河北省唐山市开滦第二中学高中生物 1.2.3基因工程的大体操作（三课时）选修3

河北省唐山市开滦第二中学高中生物基因工程的大体操作（三课时）导学案新人
教版选修3
小组：
【学习目标】
1.把握目的基因检测与鉴定的方式。

2.DNA分子杂交技术的原理。

3.总结基因工程操作中的一些注意事项
【重点难点】
重点: 目的基因检测与鉴定的方式。

难点：目的基因检测与鉴定的方式。

Array【自主学习】
目的基因的检测与鉴定
（1）什么缘故要检测与鉴定：
（2）检测的内容与方式的比较
（3）目的基因可否在受体细胞中稳固遗传的关键是 。

（4）什么是探针？。

（5）DNA 分子杂交技术的原理是 。

【问题生成】
【师生互动，问题探讨】
1.什么缘故需要进行个体生物学水平的鉴定？
2.假设要生产人的糖蛋白，能够用大肠杆菌吗？
3.DNA 分子杂交技术还有哪些应用?
4.DNA 分子杂交与分子杂交有什么区别？
5.基因工程的操作中，哪些进程发生碱基互补配对现象?
【课后小结与反思】
基因工程操作的8个易错点
(1)目的基因的插入位点不是随意的
基因表达需要启动子与终止子的调控，因此目的基因应插入到启动子与终止子之间的部位。

(2)基因工程操作进程中只有第三步(将目的基因导入受体细胞)没有碱基互补配对现象
第一步存在逆转录法取得DNA ，第二步存在黏性结尾连接现象，第四步检测存在分子水平杂交方式。

(3)原核生物作为受体细胞的优势：繁衍快、多为单细胞、遗传物质相对较少。

(4)一样情形下，用同一种限制酶切割质粒和含有目的基因的片段，但有时可用两种限制酶别离切割质粒和目的基因，如此可幸免质粒和质粒之间、目的基因和目的基因之间的连接。

(5)目的基因进入受体细胞内，而且在受体细胞内维持稳固和表达的进程，称为转化。

转化的实质是目的基因整水
平
鉴
定
合到受体细胞染色体基因组中。

(6)不熟悉标记基因的种类和作用：标记基因的作用——挑选、检测目的基因是不是导入受体细胞，常见的有抗生素抗性基因、发光基因(表达产物为带颜色的物质)等。

(7)对受体细胞模糊不清：受体细胞经常使用植物受精卵或体细胞(经组织培育)、动物受精卵(一样不用体细胞)、微生物(大肠杆菌、酵母菌)等。

要合成糖蛋白、有生物活性的胰岛素那么必需用真核生物酵母菌(需内质网、高尔基体的加工、分泌)；一样不用支原体，缘故是它营寄生生活；必然不能用哺乳动物成熟的红细胞，缘故是它无细胞核，不能合成蛋白质。

(8)还应注意的问题有：①基因表达载体中，启动子(DNA片段)≠起始密码子(RNA)；终止子(DNA片段)≠终止密码子(RNA)。

②基因表达载体的构建是最核心、最关键的一步，在体外进行。

【自我检测】
1．目的基因导入受体细胞后，是不是能够稳固维持和表达其遗传特性，只有通过鉴定和检测才能明白。

以下属于目的基因检测和鉴定的是（）
①检测受体细胞是不是有目的基因②检测受体细胞是不是有致病基因③检测目的基因是不是转录mRNA ④检测目的基因是不是翻译蛋白质
A．①②③B．②③④C．①③④D．①②④
2.在基因工程操作的大体步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是（）
A.人工合成目的基因
B.目的基因与运载体结合
C.目的基因的检测和表达
D.将目的基因导入受体细胞
3.苏云金芽孢杆菌的抗虫基因导入棉花细胞是不是已表达，其检测方式是（）
A．是不是有抗生素抗性B．是不是能检测到标记基因
C．是不是有相应的性状D．是不是能分离到目的基因
4. 以下获取目的基因的方式中需要模板链的是( )
①从基因文库中获取目的基因②利用PCR技术扩增目的基因③反转录法④通过DNA合成仪利用化学方式人工合成
A．①②③④B．①②③
C．②③④D．②③
5.基因工程有广漠的应用前景。

回答以下各题：
(1)获取目的基因后，短时间内要取得大量目的目的基因，可利用_______________扩增。

(2)构建基因表达载体的进程要利用的工具酶有___________。

(3)受体种类不同，导入方式不同。

选育优良动物，目的基因导入的经常使用方式是__________；选育优良植物，目的基因导入采纳最多的方式是_______。

目的基因进入动植物细胞而且在受体细胞维持稳固和表达的进程，称为__________________。

(4)检测目的基因在转基因生物中是不是翻译成蛋白质，方式是从转基因生物的体细胞中提取蛋白质，用相应的抗体进行________杂交，看是不是有。

6.依照基因工程的有关知识，回答以下问题：
(1)限制性内切酶切割DNA分子后产生的片段，其结尾类型有____________和____________。

(2)质粒运载体用Eco RⅠ切割后产生的片段如下：
AATTC……G
G……CTTAA
为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用Eco RⅠ切割外，还可用另一种限制性核酸内切酶切割，该酶必需具有的特点是_________________________________
_______________________________________。

(3)按其来源不同，基因工程中所利用的DNA连接酶有两类，即__________DNA连接酶和__________DNA连接酶。

(4)反转录作用的模板是______________，产物是______________________。

假设要在体外取得大量反转录产物，常采纳____________技术。

(5)基因工程中除质粒外，____________和____________也可作为载体。

(6)假设用重组质粒转化大肠杆菌，一样情形下，不能直接用未处置的大肠杆菌作为受体细胞，缘故是__________________________________________________。

7.图1表示含有目的基因D的DNA片段长度(bp即碱基对)和部份碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部份碱基序列。

现有MspⅠ、Bam HⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点别离为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。

请回答以下问题：
(1)图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由______________________连接。

(2)假设用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA片段，产生的结尾是____________结尾，其产物长度为____________。

(3)假设图1中虚线方框内的碱基对被T－A碱基对替换，那么基因D就突变成基因d。

从杂合子中分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，产物中共有____________种不同长度的DNA片段。

(4)假设将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处置后进行连接，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是____________。

在导入重组质粒后，为了挑选出含重组质粒的大肠杆菌，一样需要用添加____________的培育基进行培育。

经检测，部份含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达，其最可能的缘故是______________________ ___
____________________________________________________________________________________________________________ ___________。