70C20s共40个循环。

miR-506-5p PCR扩增体系20pL：SYBR Green preMix10pL,上下游引物各1pL外DNA模板1pL外dH2O7pL；反应条件93C15min,93C30s、58C20s、72C 40s共40个循环o收集各样本阈值循环数(CT)值。

以U6为内参，以2-”CT计算目的基因相对表达量。

1.3随访以获得病理诊断结果作为随访起点，随访方式采取门诊复查形式，每3个月随访1次，随访截至2019年4月。

以随访期间患者死亡或至随访截至时间为随访终点，统计患者生存情况。

1.4统计学方法采用SPSS23.0统计软件。

符合正态分布的计量资料以X±s表示，两样本均数比较采用独立样本t检验;计数资料比较采用X2检验。

相关性分析采用Pearson相关分析法。

生存分析采72用Kaplan-Meier法。

P<0.05为差异有统计学意义。

2结果
2.1宫颈癌组织与癌旁正常组织lncRNA FOXD2-AS1、miR-506-5p表达比较宫颈癌组织与癌旁正常组织lncRNA FOXD2-AS1相对表达量分别为I.117±0.305,0.924±0.297,miR-506-5p相对表达量分别为1.213±0.311,1.742±0.321。

与癌旁正常组织相比，宫颈癌组织lncRNA FOXD2-AS1表达升高，miR-506-5p表达降低(t分别为4.325、II.291外均<0.01)
2.2宫颈癌组织lncRNA FOXD2-AS1表达与miR-506-5p表达的关系相关分析显示，宫颈癌组织lncRNA FOXD2-AS1表达与miR-506-5p表达呈显著负相关关系(=-0.621,P<0.01)o
2.3宫颈癌组织lncRNA FOXD2-AS1、miR-506-5p 表达与患者临床病理特征的关系见表10
2.4宫颈癌组织lncRNA FOXD2-AS1、miR-506-5p 表达与患者预后的关系所有患者随访3-48个月冲位随访时间31.3个月，随访期间死亡34例。

宫颈癌lncRNA FOXD2-AS1相对表达量的
均数(1.101)为截断值，将患者分为lncRNA FOXD2-AS1高表达者46例.lncRNA FOXD2-AS1低表达者45例。

lncRNA FOXD2-AS1高表达者3年总生存率为34.6%(15/46),lncRNA FOXD2-AS1低表达者为82.5%(37/45、。

lncRNA FOXD2-AS1高表达者3年总生存率低于lncRNA FOXD2-AS1低表达者(2=22.864,P<0.05)见图1a。

以宫颈癌组织miR-506-5p相对表达量的平均数(1.245)为截断值，将患者分为miR-506-5p高表达者47例、miR-506-5p低表达者44例。

miR-506-5p高表达者3年总生存率为78.7%(37/47),miR-506-5p 低表达者3年总生存率为34.1%(15/44) miR-506-5p表达者3生率于miR-506-5p 低表达者仗2=18.485,P<0.05)o见图1b o
3讨论
我国每年宫颈癌新发病例约13.2万例,死亡达5.3万例，已成为当前严重威胁我国女性健康的重要疾病之一［0〕。

宫颈癌早期通过手术、放化疗等手段即可获得良好的治疗效果，但对于局部晚期或复发、转移患者，治疗效果较差。

近年来，随着分子生物学技术不断发展，靶向治疗逐渐应用于临床并初见成效。

但由于宫颈癌发病的分子机制目前还不清楚。

因此，探索宫颈癌发病的分子机制，寻找新的诊断标志物和治疗靶点具有重要的临床价值。

表1宫颈癌组织lncRNA FOXD2-AS1、miR-506-5p表达与患者临床病理特征的关系
临床病理特征n
lncRNA FOXD2-AS1miR-506-5p
相对表达量（土s）t P相对表达量（土s）t P
年龄0.172>0.050.092>0.05 <45岁49 1.112±0.304 1.216±0.313
鼻45岁42 1.123±0.306 1.210±0.310
病理类型0.153>0.050.150>0.05鳞癌78 1.115±0.305 1.215±0.312
癌13 1.129±0.307 1.201±0.308
FIGO分
2.115<0.05 2.588<0.05
I、I期50 1.056±0.302 1.288±0.313
41 1.192±0.309 1.121±0.306
分化程度 2.043<0.05 2.858<0.05中分化60 1.070±0.304 1.280±0.314
低分化31 1.208±0.308 1.083±0.307
深度0.077>0.050.106>0.05浅肌层39 1.114±0.304 1.217±0.312
深肌层52 1.119±0.306 1.210±0.310
淋巴结转移0.108>0.050.167>0.05有53 1.120±0.307 1.208±0.308
无38 1.113±0.303 1.219±0.313
宫颈癌组织不同lncRNA FOXD2-AS1、miR-506-5p表达者的生存曲线
图1
lncRNA是由200~300个核昔酸组成的单链RNA分子,能够与蛋白质、非RNA结合形成合物，使特定的基活或失活，或分子支架结合细胞内其他分子,从而调控靶基因的表达，继而与个体发育、衰生物程。

