尼妥珠单抗与西妥昔单抗对食管癌放疗增敏作用的体外实验

现代消化及介入诊疗　２０２０年第２５卷第５期ＭｏｄｅｒｎＤｉｇｅｓｔｉｏｎ＆Ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ２０２０牞Ｖｏｌ．２５牞Ｎｏ．５６０９
　·基础研究·
尼妥珠单抗与西妥昔单抗对食管癌放疗增敏作用的体外实验
符洪犊，梁丽明
【摘要】目的　研究尼妥珠单抗（ｈ Ｒ３）和西托昔单抗（Ｃ２２５）对食管癌患者放射增敏作用的影响。

方法　体外培养人食管癌细胞株ＴＥ １３，分为对照组（单纯Ｘ线照射干预）、ｈ Ｒ３组（Ｘ线照射＋ｈ Ｒ３干预）及Ｃ２２５组（Ｘ线照射＋Ｃ２２５干预）。

完成后收集细胞，采用免疫印迹法（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ）检测ＥＧＦＲ信号通路相关蛋白水平，应用克隆形成实验分析ｈ Ｒ３与Ｃ２２５对食管癌细胞株放疗敏感性的影响。

分别采用单溶液细胞增殖分析（ＭＴＳ）法和流式细胞术检测各组细胞增殖率和凋亡率。

结果　Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ显示Ｃ２２５组ｐ ＥＧＦＲ、ｐ ＭＡＰＫ表达均低于对照组和ｈ Ｒ３组（Ｐ＜０ ０５）。

克隆形成实验显示ｈ Ｒ３与Ｃ２２５作用于食管癌细胞的放射增敏比（ＳＥＲ）分别为１ ３５和１ ５０，Ｃ２２５组平均致死量（Ｄ０）、准阈剂量（Ｄｑ）、外推值（Ｎ）及２Ｇｙ照射后存活分数（ＳＦ２）均低于对照组和ｈ Ｒ３组（Ｐ＜０ ０５）。

Ｃ２２５组细胞增殖率显著低于对照组和ｈ Ｒ３组，细胞凋亡率显著高于对照组和ｈ Ｒ３组，差异均有统计学意义（Ｐ＜０ ０５）。

三组食管癌ＴＥ １３细胞株Ｇ２／Ｍ与Ｓ期细胞周期分布比率差异显著（Ｐ＜０ ０５），其中Ｃ２２５组Ｇ２／Ｍ期细胞比例显著高于对照组和ｈ Ｒ３组，Ｓ期细胞比例显著低于对照组和ｈ Ｒ３组（Ｐ＜０ ０５）。

