(高考生物)生物化学实验教学大纲

（生物科技行业）生物化学实验教课纲领
《基础生物学实验B》教课纲领
课程编号：08207017学时：51学分：1.5
开课对象：生物科学专业课程类型：专业必修
英文名称：BasicBiologyExperimentsB
一、课程任务、目的
生物化学是四年制本科生物专业开设的一门专业基础课，此中生物化学实验是重要环节。

本实验课程经过生物化学分别、制备、剖析、判定等实验（如
滴定、比色、层析、电泳等），增强对学生基本技术的训练。

同时要修业生了解掌握一些生化研究的理论和技术，为进入生命科学各分支学科的研究邻域
打下基础。

二、课程内容与基本要求
实验一甲醛滴定法测定氨基氮
一、目的要求：
初步掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和操作重点
二、器械：
滴定管、吸量管、试管
三、内容与方法：
1、滴定标准甘氨酸，计算氨基氮回收率
2、滴定未知浓度甘氨酸，计算氨基氮
3、计算未知甘氨酸浓度
实验二考马斯亮蓝染色法测蛋白质含量
一、目的要求
学习和掌握考马斯亮蓝G-250 法测蛋白质含量的原理和方法。

进一步掌握721 型分光光度计的使用方法和原理。

二、器械：
721型分光光度计
离心计
研钵
容量瓶
刻度吸管
试管
三、内容与方法
1 、制备样品溶液
2 、制作标准曲线
3、测定
实验三血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳
一、目的要求：
学习醋酸纤维薄膜电泳的操作，认识电泳技术的一般原理。

二、器械：
稳流稳压电泳仪、水平电泳槽、醋酸纤维薄膜、镊子、白瓷反响板、大
培育皿
三、内容与方法：
1、浸泡薄膜
2、点样
3、电泳
4、染色
5、漂洗
实验四凯氏定氮法测定总氮量
一、目的要求：
学习凯氏定氮法的原理和操作技术。

二、器械：
凯氏定氮仪、电炉、消化烧瓶、滴定管、吸量管
三、内容与方法：
1、消化
2、蒸馏
3、滴定
实验五Folin－酚法测蛋白质浓度
一、目的要求：
掌握Folin －酚法测蛋白质浓度的原理和方法，学习标准曲线的制备。

二、器械：
试管、试管架、吸量管、恒温水浴锅、721分光光度计
三、内容与方法：
1、制备标准曲线（蛋白质浓度与反响生成的蓝色物质的光汲取值的关
系曲线）
2、未知浓度的蛋白与Folin －酚试剂反响，测出兰色物质光汲取值
3、从标准曲线上查出对应蛋白浓度
实验六苯丙氨酸聚氨酶（PAL ）活力和比活力测定
一、目的要求
1 、学习一种常用的酶活力测定法，并与前面学过的二种酶活力测定法对比
较；
2 、掌握苯丙氨酸解氨酶活力与比活力测定的原理与方法，为后边该酶分别纯
化的实验中测活力与比活力所需要；
3 、认识紫外分光光度计及其使用。

二、器械：
电子天平高速冷冻离心计恒温水浴紫外分光光度计
三、内容721 分光光度计剪刀研钵试管
与方法
刻度小试管塑料离心管刻度吸管烧杯
1 、提取酶液
2、酶活力测定
3、蛋白质含量测定
4、计算
实验七硫酸铵分级积淀分别苯丙氨酸解氨酶
一、目的要求
认识硫酸铵积淀蛋白质的原理，掌握分级积淀分别酶的基本操作和方法。

二、器械
天平冷冻离心计恒温水浴紫外分光光度计
钟表冰浴试管烧杯
玻棒刻度吸管研钵剪刀
量筒离心管
三、内容与方法
1、酶液提取
2、硫酸铵分级积淀
3、积淀样品溶解
4、酶活力测定
实验八凝胶层析纯化苯丙氨酸解氨酶
一、目的要求
掌握葡聚糖凝胶柱层析法脱盐的原理和基本操作方法，分别上一个实验所得沉淀液中的酶蛋白和硫酸铵。

