利多卡因氯己定气雾剂无菌检查法的验证试验

利多卡因氯己定气雾剂无菌检查法的验证试验
【摘要】目的建立利多卡因氯己定气雾剂无菌检查法。

方法按2010年版中国药典无菌检查法验证试验的有关要求，通过接种阳性试验菌株，对添加中和剂去除利多卡因氯己定抗菌活性的实验方法和条件进行验证，建立其无菌检查的标准操作方法。

结果通过在稀释液或冲洗液中添加1%聚山梨酯80，采用薄膜过滤法，每滤筒冲洗量为300 ml，即可去除利多卡因氯己定对细菌的抑菌作用。

结论该方法准确、可靠。

【Abstract】ObjectiveThe establishment of Lidocaine and Chlorhexdine acetate aerosol sterility test method MethodsAccording to the 2010 edition of Chinese Pharmacopoeia sterility test method validation testing the requirements, positive test strains by inoculation, add neutralizer removal of Lidocaine on the Chlorhexidine antimicrobial activity of the experimental methods and conditions to verify the establishment of the sterile checks standard method of operation ResultsDilution
fluid or washing fluid by adding 1% polysorbate 80, the use of membrane filtration, washing each cartridge capacity of 300 ml, Lidocaine and Chlorhexidine can remove the inhibitory effect on bacteria ConclusionThe method is accurate and reliable.
【Key words】Lidocaine and Chlorhexdine acetate aerosol；Sterility test；Neutralizer
1仪器与材料
1.1仪器BSC1500ⅡA2X生物洁净安全柜；MJ250I生化培养箱；GHP9270隔水式恒温培养箱；SartoriusCP225 d电子天平；HTY2000B集菌仪(杭州泰林医疗器械厂生产)；PY220 、PY330一次性全封闭集菌器(杭州泰林医疗器械厂生产)。

1.2培养基营养琼脂培养基(100409)、玫瑰红钠琼脂培养基(090518)、营养肉汤(090922)、改良马丁培养基(100108)、硫乙醇酸盐培养基(100323)均购于北京三药科技开发公司
1.3稀释液(冲洗液)pH70无菌氯化钠蛋白胨缓冲液购于北京三药科技开发
公司、含1%聚山梨酯80的pH70无菌氯化钠蛋白胨缓冲液(自配)。

1.4实验用样品利多卡因氯己定气雾剂(规格：60 g/瓶)分别为山东京卫制药有限公司(批号：0904008) 、济南为民制药有限公司(批号：091020)
1.5菌株大肠埃希菌(Eschrichia coli)［CMCC(B)44 102］、生孢梭菌(Clostridium sporogenes)［CMCC(B)64941］、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)［CMCC(B)63 501］、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)［CMCC(B) 26 003］、白色念珠菌(Candida albicans) ［CMCC(F) 98 001］、黑曲霉(Aspergillus niger) ［CMCC(F) 98
003］均购于中国生物制品检定所医学菌种保藏中心，以上菌种均为第3代菌种。

2方法与结果
2.1菌液制备［1］按《中国药典》2010年版二部附录“无菌检查法”项下方法制成小于100 cfu/ml的菌悬液。

2.2验证试验
2.21样品的取样量根据《中国药典》2010年版二部无菌检查法的有关规定［1］，验证试验时每一株验证菌株需要的样品量相当于每一滤筒的样品量。

按此样品的规格：60 g/瓶，取样量为5瓶/筒，且每瓶取样量不少于1 g/瓶,共5 g，混匀后，备用。

2.22稀释液的选择试验取本品5瓶/筒，且每瓶取样量不少于1 g/瓶,共5 g，混匀后，分别转移至200 ml pH70无菌氯化钠蛋白胨缓冲液、含1%聚山梨酯
80的pH70无菌氯化钠蛋白胨缓冲液作稀释液中，振摇后，取PY220一次性全封闭集菌器(两联)一套，按薄膜过滤法处理，用pH70无菌氯化钠蛋白胨缓冲液作冲洗液分别冲洗滤膜3次，每次100 ml/膜，泵入相同培养基后，于两筒中分别接入小于100 cfu/ml的试验菌。

前者作为阳性对照筒，后者作为试验筒。

各试验菌同法操作。

再取硫乙醇酸盐培养基及改良马丁培养基分别泵入另两筒集菌器中，作为阴性对照筒。

按规定温度将述集菌器培养3～5 d。

其结果见表1。

表1稀释液的选择试验结果
稀释液
名称培养天数试验菌金葡枯草大肠生孢白念黒曲试验对照试验对照试验对照试验对照试验对照试验对照阴性对照硫乙醇
酸盐改良
马丁pH70无菌氯化钠蛋白胨缓冲液 1 d+++++ 2
d++++++++++++++3 d+++++++++++++++++++++++含1%聚山梨酯80的pH70无菌氯化钠蛋白胨缓冲液 1 d++++++++++++2 d++++++++++++++++++++++++3
d++++++++++++++++++++++++++++++++++++注：：“无菌生长”；+：“有菌生长”，加号个数表示细菌生长程度
223表1结果表明，用pH70无菌氯化钠蛋白胨缓冲液作稀释液，在规定温度培养后，对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌均有抑制作用，各试验筒均未有菌生长，阳性对照筒生长良好；但对大肠埃希菌、白色念珠菌和黑曲霉无抑制作用，试验筒和阳性对照筒均生长良好；而用含1%聚山梨酯80的pH70无菌氯化钠蛋白胨缓冲液作稀释液，在规定温度培养后，对验证试验用的6种
标准菌株均无抑制作用，各试验筒和阳性对照筒均生长良好。