第十四章免疫学检测技术
免疫学检测技术的原理分析免疫学教材课件
免疫学检测技术在疾病诊断、治疗及药物研发中具有广泛应用。本课件将介 绍其工作原理和应用，以及其优势和限制，以及如何使用本教材。
免疫学检测技术的概述
免疫学检测技术是应用于检测体液和细胞中抗原-抗体反应的技术。它们允许对诊断、预防和治疗疾病的免疫反应进 行研究。
免疫免疫性技术的应用
免疫免疫性技术利用T细胞和B细胞等免疫细胞的高度特异性来检测和研究有关免疫系统的复杂反应。
1
应用
流式细胞术，蛋白质微阵列。
2
蛋白质微阵列
是一种新型的免疫学技术，可快速，同时检测大量蛋白质。通过识别特定的抗体-抗原结合，可以确 定已标记的分子的存在和浓度。
3
流式细胞术
用于确定特定细胞的表面蛋白和内部细胞因子，并可用于诊断疾病。
工作原理
检测抗原或抗体的存在或活性，以确定某种疾病的 存在或发展过程中的免疫反应。
分类
免疫法理方法和免疫免疫性方法，包括酶免疫分析、 放射免疫分析和荧光免疫分析等。
应用
用于检测病毒、细菌、真菌和其他微生物感染，肿 瘤标志物，自身免疫疾病和输血等。
优势和限制
高度灵敏，可靠和快速，但也可能造成假阴性和假 阳性结果。
荧光免疫分析(FLISA)的优势和应用
FLISA是一种荧光标记免疫检测技术，其应用广泛且灵敏 。与ELISA类似，FLISA利用二抗或标记抗体检测抗原或抗体 的存在和浓度。
优势
灵敏和高度特异性；快速且易于自动化，具有高通量。
应用
FLISA用于检测肿瘤标志物、细菌、病毒和各种生物分 子的存在和浓度。
酶免疫分析(ELISAቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ的原理和优势
ELISA是一种常用的免疫学检测技术，其工作原理是通过将抗原-抗体体系与标记酶和底物反应，从而检测 抗原或抗体的存在或浓度。
常用免疫学检验检测技术
要点一
总结词
要点二
详细描述
蛋白质分析的常用技术
免疫印迹技术是一种用于分离、检测和识别蛋白质的常用 技术。该技术通过将蛋白质混合物在凝胶上进行电泳分离 ，然后将其转移到膜上，再与特异性抗体结合，最后通过 显色反应检测目标蛋白质。免疫印迹技术具有高灵敏度、 高特异性和可同时检测多个蛋白质的特点，广泛应用于生 物学、医学和生物工程领域。
注意事项
由于放射性同位素具有放射性，操作过程中需要注意安全防护，避免对操作人员和环境造成污染。同 时，由于放射免疫分析需要使用放射性同位素标记的抗原，因此成本较高。
优缺点分析
优点
放射免疫分析具有较高的灵敏度和特异性， 可以用于痕量物质的定量检测；操作简便， 易于自动化；测量结果准确可靠。
缺点
由于使用放射性同位素，操作过程中存在安 全风险；成本较高，需要特殊仪器和实验室 条件；对于某些样品，可能存在交叉反应或 非特异性干扰。
化学发光免疫分析（CLIA）
总结词
快速、高灵敏度的定量检测技术
详细描述
化学发光免疫分析是一种基于化学发光反应 的免疫分析技术，通过测量化学发光反应过 程中释放的光子数量来检测抗原或抗体的浓 度。该技术具有快速、高灵敏度和低背景干 扰的优点，广泛应用于传染病、肿瘤标志物
和激素等生物分子检测领域。
免疫印迹技术（Western Blot）
05
其他常用免疫学检验检测技术
时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）
总结词
高灵敏度、高特异性的定量检测技术
详细描述
时间分辨荧光免疫分析是一种基于荧光能量共振转移的免疫分析技术，通过测量荧光标 记物的发射光谱来检测抗原或抗体的浓度。该技术具有高灵敏度、高特异性和低背景干
临床医学检验技师考试辅导临床免疫学和免疫检验 第十四章 免疫细胞的分离及其表面标志检测技术练习题
第十四章免疫细胞的分离及其表面标志检测技术一、A11、已知细胞中的黏附能力最大的为A、树突状细胞B、单核细胞C、B细胞D、T细胞E、红细胞2、免疫细胞检测技术中外周血单个核细胞指的是A、有核细胞B、淋巴细胞C、单核细胞D、淋巴细胞和单核细胞E、幼稚细胞3、下列关于T细胞亚群的分离，说法错误的是A、原理是根据相应细胞的不同标志加以选择性纯化B、凡根据细胞的表面标志进行纯化得到所需要的细胞群是阳性选择法C、选择去除不需要的细胞群，仅留下所需要的细胞为阴性选择法D、E花环沉降法是最先进的细胞分选技术E、尼龙毛柱分离法是常用的分离方法4、下列有关转化的淋巴细胞的形态描述中，错误的是A、细胞变大B、出现空泡C、核仁消失D、染色质疏松E、胞质扩大5、检测T细胞数量的试验是A、溶血空斑试验B、SmIg荧光抗体染色试验C、巨噬细胞或白细胞移动抑制试验D、E玫瑰花环试验E、计算盘直接计数6、溶血空斑形成试验中，空斑的大小表示A、抗体生成细胞的多少B、抗体生成细胞的种类C、细胞的大小D、抗体生成细胞产生抗体的多少E、吞噬细胞的活性7、做自然杀伤细胞毒试验，敏感而常用的是哪种细胞株A、小鼠T细胞肿瘤细胞株B、人肺癌细胞C、K562细胞系D、小鼠细胞毒T细胞系E、L929细胞株8、具有抗肿瘤效应的第一道防线是A、TC细胞B、中性粒细胞C、TH细胞D、B细胞E