临床微生物学检验之药敏
微生物药敏结果临床解读与应用
微生物药敏结果临床解读与应用
微生物药敏试验（Antimicrobial Susceptibility Testing, AST）是一种用来检测微生物（如细菌）对特定抗生素的敏感性的实验。这种测试的结果对于指导临床治疗尤为重要，特别是在处理细菌感染时。以下是微生物药敏结果的临床解读和应用：
一、临床解读：
1.敏感（Sensitive, S）：
●如果细菌对某种抗生素敏感，这意味着这种抗生素
在临床上可以有效抑制或杀死这种细菌。
●在选择治疗方案时，敏感的抗生素通常是首选。
2.中间敏感（Intermediate, I）：
●中间敏感意味着抗生素对细菌有一定的抑制作用，
但效果不如敏感类别中的抗生素。
●在某些情况下，如果药物浓度增加或药物累积，中
间敏感的抗生素也可能有效。
3.耐药（Resistant, R）：
●耐药表示细菌对某种抗生素具有抵抗力，常规剂量
的抗生素无法有效控制或杀死这种细菌。
●应避免使用对该细菌耐药的抗生素。
二、应用：
1.制定治疗计划：
●药敏测试结果是制定抗生素治疗方案的重要依据，
有助于选择最有效的抗生素。
●这有助于提高治疗效果，同时减少抗药性的发展。
2.调整治疗方案：
●如果患者对初步治疗没有反应，药敏结果可以用来
调整治疗方案。
●在长期或复杂的感染治疗中，根据药敏结果定期调
整抗生素选择是常见的做法。
3.监测抗药性发展：
●药敏测试可以帮助监测特定地区或医院内细菌抗药
性的趋势。
●这对于公共卫生管理和抗生素使用指南的制定具有
重要意义。
4.避免抗生素滥用：
●通过准确的药敏测试，可以避免不必要或无效的抗
微生物药敏报告解读
微生物药敏报告解读
微生物药敏报告是指对分离出的微生物进行抗生素敏感性测试，以确定该菌株对不同
抗生素的敏感性结果。该报告通常包含了微生物的鉴定结果，以及针对不同类型抗生素的
敏感性测试结果。然而，报告中的信息并不总是易于理解，因此，需要认真解读报告，以
便正确选择合适的治疗方法。
微生物鉴定结果
首先，报告中通常会提供微生物的鉴定结果，如菌属、菌种及形态学特征等。这些信
息对于确定菌株的特性以及可能引起的感染类型非常重要。例如，耐药性较强的细菌，如
金黄色葡萄球菌和鲍曼不动杆菌，往往需要使用更强效的抗生素治疗。
抗生素敏感性结果
微生物药敏报告中最重要的信息是针对不同类型抗生素的敏感性测试结果。一般来说，抗生素敏感性测试通常分为以下几个类别：
1.敏感(S)：该菌株对该抗生素有高度敏感性，并有望对其治疗。
2.中度敏感(I)：菌株对抗生素的敏感性存在一定程度的变化，但仍有机会对其治
疗。
3.耐药(R)：该菌株对该抗生素存在耐药性，这意味着该抗生素治疗该菌株无效。
4.不敏感(NC)：表示对该类抗生素不做出反应，该结果通常是由于菌株并不具备这类
药物敏感性。
选择治疗方法
基于微生物药敏报告结果，医生和临床医师可以采用合适的抗生素治疗方案。但需要
注意的是，在选择治疗方法时，仅仅依赖药敏报告是不够的。医生还需要考虑病人的年龄、健康状况、过往药物使用记录，以及可能出现的副作用等方面因素。
此外，一些细菌具有多重耐药性，也就是同时对多种抗生素产生耐药，这种情况下，
通常需要使用复合方案进行治疗。
总结
微生物药敏报告对预防和治疗感染非常重要。针对不同微生物对抗生素敏感性测试的
临床微生物的鉴定与药敏
细菌耐药性的传播方式
人与人传播
通过接触患者或接触被污 染的环境，耐药细菌可在 人与人之间传播。
动物与人传播
动物携带的耐药细菌可通 过食物链或接触传播给人 类。
环境与人传播
被耐药细菌污染的水、土 壤和食品等环境因素可通 过接触或摄入传播给人类 。
细菌耐药性的控制策略
合理使用抗生素
医生应遵循抗生素使用指南， 根据患者的病情和药敏试验结 果合理选用抗生素，避免滥用