报道，lncRNA异常表达发生、发展的分子基础。

lncRNA FOXD2-AS1的编码基因位于人染色体1p33o CHEN等［1］研究报道，lncRNA FOXD2-AS1
癌组织中表达上调,lncRNA FOXD2-AS1可通影响下游癌基因表达，如p-钙黏素、Akt、E2F1，夕细胞的恶性增殖。

本发现,宫颈癌lncRNA FOXD2-AS1表达明显上调，表明lncRNA FOXD2-AS1可能参与宫颈癌的发生、发展。

目前lncRNA FOXD2-AS1的癌不清楚，可能与促进lncRNA FOXD2-AS1表达的子表达关。

有研究报道,lncRNA FOXD2-AS1表达受E2F1调控,E2F1能够结合到lncRNA FOXD2-AS1的启动子区域，并促进其表达［2］。

进一步研究发现，宫颈癌lncRNA FOXD2-AS1表达与FIGO分、分程关，表明lncRNA FOXD2-AS1异常表达能够参与宫颈癌的恶性进展，其能lncRNA FOXD2-AS1与活Notch
路，夕细胞上，提高肿瘤细胞的增殖和迁移能力，而lncRNA FOXD2-AS1后肿瘤细胞的增殖和迁移能力明显下降［3］。

本研究还发现,lncRNA FOXD2-AS1高表达者3生率低于lncRNA FOXD2-AS1低表达者。

提示lncRNA FOXD2-AS1表达上调宫颈癌患者预后不良，有希望成为预测患者预后的分子标志物。

miRNA类长度为19~23个核昔酸的非编RNA分子，在结构上具的短发夹结构，能够调控细胞发育、分化、凋亡等生物学过程。

miRNA 基因首先在RNA合的作用为初始miRNA,进而在RNA聚合酶I的作用下形成miRNA 前体，然后在Dicer酶的作用为成熟miRNA,形成RNA沉默复合物与靶基使RNA 特异性结合，夕后调控靶基因的表达。

近发现，夕中多种miRNA异常表达现象，并且相同的miRNA在不中发挥的生物学作用可能不同［5-7］o miR-506-5p的基因
定位于人体Xq27.3。

有研究表明，miR-506-5p 癌、肺癌组织中低表达;在体外基础中证实，上调miR-506-5p表达能够抑细胞增殖、侵袭、迁移等生物学行为［8］。

因此，miR-506-5p可
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作为一种抑癌基因,其在肿瘤组织中低表达可促进乳腺癌和肺癌的发生、发展。

本研究发现，宫颈癌组织miR-506-5p表达降低，表明miR-506-5p可能参与宫颈癌的发病，其机制与肿瘤发生时miR-506-5p基因的启动子区域甲基化沉默有关。

有研究报道, miR-506-5p在肿瘤中发挥抑癌基因作用，其启动子区的表观遗传学修饰导致其表达显著降低，而其下游癌基因表达则显著升高［4〕。

进一步研究发现, FIGO分期高、组织分化程度低的宫颈癌患者肿瘤组织miR-506-5p表达较低。

提示miR-506-5p异常低表达与宫颈癌的恶性进展有关，其机制可能是肿瘤发生时miR-506-5p表达降低，导致CDK4表达升高，促进肿瘤细胞周期G】期向S期转换，导致肿瘤细胞获得无限增殖的潜能［5〕。

本研究分析了miR-506-5p表达与宫颈癌患者预后的关系,结果发现miR-506-5p低表达的宫颈癌患者3年总生存率较低，提示miR-506-5p低表达与宫颈癌患者预后不良有关。

早期检测宫颈癌组织miR-506-5p表达有助于判断患者预后。

王婷等［6〕研究发现,lncRNA FOXD2-AS1能够作为分子支架结合miR-506-5p并抑制miR-506-5p 表达和生物学功能，从而促进肿瘤细胞增殖并抑制其凋亡，继而促进肿瘤恶性进展。

本研究还发现，在宫颈癌组织中lncRNA FOXD2-AS1表达与miR-506-5p表达呈负相关关系，提示在宫颈癌中lncRNA FOXD2-AS1可能通过负向调控miR-506-5p 参与肿瘤的发生、发展。

综上所述，宫颈癌组织lncRNA FOXD2-AS1高表达、miR-506-5p低表达，二者表达呈负相关关系；
宫颈癌组织lncRNA FOXD2-AS1、miR-506-5p表达与肿瘤FIGO分期、组织分化程度和患者预后有关,但二者能否成为宫颈癌早期诊断的生物标志物和治疗的潜在靶点仍需深入研究0
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