、NK细胞9、下列不属于自然杀伤（NK）细胞检测方法的是A、酶释法和放射性核素法B、酶释法和荧光分析法C、放射性核素法和荧光分析法D、放射性核素法和荧光分析法和酶释法E、反向溶血空斑实验和酶释法10、可刺激B淋巴细胞增殖转化的刺激物是A、PWMB、PHAC、ConAD、MHCE、BCG11、用于临床评价病人免疫状况的试验中，评价T细胞功能的试验是A、血清免疫球蛋白检测B、溶血空斑试验C、淋巴细胞转化试验D、膜表面Ig测定E、EA花环试验12、关于单个核细胞说法错误的是A、单个核细胞包括淋巴细胞、单核细胞B、单个核细胞的体积、形态、比重与其他细胞不同C、可利用单个核细胞的体积不同，按照密度梯度来分离D、在进行密度梯度分离时，单个核细胞比重比溶液的比重大E、多核粒细胞比重比单个核细胞比重大13、采用密度梯度分离法分离得到的细胞主要为A、单核细胞和粒细胞B、单核细胞C、淋巴细胞D、淋巴细胞和单核细胞E、淋巴细胞和粒细胞14、利用E花环沉降法可分离A、单核细胞和B细胞B、浆细胞和粒细胞C、B细胞和T细胞D、B细胞和粒细胞E、B细胞和吞噬细胞15、对分离细胞的保存说法错误的是A、用适量的10%～20%小牛血清的Hanks等培养液重悬B、以二甲亚砜作为保护剂C、短期保存中，放4℃保存D、短期保存中，迅速改变细胞所处的温度，以免造成温度休克E、长期保存中，放在液氮中，-196℃16、从单个核细胞悬液中分离出单核细胞的方法不包括A、E花环沉降法B、贴壁黏附法C、吸附柱过滤法D、磁铁吸引法E、Percoll分离液法17、下列关于淋巴细胞分离的说法错误的是A、进行细胞免疫的检测，一般须将待检淋巴细胞从血液中或组织中分离出来B、外周血细胞单个核细胞包括淋巴细胞、粒细胞和红细胞C、利用外周血的细胞的理化特性的差异可以分离不同的细胞群体D、淋巴细胞的理化特性与其他细胞差异很小，用简单的方法不易分离纯化E、淋巴细胞的分离利用专门的淋巴细胞分离纯化技术18、细胞活力测定常用的简便方法是A、伊红染色B、美蓝染色C、台盼蓝染色D、抗酸染色E、HE染色19、LPS可激发哪种细胞转化A、B细胞B、T细胞C、自然杀伤（NK）细胞D、杀伤细胞E、巨噬细胞20、可刺激T细胞增殖的刺激物是A、ConAB、MHCC、SPAD、AFPE、LPS21、自然杀伤（NK）细胞具有A、对TI抗原应答效应B、ADCCC、对TD抗原应答D、主要分泌细胞因子作用E、特异杀伤肿瘤细胞作用22、属于非抗原刺激物的物质是A、SRBCB、BCGC、LPSD、类毒素E、抗毒素血清23、关于溶血空斑试验的叙述错误的是A、1个空斑代表1个抗体生成细胞B、需要绵羊红细胞和补体参与C、空斑大小代表抗体产生的多少D、是可检测B淋巴细胞功能的一种体外试验方法E、只可检测IgG类抗体24、下列哪项不是T细胞表面标志的检测方法A、SmIg的检测B、抗体致敏细胞花环法C、免疫金银染色法D、免疫荧光法E、ABC法25、溶血空斑试验检测的是哪类细胞的功能A、T淋巴细胞B、巨噬细胞C、自然杀伤（NK）细胞D、B淋巴细胞E、LAK细胞答案部分一、A11、【正确答案】B【答案解析】单核细胞具有在37℃和Ca2＋存在时，能主动黏附在玻璃、塑料、尼龙毛、棉花纤维或葡聚糖凝胶的特性。
免疫学检测技术(课堂PPT)
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36
一、凝聚反应(Agglutination)
二、沉淀反应
1、溶液中的沉淀反应
2、凝胶扩散沉淀
3、免疫电泳Biblioteka 血清免疫电泳火箭电泳
对流免疫电泳
三、补体参与的反应
四、免疫标记的抗原抗体技术
酶联免疫吸附（ELISA）
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一、凝集反应
凝集反应是指颗粒抗原与相应抗体结合 反应出现的可见性现象。颗粒抗原如完整 的细菌、红细胞等与相应抗体相混合，在 一定条件下出现凝集。凝集反应中抗原称 为凝集原，抗体称为凝集素。
. Equivalence – Lattice formatio6 n
抗原或抗体检测原理
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7
• 免疫学（Immunology）：
是研究抗原性物质、免疫系统、免疫应 答的规律及免疫应答的调节的一门科学。
• 免疫的定义（Immunity）：免疫是机体识 别自我与非自我的过程。排除异己，维护 自身稳定的生理反应。
体细胞会因物理、化学和病毒等生物因素的影响，使
细胞发生癌变，形成肿瘤等，机体可识别、清除这些
细胞，这是免疫系统的第三个功能。当这一功能低下
或失调时，会导致肿瘤或癌. 症。
9
抗原 （Antigen）
抗原概念 凡能刺激机体产生特异性抗体和致敏淋巴细胞，
并能与相应抗体或致敏淋巴细胞在体内或体外发生 反应的物质。
亲缘关系越远，差异越大，抗原性越强。
自身抗原：自身组织发生异常变异、免疫功能紊乱、眼球晶体 蛋白、精子蛋白、甲状腺蛋白
2. 大分子胶体：一般在10 kD以上 。
3. 具有复杂的立体结构或空间构象.