勤洗手
经常用肥皂和流动水洗手，或 使用含有至少60%酒精的手 部消毒液，以减少接触传播。
呼吸道卫生
在咳嗽或打喷嚏时用纸巾掩盖 口鼻，或使用肘部弯曲处遮挡 ，并及时处理用过的纸巾。
避免接触感染源
避免与感染患者接触，或至少 保持1米距离；避免触摸眼睛
、鼻子和口。
05
新技术在临床微生物 鉴定与药敏中的应用
感染的治疗
抗生素治疗
根据感染的病原体类型和药敏试验结 果，选择敏感的抗生素进行治疗。
其他治疗
预防性用药
对于某些高风险人群或特定感染，医 生可能会建议预防性用药以降低感染 风险。
如手术治疗、支持治疗等，根据感染 的具体情况和患者状况进行选择。
预防和控制感染的措施
01
02
03
04
提高免疫力
通过合理饮食、适量运动、保 持良好的作息等方式提高自身 免疫力，减少感染的风险。
微生物药物敏性试验的意义
纸片扩散法具有操作简便、成本低廉的优点，适用于大量样本的初步筛选。但是，该方法的结果受人为因素影响 较大，且无法准确测定细菌的MIC值。
E试验
总结词
E试验是一种半定量药物敏性试验方 法，通过在细菌培养液中加入药物浓 度的梯度，观察细菌的生长情况，从 而判断细菌对药物的敏感性。
详细描述
E试验具有操作简便、结果准确、可重 复性好的优点，适用于临床实验室和 科研实验室。但是，该方法需要特殊 的仪器和试剂，成本较高。
微生物药物敏性试验 的意义
目 录
• 微生物药物敏性试验的定义和目的 • 微生物药物敏性试验的方法和流程 • 微生物药物敏性试验的应用领域 • 微生物药物敏性试验的挑战和前景 • 微生物药物敏性试验的案例分析
01
微生物药物敏性试验的 定义和目的
定义
微生物药物敏性试验是指通过实验手 段检测微生物对各种药物的敏感性和 耐药性，从而为临床治疗提供依据的 过程。
详细描述
基因组学方法具有预测准确、操作简便的优点，适用于科研 实验室和临床实验室。但是，该方法需要高分辨率的基因测 序技术，成本较高。
03
微生物药物敏性试验的 应用领域
临床治疗
指导抗生素使用
通过药敏试验，医生可以了解致病菌对各种抗生素的敏感性和耐药性，从而选择最合适的抗生素进行 治疗，提高治疗效果并减少耐药性的产生。
临床微生物学检验理论课：04药敏试验+合理用药
二、临床合理使用抗菌药物
（一）CLSI M100-S22药敏试验解读 （二）临床常用抗菌药物种类及合理使用 （三）PK/PD参数与抗菌药物合理使用
PD主要研究药物效应随着给药时间和浓度而变化 的动力学过程。
PK/PD简介
PK/PD 研究是把PK与PD结合起来研究药物剂量相 对应的时间-浓度-效应关系，可以反映药物-人 体-病原体之间的关系。
PK/PD简介
时间依赖性抗菌药物(time dependence antimicrobial agents，简称TDAA)。
浓度依赖性抗菌药物（大火爆炒）
浓度依赖性抗菌药物，指杀菌活力在很大范围内 随药物浓度的增大而增加的一类药物。
反映浓度依赖性药物的杀菌活性的PK/PD 参数为 Cmax/MIC 或AUC24/MIC。
其特点是具有较长的PAE和首剂接触效应（the first-exposure effect，FEE）。
（四）药敏试验结果解读
临床和实验室标准化委员会标准（clinical and laboratory standards of institute, CLSI）
敏感（susceptible，S） 是指菌株能被使用推荐剂量治疗感染部位可达到的
抗菌药物浓度所抑制，推荐使用；
中介（intermediate，I） 指抗菌药物MIC接近血液和组织中通常可达到的浓度，
临床微生物实验室药敏质控记录单
临床微生物实验室药敏质控记录单
临床微生物实验室药敏质控记录单是用来记录药敏质控实验中所使用
的药物对不同微生物菌株的敏感性和耐药性的情况。通过对不同菌株的药