结论　ｈ Ｒ３与Ｃ２２５对食管癌放疗均具有增敏效果，且Ｃ２２５增敏作用较ｈ Ｒ３作用更为显著，这可能与其抑制ＥＧＦＲ及下游蛋白表达有关。

【关键词】　食管癌；ＥＧＦＲ；尼妥珠单抗；西妥昔单抗；增敏效果；体外实验
中图分类号：Ｒ７３５．３；Ｒ５７１　文献标志码：Ａ　ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２－２１５９．２０２０．０５．０１３
作者单位：５７０２０８中南大学湘雅医学院附属海口医院心胸外二科
通信作者：梁丽明，Ｅ ｍａｉｌ：ｌｉａｎｇｌｉｍｉｎｇ００８＠１６３．ｃｏｍ基金项目：海南省卫生计生科研项目（１６Ａ２０００１８）
ＴｈｅｖｉｔｒｏｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｏｆｒａｄｉｏｓｅｎｓｉｔｉｚｉｎｇｅｆｆｅｃｔｏｆｎｉｔｏｒｚｕｍａｂａｎｄｃｅｔｕｘｉｍａｂｏｎｅｓｏｐｈａｇｅａｌｃａｎｃｅｒＦＵＨｏｎｇ ｄｕ牞ＬＩＡＮＧＬｉ ｍｉｎｇ
Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆｃａｒｄｉｏｔｈｏｒａｃｉｃｓｕｒｇｅｒｙ牞Ｈａｉｋｏｕｈｏｓｐｉｔａｌ牞ＸｉａｎｇｙａＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ牞ＣｅｎｔｒａｌＳｏｕｔｈＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ牞５７０２０８
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｖｉｔｒｏｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｏｆｒａｄｉｏｓｅｎｓｉｔｉｚｉｎｇｅｆｆｅｃｔｏｆｎｉｔｏｒｚｕｍａｂ牗ｈ Ｒ３牘ａｎｄｃｅｔｕｘｉｍａｂ牗Ｃ２２５牘ｏｎｅｓｏｐｈａｇｅａｌｃａｎｃｅｒ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　ＴｈｅｈｕｍａｎｅｓｏｐｈａｇｅａｌｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｌｉｎｅＴＥ １３ｗｅｒｅｃｕｌｔｕｒｅｄｉｎｖｉｔｒｏ牞ｔｈｅｙｗｅｒｅｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ牗Ｘ ｒａｙｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ牘牞ｈ Ｒ３ｇｒｏｕｐ牗Ｘ ｒａｙ＋ｈ Ｒ３ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ牘ａｎｄＣ２２５ｇｒｏｕｐ牗Ｘ ｒａｙ＋Ｃ２２５ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ牘．Ｔｈｅｃｅｌｌｓｗｅｒｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄａｆｔｅｒｃｏｍｐｌｅｔｉｏｎ牞ａｎｄｔｈｅＥＧＦＲｓｉｇｎａｌｐａｔｈｗａｙｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ牞ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｈ Ｒ３ａｎｄＣ２２５ｏｎｒａｄｉｏｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｏｆｅｓｏｐｈａｇｅａｌｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｌｉｎｅｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄｂｙｃｌｏｎｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｔｈｅｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｒａｔｅａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｒａｔｅｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｓｉｎｇｌｅｓｏｌｕｔｉｏｎｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓ牗ＭＴＳ牘ａｎｄｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　ＴｈｅＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｐ ＥＧＦＲａｎｄｐ ＭＡＰＫｉｎＣ２２５ｇｒｏｕｐｗｅｒｅｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐａｎｄｈ Ｒ３ｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔｒａｔｉｏ牗ＳＥＲ牘ｏｆｈ Ｒ３ａｎｄＣ２２５ｏｎｅｓｏｐｈａｇｅａｌｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓｗｅｒｅ１．３５ａｎｄ１．５０牞ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ牞ｔｈｅｍｅａｎｌｅｔｈａｌｄｏｓｅ牗Ｄ０牘牞ｑｕａｓｉｔｈｒｅｓｈｏｌｄｄｏｓｅ牗Ｄｑ牘牞ｅｘｔｒａｐｏｌａｔｉｏｎｖａｌｕｅ牗Ｎ牘牞ｓｕｒｖｉｖｉｎｇｆｒａｃｔｉｏｎａｔ２Ｇｙ牗ＳＦ２牘ｉｎＣ２２５ｇｒｏｕｐｗｅｒｅｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｏｆｔｈｅｃｏｎｔｒａｌｇｒｏｕｐａｎｄｈ Ｒ３ｇｒｏｕｐ．ＴｈｅｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｒａｔｅｏｆＣ２２５ｇｒｏｕｐｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐａｎｄｈ Ｒ３ｇｒｏｕｐ牞ａｎｄｔｈｅａｐｏｐｔｏｓｉｓｒａｔｅｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐａｎｄｈ Ｒ３ｇｒｏｕｐ牞ｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｗｅｒｅｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ牗Ｐ＜０ ０５牘．ＴｈｅｒｅｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅＧ２／ＭａｎｄＳ ｐｈａｓｅｃｅｌｌｃｙｃｌｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｒａｔｉｏｏｆＴＥ １３ｃｅｌｌｌｉｎｅｓｉｎｔｈｒｅｅｇｒｏｕｐｓ牗Ｐ＜０ ０５牘牞ｔｈｅＧ２／
Ｍ ｐｈａｓｅｃｅｌｌｒａｔｉｏｏｆＣ２２５ｇｒｏｕｐｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｏｆｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐａｎｄｈ Ｒ３ｇｒｏｕｐ牞ａｎｄｔｈｅＳ ｐｈａｓｅｃｅｌｌｒａｔｉｏｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｏｆｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐａｎｄｈ Ｒ３ｇｒｏｕｐ牗Ｐ＜０ ０５牘．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅｈ Ｒ３ａｎｄＣ２２５ｈａｖｅｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎｅｆｆｅｃｔｏｎｅｓｏｐｈａｇｅａｌｃａｎｃｅｒｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ牞ａｎｄＣ２２５ｈａｓｍｏｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎｅｆｆｅｃｔｔｈａｎｈ Ｒ３牞ｗｈｉｃｈｍａｙｂｅｒｅｌａｔｅｄｔｏｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＥＧＦＲａｎｄｄｏｗｎｓｔｒｅａｍｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．
【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】ｅｓｏｐｈａｇｅａｌｃａｎｃｅｒ牷ＥＧＦＲ牷ｎｉｍｏｔｕｚｕｍａｂ牷ｃｅｔｕｘｉｍａｂ牷ｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎｅｆｆｅｃｔ牷ｖｉｔｒｏｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
食管癌是上消化道主要恶性肿瘤，有报道显示其死亡率
居国内恶性肿瘤第２位［１］。