如明胶分子量虽然为100 kD，但结构简单，免疫原性差。
《免疫学检测技术》课件
免疫荧光技术（IFT）
原理：利用荧 光标记的抗体 与抗原结合， 通过荧光显微 镜观察荧光信
号
应用：检测细 胞表面抗原、 细胞内抗原、
细胞因子等
优点：灵敏度 高、特异性强、
可定量分析
缺点：操作复 杂、成本较高、 需要专业设备
免疫沉淀技术（IP）
原理：利用抗原-抗体特异性结 合，沉淀出目标蛋白
应用：蛋白质相互作用研究、 蛋白质组学研究等
细胞因子 检测：用 于诊断免 疫系统疾 病、肿瘤 等
免疫组化 检测：用 于诊断肿 瘤、感染 性疾病等
流式细胞 术：用于 检测免疫 细胞亚群、 细胞因子 等
免疫荧光 检测：用 于检测抗 原、抗体 等
免疫印迹 法：用于 检测蛋白 质、抗体 等
在生物制品检测中的应用
疫苗检测：检 测疫苗的有效
性和安全性
抗体检测：检 测抗体的浓度
检测方法：开发新 型检测方法，提高 检测灵敏度和准确 性
自动化：实现检测 过程的自动化，提 高检测效率
便携化：开发便携 式检测设备，方便 现场检测和快速诊 断
THANKS
汇报人：
例
Part One
单击添加章节标题
Part Two
免疫学检测技术概 述
免疫学检测技术的定义和分类
免疫学检测技术的发展历程
19世纪末，免疫 学检测技术开始 萌芽
20世纪初，免疫 学检测技术逐渐 成熟
20世纪中叶，免 疫学检测技术快 速发展
21世纪初，免疫 学检测技术进入 分子水平
免疫学检测技术的应用领域
优点：灵敏度高、特异性强、 操作简便
注意事项：选择合适的抗体、 控制反应条件、避免非特异性 结合等
流式细胞术（FC）
免疫学检测技术基本原理
荧光免疫检测技术(FI)的基本原理
荧光免疫检测技术与FIA类似，但是不需要标记酶和底物，而是直接标记荧光染料，通过检测荧光信号 随时间变化的曲线来判断样品中免疫分子的存在和浓度。
无需酶标记
荧光免疫检测不需要使用 酶标记荧光素酶，避免了 潜在的酶和底物污染。
高通量检测
荧光免疫检测可以在低浓 度下完成快速检测，适用 于高通量和大规模的样品，可以 标记多种不同的免疫分子， 提高检测的多元性和特异 性。
放射免疫检测技术(RIA)的基本原理
放射免疫检测技术利用放射性标记的免疫分子来检测样品中目标免疫分子的存在和浓度。
1
放射性标记
将免疫分子与放射性元素标记如131I、125I等结合。
2
孵育和分离
将标记的免疫分子与待测样品反应孵育，通过分离获得实验的反应产物。
免疫学检测技术基本原理
免疫学检测技术是一种检测生物体内免疫分子的方法，应用广泛于临床诊断、 生命科学、农业、环境监测和食品安全等领域。
免疫学检测技术的定义和概述
免疫分子的来源
免疫分子包括抗体、补体和细 胞因子等，都是免疫系统特异 性抗原识别和应对的产物。
检测方法的基本原理
通过与特定抗原或抗体结合来 检测样品中目标免疫分子的存 在和浓度。
免疫学检测技术的应用
广泛应用于疾病诊断、药物开 发、生物学研究和疫苗制备等 领域，成为现代生物技术发展 的重要手段。
免疫学检测技术的常见方法
直接法
直接使用标记的抗体或抗原检测样品中的免 疫分子。
间接法
利用未标记的抗体与样品中的免疫分子结合， 再使用标记的二抗或蛋白A/G结合物检测。
竞争法
利用抗原或抗体与样品中的免疫分子竞争结 合，测定中目标免疫分子的含量。
免疫学检测技术基本原理及其应用课件
探讨免疫学检测技术在环境污染监测中的应 用，如检测水中的污染物。
生物医学研究
了解免疫学检测技术在研究领域的应用，如 免疫组织化学和流式细胞术。
食品安全监测
介绍免疫学检测技术在食品安全监测中的作 用，如快速检测食品中的有害物质。
免疫学检测技术的前景展望
展望免疫学检测技术未来的发展方向和应用 前景。
述
3 免疫学检测技术分
类
介绍免疫学检测的基本 原理，如抗原-抗体相互 作用和信号放大。
探讨不同类型的免疫学 检测技术，如免疫层析、 免疫荧光和酶联免疫吸 附实验。
免疫学检测技术的应用
临床诊断
探索免疫学检测技术在疾病诊断和监测中的 广泛应用，如病毒检测和肿瘤标志物。
生物工业
探索免疫学检测技术在生物工业中的应用， 如生物制药和工业发酵。
免疫学检测技术基本原理 及其应用课件
欢迎来到免疫学检测技术基本原理及其应用的课件！本课程将带您深入了解 免疫学检测技术的基本原理以及广泛的应用领域。让我们开始这段令人兴奋 的学习旅程吧！