敏性测试，可以了解微生物对不同药物的敏感程度，从而指导临床医生在
选择抗生素治疗时的决策。
药敏质控记录单需要包含以下内容：
1.实验日期和编号：记录实验进行的日期，每个实验都应有一个唯一
的编号，方便追溯和管理。
4.实验方法：描述所采用的药敏性测试方法和步骤，例如药敏纸片法、薄荷牛耳菌培养基法等。同时，还需要记录实验的环境条件，包括温度、
湿度等。
5.实验结果：对每个菌株在不同药物浓度下的生长情况进行描述和记录，可以使用生长与不生长的符号进行表示，例如"+"表示生长，"-"表示
不生长。此外，还需要记录最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）。
6.结果分析：对实验结果进行统计和分析，比较不同菌株对不同药物
的敏感性和耐药性，可以计算出敏感度和耐药性的百分比。
7.质量控制：记录实验中所采用的质控菌株信息和实验结果，确保实
验的准确性和可重复性。
8.讨论和结论：根据实验结果和分析，讨论不同菌株对不同药物的药
敏性和耐药性，并给出相应的结论和建议，为临床医生提供指导。
9.签名和日期：实验记录需要有实验人员的签名，确保实验的可追溯
性和可靠性。
通过记录药敏质控实验的详细信息，可以对微生物菌株的敏感性和耐药性进行科学评估，为临床医生提供合理的用药建议，从而提高抗生素治疗的准确性和疗效。这对于控制和预防医院感染、减少耐药菌的传播至关重要，也对临床微生物实验室的质量管理和质控工作提出了更高的要求。
药敏试验原理
药敏试验原理
药敏试验是一种用于测试微生物对抗生素或药物的敏感性的实验方法。它可以帮助医生确定最有效的治疗方法，避免使用对微生物无效的药物，从而减少药物滥用和耐药性的产生。药敏试验的原理是通过将不同的抗生素或药物加入培养基中，观察微生物在不同药物浓度下的生长情况，从而判断微生物对药物的敏感性。
在进行药敏试验时，首先需要培养待测微生物，使其达到一定的数量和生长状态。然后将不同浓度的药物加入含有微生物的培养基中，通常会采用双倍稀释法或梯度法来确定不同浓度的药物。接着将含有药物的培养基与微生物接种于琼脂平板上，培养一定时间后观察微生物的生长情况。通过比较不同药物浓度下微生物的生长情况，可以确定微生物对药物的敏感性。
药敏试验的结果通常会以最小抑菌浓度（MIC）来表示，MIC是指能完全抑制微生物生长的最低药物浓度。根据MIC的结果，可以将药物分为对微生物具有杀菌作用和仅具有抑菌作用两种类型。对于临床治疗来说，通常会选择对微生物具有杀菌作用的药物，以达到最好的治疗效果。
除了MIC外，药敏试验还可以通过观察药物对微生物的杀菌曲线来评估药物的抗菌活性。杀菌曲线可以反映出药物对微生物的杀菌速度和效果，对于选择治疗方案和判断药物的疗效都具有重要意义。
总的来说，药敏试验是一种非常重要的实验方法，可以帮助医生选择最有效的治疗药物，减少药物滥用和耐药性的产生。通过了解药敏试验的原理和结果解读，可以更好地理解临床上药物选择的依据，为临床治疗提供更科学的依据。同时，药敏试验也为药物研发和抗菌药物的选择提供了重要的参考依据，对于推动医学和药学领域的发展具有重要意义。
临床微生物学检验之药敏
临床微生物学检验
一、纸片扩散法
又称Kirby-Bauer(K-B)法，由于其在抗菌药物的选择上具有灵活性，且花费低廉，被WHO 推荐为定性药敏试验的基本方法，已在临床广泛使用。
（一）实验原理
将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中的水分溶解后不断向纸片周围扩散形成递减的梯度浓度，在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成无菌生长的透明圈即为抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的MIC呈负相关。