二、器械
层析柱紫外分光光度计721 分光光度计
恒温水浴钟或腕表刻度吸管
刻度试管试管滴管
三、内容与方法
1、层析脱盐：凝胶溶胀，灌胶，层析，采集
2、酶活力测定
3、蛋白质含量测定
实验九过氧化物酶活力测定
一、目的要求：
认识酶活力、比活力观点，经过测定过氧化物酶活力，掌握酶活力测定
的一般方法。

二、器械：
天平、研钵、离心计、试管、量筒、恒温水浴锅、721 分光光度计
三、内容与方法：
1、酶液制备（植物样品在酶抽提液中磨成匀浆，取清液）
2、酶活力测定（愈创木酚溶液中加入必定量酶液，再加入过氧化氢溶
液，快速混匀并测定）
实验十聚丙烯酰胺凝胶电泳剖析过氧化物酶同工酶
一、目的要求
1 、学习聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理。

2 、学习聚丙烯酰胺凝胶电泳的操作技术。

二、器械
电泳仪一套（包含稳压电源及垂直电泳槽）
高速离心计
真空泵及抽滤器
烘箱（或培育箱）
细玻管及玻璃架
研钵
注射器
培育皿
烧杯
橡皮膏、剪刀等
三、内容与方法
1、样品制备
2、凝胶制备
3、装槽
4、点样
5、电泳
6、取胶
7、染色
实验十一底物浓度对酶促反响影响一、目的要求：
认识米氏常数意义，学习测定米氏常数的原理和方法。

二、器械：
锥形瓶、吸量管、滴定管、量筒
三、内容与方法：
1 、磷酸缓冲液配制（pH7.0,0.2M）
2 、 KMNO 4 浓度标定
3、H2O2浓度的标定
4、H2O2酶制备
5、反响速度测定
6、关系曲线制作
7、求出 K m
实验十二血清胆固醇的测定一、目的要求：
认识掌握测定胆固醇的原理和方法
二、器械：
试管、试管架、容量瓶、吸量管、离心计、分光光度计
三、内容与方法：
1、血清经无水乙醇办理，使蛋白积淀
2 、设置胆固醇标准管、样品管，分别与磷硫铁试剂反响，测定A560
3、计算血清蛋固醇含量
实验十三复原糖和总糖的测定
一、目的要求：
认识 3.5 一二硝基水杨酸化色法测定糖原理，掌握复原糖及总糖定量测
定的操作方法。

二、器械：
天平、烧杯、离心计、容量瓶、恒温水浴锅、白瓷板、分光光度计
三、内容与方法：
1、面粉样品中复原糖提取（水溶解法）
2、面粉样品中总糖的提取（开水溶中酸水解）
3、标准曲线制备
4、样品待测液的测定
5、标准曲线上查找相应糖含量
实验十四、油料作物脂肪抽提和含量测定
一、目的要求
学习脂肪的提取和测定方法
二、器械
索氏脂肪抽提器(一套 )，剖析天平，恒温水浴锅，烘箱，干燥器。

三、内容与方法
1、样品烘干、磨碎
2、滤纸包好样品
3、抽提
4、烘干称重
实验十五水果中维生素Ｃ的测定
一、目的要求：
认识一种维生素Ｃ的测定方法和原理。

二、器械：
研钵、试管、离心计、721 分光光度计
三、内容与方法：
1、水果中维生素Ｃ提取
2、标准曲线制作及样品测定
实验十六酵母RNA 的提取及判定一、目的要求
认识核酸的组分，并掌握判定核酸组分的方法。

二、器械
1、乳钵
2、 150ml 锥形瓶
3、恒温水浴箔
4、量简
5、布氏漏斗及抽滤瓶
6、吸管
7、滴管
8、试管及试管架
9、烧杯
10、离心计
11、漏斗
三、内容与方法
1 、 RNA提取，干燥
2、嘌呤碱、核糖、磷酸等的判定
实验十七定磷法测定核酸浓度
一、目的要求
掌握利用核酸定磷测定法测定核酸的含量。