免疫学检测技术基本原理1 来自疫学基础知识回顾回顾免疫学的基本概念 和原理，为后续的技术 解释提供基础。
2 免疫学检测原理概
免疫学检测技术的挑战与改进
1 技术难点
探讨当前免疫学检测技术所面临的挑战，如灵敏度、特异性和自动化。
2 改进方向
讨论改进免疫学检测技术的可能方向，如新的标记方法和数据分析技术。
南开大学免疫学讲义-第十四章 免疫标记技术
免疫标记技术免疫标记技术指用荧光素、放射性同位素、酶、铁蛋白、胶体金及化学(或生物)发光剂等作为追踪物，标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应；并藉助于荧光显微镜，射线测量仪，酶标检测仪，电子显微镜和发光免疫测定仪等精密仪器，对实验结果直接镜检观察或进行自动化测定，可以在细胞、亚细胞、超微结构及分子水平上，对抗原抗体反应进行定性和定位研究；或应用各种液相和固相免疫分析方法，对体液中的半抗原、抗原或抗体进行定性和定量测定。
因此，免疫标记技术在敏感性、特异性、精确性及应用范围等方面远远超过一般免疫血清学方法。
根据试验中所用标记物的种类和检测方法不同，免疫标记技术分为免疫荧光技术，放射免疫技术，免疫酶技术，免疫电镜技术，免疫胶体金技术和发光免疫测定。
近年来，随着分子生物学、细胞生物学、基础免疫学和免疫化学等学科的进展以及应用现代高新技术建立的仪器分析日趋发展，免疫标记技术也不断完善和更新。
各种新技术和新方法不断涌现，至今已发展成为一类检测微量和超微量生物活性物质的免疫生物化学分析技术。
在医学和其他生物学科的所究领域及临床检验上作中应用十分广泛。
第一节免疫荧光技术免疫荧光分析(Immunofluorescence assay，IFA)始创于40年代韧，1942年Coons等曾次报道用异氰酸荧光素标记抗体．检查小鼠组织切片中的可溶件肺炎球菌多糖抗原，当时内于此种荧光素标记物的性能较差，未能推广使用。
直至50年代末期，Riggs等(1958)合成性能较为优良的异硫氰酸荧光黄。
Mashall等(1958)对荧光抗体的标记方法又进行改进，从而使免疫荧光技术逐渐推广应用。
一、基本原理免疫荧光技术是将抗原抗体反应的特异性和敏感性与显微示踪的精确性相结合。
以荧光素作为标记物，与已知的抗体(或抗原)结合、但不影响其免疫学特性。
然后将荧光素标记的抗体作为标准试剂，用于检测和鉴定未知的抗原。
在荧光显微镜下，可以直接观察呈现特异荧光的抗原抗体复合物及其存在部位。
第十四章免疫学检测技术
将发光物质（如吖啶酯、鲁米诺等）标记抗 原或抗体，发光物质在反应剂（如过氧化阴离子
）激发下发射光子，通过自动发光分析仪测定光
子产量，可反映待检样品中抗体或抗原含量。 该法灵敏度高，常用于检测血清超微量活性 物质（甲状腺素等激素）。
５．免疫印迹法(immunoblotting)
该法又称Western印迹法，其结合凝胶电
免疫电泳原理图解
火箭电泳 （Rocket Electrophoresis)
火箭电泳也称单向电泳扩散免疫沉淀试验， 是把单向免疫扩散同电泳结合在一起的方法。抗原 在含有定量抗体的琼脂中泳动，两者比例适宜时， 在较短时间内生成锥形的沉淀峰。在一定浓度范围 内，沉淀峰的高度与抗原含量成正比。此法的特点 是需时较短，故可用于快速沉淀标本中抗原的含量。
1．直接凝集（direct agglutination) ：
细菌或红细胞与相应抗体直接反应，可出现 细菌或红细胞凝集现象。
2．间接凝集（indirect or passive agglutination) ： 检测针对可溶性Ag的Ab 3．间接凝集抑制试验 (direct agglutination inhibition test) 4. 协同凝集试验（co-agglutination test）
用于检测特异性抗体。用已知抗原包被固相，加入
待检血清标本，再加酶标记的二抗，加底物观察显 色反应。
2）免疫细胞或免疫组化技术
应用酶标记的抗体与组织或细胞抗原发生反 应，结合形态学观察，对组织或细胞表面抗原 进行定性、定量、定位。
ICC
IHC
3．放射免疫测定法(radioimmunoassay, RIA)
5种成分，3个系统
反应分两步进行
第一步:反应系统与补体的作用