（二）培养基和抗菌药物纸片
1、抗菌药物纸片选择直径为6.35mm，吸水量为20µl的专用药敏纸片，用逐片加样或
侵泡方法使每片含药量达规定所示。含药纸片密封贮存2~8℃或-20℃无霜冷冻箱内保存，β-内酰胺类药敏纸片应冷冻贮存，且不超过一周。使用前将贮存容器移至室温平衡1~2小时，避免开启贮存容器时产生冷凝水。
2、培养基水解酪蛋白（Mueller-Hinton,M-H）培养基是CLSI采用的兼性厌氧菌和需氧
菌药敏试验标准培养基，pH为7.2~7.4，对那些营养要求高的细菌如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌、链球菌等需加入补充物质。琼脂厚度为4mm。配置琼脂平板当天使用或置塑料密封袋中4℃保存，使用前应将平板置35℃温箱孵育15分钟，使其表面干燥。（三）实验方法
实验菌株和标准菌株接种采用直接菌落法或细菌液体生长法、用0.5麦氏比浊管标准的菌液浓度，校正浓度后的菌液应在15分钟内接种完毕。操作步骤如下：
1、接种用无菌棉拭子蘸取菌液，在管内壁将多余菌液旋转挤去后，在琼脂表面均匀涂抹
临床微生物的鉴定与药敏
肺炎链球菌
涂片：革兰阳 性球菌，矛头 状尖端相背或 短链排列，有
荚膜 M1
M4
菊糖发酵试验 阳性、 胆汁溶
菌试验阳性
血平板上为灰白 色、扁平光滑、 湿润半透明、草 绿色溶血环。培 养久后，菌落中
(10)有免疫抑制作用的抗生素：如环孢素。
Thank You!
L/O/G/O
二. 按感染部位分类 -- 浅部真菌感染 指侵犯皮肤、指甲、毛发 -- 深部真菌感染 指侵犯皮下组织、内脏及全身的感染
三. 按真菌致病性分类 --致病性真菌 --条件致病性真菌 指在机体免疫力低下时才致病的真菌，通常 与人处于共生状态，为人体正常菌群的一部分
真菌检验
? 念珠菌属
- 属酵母样真菌，产生假菌丝，与酵母菌不同 而称其为类 酵母菌，也成为假丝酵母菌。常见 12种。
敏感性
细菌的生理、 生化表型是由 其所含的遗传
基因所决定
临床细菌的主要分类
A 革兰氏阴性杆菌
氧化酶实验
革兰氏阴性球菌 D
病原菌
B 革兰氏阳性球菌
触酶试验
革兰氏阳性杆菌 C
革兰氏阳性球菌
? 葡萄球菌 ? 凝固酶阴性葡萄球菌 ? 肠球菌 ? 链球菌
微生物药敏结果解读及与临床的沟通
•
他药物联合用药 药物剂型及生物利用度（纯品、商品）
与临床沟通中常见问题
7、涂片镜检结果与培养结果不吻合？
涂片镜检是报告所有检见的细菌，而培养 的目的是检出致病菌。 一些苛氧菌需在特殊的环境或培养基上才 能生长。
与临床沟通中常见问题
8、取的明显就是脓液标本，为何 鉴定报告为无菌生长？
我们做的是有氧培养，脓液可能为厌 氧菌感染。 可能细菌被大量的中性粒细胞吞噬。
4、粪便采集和处理
（1）采集时间： 1、腹泻患者于急性期，尽量在用药前采集粪便。 2、伤寒患者于发病2周后采集粪便。 3、怀疑霍乱时立即采集粪便送检。 （2）采集方法： 1、自然排便法：取新鲜粪便的黏液、脓血等有意 义成份2-3克或1-2ML，置于无菌容器中送检。 2、直肠拭子法：难以获得粪便或排便困难者及幼 儿采用此法。
3、尿液标本采集和处理
通常留取晨尿，尿液采集后要及时送检，并保证2小时内 接种；不能及时送检和接种时，尿液应置2-6℃冰箱保存 并于8小时内接种。 （1）中段尿采集法：成年男性和女性分别用肥皂水或1： 1000高锰酸钾水溶液清洗尿道口和外阴部，再用冷凉白开 水冲洗，排尿时弃去前段尿，收集中段尿10-20ML置于带 盖的无菌容器内立即送检。 （2）导尿法：用导尿管留取10-20ML尿液置无菌容器中;长 期留置导尿管者应更换新导尿管留尿，留置导尿时，用无 菌消毒法消毒导尿管外部及导尿管口，用无菌注射器抽取 尿液送检（不可采集尿液收集袋中的尿液送检）。