二、器械
剖析天平， 722 型分光光度计，恒温水浴，200 ℃恒温烘箱或万用电炉，移液管，凯氏烧瓶 4 个，烧杯，
容量瓶，培育皿一个，称量瓶一个，干燥器，试管20ml ×20 ，离心管 4 个水浴锅 1 个，药勺 1 个。

三、内容与方法
1、样品的消化
2、用标准磷溶液制作标准曲线
3、总磷量的测定
4、无机磷测定
5、计算
实验十八脱氧核糖核酸的琼脂糖凝胶电泳
一、目的要求
1 、掌握琼脂糖凝胶电泳分别DNA 的原理和方法。

2 、学习利用琼脂糖胶电泳方法测定DNA 片段大小。

3 、学习相关成立DNA 限制性内切酶图谱的基本技术。

二、器械
Eppendorf 离心管（ 1.5ml ，经消毒），电泳槽，电泳仪，凝胶塑料托盘，电泳样品槽模板（梳子），锥形瓶（ 100ml ），
小烧杯（ 50 ， 100 ， 250ml ），橡皮膏，电热恒温箱，玻璃纸。

三、内容与方法
1 、 DNA的酶解
2、凝胶的制备
3、点样
4、电泳
5、染色
6、察看
实验十九纸层析法剖析生物体内的转氨反响
一、目的要求
1、掌握纸层析法基来源理和操作方法。

2、利用纸层析法分别氨基酸，从而认识生物体内的转氨基作用。

二、器械
（1）研钵
（2）试管及小离心管 10ml*4
（3）天平
（4）刻度吸管 1ml*82ml*2
（5）离心计
（6）恒温水浴（ 37 0C）
（7）开水浴
（8）层析纸、铅笔、小尺
（9）毛细管
（10 ）电吹风机
（11 ）订书机
（12 ）层析缸、培育皿
（13 ）喷雾器
三、内容与方法
1、酶液的制备
2、转氨反响
3、裁纸
4、点样
5、扩展
6、显色
7、计算
三、课程难点与重点
生物化学实验内容较为复杂，操作要求高，所需时间长，应成分调换学生
的踊跃性。

四、实践环节及基本要求
各实验尽量采纳学生较为熟习的资料，用生产实践和各研究领域常用的实
验方法和技术。

五、对学生能力培育的要求
经过生物化学分别、制备、剖析、判定等实验（如滴定、比色、层析、电泳
等），增强对学生基本技术的训练，培育学生创建性思想能力。

认识掌握一些生化研究的理论和技术，为进入生命科学各分支学科的研究邻
域打下基础。

六、学时分派（总学时数为51 ，包含实验理论部分、
6 个必做实验和3~4个选做实验）
1 、实验理论部分（总14 学时），包含：
电泳技术（ 5学时），层析技术（ 4学时），核酸研究方法（ 5 学时）。

2 、必做实验（总学时为25）
序号实验内容学时数1Folin －酚法测蛋白质浓度3
2苯丙氨酸解氨酶（PAL ）活力和比活力测定4
3过氧化物酶活力测定4
4过氧化物酶同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳8
5面粉中复原糖和总糖的测定3
6酵母核糖核酸的提取和组分判定3 3 、选做实验（选做以下实验中的3~4个，达成 12 学时的实验内容）
序号实验内容学时数1甲醛滴定法测定氨基氮3
2考马斯亮蓝染色法测定蛋白质含量3
3硫酸铵分级积淀分别苯丙氨酸解氨酶6
4凝胶层析法纯化苯丙氨酸解氨酶6
5底物浓度对酶促反响速度的影响6
6血清胆固醇的测定3
7粗脂肪的提取和定量测定3
8水果（蔬菜）中Vc 含量的测定3
9纸层析法剖析氨基酸的转氨反响4
10脱氧核糖核酸的琼脂糖凝胶电泳3
11血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳3
12凯氏定氮法测定总氮量8
13定磷法测定核糖核酸纯度6
七、查核方式
由平常成绩和期末考察成绩两部分构成，以平常成绩为主。

八、教材和参照书
1、基础生物化学实验，北京师范大学生物系编，高等教育第一版
社，1982 。

2、生物化学实验原理和方法，李建武等编，北京大学第一版社，1994 。

3、自编资料。