免疫学检测技术
Ab
Ab
双向免疫扩散
Ag1 Ag2
Ag3
Ag4
Ab
鉴定多种抗原是完全相同、 部分相同或完全不同
沉淀反应—免疫电泳
存在于不同区域 旳抗原与抗体结 合，在百分比合 适处形成沉淀弧。 沉淀弧旳数量、 位置和形状与原 则品相对比，可 分析样品旳成份 及其性质。
第二节 免疫组织化学检测技术
抗原＋抗体（特异性）＋酶标识抗体，经过酶与 底物作用生成有色反应物，定位组织或细胞内抗 原旳一门技术。 免疫组织化学：用带标识物旳抗体或抗原在组织细 胞原位经过抗原抗体反应或组织化学反应，对相 应抗或抗体进行定性、定量、定位测定旳技术。
d) 微粒捕获酶免疫分析技术
将已知特异性抗体致敏旳
免疫微粒与生物素、亲和
b）
素、酶相结合，最终酶作
用于荧光底物发光，经过
检测荧光强度判断未知抗
原旳含量。
e) 免疫组化技术
定位、定性、定量检测
②免疫荧光技术
海马细胞
微管蛋白
绿色(胞体、树突)
轴突终末蛋白
红色(突触)
培养旳成纤维细胞
微管呈绿色
核呈蓝色
+Y
体外加入 抗人IgG
Y
Y
Y
Y
出现凝集现象， 叫间接库姆试验
2.沉淀反应
毒素、组织浸液及血清中旳蛋白等可溶性抗原与相应抗体反应后，出现肉眼可见旳沉 淀物，称为沉淀反应。沉淀反应可在液体中进行，也可在半固体琼脂凝胶中进行。
单向免疫扩散 Ab in gel
用于拟定 抗原浓度
Ag
Ag
Ag
Ag
免疫比浊
过量Ab Ab
免疫学检测技术就是利用抗原和抗体高 度特异性结合旳原理和措施，检测分 析各样品中旳目旳物质，以监控物品 质量、检测机体免疫机能和诊疗某些 疾病旳体外检测措施。
免疫学检测技术及应用概述
免疫学检测技术及应用概述免疫学检测技术的原理是利用机体产生的特异性抗体与抗原之间的特异性结合反应。
当机体感染病原体或注射外源性抗原后，免疫系统将识别并生成相应的抗体。
免疫学检测技术通过将已知的抗原与待测物进行结合，利用特异性抗体识别和测定待测物的存在与含量。
常见的免疫学检测技术包括免疫荧光、酶联免疫吸附法（ELISA）、放射免疫分析法（RIA）、免疫电泳、免疫印迹等。
其中，免疫荧光是一种通过将荧光标记的抗体与待检测物结合后，利用荧光显微镜观察来检测抗原或抗体的存在。
ELISA是一种通过将待检测物与酶标记的抗体结合，再利用底物与酶反应来产生颜色变化，通过光密度计读取颜色变化程度来测定待检测物的含量。
RIA则是通过将放射性同位素标记的抗体与待检测物结合，再通过放射性测定来确定待测物的含量。
免疫学检测技术在临床诊断中被广泛应用。
例如，通过检测病毒或细菌感染所产生的特异性抗体，可以确定患者是否感染此病原体。
免疫学检测还广泛用于肿瘤标志物的检测，根据肿瘤细胞产生的特异性抗原来判断肿瘤的存在与发展程度。
此外，免疫学检测还可用于血型鉴定、妊娠检测、自身免疫性疾病等多个方面的诊断。
免疫学检测技术在生物学研究中也发挥着重要作用。
例如，在分子生物学研究中，通过检测特定的抗体可以确定蛋白质的表达和定位，从而理解其功能。
免疫学检测还可以用于研究免疫系统的功能和异常情况，为疾病的治疗和预防提供参考。
在药物研发中，免疫学检测技术可以用于药物的安全性和有效性评估。
例如，通过检测特定抗体的产生，可以评估疫苗的免疫效果。
免疫学检测技术还可以用于药物代谢和药物动力学研究，为药物的合理应用提供依据。
总之，免疫学检测技术是一项重要的分析和检测技术，广泛应用于临床诊断、生物学研究和药物研发等领域。
随着技术的不断发展，免疫学检测技术将继续发挥其在疾病诊断、药物研发和生物学研究中的重要作用。
免疫学检测技术的基本原理及其应用PPT
免疫反应链
了解单克隆和多克 隆抗体在免疫反应 中的作用。
信号放大
揭示检测技术如何 利用信号放大机制 来增强检测敏感性。
检测方法
介绍常见的免疫学 检测方法，如 ELISA、免疫印迹 和流式细胞术。
免疫学检测技术的主要应用领域
探索免疫学检测技术在医学领域中的主要应用领域，包括诊断疾病、疫苗开发和药物监测。
1 定义
免疫学检测技术是一组用于检测和测量免疫反应的实验细胞生物学的深入研究。
免疫学检测技术的基本原理
深入了解免疫学检测技术的基本原理和机制，包括抗原-抗体相互作用、免疫反应链、信号放大和检测 方法。
抗原-抗体相 互作用
抗原与特定抗体之 间的相互作用是这 些技术的基础。