微生物药敏实验报告
微生物药敏实验报告
本实验旨在检测微生物对不同抗菌药物的敏感性，以指导临床合理用药，提高治疗效果。
药敏实验是通过测量抗菌药物在体外对微生物的抑制作用，评估药物对病原菌的抗菌活性。本实验采用纸片扩散法，将含有不同抗菌药物的药敏纸片放置在培养基上，观察细菌生长情况，计算抑菌圈直径，从而判断细菌对药物的敏感性。
细菌接种：将待测细菌接种于固体培养基上，用无菌棉签均匀涂抹。药敏纸片放置：选择合适药敏纸片，用无菌镊子将其放置在培养基上，间距至少24mm。
培养：将培养皿置于37℃恒温培养箱中培养24小时。
结果分析：根据抑菌圈直径判断细菌对药物的敏感性，如敏感、中介或耐药。
青霉素、阿莫西林、头孢拉定对细菌具有较好的抗菌活性，可作为首选药物。
环丙沙星具有较强的抗菌作用，可作为备选药物。
红霉素、四环素、庆大霉素和克林霉素的抗菌效果较弱，可作为辅助治疗药物。
克林霉素和复方磺胺甲噁唑对细菌不敏感，应避免使用。
根据药敏实验结果，建议使用青霉素、阿莫西林、头孢拉定和环丙沙星治疗该细菌感染。在使用过程中，应注意观察患者反应情况，及时调整用药方案。同时，应进行定期药敏实验复查，以避免耐药性的产生。
微生物在自然界中广泛存在，而临床微生物鉴定与药敏试验对于诊断和治疗感染性疾病具有重要意义。本文将介绍临床微生物鉴定的方法和药敏试验的基本原理及其在感染性疾病治疗中的重要性。
临床微生物鉴定是指通过一系列实验方法对临床标本中分离出的微生物进行种类鉴别和抗菌药物敏感性的测定。这有助于医生正确选择抗菌药物，提高感染性疾病的治疗效果。
微生物药敏报告的解读
C组：为备选药物，作为替代 或补充
在下列情况下使用： 对一个或多个首选药耐药的地区流行株 感染 对不常见菌感染的治疗，控制传染病的 流行，获得耐药性监测资料。
微生物药敏报告的解读
▪ U组：为备选药物，仅用于尿 路感染的治疗。
微生物药敏报告的解读
药敏试验相关概念解释
▪ MRSA—耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 ▪ MRSE—耐甲氧西林表皮葡萄球菌
菌，可引起严重的感染，该菌的耐药率 很高，对多数抗生素呈多重耐药，因此 对不动杆菌感染的治疗，药敏试验是重 要的参考指标。 ▪ 根据药敏试验监测结果，目前对不动杆 菌敏感性较高的是亚胺培南、头孢 哌 酮/舒巴坦和喹诺酮类
微生物药敏报告的解读
▪ 谢谢
微生物药敏报告的解读
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▪ 如果临床出现产ESBLs菌株，则对第三 代头孢菌素（它们是头孢噻肟、头孢他 啶、头孢哌酮、头孢曲松等）耐药，及 对单环酰胺类抗生素（氨曲南）耐药
微生物药敏报告的解读
▪ ESBLs在实验室有一专门的检测方法，如果病 人的药敏报告单已注明为产ESBLs菌株，则表 明已经实验室确证。
▪ 如果病人药敏报告单未注明为产ESBLs菌株， 三代头孢菌素和单环 酰胺类抗生素中有一种 MIC≥2ug/ml， 则提示菌株可能产超广谱β—内 酰胺酶，这种情况下，即使实验室报告为敏感 的第三代头孢菌素和单环酰胺类抗生素，在临 床也不推荐使用。
clsi药敏试验标准2023
CLSI药敏试验标准2023
一、药敏试验定义
药敏试验（Antimicrobial Susceptibility Testing，AST）是一种实验室方法，用于测定细菌对各种抗菌药物的敏感性或耐药性。药敏试验可以帮助医生选择最合适的抗菌药物来治疗感染，提高治疗效果并减少耐药性的传播。
二、试验规则
1.试验方法：CLSI推荐使用微量稀释法（microdilution method）进行药敏试
验。该方法通过在试管或微孔板中加入细菌悬液和不同浓度的抗菌药物，测定细菌生长情况，从而判断细菌对药物的敏感性。