放射治疗是目前临床食管癌的主要方案，但近年来有学者提出食管癌对放射线抗拒增强［２］，
这可能降低放射治疗的敏感性，影响治疗效果。

尼妥珠单抗
６１０
　现代消化及介入诊疗　２０２０年第２５卷第５期ＭｏｄｅｒｎＤｉｇｅｓｔｉｏｎ＆Ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ２０２０牞Ｖｏｌ．２５牞Ｎｏ．５
（ｎｉｍｏｔｕｚｕｍａｂ，ｈ Ｒ３）与西妥昔单抗（ｃｅｔｕｘｉｍａｂ，Ｃ２２５）是抗表皮生长因子受体（ｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＥＧＦＲ）单克隆抗体，既往报道证实ｈ Ｒ３与Ｃ２２５可通过与ＥＧＦＲ结合，阻断其下游信号通路，从而发挥抗肿瘤作用［３－４］。

因而，有报道将ｈ Ｒ３和Ｃ２２５与放疗联合应用［５］，但有关ＥＧＦＲ表达对ｈ Ｒ３和Ｃ２２５放疗增敏作用的影响，临床尚不明确。

本研究通过体外实验，探讨ＥＧＦＲ表达的临床意义。

报道如下。

１　资料与方法
１．１　实验设备和试剂
人食管癌细胞株ＴＥ １３购自上海美轩生物科技有限公司，尼妥珠单抗（百泰生物药业有限公司，国药准字Ｓ２００８０００１，５０ｍｇ∶１０ｍＬ），西妥昔单抗（德国霍克大药厂，批准文号Ｓ２００５００９５，１００ｍｇ／２０ｍＬ）。

ＡＣ０３Ｌ０５５型胎牛血清购自上海李记生物科技有限公司，流式细胞仪购自美国ＴｈｅｒｍｏＡＢＩＡｔｔｕｎｅＮｘＴ声波聚焦流式细胞仪。

艾美捷ＡｂｎｏｖａＥＧＦＲ单克隆抗体购自美国。

ＡｎｎｅｘｉｎＶ ＦＩＴＣ／ＰＩ双染细胞凋亡检测试剂盒购自上海润成生物科技有限公司。

１．２　实验方法
（１）细胞株培养：采用含１０％胎牛血清的ＲＰＭＩ １６４０细胞培养基进行人食管癌细胞株ＴＥ １３培养，培养环境：３７℃５％ＣＯ
２
恒温箱。

在室温下，以Ｘ线进行照射，参数：剂量７ ６Ｇｙ／ｍｉｎ，电压１５０ｋＶ，电流２０ｍＡ，连续２ｈ。

（２）免疫印迹法（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ）检测ＥＧＦＲ信号通路蛋白：将细胞株接种于１８个孔板，分为３组，每组６孔，ｈ Ｒ３组与Ｃ２２３组分别给予ｈ Ｒ３和Ｃ２２５干预各１ｄ，再以４Ｇｙ照射１ｄ，对照组直接给予４Ｇｙ照射１ｄ。