诊断疾病
了解免疫学检测技术在早期疾病诊断和监测中的重要作用。
疫苗开发
探索免疫学检测技术在疫苗研发和效力评估中的应用。
药物监测
了解如何利用这些技术来监测药物治疗的有效性和副作用。
免疫学检测技术的具体方法和步骤
深入了解免疫学检测技术的具体方法和步骤，包括样本收集、试剂准备、标记和检测分析。
1
样本收集
收集样本是免疫学检测的第一步，通常涉及血液、尿液或组织样本。
免疫学检测技术在医学领域的应用案例
探索免疫学检测技术在医学领域中的实际应用案例，包括癌症诊断、自身免疫疾病和传染病。
癌症诊断
了解如何利用免疫学检测技术 来识别和分类不同类型的癌症 细胞。
自身免疫疾病
探索免疫学检测在自身免疫疾 病诊断和治疗中的关键作用。
传染病
了解免疫学检测技术在传染病 预防、控制和治疗中的应用。
免疫学检测技术的基本原 理及其应用
本演示文稿将介绍免疫学检测技术的基本原理及其在医学领域中的应用。了 解这些关键概念和案例将有助于您更好地理解和应用免疫学检测技术。
细胞与分子免疫学：第十四章 免疫学检测技术
1） ELISA 基本原理
将抗原或抗体结合到固相载体的表面，并保持 其免疫活性。
抗原或抗体与酶连接成酶标抗原或抗体，仍分 别保持其免疫活性和酶活性。
在固相载体上按照一定的步骤加入待测抗原或 抗体及酶标抗体或酶标抗原，洗去未结合的游 离物质，加入酶的底物显色，颜色的深浅与待 测物质含量呈相关性。
可用于测定小分子抗原或半抗原及抗体。以检 测抗原为例，待测抗原和酶标抗原竞争与固相 抗体结合，结合于固相的酶标抗原量与标本中 待测抗原含量呈反比。
D、捕获法——最常用于检测IgM抗体 包被抗人IgM 链+待测标本----IgM类抗体全被 固相抗体捕获------洗涤+ 特异性抗原（针对待 测IgM的相应抗原）与固相上特异性IgM结合+ 酶标抗体（针对特异性Ag的）+底物----显色----显色表示有特异性IgM。
2、四乙基罗丹明（RB200） 橘红色粉末，发出橘红色或橙色荧光。最大吸收峰 570nm，最大发射峰595—600nm。含磺酸基。与 FITC做双标记或对比染色。
3、藻红蛋白（R-RE）
发出橙色荧光，最大吸收峰565nm，最大发射峰 575nm，可与FITC共用488nm激发光，可用于流式细 胞仪的双标记。
酶免疫测定 非均相酶免疫测定 固相酶免疫测定
（EIA）
液相酶免疫测定
（同RIA）
（三）固相载体的种类
A、塑料制品 聚苯乙烯： 蛋白质非共价键或物理吸附结合到载体表 面，可制成小试管、小珠、微量反应板的形式 专用于ELISA的微量反应板——ELISA板（812=96孔）
B、微颗粒 高分子单体聚合成的微球或颗粒，带有能与蛋白质结 合的功能基团，易于化学偶联，结合容量大。反应时 可均匀的分散到整个反应溶液中，反应速度快。其中 可包裹磁性物质，制成磁化微颗粒，使分离可在磁板 中完成，自动化分析。
第十四章超敏反应性疾病免疫学检验
一、抗原非特异性CIC检测技术 细胞法-Raji细胞法：
3.影响因素 ①培养条件能改变Raji细胞其表面受体的数量及亲和性，影响检测敏感性; ②待检血清中如有抗淋巴细胞的抗体，能和Raji细胞反应; ③SLE血清中的抗DNA也能和Raji细胞反应，使测定结果偏高。
一、抗原非特异性CIC检测技术 细胞法-Raji细胞法：
1min后拭（吸）去试验抗原液
分级 -
速发型皮肤试验的结果判定标准
皮内试验
点刺试验
无风团或小于阴性对照
无风团反应或小于阴性对照
+
风团3～5mm、红晕＜20mm
++
风团6～9mm伴红晕
+++
风团10～15mm伴红晕
++++ 风团＞15mm伴红晕和伪足
无风团,阴性对照＜红晕≤20mm 无风团，红晕＞20mm 风团伴红晕 风团伴红晕和伪足
某些过敏体质者高于正常1000～10000倍
0.1～0.9mg/L
特应症、支气管肺曲菌病、 药物性间质性肺炎、麻风、 寄生虫病及IgE型骨髓瘤等
参考值
血清IgE高
二、特异性IgE的检测
√ 酶联免疫吸附试验（ELISA）：常用间接法。 √ 免疫印迹技术（IBT）：操作简单，能一次性测定多种变应原的特异性IgE，故临床已普
注意事项及禁忌症：
禁忌证 受试者在心肺功能不全、高血压、甲亢、妊娠、严重咽喉炎、呼吸道感染或肺炎等情况下一般