2.试验菌种：CLSI推荐使用临床分离的细菌菌种进行药敏试验，包括革兰阳
性菌、革兰阴性菌、非发酵菌等。
3.药物浓度：药敏试验中使用的抗菌药物浓度应符合CLSI标准，以保证试验
结果的准确性。
4.孵育时间：孵育时间应根据菌种和药物特性确定，一般为16-20小时。
5.结果判定：根据细菌生长情况，药敏试验结果可分为敏感（S）、中介（I）
和耐药（R）三种类型。
三、质量控制
1.室内质控：每次试验应包括阴性对照（无菌生长）和阳性对照（细菌生
长），以验证试验的准确性。
2.室间质控：参加CLSI组织的室间质控计划，以确保不同实验室之间的结果
具有可比性。
四、抗生素敏感性试验
1.常规抗生素：包括β-内酰胺类（如青霉素类、头孢菌素类等）、氨基糖苷
类（如链霉素、庆大霉素等）、氟喹诺酮类（如环丙沙星、左氧氟沙星等）等多种抗生素。
2.特殊抗生素：针对某些特定感染，如结核病、真菌感染等，需使用特殊的
抗结核药物或抗真菌药物进行药敏试验。
药敏试验及药敏试验结果
40
0
24-hr AUC/MICCorrelation of serum pharmacokinetics with MIC (susceptibiliof an organism
• 中介 (Intermediate)– MIC接近血 、体液中药物的浓度， 治疗反应率低于敏感株• 药物生理浓集部位有效 (尿 －FQ)• 加大用药剂量可能有效– 缓冲区： 防止操作的系统误差造 成重大结果的判定错误
• 半定量…纸片扩散法 (抑菌圈直径)• MIC法：– 稀释法(肉汤、琼脂)– 自动化仪法– 抗生素连续梯度法 (Etest )– 流式细胞仪
• 苯唑西林 葡萄球菌 所有β - 内酰胺类• 四环素 所有（除葡 多西环素 ， 米诺环素 萄球菌和不动杆菌〕
• 红霉素 G＋球菌 罗红 ， 克拉 ， 阿奇• 克林霉素 所有 林可霉素
测试药菌名 推测其它药物的敏感性
预报用药(一)
. 氨半西林 肠球菌 青霉素. 青霉素G 葡萄球菌 氨半 ’美洛 ’替卡. 头抱嚷吩 肠杆菌科 拉定 ’头抱氨半 ’克罗
• 药代动力学： 药物吸收 ， 分布 ， 代谢 ， 排泄• 药效学： 药物对机体的作用• 时间依赖型（％T>MIC〕： β - 内酰胺类， 大环内酯类• 浓度依赖型（AUC/MIC比率〕： AGS,FQ
耐药 中介 敏感 D 1 d2 抑菌圈直径（mm)
微生物药敏实验报告
优势菌种分析
根据药敏实验结果，分析优势菌种，为临床用药提供参考。
04
结论与建议
结论总结
抗生素敏感性
实验结果显示，所测试的微生物对多种抗生 素具有敏感性或耐药性。
耐药性趋势
近年来，某些常见病原菌的耐药性呈上升趋 势，需引起关注。
病菌种类差异
不同病菌对同一种抗生素的敏感性存在差异 。
临床建议
预防耐药性
THANKS
感谢观看
03
数据分析
数据整理
原始数据
收集实验中得到的原始数据，包括细菌种类、药敏实 验结果等。
数据清洗
对原始数据进行清洗，去除异常值和缺失值，确保数 据准确性。
数据分类
将数据按照细菌种类、药物类型等进行分类，以便于 后续分析。
数据分析方法
01
描述性统计
对数据进行描述性统计，计算平 均值、中位数、标准差等指标， 了解数据分布情况。
202X-01-07
微生物药敏实验报告
汇报人：
目录
• 实验简介 • 实验结果 • 数据分析 • 结论与建议 • 参考文献
01
实验简介
实验目的
监测微生物耐药性的变化 趋势
为临床医生提供用药依据 ，指导合理用药
检测微生物对各种抗菌药 物的敏感性
01
03 02
实验原理
通过在含有不同浓度 抗菌药物的平板上培 养微生物，观察其生 长情况
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临床微生物学检验