完成后提取总蛋白，再进行电泳、转膜及免疫蛋白印记处理，完成后洗涤膜液，曝光后显影。

（３）流式细胞仪检测细胞凋亡：收集三组对数生长期ＴＥ １３细胞，分别接种于１８个孔板，每组６孔，ｈ Ｒ３组与Ｃ２２５组分别经ｈ Ｒ３与Ｃ２２５处理２４ｈ，再以４Ｇｙ照射２ｄ，利用流式细胞仪检测细胞凋亡率，操作按试剂盒说明进行。

（４）ＭＴＳ法检测细胞增殖率：ｈ Ｒ３组、Ｃ２２５组分别给予５０μＬ／ｍＬｈ Ｒ３和Ｃ２２５干预２４ｈ，对照组未行特殊干预，给予培养３ｄ。

完成后去培养基，在每孔中加１００μＬ１０％ＭＴＳ培养基，计算增值率＝给药组酶标仪４９２μｍ处光密度值（ＯＤ）／未给药组ＯＤ值×１００％［６］。

（５）克隆形成实验：取对数生长期单细胞悬液接于６孔板中，设计０、２、４、６及８Ｇｙ５个照射剂量，每个剂量３个复孔。

贴壁１ｄ后再加入５０μｇ／ｍＬｈ Ｒ３或Ｃ２２５，培养１ｄ后再以不同照射剂量干预３ｄ。

再用培养液持续培养２周，采用甲醇固定，０ ４％结晶紫染色。

在低倍显微镜（×１００）下观察计算克隆形成率，采用Ｓｉｇｍａｐｌｏｔ软件计算平均致死剂量（ｍｅａｎｌｅｔｈａｌｄｏｓｅ，Ｄ
０
）、准阈剂量（ｑｕａｓｉｔｈｒｅｓｈｏｌｄｄｏｓｅ，Ｄ
ｑ
）、外推值（ｅｘｔｒａｐｏｌａｔｉｏｎｖａｌｕｅ，Ｎ）、２Ｇｙ照射后存活分数（ｓｕｒｖｉｖｉｎｇ
ｆｒａｃｔｉｏｎａｔ２Ｇｙ，ＳＦ
２
）及放射增敏比（ｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔｒａｔｉｏ，ＳＥＲ）。

１．３　观察指标
记录ｈ Ｒ３组、Ｃ２２５组及对照组Ｄ
０
、Ｄ
ｑ
、Ｎ、ＳＦ
２
及ＳＥＲ水平，比较三组ＥＧＦＲ蛋白表达水平，记录细胞增殖率和凋亡
率，记录三组Ｇ
０
／Ｇ
１
期、Ｇ
２
／Ｍ期及Ｓ期细胞周期分布。

１．４　统计学方法
选用ＳＰＳＳ２０ ０软件包处理数据，计量资料以珋ｘ±ｓ表示，多组间比较行方差分析，两两比较行ＬＳＤ ｔ检验；计数资料以ｎ（％）表示，组间行 ２检验，Ｐ＜０ ０５为差异有统计学意义。

２　结果
２．１　不同分组细胞放射敏感性参数
根据不同照射剂量获得平均存活分数，拟合食管癌ＴＥ １３细胞株生存曲线，见图１。

放射敏感性计算结果显示，ｈ Ｒ３
组与Ｃ２２５组Ｄ
０
、Ｄ
ｑ
、Ｎ及ＳＦ
２
均低于对照组，ｈ Ｒ３组与Ｃ２２５组ＳＥＲ水平差异无统计学意义（Ｐ＞０ ０５）。