不适宜作激发试验； 有过敏性休克，严重的血管性水肿及严重的喉头水肿病史者； 一周之内预防接种、职业性过敏因素的接触等。
二、支气管激发试验（bronchial provocative test,BPT）
医学免疫学-医考讲义- 免疫学检测技术
免疫学检测技术大纲要求一、抗体的检测及应用抗体进行的检测二、免疫细胞的分离三、免疫细胞的特异性、数量和功能检测一、抗体的检测及应用抗体进行的检测（一）概念利用抗原和抗体特异性结合的特性，对抗原或抗体进行定性、定量检测。
（二）血凝抑制试验可定量检测流感病毒中和抗体。
流感病毒包膜上血凝集素可凝集红细胞，血凝集素中和抗体可抑制这种凝集。
（三）凝集反应和血型鉴定颗粒性抗原 + 相应抗体→ 凝集1.直接凝集反应：玻片法：抗体→抗原？（如：人类ABO血型鉴定；菌种鉴定）定性实验试管法：抗原→ 抗体？（如：肥达反应（诊断伤寒、副伤寒）半定量实验2.间接凝集反应：将可溶性抗原/抗体吸附于载体（红细胞或乳胶颗粒）+ 相应抗体/抗原→间接凝集如：将人IgG吸附在乳胶颗粒上的类风湿因子检测。
反向间接凝集：已知抗体吸附在载体上的凝集。
如Rh血型不符时检测患者抗红细胞Rh抗原IgG。
（四）免疫荧光用荧光素标记的抗体/抗原分子检测相对应的抗原/抗体分子的技术。
用于CD分子鉴定、细胞蛋白定位等。
常用荧光素：异硫氰酸荧光素（FITC）、藻红蛋白（PE）（五）放射免疫放射性核素标记进行的抗原抗体反应，用于激素等微量物质的检测。
（六）酶免疫1.酶联免疫吸附实验（ELISA）将抗原或抗体与固相载体（常为聚苯乙烯板）结合，然后加入待测抗体或抗原，最后以酶标抗体和底物进行检测的技术。
用于抗原或血清抗体的定量检测。
2.免疫组化：用标记特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和酶-底物的显色反应，对细胞中的抗原进行定位、定性检测的方法。
（七）免疫电镜免疫化学技术与电镜技术结合，在超微结构水平观察抗原、抗体结合定位的方法。
（八）免疫沉淀用特异性抗体自细胞裂解液中分离特异性蛋白抗原的方法。
（九）免疫印迹：Western blotting用抗体检测蛋白质的分子量和抗原特异性的方法。
免疫印迹二、免疫细胞的分离（一）Ficoll-hypaque离心法：即葡聚糖-泛影葡胺密度梯度离心法。
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免疫球蛋白的功能
抗体（Antibody) 的产生与功能
抗体产生的主要过程
抗体
抗体的制备
注射
抗原（如类毒素）
抗体？ 抗原？
血清
抗体的制备 • 抗血清：指抗原人工免疫实验动物，获得含
特异性抗体的血清。 • 多克隆抗体 (PAb)： 多个抗原决定簇免疫机体
所产生的多种抗体的混合物。 • 单克隆抗体（monoclonal antibody，MAb） ： 只针对某一特定的抗原决定簇，纯度高的抗体。
抗原 （Antigen）
抗原概念 凡能刺激机体产生特异性抗体和致敏淋巴细胞，
并能与相应抗体或致敏淋巴细胞在体内或体外发生 反应的物质。
抗原性（Antigenicity）：包括免疫原性和反应原性
二个方面 • 免疫原性：抗原能刺激机体产生抗体和致敏淋巴细
胞的性能。 • 反应原性：抗原与特异性抗体或致敏淋巴细胞在体
第十四章免疫学检测 技术
第十四章 免疫学检测技术
抗原和抗体可以发生高度专一性的结合
抗原和抗体可以发生高度专一性的结合
抗原和抗体可以发生高度专一性的结合
抗原和抗体可以发生高度专一性的结合
• 抗原或抗体检测原理： 借助抗原和抗体在体外特异结合后出现的
各种现象，对标本中的抗原或抗体进行定 性或定量的检测。
根据抗原的化学性质分： • 天然抗原：微生物及其产物抗原如 • 菌体抗原（O 抗原） • 鞭毛抗原（H 抗原） • 表面抗原（如大肠杆菌的K 抗原） • 细菌的毒素抗原 • 病毒抗原（V 抗原） • 人工抗原：人工合成多肽、蛋白等
抗体（Antibody)
一、概念 是抗原刺激B淋巴细胞, 使之增殖分化成
第一节 免疫学检测技术原理
可作为抗原进行检查的物质：
微生物及其大分子产物 人和动物细胞 人和动物体内的各种大分子 各种半抗原
抗原或抗体检测原理
较早的抗原抗体反应检测方法