一、纸片扩散法
又称Kirby-Bauer(K-B)法，由于其在抗菌药物的选择上具有灵活性，且花费低廉，被WHO 推荐为定性药敏试验的基本方法，已在临床广泛使用。
（一）实验原理
将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中的水分溶解后不断向纸片周围扩散形成递减的梯度浓度，在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成无菌生长的透明圈即为抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的MIC呈负相关。
（二）培养基和抗菌药物纸片
1、抗菌药物纸片选择直径为6.35mm，吸水量为20µl的专用药敏纸片，用逐片加样或
侵泡方法使每片含药量达规定所示。含药纸片密封贮存2~8℃或-20℃无霜冷冻箱内保存，β-内酰胺类药敏纸片应冷冻贮存，且不超过一周。使用前将贮存容器移至室温平衡1~2小时，避免开启贮存容器时产生冷凝水。
2、培养基水解酪蛋白（Mueller-Hinton,M-H）培养基是CLSI采用的兼性厌氧菌和需氧
菌药敏试验标准培养基，pH为7.2~7.4，对那些营养要求高的细菌如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌、链球菌等需加入补充物质。琼脂厚度为4mm。配置琼脂平板当天使用或置塑料密封袋中4℃保存，使用前应将平板置35℃温箱孵育15分钟，使其表面干燥。（三）实验方法
实验菌株和标准菌株接种采用直接菌落法或细菌液体生长法、用0.5麦氏比浊管标准的菌液浓度，校正浓度后的菌液应在15分钟内接种完毕。操作步骤如下：
1、接种用无菌棉拭子蘸取菌液，在管内壁将多余菌液旋转挤去后，在琼脂表面均匀涂抹
接种3次，每次旋转平板60度，最后沿平板內缘涂抹一周。
2、贴抗菌药物纸片平板置室温下干燥3~5分钟，用纸片分配器或无菌镊子将含药纸片紧
贴于琼脂表面，各纸片中心相距》24mm，纸片距平板內缘》15mm，纸片贴上后不可再移动，因为抗菌药物会自动扩散到培养基内。
3、孵育置35℃孵育箱16~18小时后阅读结果，对苯唑西林和万古霉素敏感等应孵育24
小时。
（四）结果判断和报告
用游标卡尺或直尺量取抑菌圈直径（抑菌圈的边缘应是无明显细菌生长的区域），先量取质控菌株的抑菌环直径，以判断质控是否合格；然后量取试验菌株的抑菌环直径。根据CLSI 标准，对量取的抑菌圈直径作出“敏感”、“耐药”、“中介”的判断。
（五）质量控制
对于肠杆菌科细菌，M-H琼脂，生长法或直接菌落悬液法，相当于0.5麦氏标准的细菌浓度，35℃+-2℃，空气，16~18小时观察结果，质控菌株推荐为大肠埃希菌A TCC25922，大肠埃希菌A TCC35218（为监控β-内酰胺酶/β-内酰胺抑制剂纸片用）；对于铜绿假单胞菌A TCC35218；对于葡萄球菌属细菌，16~18小时观察结果，测苯唑西林、甲氧西林、萘夫西林和万古霉素需24小时，试验温度超过35℃不能检测甲氧西林耐药葡萄球菌，推荐质控菌株为金黄色葡萄球菌A TCC25923，大肠埃希菌A TCC35218，纸片扩散法检测葡萄球菌对万古霉素的敏感性不可靠；对于肠球菌属细菌，16~18小时观察结果，测万古霉素需24小时，推荐质控菌株为粪肠球菌A TCC29212;对于流感嗜血杆菌和副流感嗜血杆菌，推荐质控菌株为流感嗜血杆菌A TCC49247，流感嗜血杆菌A TCC49766，大肠埃希菌A TCC35218（测试阿莫西林/克拉维酸时）；对于肺炎链球菌和肺炎链球菌之外其他链球菌，培养基为M-H琼脂+5%羊血，35℃+-2℃，5%CO2,20~24小时观察结果，推荐质控菌株为肺炎链球菌A TCC49619.