见表１。

图１　不同剂量分组患者ＴＥ １３细胞株生存率
表１　不同分组细胞放射敏感性参数
组别ｎＤ０（Ｇｙ）Ｄｑ（Ｇｙ）Ｎ（Ｇｙ）ＳＦ２ＳＥＲ对照组６２．０９±０．４８ ３．１８±０．８３ ４．３４±１．６８ ０．９８±０．４４ －ｈ Ｒ３组６１．７２±０．３０ １．９６±０．５６ ３．４６±０．９７ ０．８６±０．３２ １．３５±０．４１Ｃ２２５组６１．３１±０．２４１．２７±０．４１２．２３±０．７３０．４７±０．１５１．５０±０．４８统计值－Ｆ＝７．２４９Ｆ＝１４．３８４Ｆ＝４．７０６Ｆ＝４．０１８ｔ＝０．５８２Ｐ值－０．００６０．００００．０２６０．０４００．５７３ 注：与Ｃ２２５组比较， Ｐ＜０ ０５
２．２　不同分组ＥＧＦＲ蛋白表达水平比较
Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测结果显示Ｃ２２５组ｐ ＭＡＰＫ和ｐ ＥＧＦＲ
表达水平均低于对照组和ｈ Ｒ３组。

见表２，图２。

现代消化及介入诊疗　２０２０年第２５卷第５期ＭｏｄｅｒｎＤｉｇｅｓｔｉｏｎ＆Ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ２０２０牞Ｖｏｌ．２５牞Ｎｏ．５６１１
　表２　不同分组ｐ ＭＡＰＫ和ｐ ＥＧＦＲ表达水平
组别ｎｐ ＭＡＰＫ
ｐ ＥＧＦＲ
对照组６０．４０±０．１４
０．８７±０．３７
ｈ Ｒ３组６０．２８±０．１１
０．７２±０．３１
Ｃ２２５组６０．１５±０．０５
０．３９±０．１２
Ｆ值－８．２２８４．３８７Ｐ值
－
０．００４
０．０３２
注：与Ｃ２２５组比较，
Ｐ＜０ ０
５
图２　Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测不同分组食管癌细胞株中ＥＧＦＲ蛋白表达　注：１为对照组，２为ｈ Ｒ３组，３为Ｃ２２５组２．３　不同分组细胞增殖和凋亡率比较
三组细胞增值率和凋亡率比较，差异有统计学意义（Ｐ＜０ ０５），Ｃ２２５细胞增殖率显著低于对照组和ｈ Ｒ３组，细胞凋亡率显著高于对照组和ｈ Ｒ３组，差异有统计学意义（Ｐ＜０ ０５）。

见表３，三组患者食管癌ＴＥ １３细胞株Ｇ２／
Ｍ与Ｓ期细胞周期分布比率差异显著（Ｐ＜０ ０５），其中Ｃ２２５组Ｇ２／Ｍ期细胞比例显著高于对照组和ｈ Ｒ３组，Ｓ期细胞比例显著低于对照组和ｈ Ｒ３组，差异有统计学意义（Ｐ＜０ ０５），见表４。

流式细胞术检测ｈ
Ｒ３与Ｃ２２５对细胞凋亡的影响见图３。

表３　不同分组细胞增殖和凋亡率比较（珋
ｘ±ｓ，％）组别ｎ细胞增殖率细胞凋亡率对照组６９７．５６±２．３４
２．６３±０．８７
ｈ Ｒ３组６８７．０８±２．４６
７．３４±２．２５
Ｃ２２５组６８２．４９±３．１７
＃９．０５±２．１９
＃Ｆ值－４９．７７８１８．７４４Ｐ值
－
０．０００
０．０００
注：与对照组比较，
Ｐ＜０ ０５，与ｈ Ｒ３组比较，＃Ｐ＜０ ０５
表４　不同分组细胞周期分布比较（珋
ｘ±ｓ，％）组别ｎＧ０／Ｇ１Ｇ２／ＭＳ对照组６６０．３７±６．０５５．２９±２．３１
３５．２４±４．７０ｈ Ｒ３组６５８．６４±５．７６１４．１８±３．９３
２９．７６±５．５７
Ｃ２２５组６５６．２１±５．０９
２８．６２±５．８６ ＃１８．６９±６．９１
＃Ｆ值－０．８２２４５．２７４１２．６８５Ｐ值
－
０．４５９
０．０００
０．００１
注：
与对照组比较，
Ｐ＜０ ０５，与ｈ Ｒ３组比较，＃Ｐ＜０ ０
５图３　流式细胞术检测ｈ Ｒ３与Ｃ２２５对细胞凋亡的影响　图３Ａ为对照组，图３Ｂ为ｈ Ｒ３组，图３Ｃ为Ｃ２２５组
３　讨论
ＥＧＦＲ是ＣｅｒｂＢ表达产物，与肿瘤细胞分化、增殖密切相关，通过调节其下游通路相关因子，参与肿瘤增殖和生长过程，还可诱导ＣＯＸ ２表达，发挥协同作用，促进肿瘤进展
［７－８］。