1、凝集反应 （Agglutination) 2、沉淀反应 (Precipitation) 3、补体结合试验 (Complement fixation test ) 4、中和试验 (Neutralization test)
浆细胞而产生的能与抗原发生特异性反应 的免疫球蛋白(Immunoglobulin, Ig)
抗体（Antibody)
一、概念
二、免疫球蛋白的基本结构 免疫球蛋白：在人和动物血液、组织液及其
他分泌液中的一类结构相似的球蛋白。 1. 由4 条肽链组成： 2 条重链， 2 条轻链 2. 一个抗体单分子： 2 个抗原结合位点
一、凝聚反应(Agglutination) 二、沉淀反应
1、溶液中的沉淀反应 2、凝胶扩散沉淀 3、免疫电泳
血清免疫电泳 火箭电泳 对流免疫电泳
三、补体参与的反应 四、免疫标记的抗原抗体技术
酶联免疫吸附（ELISA）
一、凝集反应
凝集反应是指颗粒抗原与相应抗体结合 反应出现的可见性现象。颗粒抗原如完整 的细菌、红细胞等与相应抗体相混合，在 一定条件下出现凝集。凝集反应中抗原称 为凝集原，抗体称为凝集素。
Equivalence – Lattice formation
抗原或抗体检测原理
• 免疫学（Immunology）： 是研究抗原性物质、免疫系统、免疫应
答的规律及免疫应答的调节的一门科学。
• 免疫的定义（Immunity）：免疫是机体识 别自我与非自我的过程。排除异己，维护 自身稳定的生理反应。
内或体外发生反 应的性能。
抗原 （Antigen）
构成抗原的条件 1. 异物性：机体免疫细胞能识别自身和异己物质，只
有外源性的物质才具有免疫原性，产生免疫反应。 亲缘关系越远，差异越大，抗原性越强。 自身抗原：自身组织发生异常变异、免疫功能紊乱、眼球晶体
蛋白、精子蛋白、甲状腺蛋白
2. 大分子胶体：一般在10 kD以上 。
免疫的功能： 1. 抵抗感染（Defense）：机体能抵抗病原微生物 侵袭的能力。又称免疫防御。
抗菌、抗病毒、抗真菌、抗寄生虫免疫
2. 自身稳定（Homeostasis）：机体在新陈代谢过 程中，产生大量的衰老死亡细胞，免疫的第二个功能 就是清除这些细胞，维持机体的生理平衡。
3. 免 疫监视（Immunological surveillance）：机 体细胞会因物理、化学和病毒等生物因素的影响，使 细胞发生癌变，形成肿瘤等，机体可识别、清除这些 细胞，这是免疫系统的第三个功能。当这一功能低下 或失调时，会导致肿瘤或癌症。
一、凝集反应
抗原抗体的结合具有高度专一性 借助抗原和抗体在体外特异结合后出现的各种
现象，对标本中的抗原或抗体进行定性或定量的 检测。
对抗原或抗体进行定性或定量的检测的原理
Ab excess
Ag excess
Equivalence – Lattice formation
对抗原或抗体进行定性或定量检测的原理
根据抗原抗体形成的免疫复合物的浓度进 行定量检测。 P 312
抗体（Antibody)
抗体（Antibody，Ab)
• 免疫球蛋白的双重性 免疫球蛋白是一种蛋白质，是抗体
( Ab1 )；同时又可引起机体产生抗体（抗抗
体,Ab2 ），所以既是抗体又是抗原。
Ag
Ab1
Ab2
抗体（Antibody，Ab)
• 免疫球蛋白的双重性 • 免疫球蛋白的功能
1. 与抗原结合 2. 激活补体 3. 组织结合 4. 调理作用 5. 抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(ADCC）
多克隆抗体与单克隆抗体
多克隆抗体与单克隆抗体的制备
单克隆抗体的制备
骨髓瘤细胞
脾脏淋巴细胞
（ HGPRT-TK- )
（HGPRT+TK+）
在HAT中不能生长
பைடு நூலகம்
体外培养过程中死亡
↓←PEG
杂交瘤细胞
(HGPRT+、TK+)
↓
在HAT中大量长期繁殖
↓
克隆化
↓
产生单抗
第一节 免疫学检测技术原理
• 抗原或抗体检测原理：
3. 具有复杂的立体结构或空间构象.
如明胶分子量虽然为100 kD，但结构简单，免疫原性差。
抗原如何被识别
抗原的特异性
抗原决定簇：抗原分子表面具有免疫活 性的化学基因,是抗原与抗体结合的部位。
抗原分子中抗原的特异性由抗原决定簇
决定。
一种细菌可以刺激多少种抗体产生？
抗原
一种细菌可以刺激多少种抗体产生？