二、稀释法
（一）肉汤稀释法
1、培养基使用M-H肉汤，需氧菌、兼性厌氧菌在此培养基中生长良好。在该培养液中
加入补充成分可支持流感嗜血杆菌、链球菌生长。培养基制备完毕后应校正pH为
7.2~7.4（25℃）。离子校正的M-H肉汤（cation-adjusted Mueller-Hinton broth，CAMHB）
为目前推荐的药敏试验培养基。
2、药物稀释药物原液的制备和稀释遵照CLSI的指南进行。
3、菌种接种配制0.5麦氏浓度菌液，用肉汤（宏量稀释法）、蒸馏水或生理盐水（微量
稀释法）稀释菌液，使最终菌液浓度（每管或每孔）为5x105CFU/ml，稀释菌液于15分钟内接种完毕，35℃孵育16~20小时，当试验菌为嗜血杆菌属、链球菌属孵育时间为20~24小时，葡萄球菌和肠球菌对苯唑西林和万古霉素的药敏试验应孵育时间为24小时。
4、结果判断以在试管内或小孔内完全抑制细菌生长的最低药物浓度为最低抑菌浓度
（minimal inhibitory concentration，MIC）(µg/ml)。微量稀释法时，常借助于比浊计判别是否细菌生长。有时根据需要测定最低杀菌浓度（minimal bactericidal concentration,MBC）;把无菌生长的试管（微孔）吸取0.1ml加到冷却至50℃M-H琼脂混合倾注平板，同时以前述的稀释1:1000（或1:200）的原接种液作倾注平板，培养48~72小时后计数菌落数，即可得到抗菌药物的最小杀菌浓度。
5、质量控制对于常见需氧菌和兼性厌氧菌，M-H琼脂，孵育时间、环境、质控菌株同
纸片扩散法。
（二）琼脂稀释法
琼脂选择法是将药物混匀于琼脂培养基中，配制含不同浓度药物平板，使用多点接种器接种细菌，经孵育后观察细菌生长情况，以抑制细菌生长的琼脂平板所含药物浓度测得MIC。
1、培养基M-H琼脂为一般细菌药敏试验的最佳培养基，调整pH在7.2~7.4，pH的过高
或过低会影响药物效能。
2、含药琼脂制备将已稀释的抗菌药物按1:9加入在45~50℃水浴中平衡融化M-H琼脂
中，充分混合倾入平皿，琼脂厚度为3~4mm。室温凝固后的平皿装入密封塑料袋中，置2~8℃，贮存日期为5天，对易降解药物如头孢克洛，在使用48小时之内制备平板，使用前在室温中平衡，放于温箱中30分钟使琼脂表面干燥。
3、细菌接种将0.5麦氏比浊度菌液稀释10倍，以多点接种器吸取（约为1~2µl）接种于
琼脂表面，稀释的菌液于15分钟内接种完毕，使平皿接种菌量为1 x104CFU/点。接种后置35 ℃孵育16~20小时，特殊药需要24小时。奈瑟菌属、链球菌属细菌置于5%CO2，幽门螺杆菌置微需氧环境中孵育。
4、结果判断将平板置于暗色、无反光表面上判断试验终点，以抑制细菌生长的药物稀释
度为终点浓度。
药敏试验的结果报告可用MIC（µg/ml）或对照CLSI标准用敏感（S）、中介（I）和耐药（R）报告。有时对于稀释法的批量试验，需要报告MIC50、MIC90.MIC50是指抑制50%试验菌的最低药物浓度，MIC90是指抑制90%试验菌株的最低药物浓度，例如被测大肠埃希菌100株，抗菌药物为头孢哌酮，在8µg/ml时可抑制90株大肠埃希菌生长，此时头孢哌酮对大肠埃希菌的MIC90是8µg/ml。
三、E-test
E-test法（epsilometer test）是一种结合稀释法和扩散法原理对抗菌药物药敏试验直接定量的药敏试验技术。
1.原理E试条是一种5mmx50mm的无孔试剂载体，一面固定有一系列预先制备的，浓度