放射治疗在食管癌治疗中的作用已成为临床共识，
但因放射引发的Ｅ
ＧＦＲ过表达可能成为肿瘤ＤＮＡ细胞修复损伤能力增强和放射抗拒性的重要诱因
［９－１０］
，反而降低治疗
效果。

因而，阻断ＥＧＦＲ信号通路激活，抑制放射抗拒性，提高增敏作用成为食管癌放射治疗的新课题。

ｈ Ｒ３与Ｃ２２５是目前临床常用的ＥＧＦＲ单抗药物，ｈ Ｒ３是国内首个以ＥＧＦＲ为靶点的人源化单克隆抗体，既往报道显示ｈ
Ｒ３与Ｃ２２５通过阻断内源化配体与ＥＧＦＲ结合，进而抑制其下游信号通路的激活［１１－１４］
，发挥抗肿瘤作用。

本研究
通过体外实验研究也发现ｈ Ｒ３与Ｃ２２５对放射诱发的食管癌细胞增殖均有抑制作用。

另外，ｈ Ｒ３与Ｃ２２５对ＥＧＦＲ信号通路蛋白ＥＧＦＲ和ＭＡＰＫ激活均有阻滞作用，这可能是Ｃ２２５
与ｈ Ｒ３抑制肿瘤细胞增殖的机制［１５］
，提示ｈ Ｒ３与Ｃ２２５增敏作用可能与ＥＧＦＲ表达相关。

ＭｏｎｉｃａＣＳ等［１６］也认为
ＥＧＦＲ激活后可下调ｂｃｌ ２基因表达，同时上调ｂａｘ细胞凋亡活化基因，进而达到降低放疗敏感性作用。

本研究还发现Ｃ
２２５组细胞凋亡率显著高于ｈ Ｒ３组和对照组，提示Ｃ２２５对食管癌细胞株的抑制作用优于ｈ Ｒ３。

Ｃ２２５可与ＥＧＦＲ单价、双价结合，而ｈ Ｒ３与ＥＧＦＲ仅双价结
合［１７ １８］
，这可能是Ｃ２２５抑制ＥＧＦＲ蛋白表达作用更明显的原
因。

此外，与ｈ Ｒ３比较，Ｃ２２５联合放疗没有促进ＥＧＦＲ活性构象的形成，这提高了对下游信号通路传导激活的阻滞作
用［１９］，抑制ｐ ＭＡＰＫ表达，这可能是Ｃ２２５增敏效果优于ｈ Ｒ３
６１２
　现代消化及介入诊疗　２０２０年第２５卷第５期ＭｏｄｅｒｎＤｉｇｅｓｔｉｏｎ＆Ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ２０２０牞Ｖｏｌ．２５牞Ｎｏ．５
的原因之一。

另外，本研究显示Ｃ２２５组Ｇ０／Ｇ１期、Ｇ２／Ｍ期及Ｓ
期ＴＥ １３细胞株水平逐渐，提示Ｃ２２５可能具有时间依赖性，随着作用时间，细胞增殖抑制效果越显著，陈静等［２０］还认
为作用时间与药物浓度还可能存在交互作用，增强肿瘤细胞杀伤能力，抑制Ｔ
Ｅ １３细胞增殖，支持本研究结果。

综上，ｈ Ｒ３与Ｃ２２５对食管癌细胞株具有放疗增敏作用，Ｃ２２５作用较ｈ Ｒ３更明显，这可能与其抑制ＥＧＦＲ及下游蛋白表达有关。

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（收稿日期：２０２０ ０２ ２７）
（本文编辑：王志青櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒
）
（上接第６０８页）
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，２０２０，５２３（３）：７６６ ７７２．（收稿日期：２０２０ ０２ ２３）
（本文编辑：赵芯梅）。